三阴性乳腺癌组织亲嗜性病毒整合位点1和核转运蛋白基因2的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨亲嗜性病毒整合位点1(EVI1)、核转运蛋白基因2(KPNA2)在三阴性乳腺癌(TNBC)的表达,分析EVI1、KPNA2表达与临床病理特征及预后的关系。方法选取2012年1月—2015年1月中国人民解放军联勤保障部队第983医院收集的73例TNBC患者手术切除的癌组织、癌旁组织及70例正常乳腺组织(对照组)的石蜡标本,采用免疫组织化学法检测EVI1、KPNA2的阳性表达。收集相关临床病理资料,分析EVI1、KPNA2表达与TNBC患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同EVI1、KPNA2表达下TNBC患者无进展生存时间(PFS)及总生存时间(OS)差异。结果癌组织、癌旁组织和对照组EVI1、KPNA2阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),TNBC癌组织中EVI1、KPNA2阳性表达率高于癌旁组织和对照组(P<0.05),癌旁组织和对照组EVI-1、KPNA2阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同组织学分级、淋巴结、Ki-67表达、脉管内癌栓TNBC患者的EVI1阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),淋巴结是否转移的TNBC患者的KPNA2阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示EVI1阳性表达、KPNA2阳性表达患者PFS、OS生存率均低于EVI1阴性表达、KPNA2阴性表达患者(P<0.05)。结论EVI1、KPNA2阳性表达与TNBC患者肿瘤恶性侵袭行为和预后不良有关,评价EVI1、KPNA2表达可为TNBC患者预后预测提供一定的依据。

亲嗜性病毒整合位点1负向调控微小RNA-9与急性髓系白血病发病机制研究

目的探讨亲嗜性病毒整合位点1（EVI1）对微小RNA－9（miR－9）的调控作用和机制及对急性髓系白血病细胞增殖能力的影响及机制，研究EVI1参与髓系白血病的分子机制.方法首先使用MSCV－EVI1及MSCV－vector制备反转录病毒并感染Uocm1细胞系，比较EVI1过表达后miR－9表达水平，miR－9启动子序列甲基化程度及EVI1过表达对细胞周期和克隆形成能力的影响；然后使用去甲基化药物地西他滨以0.1 μmol/L浓度处理EVI1过表达的Uocm1细胞，以逆转miR－9启动子过度甲基化，研究恢复miR－9表达对细胞周期和增殖能力的影响.结果相对于空载体组，过表达EVI1可以显著下调miR－9表达水平：对照组相对表达量为0.006±0.001，而EVI1过表达组相对表达量为0.004±0.000 （t＝4.09，P〈0.05），并且miR－9启动子序列出现过度甲基化现象；EVI1过表达组的Uocm1细胞较空载体组Uocm1细胞克隆形成能力增强（对照组122.3±7.8，空载体组45.7±6.1）（t＝－13.44，P〈0.01），EVI1过表达组细胞中S期、G2期比例增高（均P〈0.05），而G0/G1期细胞比例降低（P〈0.05）。相对于对照组，0.1 μmol/L地西他滨可显著降低EVI1引起的miR－9启动子过度甲基化，恢复miR－9的表达（P〈0.01）；G0/G1期细胞比例在对照组为（48.25±2.19）%，地西他滨组为（65.9±2.90）%（t＝－6.85，P〈0.05）；对照组细胞集落数为123.40±8.12，而地西他滨组仅为51.00±10.01（t＝9.59，P〈0.01），提示地西他滨可通过G0/G1期阻滞遏制细胞增殖.结论EVI1通过诱导miR－9启动子过度甲基化下调miR－9表达可能是EVI1参与髓系白血病的机制之一；地西他滨能降低miR－9启动子甲基化水平，逆转EVI1对miR－9的负向调控，为其用于EVI1高表达急性髓系白血病的治疗提供了理论依据。

地西他滨治疗亲嗜性病毒整合位点1高表达的慢性髓细胞性白血病分子机制研究

目的探索亲嗜性病毒整合位点1(ecotropic viral integration site 1,EVI1)高表达对K562细胞的影响,及DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨治疗EVI1高表达的慢性髓细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)的分子机制。方法使用逆转录病毒载体转染K562细胞,检测空载体组和EVI1组微小RNA(micro RNA,miR)-9表达水平、miR-9启动子序列甲基化程度及细胞克隆数。使用地西他滨和溶媒处理EVI1高表达的K562细胞,检测miR-9表达水平、miR-9启动子序列甲基化程度、细胞克隆数及细胞周期。结果与空载体组相比,EVI1组miR-9相对表达量显著降低[(0.0021±0.0003)比(0.0034±0.0003),P<0.01],miR-9启动子序列甲基化程度显著增加,细胞增殖能力增强[(232.67±6.81)比(124.67±5.03),P<0.01]。地西他滨组较溶媒组miR-9表达水平显著升高[(0.0023±0.0003)比(0.0007±0.0001),P<0.01],miR-9启动子甲基化程度显著降低[(44.67±6.57)%比(90.22±4.29)%,P<0.01],细胞增殖能力减弱[(173.67±12.06)比(219.33±10.26),P<0.01],G_(0)/G_(1)细胞比例增高[(59.25±1.20)%比(50.45±1.06)%,P<0.05]。结论EVI1通过增加miR-9启动子甲基化程度,下调miR-9表达,可能是EVI1参与CML的机制之一。地西他滨可逆转EVI1高表达所致的miR-9甲基化程度,肿瘤细胞克隆增殖能力得以遏制,为其用于EVI1高表达的CML治疗提供理论依据。

EVI1表达与食管癌细胞放疗敏感性的关系及机制

目的探讨异位病毒整合位点1(EVI1)对食管癌细胞放疗敏感性的影响及作用机制。方法选择在我院接受放射治疗的食管癌患者组织标本67例,qRT-PCR检测EVI1在食管癌组织中的表达水平,Spearman等级相关分析EVI1的表达与放疗敏感性的相关性。常规培养ECA109细胞,采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株ECA109(ECA109R),MTS检测ECA109和ECA109R细胞48 h的放射剂量IC50值,western blotting检测ECA109和ECA109R细胞中的EVI1表达。ECA109R细胞分为对照组(si-NC组)和干扰EVI1表达组(si-EVI1组)并进行siRNA转染,采用western blotting检测各组细胞中EVI1的表达,MTS检测各组细胞48 h的放射剂量IC50值。si-NC组和si-EVI1组细胞经辐射后,平板克隆检测各组细胞平板克隆形成率,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,western blotting检测各组细胞中凋亡相关蛋白活化caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果EVI1在放疗抵抗食管癌组织中的表达高于其在放疗敏感食管癌组织中的表达(P<0.05),EVI1的表达与食管癌患者分化程度和临床分期相关(P<0.05),EVI1的表达与放疗敏感性呈负相关(P<0.05)。与ECA109细胞相比,ECA109R细胞48 h的放射剂量IC50值和EVI1的表达增加(P<0.05)。siRNA转染ECA109R细胞后,与si-NC组相比,si-EVI1组细胞中EVI1的表达降低和放射剂量IC50值降低(P<0.05)。与辐射si-NC组相比,辐射si-EVI1组细胞平板克隆形成率降低,细胞凋亡率增加(P<0.05)。与辐射si-NC组相比,辐射si-EVI1组细胞中活化caspase 3和Bax蛋白的表达均增加,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论EVI1可能通过调控凋亡相关蛋白增加食管癌细胞放疗敏感性,是治疗食管癌的潜在靶标。

B淋巴细胞特异单克隆鼠白血病病毒整合位点基因-1及辅助性T淋巴细胞相关细胞因子在儿童免疫性血小板减少症中的变化

目的通过检测新诊断免疫性血小板减少症（ITP）患儿B淋巴细胞特异单克隆鼠白血病病毒整合位点基因-1（Bmi-1）及辅助性T淋巴细胞相关因子1干扰素（IFN-γ）、白细胞介素4（IL-4）mRNA的表达变化，分析探讨Bmi-1及Th1／Th2细胞比例在新诊断ITP患儿中的变化及意义。方法试验组36例ITP患儿均来源于新乡医学院第一附属医院儿科2013年4至12月住院和门诊患儿，同期小儿外科择期手术患儿26例作为对照组，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测外周血淋巴细胞中Bmi-1、TFN-γ、IL-4mRNA的表达；并采用t检验和直线相关分析进行分析比较。结果1．试验组外周血淋巴细胞中Bmi-1 mRNA为2．63±0．54，对照组Bmi-1 mRNA为3．91±0．92，试验组明显低于对照组（P〈0．001）；试验组IFN-γmRNA为3．84±0．43，对照组IFN-γmRNA为2．88±0．57，试验组明显高于对照组（P〈0．001）；试验组IL-4mRNA为1．444-0．39，对照组IL4mRNA为1．874-0．34，试验组明显低于对照组（P〈0．001）。2．试验组外周血淋巴细胞中IFN-γmRNA表达与IL-4mRNA表达呈负相关（r=一0．667，P〈0．001），IL-4mRNA表达与Bmi-1mRNA表达呈正相关（r=0．776，P〈0．001），IFN-γmRNA表达与Bmi-1mRNA表达无相关性（r=一0．206，P〉0．05）。结论Bmi-1可能通过调节Th细胞参与ITP发病；ITP患儿存在Th细胞功能紊乱、Th1／Th2比例失调，可能是Th1优势。

MEIS1表达对胃癌根治术后患者生存期的影响及其在预后评估中的价值

目的:探讨不同表达水平骨髓嗜病毒整合位点1 (MEIS1)胃癌患者的术后生存情况,分析MEIS1表达在胃癌患者预后评估中的预测价值。方法:在胃癌生存队列中选取215例行胃癌根治术的患者。免疫组织化学染色法检测胃癌和癌旁正常组织中MEIS1表达水平。采用χ^(2)检验或Fisher确切概率法分析MEIS1表达水平与患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用Log-rank检验比较MEIS1高表达组和MEIS1低表达组胃癌患者生存差异;采用多因素Cox比例风险回归模型计算风险比(HR)及其95%置信区间(CI),评价MEIS1表达水平与胃癌患者生存的关系。结结果果:免疫组织化学染色,MEIS1在胃癌组织中表达水平降低;单因素分析,MEIS1高表达患者比MEIS1低表达患者总生存期长(P=0.049),预后更好;多因素Cox比例风险回归分析,MEIS1低表达和TNM分期高是胃癌患者预后的独立危险因素(HR=1.577, 95%CI:1.011~2.460, P=0.045;HR=2.709, 95%CI:1.708~4.297, P<0.001)。结结论论:MEIS1低表达胃癌患者术后总生存期短,MEIS1有望成为胃癌根治术后患者预后评估的生物标志物。

MEIS1基因多态性与血液透析维持不宁腿综合征的相关性研究

不宁腿综合征(restless leg syndrome,RLS)属于是较为常见的一种运动感觉异常性病症,常表现为静态休息或夜间睡眠时存在下肢麻木、虫蚀、蚁走等严重不适感[1-2]。研究发现,相比正常健康的群体,血液透析维持患者伴发RLS的概率较高(6%~75%)[3]。RLS家族有较高的阳性率,说明RLS存有遗传易感性,环境因素、易感基因以及其互相作用有关[4]。髓系亲嗜性白血病病毒整合位点1(myelophilic leukemia virus integration site 1,MEIS1)属于同源盒基因中的分枝基因,转录因子的编码为三核苷酸环延伸家族中的一员,对血液透析维持伴RLS发生、进展均有参与[5]。基于此,本文探讨了MEIS1基因多态性与血液透析维持伴RLS的相关性,以期为临床治疗该病提供依据。

Meis1与VEGFR-2在早期肾癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨髓系亲嗜性白血病病毒整合位点1(myeloid ecotropic viral integration site 1,Mesi1)及血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)在人早期肾癌中表达的临床意义及相关性。方法:收集中南大学湘雅医学院附属海口医院2005年4月至2018年9月间手术切除后的肾癌及癌旁组织标本,其中石蜡组织80对,新鲜冻存组织15对。利用real-time PCR及免疫组织化学技术分别检测肾癌组织中Meis1和VEGFR-2的mRNA和蛋白质表达水平,并分析其与患者的临床病理学参数及预后的相关性。结果:肾癌组织中Meis1和VEGFR-2的mRNA和蛋白质表达水平均较癌旁组织低,差异均有统计学意义(均P<0.01),并且Meis1与VEGFR-2在表达量上呈正相关(r=0.681,P<0.01)。患者的临床病理学相关参数分析显示:Meis1表达的阳性率与肾癌的病理类型有关(P<0.01),Meis1和VEGFR-2表达的阳性率与肾癌患者性别、年龄、T分期等均无关,差异均无统计学意义(均P>0.05),但其与患者的预后明显有关(P<0.05)。Cox回归分析显示:Meis1是影响患者预后的独立因素(95%CI:0.08~1.85,P<0.05)。结论:早期肾癌组织中Meis1和VEGFR-2的mRNA和蛋白质表达水平明显降低,在肾癌中可能可作为肿瘤抑制因子来影响肾癌的发生、发展,Meis1可作为预测肾癌患者预后的生物标志物。

MEIS1在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨骨髓嗜病毒整合位点1(MEIS1)在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义。方法选取45例子宫内膜样腺癌患者的病变组织(内膜癌组),以及12例非内膜病变患者的正常子宫内膜组织(对照组),采用免疫组织化学染色检测2组组织中MEIS1蛋白的阳性率,分析内膜癌组MEIS1蛋白与临床病理特征、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)间的关系。结果子宫内膜样腺癌组织中,MEIS1蛋白主要表达于腺上皮细胞胞核中。内膜癌组的MEIS1蛋白阳性率高于对照组(P<0.05)。子宫内膜样腺癌组织中,MEIS1的表达与腺癌细胞分化级别、分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、脏器转移等均无关(P均>0.05),与ER、PR的表达有关(P均<0.05)。结论MEIS1在子宫内膜样腺癌中呈高表达,并与ER、PR的表达相关,可能参与了子宫内膜样腺癌的发生机制。

美沙拉嗪通过Wnt1通路改善溃疡性结肠炎小鼠结肠屏障功能的机制研究

目的:探讨美沙拉嗪(MSLZ)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠屏障的改善作用及其对无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点1(Wnt1)信号的调控机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(Control)、模型组(UC)、MSLZ组和MSLZ^(+)shWnt1组;除Control组外,其他组小鼠采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建UC模型。Control组、UC组、MSLZ组小鼠造模结束后每日腹腔注射5×10~9 pfu/ml NC-shRNA,MSLZ^(+)sh-Wnt1组小鼠每日腹腔注射5×10~9 pfu/ml shRNA-Wnt1;MSLZ组和MSLZ^(+)sh-Wnt1组小鼠每日灌胃400 mg/kg MSLZ,Control、UC组每日灌胃等剂量无菌蒸馏水。检测各组小鼠结肠长度,试剂盒检测各组小鼠血清D-乳酸(D-LA)和脂多糖(LPS)含量以及二胺氧化酶(DAO)活性;TUNEL染色检测各组小鼠结肠组织细胞凋亡;免疫组化检测结肠组织黏蛋白2(MUC2)和上皮细胞间紧密连接蛋白(Occludin)表达;Western blot检测结肠组织Wnt1、β-catenin、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果:MSLZ能明显增加UC小鼠结肠长度,升高结肠组织MUC2、Occludin、Wnt1、β-catenin和Bcl-2表达,降低血清D-LA、LPS、DAO水平、结肠组织细胞凋亡率及Bax表达;MSLZ^(+)sh-Wnt1可部分逆转MSLZ对结肠屏障功能的保护作用(均P<0.05)。结论:MSLZ能抑制UC小鼠结肠黏膜细胞凋亡,减轻结肠组织病理损伤,改善结肠黏膜屏障功能,可能与激活Wnt1信号有关。

EVI1在急性髓系白血病中的研究进展

急性髓系白血病(AML)是血液系统常见的恶性疾病,伴EVI1高表达患者占成人AML的8%~10%。研究表明EVI1高表达在AML的治疗与预后中发挥重要作用。近些年来研究人员不断揭示EVI1的结构与作用,但其介导AML的机制尚未完全明确。系统探讨EVI1在AML中的作用可为EVI1高表达AML患者的精准化治疗提供有益参考。

白血病融合基因EVI1的多态性与白血病发生风险的相关性

目的:探讨白血病融合基因亲嗜性病毒整合位点1(ecotropic viral integration site-1,EVI1)的多态性与白血病发生风险的相关性。方法:选取本院2017年2月~2019年2月收治的骨刺患儿90例作为研究组,同期选择健康人群83例作为对照组。清晨空腹抽取两组入选者的外周静脉血2 mL,采用PCR方法检测两组入选者EVI1的多态性情况,调查一般资料并进行相关性分析。结果:EVI1 rs17561基因共有CC、CA、AA三种基因型,两组入选者的EVI1 rs17561基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律,研究对象具有群体代表性。两组入选者EVI1 rs17561基因型分布差异具有统计学意义(P<0.05),研究组的EVI1 rs17561基因CC基因型显著高于对照组(90.0%vs. 75.9%, P<0.05),研究组的等位基因C频率(显著高于对照组(96.7%vs. 80.7%, P<0.05)。在90例骨刺患儿中,6例患儿确诊为白血病,检出率为6.7%,均为CC基因型。研究组患儿EVI1 rs17561基因的CC基因型与血小板计数、危险度分层、诊断分型显著相关(P<0.05)。多元Logistic回归分析显示血小板计数、危险度分层、诊断分型为影响EVI1rs17561CC基因型的主要因素(P<0.05)。结论:白血病患儿融合基因EVI1多态性比较常见,多表现为rs17561CC等位基因,此等位基因可能与白血病患者的血小板计数、危险度分层、诊断分型显著相关,其中血小板计数、危险度分层、诊断分型为影响EVI1rs17561CC基因型的主要因素。

PDZ连接激酶诱导自噬对肺癌细胞顺铂化疗敏感性的影响研究

目的探究PDZ连接激酶(PBK)对肺癌细胞顺铂化疗敏感性的作用及其相关的作用机制。方法A549细胞用顺铂处理或者是转染si-NC、si-PBK、si-亲嗜性病毒整合位点-1(EVI1)、oe-NC和oe-EVI1。RT-qPCR检测人肺癌细胞株A549、HCC827、NCI-H1299和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中EVI1和PBK mRNA表达;Western blot检测细胞中EVI1、PBK、Beclin1、p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3B)蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;EdU实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;ChIP-PCR实验检测细胞中EVI1和PBK启动子区域的结合。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较(EVI1及PBK表达情况只比较HCC827组与BEAS-2B组、NCI-H1299组与BEAS-2B组、A549组与BEAS-2B组)采用LSD-t检验。si-NC组和si-EVI1、oe-NC组和oe-EVI1组PBK的表达情况采用独立样本t检验进行比较。结果与BEAS-2B细胞相比,HCC827、NCI-H1299和A549细胞中EVI1和PBK mRNA表达以及蛋白表达均升高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与空白对照组相比,顺铂组和顺铂+si-NC组细胞中EVI1和PBK mRNA表达以及蛋白表达均升高,Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达(0.15±0.01比0.36±0.02、0.34±0.02)(1.32±0.11比4.16±0.21、4.04±0.15)均升高,差异具有统计学意义(P均<0.05);与空白对照组相比,顺铂组、顺铂+si-NC组及顺铂+si-PBK组细胞24、48、72 h细胞活力降低,EdU阳性细胞率[(42.71±2.56)﹪比(30.25±1.91)﹪、(28.90±2.51)﹪]、迁移数[(133.67±6.51)个比(72.00±4.00)个、(70.00±2.65)个]、侵袭数[(81.00±4.00)个比(43.00±3.00)个、(42.00±3.00)个]、p62蛋白表达(0.65±0.03比0.22±0.02、0.23±0.01)均降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与顺铂组和顺铂+si-NC组相比,顺铂+si-PBK组细胞中PBK mRNA和蛋白表达降低,24、48、72 h细胞活力降低,EdU阳性细胞率[(30.25±1.91)﹪比(28.90±2.51)﹪、(22.25±1.97)﹪]、迁移数[(72.00±4.00)个、(70.00±2.65)个比(34.00±3.00)个]、侵袭数[(43.00±3.00)个、(42.00±3.00)个比(21.33±2.52)个]、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达(0.36±0.02、0.34±0.02比0.25±0.02)(4.16±0.21、4.04±0.15比2.45±0.22)均降低,差异具有统计学意义(P均<0.05);p62蛋白表达(0.22±0.02、0.23±0.01比0.46±0.02)升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。EVI1通过直接与PBK启动子区域结合,与si-NC组相比,si-EVI1组细胞中EVI1 mRNA和蛋白表达降低,PBK mRNA和蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P均<0.05);与oe-NC组相比,oe-EVI1组细胞中EVI1和PBK mRNA和蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论受EVI1调节的PBK可能通过促进自噬抑制肺癌细胞对顺铂的化疗敏感性。