用于分离单糖与寡糖的亲水色谱材料制备及应用进展

糖类化合物在食品科学、医药科学、生命科学等领域中发挥至关重要的作用。糖类化合物可分为单糖、寡糖和多糖,其中单糖和寡糖大多是可溶性糖,不仅可以充当结构物质,还具有抗氧化、抗癌、抗菌、抗病毒等多种生物活性。亲水作用色谱弥补了反相液相色谱在糖类化合物分离方面的不足。本文重点介绍了2017—2022年报道的适合分离分析单糖和寡糖的氨基键合固定相、酰胺类键合固定相、糖类键合固定相、两性离子键合固定相等亲水色谱固定相,并概述了乙腈含量、缓冲盐浓度、流动相pH值和柱温等色谱分离条件对亲水分离效果的影响,以期为单糖及寡糖的分离分析提供一定的参考。

甲哌鎓原药及其制剂的高效液相亲水色谱分析

采用默克ZIC-HILIC亲水色谱柱进行分离,DAD或VWD检测器进行检测,利用外标法定量。流动相为80%的乙腈+20%的25 mM乙酸铵,柱温30℃,检测波长210 nm。制剂回收率98.87%~101.14%,满足《NY/T 2887-2016农药产品质量分析方法确认指南》相关要求。方法操作简便,定量准确。

反相／亲水色谱法分析糖苷类化合物

根据皂苷、黄酮苷等糖苷类化合物的结构特点,采用亲水色谱模式分析该类化合物,以弥补反相色谱模式分离结构类似糖苷类化合物选择性的不足。首先选择14个糖苷类化合物,比较了反相色谱柱(XAqua C18)和亲水色谱柱(Click XIon)的分离效果,评价了反相/亲水色谱的正交性,并构建了反相/亲水二维体系用于西洋参样品的分离。结果表明,糖苷类化合物在反相及亲水色谱柱上均有很好的保留,但两者具有不同的分离选择性,14种物质在反相和亲水柱的出峰顺序有较大差异,在反相色谱中不易分离的人参皂苷Rg1和Re在亲水色谱柱可获得很好的分离,反相/亲水模式分离糖苷化合物具有很好的正交性。以构建的RPLC/HILIC二维色谱体系分离西洋参样品,有效地提高了分离能力及峰容量,有利于后续更多极性及微量化合物的制备、结构表征与活性研究,且该方法操作简便、流动相兼容性好,可作为糖苷分离分析、制备的有效手段,也可以为其他中药复杂体系的分析提供参考。

免疫亲和柱净化-超高效亲水色谱-三重四极杆质谱联用法测定人尿液和血浆中河豚毒素

建立了测定人尿液和血浆中河豚毒素（TTX）的超高液相色谱-三重四极杆质谱联用分析方法。尿液和血浆样品经免疫亲和柱净化,以0.1%甲酸-乙腈和0.1%甲酸溶液作为流动相进行梯度洗脱,在UPLCBEHAmide柱上实现分离,正离子电喷雾多反应监测（MRM）模式检测,溶剂标准外标法定量。尿液和血浆中TTX的测量范围为0.05-400μg/L,平均加标回收率分别为92%-95%和91%-96%,相对标准偏差在3.3%-7.2%和3.9%-7.8%（n=5）之间,样品中TTX的检出限（S/N=3）均为0.02μg/L,定量限（S/N=10）为0.05μg/L。本方法适用于尿液和血浆中TTX的中毒检测和临床监测。

亲水色谱柱对氨基酸及其美拉德反应初始中间体的分离

采用Xbridge BEH Amide和Atlantis HILIC Silica两亲水色谱柱分离半胱氨酸、甘氨酸及其与木糖形成的美拉德反应初始中间体2-木糖基噻唑烷-4-羧酸、甘氨酸-Amadori和半胱氨酸-Amadori 5个化合物。通过研究流动相中有机相(乙腈)的比例、缓冲盐浓度、pH值、柱温、流速对容量因子和分离度的影响,分别找到较佳分离条件。在BEH Amide色谱柱上5个化合物之间的分离度均达到2.28以上,对比可知,采用BEH Amide色谱柱更好。

亲水色谱法分析白坚木皮醇的研究

白坚木皮醇是天然橡胶制胶乳液中存在的一种具有极高药用价值的天然化合物,多存在于制胶废水中。由于其极性高且溶于水,在常用的反相液相色谱柱中保留值较低,分析和分离都较困难。本研究选用SHI-SEIDO PC HILIC色谱柱建立了亲水色谱法(HILIC)测定白坚木皮醇的方法。以乙腈-水(V/V,60/40)为流动相,二极管阵列(DAD)为检测器时,检测波长为190 nm,白坚木皮醇的保留因子为1.07,线性范围为0.05～4mg/mL,检测限0.01 mg/mL。

亲水色谱法测定硝酸盐和亚硝酸盐方法研究

建立使亲水色谱柱同时测定硝酸盐和亚硝酸盐的高效液相色谱方法。样品匀浆后超声提取,高速离心处理,采用亲水色谱柱分离,乙酸铵和乙腈作为流动相进行等度洗脱,210 nm紫外检测。该方法简便快捷、准确可靠,成本低廉,适用于多种蔬菜中亚硝酸盐和硝酸盐的分析。

亲水色谱柱-超高效液相色谱法测定饲料中纳多洛尔含量

用Waters AcQuity BEH Hilic亲水色谱柱-超高效液相色谱法测定了饲料中纳多洛尔的含量。样品先后2次用1%(φ)酸化甲醇溶液15,10mL超声提取,合并两次上清液,并分取5mL,通过MCX SPE小柱净化。用5%(φ)氨化甲醇溶液5mL洗脱。洗脱液在40℃用吹氮蒸干。残渣用由乙腈、0.5%甲酸溶液和水以体积比10比15比75组成的混合液1mL溶解,分取1.0μL进行色谱分析。采用亲水色谱柱为固定相及上述乙腈-甲酸溶液-水的混合液作流动相,纳多洛尔得到很好分离,纳多洛尔的质量浓度在0.01~20mg·L-1之间与峰面积呈线性关系。方法的测定下限(10S/N)为0.01mg·kg-1。用标准加入法测得回收率在78.5%~95.0%之间,测定值的相对标准偏差(n=5)均小于8%。

亲水色谱-质谱检测器联用测定水中三氟乙酸和二氯乙酸

目的建立快速、简单检测自来水中两种常见卤乙酸的亲水色谱-质谱定性定量分析方法。方法采用自来水样直接进样,经过氨基柱分离净化,应用90%10mmol/L乙酸铵-10%乙腈作为流动相进行等度洗脱,电喷雾负离子(ESI-)扫描模式,选择离子监测模式(SRM)进行质谱分析。结果目标化合物在3 min内实现分离,三氟乙酸(TFA)和二氯乙酸(DCAA)在检测质量浓度范围内均线性关系良好(r≥0.997),检测限为10～50μg/L,定量限为25～200μg/L,对三氟乙酸和二氯乙酸分别进行低、中、高3个浓度梯度的样品加标回收试验(n=3),平均加标回收率为74.3%～116%,相对标准偏差为1.3%～5.5%。结论该分析方法操作简单、精密度好、灵敏度高,适用于快速检测自来水中常见卤乙酸。

超高效亲水色谱-串联质谱法快速检测鸡肉及其制品中的利巴韦林及其代谢物的总残留量

建立了鸡肉及其制品中利巴韦林和磷酸化利巴韦林代谢物总残留量的亲水作用色谱-串联质谱分析方法（HILIC-MS/MS）。样品采用含1%（v/v）乙酸的乙腈超声提取，于37℃条件下以酸性磷酸酶酶解，正已烷除脂后用C18与PSA填料分散固相萃取净化。采用酰胺基超高效亲水作用色谱柱，在乙腈和0．1％甲酸组成的梯度洗脱流动相中分离，在电喷雾正离子电离多反应监测模式下监测，结果表明，样品中利巴韦林残留量在1～200μg／kg之间时．线性相关系数大于0．999，方法检出限（LOD．S／N≥3）为1μg／kg．定量限（LOQ．S／N≥10）为5μg／kg．在3个添加水平下的回收率为67.8%-112.7%，相对标准偏差为6.1%-13.6%。经测定多种实际样品，证明该方法简便，快速，准确，可以满足日常鸡肉及其制品中利巴韦林及其代谢物总残留量的分析要求。

亲水色谱-超高效液相色谱荧光检测法快速检测牛奶中三聚氰胺

目的：建立亲水色谱-超高效液相色谱荧光检测法对牛奶中三聚氰胺的快速测定。方法：牛奶样品经乙腈超声提取三聚氰胺,用Agilent ZORBAX RRHD HILIC Plus色谱柱,以乙腈-甲酸水溶液为流动相,通过荧光检测器进行测定。结果：三聚氰胺在（0.0510.00）μg/m L范围内呈良好线性关系（r=0.999 9）;回收率100.9%103.7%。检出限和定量限分别为0.060和0.171μg/m L。结论：该法简便、准确且特异性高,可用于牛奶中三聚氰胺的快速检测。

亲水色谱-超高效液相-串联质谱法测定滇橄榄中水解氨基酸研究

目的:建立滇橄榄中的水解氨基酸的亲水色谱-超高效液相-串联质谱法测定方法。方法:采用盐酸水解滇橄榄中的17种氨基酸,DE-52纤维素除氯离子后,利用亲水色谱柱,结合超高效液相色谱-串联质谱仪,采用正离子模式,多反应监测(MRM),外标法定量,测定滇橄榄中17种水解氨基酸。结果:DE-52纤维素能够有效去除水解溶液中的氯离子,亲水色谱柱对于亮氨酸和异亮氨酸等具有较好的分离效果,在0.0003~2.0μg·mL^-1质量浓度范围内,17种氨基酸的线性关系较好,检出限为0.015~13.0 mg·kg^-1,回收率为73.8%~98.8%,RSD为3.25%~7.79%。结论:该方法重复性好、灵敏度高,适合滇橄榄中17种水解氨基酸的测定。

多羟基化合物键合亲水色谱固定相的制备及其分离性能

用硅胶与氨丙基三甲氧基硅烷反应,再与δ-葡萄糖酸内酯反应,制备了一种多羟基化合物键合的新型亲水色谱固定相。以水-有机溶剂(乙醇、乙腈、四氢呋喃)为流动相,通过改变流动相中有机溶剂的种类及浓度、缓冲盐浓度和柱温,考察了该固定相对6种强极性中药组分的保留行为和保留机理。当水的比例在0～40%(v/v)范围时,溶质的保留随着流动相中水的比例的增大而减小,属于典型的亲水色谱分离模式;而当流动相中水的比例在0～100%(v/v)范围内变化时,溶质的保留随着水的比例变化呈"U"形曲线,属于亲水色谱和反相色谱的混合保留机理。缓冲盐的浓度和pH效应说明,所选用的中药组分与所制备的固定相间还存在弱的静电作用。该固定相对6种中药组分以及丹参注射液具有良好的分离性能,表明其在强极性中药有效成分的分离及其他强极性物质的分离分析中具有一定的应用前景。

亲水色谱-串联质谱法对牛奶与奶粉中三聚氰胺及其衍生物含量的测定

建立了牛奶和奶粉中三聚氰胺及其3种衍生物（三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺）的亲水色谱-串联质谱检测方法（HILIC-MS/MS）。牛奶样品直接用乙腈超声波提取;奶粉样品先用水溶解后再加乙腈超声波提取,高速离心后以乙腈-水为流动相,采用亲水作用色谱柱分离这4种化合物,在电喷雾正、负电离切换多反应监测模式下进行定性与定量分析,三聚氰酸一酰胺与三聚氰酸二酰胺含量在50～10000μg/kg之间、三聚氰胺与三聚氰酸在25～5000μg/kg之间,均获得良好的线性。方法检出限（LOD）为5～20μg/kg,定量下限（LOQ）为50～100μg/kg,3个添加水平的平均回收率为81%～97%。该方法简便、快速、准确,可满足牛奶及奶粉中三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺测定的需要。

亲水色谱-蒸发光散射检测器-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱法测定低聚麦芽糖化学成分

建立亲水色谱-蒸发光散射检测器-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱(HILIC-ELSD-ESI-Q-TOF/MS)技术用于工业低聚麦芽糖中化学成分的快速鉴别及其含量测定的方法。以低聚麦芽糖为研究对象,采用HILIC法对低聚麦芽糖进行快速分离,ESI-Q-TOF/MS法对多种化合物进行鉴别,依据其精确分子质量、MS/MS裂解特征、色谱保留行为等信息,结合对照品信息和文献报道等对其进行验证,并采用HILIC-ELSD对已知成分进行定量测定。结果表明,采用亲水色谱法进行测定,低聚麦芽糖中各成分分离度较好;应用ESI-Q-TOF/MS鉴定出工业低聚麦芽糖中的10种成分;其中7种化合物(葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖)回归方程的相关系数均优于0.9990,表明线性关系良好;平均回收率在95.66%~99.00%范围内,相对标准偏差在1.11%~4.93%范围内;检出限在0.004~0.070μg/mL之间,定量限在0.013~0.233μg/mL之间。对7种成分定量测定表明,麦芽七糖的含量(14.31%±0.13%)最高,其次为麦芽三糖(9.34%±0.14%),麦芽六糖(7.49%±0.09%)。麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖的总含量则达到了43.39%±0.35%。该方法分离度好、灵敏度高,可以对多种不同聚合度低聚麦芽糖成分进行定性和定量分析,为低聚麦芽糖工业化生产及应用的质量控制提供了一种分析方法支持。

基于二醛微晶纤维素功能化C18的反相/亲水色谱固定相的制备（英文）

通过十八烷基胺的氨基与二醛微晶纤维素的醛基共价键合,制备了基于二醛微晶纤维素(DMCC)官能化C18的新型反相/亲水色谱固定相(C18-DMCC/SiO2),该色谱固定相被用于反相色谱(RPLC)和亲水相互作用色谱(HILIC)模式。C18-DMCC/SiO2色谱柱展现了良好的疏水选择性和芳香选择性,在反相色谱模式下可分离烷基苯和多环芳烃(PAHs)。苯胺类、酚类和糖苷类等极性化合物被用于评估该色谱柱在反相色谱模式下的极性选择性,商品C18柱作对照柱,色谱评价结果令人满意。核酸碱基被用于评估C18-DMCC/SiO2色谱柱的亲水色谱性能。通过考察有机溶剂含量对分析物保留的影响,发现该新型色谱固定相具有反相/亲水色谱的典型特征。

亲水色谱在食品内源组分分离分析方面的应用进展

亲水色谱是一种类似于正相色谱保留模式的分离手段,主要以水(2%~40%)和乙腈(大于60%)作为流动相在极性固定相表面完成目标物质分离。在亲水色谱分离模式下,化合物按照极性由弱到强依次出峰,因此其可作为分析强极性化合物和离子化合物的适宜手段。近些年亲水色谱在食品科学方面的应用越来越广泛。亲水色谱在食品分离分析方面的应用对象已包含食品内源组分、食品外源污染物和毒性物质等。本文主要针对亲水色谱在食品内源组分(核苷碱基、核苷、核苷酸,氨基酸、多肽、蛋白质,磷脂酰胆碱类化合物,碳水化合物,维生素等物质)的应用展开讨论,以期为食品中未知成分的分离分析提供参考。

基于亲水色谱-电雾式检测器-电喷雾-飞行时间质谱技术的西洋参不同部位单糖组成的对比分析

采用亲水色谱-电雾式检测器-电喷雾-飞行时间质谱,测定西洋参不同部位(芦头、主根、参须)中多糖的单糖组成。采用超声辅助酸解法对西洋参多糖进行完全水解,应用Waters Xbridge Amide柱(4.6 mm×250 mm,5μm),梯度洗脱(A为乙酸铵水溶液,B为乙腈),流速0.8 mL/min,柱温40℃,ESI-TOF/MS进行定性鉴别,CAD检测器(雾化器温度60℃,N_(2)压力8.8 kPa)进行定量测定,结合主成分分析对西洋参不同部位进行区分。该方法在一定质量浓度范围内具有良好的线性(相关系数>0.9991),检出限为0.03~0.13μg/mL,平均回收率为94.17%~107.15%。应用该方法测定了西洋参不同部位多糖水解产物中7种单糖(葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、岩藻糖、甘露糖)和2种糖醛酸(半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸),主根中葡萄糖含量较高,其平均值为(2.123±0.070)mg/g;芦头中鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸含量较高,其平均值分别为(0.037±0.006)mg/g、(0.179±0.023)mg/g、(0.158±0.028)mg/g、(0.036±0.006)mg/g、(0.069±0.007)mg/g、(0.376±0.096)mg/g;参须中岩藻糖含量较高,其平均值为(0.120±0.005)mg/g。该方法简单,灵敏度、重复性好,为西洋参单糖组成和不同药用部位开发利用提供了方法和数据支持。

亲水色谱⁃质谱联用方法分析水中肼、甲基肼和偏二甲肼

针对现有方法分光光度法和液相色谱法在分析水样中肼、甲基肼和偏二甲肼含量中存在的选择性差、分析效率低等问题,开发了一种基于亲水色谱‑质谱联用的肼类化合物含量分析方法。分别考察了样品配制条件、流动相组成及质谱分析条件对分离效果、分析时间、检测灵敏度的影响,优化得到了适合于肼类化合物分析的液相色谱‑质谱分析条件。该方法使用80%异丙醇‑0.1%甲酸溶液作为样品溶剂,进样10μL进行分析;以70%乙腈‑10 mmol·L^(-1)甲酸铵、pH=3.5的混合溶剂作为流动相,用亲水色谱柱进行分离;分别选取质子化肼‑乙腈非共价加合物、质子化甲基肼、质子化偏二甲肼作为检测离子,并分别采用50,100,100 eV源后碰撞能对肼、甲基肼和偏二甲肼进行质谱分析。在0.01~2 mg·L^(-1)之间一定的浓度范围内,3种肼类化合物的质谱响应与其浓度呈现出良好的线性关系,可应用于水样中3种肼类化合物的定量分析。3种肼类化合物的方法检出限分别为0.04,0.005,0.025 mg·L^(-1)。对加标水样进行了分析,所得方法回收率介于92%~115%。

基于氧化石墨烯的环糊精型色谱固定相的制备及在对映体分离与亲水色谱中的应用

将氧化石墨烯(GO)通过酰胺键键合到氨基硅胶上,进一步将β-环糊精(β-CD)化学键合于GO上,制备了一种新型手性固定相材料,采用IR、SEM、TEM、元素分析和热重分析进行了表征。7种对映体得到不同程度的拆分,同时此固定相表现出典型的亲水作用色谱(HILIC)特征,4种核苷小分子在流动相为甲醇-乙腈-水(45∶45∶10,V/V)时得到分离。通过考察流动相组成、温度、pH值对分析物保留的影响,进一步探讨了该固定相的分离机理。在20~60℃时,温度越低越有利于分析物质分离;加入质子化溶剂甲醇,4种分析物的保留时间显著减弱;pH值的改变影响分析物的质子化程度进而改变与固定相作用力和保留时间。结果表明,此色谱固定相中GO和β-CD在手性拆分中具有协同作用,而在HILIC中分析物的保留归因于混合模式的保留机理,包括亲水作用、静电作用、氢键、π-π堆积作用等。