大亳菊总黄酮的提取及其颗粒剂制备工艺研究

优选大亳菊总黄酮的提取及其颗粒剂制备工艺。采用正交试验,以总黄酮提取率为判断标准,优选大亳菊总黄酮的提取工艺;以成型率为判断标准,优选大亳菊总黄酮颗粒剂的制备工艺。结果表明,优选的大亳菊总黄酮提取工艺为:液料比为25∶1,乙醇体积分数75%,提取温度85℃,回流时间1.25h;优选的制粒工艺为:可溶性淀粉∶糊精=1∶1,浸膏粉∶辅料=1∶3,干燥温度60℃,干燥时间2h。该工艺简便、稳定,可以用于大亳菊总黄酮的提取及其颗粒剂的制备。

小亳菊及其硫磺熏制品挥发油成分的GC-MS分析

目的:分析通风晾干品和硫磺熏制品小亳菊的挥发油成分,为其质量评价提供科学依据。方法:采用水蒸气蒸馏法提取2种小亳菊挥发油,用GC毛细管色谱柱进行分析,归一化法测定其相对含量,GC-MS鉴定化学成分。结果:从通风晾干品小亳菊挥发油中检出216个色谱峰,鉴定了50个化合物,占挥发油总量的73.21%;从硫磺熏制品小亳菊挥发油中检出211个色谱峰,鉴定了65个化合物,占挥发油总量的82.32%。结论:通风干燥晾干品小亳菊挥发油收率为3.50%,硫磺熏制品小亳菊挥发油收率为4.22%,两者相差近1.2倍;两者挥发油组成皆以单萜类化合物为特征性成分,倍半萜类化合物为次要成分,但所含化合物有很大的差异。菊花的硫磺熏制加工过程应严格控制和规范化。

ICP-MS法测定亳菊不同部位及其土壤中微量元素

目的：探究微量元素在亳菊不同部位的分布及富集规律。方法：采用微波消解处理亳菊不同部位及根系附近土壤,通过ICP-MS测定,并采用统计学软件对试验数据进行相关性分析。结果：亳菊不同部位及其土壤中8种微量元素含量存在差异;亳菊不同部位对8种微量元素的富集系数存在明显差异,变化范围为0.0054~0.9205;亳菊花序中Fe与Mg呈显著正相关;亳菊花序与土壤中的Fe呈显著正相关,亳菊枝叶与土壤中的Al、Ba和Mg呈显著正相关。结论：亳菊对微量元素的吸收存在选择性,可以通过改善栽培中的部分环节来提高亳菊的质量。

不同加工方法对亳菊黄酮类成分含量影响

目的:通过测定亳菊中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素和金合欢素的含量,考察加工方法对质量的影响。方法:采用phenomenex,synergi Fusion-RP色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),0.1%磷酸水-甲醇梯度洗脱,检测波长350 nm。结果:不同加工方法对亳菊中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素和金合欢素含量有明显的影响。结论:不同加工方法对亳菊的黄酮类成分有较大影响,产地加工时应注意烘干的温度。

RP-HPLC法同时测定亳菊总黄酮中3种黄酮类成分

目的建立亳菊总黄酮中木犀草素、芹菜素、金合欢素3种黄酮类成分的HPLC测定方法。方法采用Shim-pack VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;柱温25℃,甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱;体积流量0.8mL/min;检测波长350 nm;进样量20μL。结果亳菊总黄酮中木犀草素、芹菜素、金合欢素线性范围分别为0.140 8～0.704 0μg(r=0.999 9),0.110 2～0.551 0μg(r=0.999 9),0.008 1～0.040 50μg(r=0.999 1);平均回收率(n=6)分别为100.7%,100.5%,99.4%。结论本法灵敏、简便准确、重现性好,可用于亳菊总黄酮的质量控制。

亳菊和大马牙中绿原酸、黄酮类成分及挥发油含有量的比较

目的 建立HPLC法同时测定亳菊和大马牙中绿原酸、木犀草苷、黄芩苷、槲皮素和金合欢素,为选用药用菊花提供参考。方法 2种菊花以70%甲醇提取,HPLC分析采用Shim-pack C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈（A相）-0.1%磷酸（B相）梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长348 nm;按《中国药典》方法测定它们的总挥发油含有量。结果 绿原酸、木犀草苷、黄芩苷、槲皮素和金合欢素分别在0.5~5.0μg、0.11~1.1μg、0.74~7.4μg、0.39~3.9μg、0.28~2.8μg范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.3%（RSD=2.0%）、99.3%（RSD=2.0%）、99.7%（RSD=1.9%）、99.1%（RSD=2.0%）、98.0%（RSD=1.8%）。亳菊挥发油提取率为0.52%,大马牙为0.42%。亳菊中的绿原酸、木犀草苷、槲皮素、金合欢素和总挥发油含有量高于大马牙,但大马牙的黄芩苷含有量高于亳菊4倍多。结论 大马牙中绿原酸和木犀草苷含有量未能在线性范围内测得,所以不能代替亳菊入药。

亳菊HPLC特征指纹图谱研究

目的:建立亳菊的HPLC特征指纹图谱,为亳菊的质量控制提供依据。方法:采用Spursil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相,流速1.0 m L/min,进行梯度洗脱;检测波长325 nm,柱温30℃。结果:建立了亳菊HPLC指纹图谱的共有模式,标定16个共有峰,利用对照品指认5个峰,10批亳菊样品的HPLC图谱相似度均大于0.900。结论:所建立的HPLC指纹图谱分析方法简单、重现性良好,可为亳菊的品种鉴别及质量评价提供依据。

正交设计优选亳菊叶总黄酮提取工艺

目的探讨亳菊叶总黄酮提取工艺。方法采用正交试验,考察乙醇浓度、料液比、提取时间及提取次数4个因素对亳菊叶总黄酮提取率及浸膏得率的影响。结果优选出总黄酮最佳提取工艺为8倍量70%乙醇,回流提取2次,每次1 h。结论该工艺可提高亳菊叶总黄酮的提取率。

反相高效液相色谱法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量

目的建立同时测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的反相高效液相色谱检测方法。方法采用Restek PinnacleⅡC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,配制流动相为甲醇∶四氢呋喃∶0.3%H3PO4水溶液=42∶13∶56,在流速为1.0ml/min,检测波长为350nm,柱温为室温,进样量为10μl的情况下建立测定方法。结果木犀草素线性范围为3.99-99.75μg/ml（r=0.9996）,平均加样回收率为105.9%,RSD=1.5%;芹菜素线性范围为4.095-102.375μg/ml（r=0.9996）,平均加样回收率为103.7%,RSD=2.5%。结论用该方法测定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量,具有分析时间较短,分离度高的特点。

亳菊重金属积累特性研究

测定了亳州5个亳菊种植区土壤和亳菊根、茎、叶、花中重金属Cd、Pb和Cu的含量,并分析了亳菊-土壤重金属含量的相关性和亳菊对重金属Cd、Pb和Cu的吸收能力及其在亳菊中的分布特征。结果表明:亳菊的根部重金属含量严重超标,亳菊的叶、茎、花中重金属含量基本达到绿色标准,但叶片中重金属含量偏高;亳菊对重金属的富集和转运能力为Cd>Cu>Pb,亳菊中Cd的分布特征为根≥叶>茎>花,Pb和Cu的分布特征为根>叶>茎>花;亳菊中重金属的含量与土壤重金属水平显著相关,因此要加强亳州药材产区土壤重金属的监测和治理,从源头上保证中药材的质量。

亳菊EDT1抗旱基因遗传转化体系建立与耐旱性初步评价

目的:建立亳菊EDT1抗旱基因遗传转化体系,并初步评价其耐旱性。方法:以亳菊茎段外植体为受体材料,抗草甘膦除草剂为筛选基因,通过发根农杆菌介导法转入EDT1抗旱基因。通过农杆菌介导,对影响亳菊遗传转化效率的四个因素进行讨论:侵染时间、农杆菌菌液浓度、乙酰丁香酮浓度和共培养时间,以及草甘膦最佳筛选浓度的研究。结果:建立了农杆菌介导的亳菊高效遗传转化体系,菌液浓度(A600)为0.6~0.8,乙酰丁香酮浓度150μmol/L,侵染时间25 min,共培养3 d,除菌培养后,可得到15 d最大转化效率95.6%。草甘膦对亳菊组培苗致死率的研究表明其最佳筛选浓度为100 mg/L。通过聚合酶链式反应(PCR)检测,初步得到5株转基因植株。结论:在干旱胁迫下,叶片中抗氧化酶活性和MDA含量测定表明,转基因植株具有较高的耐旱性。

亳菊叶片组织培养技术优化的研究

[目的]研究不同植物生长物质对诱导亳菊叶片愈伤组织诱导和不定芽分化的影响。[方法]以亳菊组培苗的叶片作为外植体,使用正接和背接2种方式接种于正交设计的培养基中,诱导叶片形成愈伤组织;再将愈伤组织接种于新配制的培养基中,对愈伤组织诱导率和芽分化率进行方差和极差分析。[结果]诱导亳菊叶片形成愈伤组织最佳的培养基组合为MS+2.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;诱导愈伤组织分化成不定芽的最佳培养基是MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/LNAA。[结论]为亳菊的遗传转化体系构建和诱变育种提供了高效的操作系统。

不同浓度亳菊水提物对秀丽隐杆线虫脂滴凝聚影响观察

目的探讨亳菊对秀丽隐杆线虫脂肪沉积的影响。方法用不同浓度亳菊水提取液配制NGM培养基,培养同步化秀丽隐杆线虫,成虫经油红O染色,异丙醇萃取,测定OD值,并与普通NGM培养基培养的同步化线虫相比较。结果随着浓度的提高,线虫体内的脂肪沉积量呈现出一定的曲线变化,其具体机制有待于进一步研究。

亳菊生药学研究进展

介绍了近10年来亳菊在植物形态、性状、显微特征、理化、化学成分等方面的研究进展,并从黄酮、绿原酸、挥发油类化合物的定量分析研究方面对文献进行了综述,为该药的鉴别以及进一步开发利用提供了科学依据。

酶水解对亳菊总黄酮中黄酮苷元的影响

目的体外研究烘干过程中酶对亳菊总黄酮成分的影响,为亳菊产地加工和炮制工艺提供前期研究基础。方法模拟亳菊烘干过程,采用β-D-葡萄糖苷酶酶解亳菊总黄酮,以金合欢素、芹菜素、木犀草素3种黄酮苷元含量为指标,分析酶解反应对3种黄酮苷元含量变化的影响。结果酶解反应后,亳菊总黄酮中木犀草素、芹菜素、金合欢素3种黄酮苷元的含量升高。结论β-D葡萄糖苷酶可酶解亳菊中黄酮类成分,使其中黄酮苷元含量升高,β-葡萄糖苷酶水解亳菊总黄酮是烘干过程中黄酮苷元含量升高的原因之一。

亳菊茎尖愈伤组织诱导与再生植株的研究

[目的]研究亳菊茎尖组织培养技术,为亳菊产业化生产提供科学依据。[方法]在不同的MS培养基中,考察不同浓度的6-BA、NAA对亳菊茎尖愈伤组织、丛生芽、再生植株诱导的影响。[结果]茎尖诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+1.00 mg/L6-BA+0.30mg/L NAA,以MS+0.50 mg/L6-BA+0.10 mg/L NAA为芽的诱导培养基,芽诱导率达100%;最佳的生根培养基为1/2MS+0.30 mg/L IBA。[结论]通过亳菊茎尖愈伤组织培养技术,可以达到快速繁殖的目的。

亳菊保健啤酒研究

通过在啤酒发酵过程中添加不同比例的亳菊水提液,研究亳菊水提液添加浓度对啤酒风味和抗氧化能力的影响.研究发现,在啤酒后酵前加入3～4 g/L的亳菊参与发酵反应,能生产出兼具亳菊和啤酒独特风味、抗氧化能力强的亳菊保健啤酒.

不同加工工艺对亳菊中绿原酸、木犀草苷和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量的影响

目的比较不同加工方法对亳菊中绿原酸、木犀草苷和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量的影响。方法样品用50%甲醇溶液提取,采用高效液相色谱法在同一色谱条件(色谱柱为Shimadzu VP-ODS,250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液;梯度洗脱;流速:1.0mL/min;柱温:30℃)下对亳菊3种成分同时进行测定并比较不同干燥条件下各成分的含量。结果不同加工方法对亳菊中3种有效成分含量有明显影响,对亳菊花的色泽、气味、质地有明显影响,胎菊和菊米无明显变化。结论微波和蒸制干燥可作为亳菊规模化生产的加工方法。

亳菊的组织培养快繁技术研究

[目的]探讨亳菊组织培养的快繁技术。[方法]以亳菊的茎尖作为外植体,以MS为基本培养基,附加不同剂量的NAA和6-BA,分别进行丛生芽诱导、增殖和生根培养,考察不同激素配比的培养基对亳菊丛生芽形成与生长的影响,以及对试管苗长势和生根的影响,并根据丛生芽的数量、长势、苗高、根条数、繁殖周期等指标,筛选适合亳菊茎尖离体组织培养的培养基配方。[结果]亳菊诱导分化的最佳培养基配方为MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.10 mg/L;增殖培养的最佳培养基配方为MS全量培养基;诱导生根的最佳配方为1/2MS+IBA0.30 mg/L。将试管苗移栽到土∶泥炭∶珍珠岩为1∶1∶1的基质中,其成活率达99%,大田移栽的试管苗成活率可高达97.9%。[结论]该研究所筛选的培养基配方可作为亳菊脱毒培养的最优技术方案。

安徽亳菊挥发油成分GC-MS分析

目的:分析安徽亳菊两种栽培类型(大亳菊、小亳菊)挥发油的化学成分,为其质量评价提供科学依据。方法:采用水蒸气蒸馏法提取大亳菊和小亳菊挥发油,用GC毛细管色谱柱进行分析,归一化法测定其相对含量,GC-MS法鉴定化学成分并进行比较。结果:从大亳菊、小亳菊挥发油中分别检出193和237个色谱峰,分别鉴定出51和63个化合物,分别占挥发油总量的75.53%和78.68%。结论:2种亳菊栽培类型挥发油中共有成分为樟脑烯、1-辛烯、6-庚烯-2-醇2,6-二甲基、dl-柠檬烯、沉香醇、filifolone、d-葑醇、(S)-顺式-马鞭草烯醇、菊油环酮、异柠檬醛、马鞭草烯醇、龙脑、α-松油醇、菊烯酯醋酸盐、马鞭草酮、去氢香橙烯、β-紫罗兰酮、α-石竹烯、β-倍半水芹烯和杜松脑。相对含量最高的是马鞭草酮,在大亳菊和小亳菊中的含量分别是14.52%和8.73%;α-石竹烯和β-倍半水芹烯也有一定的含量。亳菊栽培类型不同,挥发油中化学成分在数量上和在种类上都有明显区别,结果为安徽亳菊栽培类型的确立提供了化学方面的佐证,亦为其质量评价提供了物质基础。