基于AEP/PI3K/AKT信号通路探讨温肾散结方对人前列腺癌细胞的调控作用和分子机制

目的:基于天冬酰胺内肽酶(AEP)/磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/AKT),探讨温肾散结方(WSSJ方)对人前列腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并进一步探讨其潜在的分子机制。方法:制备WSSJ方冻干粉;体外培养人前列腺癌PC3、DU145和22RV1细胞,CCK-8法检测WSSJ方对前列腺癌细胞相对活力的影响并测定最佳给药浓度;集落形成实验检测WSSJ方对单细胞增殖能力的影响;划痕实验检测WSSJ方对前列腺癌细胞迁移能力的影响;RT-qPCR检测细胞内AEP mRNA、PI3K mRNA及AKT mRNA表达;Western blotting检测细胞内AEP、PI3K及AKT蛋白表达。结果:WSSJ方组前列腺癌细胞增殖活力随给药浓度升高逐渐降低;WSSJ方组细胞计数与细胞融合情况均低于对照组;WSSJ方低、中、高剂量组细胞集落形成数量均少于对照组;WSSJ方组细胞迁移率显著低于对照组(P<0.01);WSSJ方组PC3细胞AKT蛋白相对表达量低于对照组,DU145细胞、22RV1细胞AEP、PI3K蛋白相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);WSSJ方组PC3细胞、DU145细胞、22RV1细胞AEP mRNA、PI3K mRNA及AKT mRNA表达均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:WSSJ方能有效抑制人前列腺癌细胞的增殖和迁移能力,并且其对肿瘤细胞的抑制呈现剂量依赖性,作用机制可能与下调AEP抑制PI3K/AKT信号通路有关。

沙棘黄酮制备及体外抑制人前列腺癌PC-3细胞作用研究

采用AB-8大孔树脂纯化沙棘黄酮初提物,用10%、30%、50%乙醇溶液梯度洗脱,以总黄酮含量和黄酮苷元含量为指标,筛选纯化样品;采用MTT法、实时无标记细胞分析技术检测沙棘黄酮样品体外对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制作用,流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期情况,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达情况。实验结果表明50%乙醇梯度洗脱样品(S50)中,总黄酮含量达到25.42%;水解后得到SH50样品,其槲皮素、异鼠李素含量分别达到5.03%、18.64%;25μg/m L的SH50样品对PC-3细胞即有增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;同时25μg/m L的SH50样品作用48 h即可显著诱导细胞凋亡(P<0.01),并将细胞周期阻滞在G2/M期,此外,样品可提高Bax蛋白和降低Bcl-2蛋白的表达。说明沙棘黄酮SH50样品对体外人前列腺癌PC-3细胞具有抑制增殖并诱导细胞凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞周期,调节Bax和Bcl-2蛋白的表达有关。

Aurora A表达对人前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的研究Aurora A表达增高对人前列腺癌细胞LNCaP生物学行为的影响,以了解其在人前列腺癌发生发展中的作用。方法克隆Aurora A全长基因,将其转染入LNCaP细胞中表达,采用四唑盐(MTT)法细胞增殖实验检测Aurora A表达升高的阳性细胞生长情况,采用改良的Transwell侵袭小室方法检测细胞侵袭能力;同时与转染空质粒(pcDNA3.1)细胞和未转染细胞进行比较。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1-Full Length Aurora A。Aurora A高表达的LNCaP细胞增殖速度较空质粒转染细胞和未转染细胞快,培养3d后LNCaP-Aurora A组细胞较pcDNA3.1质粒转染细胞及未转染的LNCaP细胞增多,差异有统计学意义(P<0.05)。在体外细胞移动实验中,LNCaP-Aurora A组细胞也较另两组细胞表现出更强的穿膜能力(P<0.01)。结论Aurora A表达增高与人前列腺癌细胞的恶性表型具有密切相关性,Aurora A在人前列腺癌发生发展中可能发挥重要作用。

CCK-8法与MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的比较研究

目的探讨CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。方法以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,采用CCK-8和MTT法检测抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对PC3细胞增殖的影响。结果 CCK-8法的最佳检测波长为450 nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4 h,适宜细胞数量范围为8×102～1×105个。结论 CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。

鸦胆子苦醇抑制人前列腺癌DU145细胞生长及作用机制

中药鸦胆子是一种常用的抗肿瘤中草药,鸦胆子苦醇是来源于鸦胆子的主要成分。该研究探讨了鸦胆子苦醇(brusatol)对人前列腺癌DU145细胞的生长抑制及其作用机制。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测鸦胆子苦醇对不同细胞株的生长抑制情况,以及不同浓度的鸦胆子苦醇对DU145细胞的增殖抑制率;应用Hoechst 33258染色法观察鸦胆子苦醇处理DU145细胞后所发生的形态学变化;分别采用PI单染及AnnexinV-FITC双染法流式细胞术分析细胞周期分布个凋亡率的变化;以Western blot测定鸦胆子苦醇对MAPK信号通路相关蛋白表达的影响。结果表明:鸦胆子苦醇对人前列腺癌DU145细胞的抑制作用更为显著,并且可以时间和剂量依赖性地抑制人前列腺癌DU145细胞的生长,其半数有效抑制浓度IC50为(0.27±0.04)μmol·L-1;鸦胆子处理DU145细胞后,Hoechst 33258染色可见到明显的凋亡特征;细胞周期图中可见明显的亚二倍体峰,且随着作用时间的延长凋亡比例增加,FCM检测鸦胆子苦醇作用24 h后凋亡图中,可见凋亡的发生;Western blot检测表明鸦胆子苦醇处理后可使磷酸化的p38和JNK表达增加,使磷酸化的ERK表达降低。鸦胆子苦醇能显著抑制DU145细胞增殖,诱导DU145细胞凋亡。磷酸化的P38和JNK的表达增加,但磷酸化的ERK表达下降,这表明MAPK途径的活化可能是鸦胆子苦醇对DU145细胞生长抑制的作用机制之一。因此,鸦胆子苦醇是潜在的抗前列腺癌药物,有必要进一步在动物水平阐明其抗前列腺癌活性。

枸杞多糖对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的研究枸杞多糖(LBP)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响。方法体外培养的人前列腺癌PC-3细胞经枸(LBP)处理后,采用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪分析LBP对PC-3细胞周期和凋亡的影响,TUNEL法观察PC-3细胞凋亡的变化,用免疫组化法检测其Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果LBP可明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的生长,并能诱导PC-3细胞凋亡,凋亡率分别为8.5%、17.5%、29.5%、37.5%和41.5%,与对照组比较,差异有非常显著性(P<0.01);同时PC-3细胞Bcl-2/Bax蛋白比值显著下降,呈明显的剂量-效应关系。结论LBP对人前列腺癌PC-3细胞DNA具有损伤作用,能诱导PC-3细胞的凋亡,调节其相关基因的表达。

番茄汁对人前列腺癌细胞DNA损伤作用的影响

目的探讨番茄汁对人前列腺癌细胞株(PC-3)DNA损伤作用的影响。方法于人前列腺癌PC-3细胞的细胞培养液中分别加入番茄汁40,80,120μl/ml,培养48h;用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测番茄汁对人前列腺癌PC-3细胞DNA损伤程度。结果番茄汁可引起PC-3细胞DNA链断裂,细胞尾长与拖尾率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论番茄汁能导致人前列腺癌PC-3细胞的DNA损伤。

番茄汁对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨番茄汁对人前列腺癌PC-3细胞生长抑制作用及其机理研究。方法:番茄红素及不同浓度番茄汁作用于人前列腺癌PC-3细胞48h;采用生长曲线及噻唑蓝(MTT)法检测番茄汁、番茄红素对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用,通过原位(缺口)末端标记法(TUNEL)法观察凋亡细胞的形态结构变化,流式细胞仪检测细胞凋亡峰。结果:番茄汁、番茄红素能显著抑制人前列腺癌PC-3细胞生长;TUNEL方法检测呈阳性;流式细胞仪分析图上出现典型的凋亡细胞峰。以上各指标中,番茄汁随着浓度增大其作用加强;低剂量组的作用虽比番茄红素组差,中剂量组的作用与番茄红素组相比无差别,高剂量组的作用比番茄红素组强。结论:番茄汁对抗人前列腺癌PC-3细胞的作用,除番茄红素外,可能还存在其他抗癌成分的交互作用。番茄汁、番茄红素对PC-3细胞生长抑制作用的机理可能与其诱导人前列腺癌PC-3细胞细胞凋亡有关。

蕃茄汁对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响

目的 研究番茄汁对人前列腺癌PC 3细胞增殖的影响及其可能的机制。方法 体外培养人前列腺癌PC 3细胞,分别加入不同浓度的番茄汁;用彗星试验测定经番茄汁处理的人前列腺癌PC 3细胞DNA链断裂情况,分析DNA的损伤作用;采用MTT法测定细胞的增殖情况。结果 番茄汁对人前列腺癌PC 3细胞的DNA具有损伤作用,可使DNA链断裂,DNA的迁移长度与彗星细胞拖尾率显著增高,与对照组相比,差异有非常显著性;能抑制PC 3细胞的增殖,与对照组相比,各实验组的吸光度逐渐降低,差异有非常显著性,且随着浓度的增加抑制作用逐渐加强。结论 番茄汁可诱导人前列腺癌PC 3细胞的DNA损伤,从而抑制其生长。

Zeylenone抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及诱导凋亡作用研究

目的研究(4R,5S,6S)-4-苯甲酰氧基-6-[(苯甲酰氧基)甲基]-5,6-二羟基-2-环己烯-1-酮Zeylenone(Zey)对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法采用MTT法观察Zey对PC-3细胞和正常前列腺基质细胞WPMY-1的增殖抑制作用,应用平板克隆形成实验观察Zey对PC-3细胞克隆形成的作用,AO/EB荧光染色观察细胞形态、JC-1染色观察Zey对细胞内线粒体膜电位的影响,An-nexin V-FITC/PI双染检测凋亡细胞比率,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Caspase-7和PARP的激活及Bcl-2、Bax、Bid、Bcl-xL蛋白的表达。结果Zey可以明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,而对正常前列腺基质细胞WPMY-1的抑制作用显著低于PC-3细胞。Zey抑制PC-3细胞克隆形成并明显诱导其凋亡。线粒体膜电位检测结果显示Zey导致细胞内线粒体膜电位的明显降低,Western blot检测结果表明Caspase-8、Caspase-9、Caspase-7、Caspase-3被激活,PARP和Bid被剪切活化,Bcl-2、Bcl-xL表达下降,而Bax表达上调。结论 Zey可选择性抑制人非激素依赖性前列腺癌PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,作用机制与其对Bcl-2和Caspase家族蛋白的影响,从而诱导PC-3细胞发生内源性和外源性凋亡相关。Zey有望成为治疗前列腺癌的候选药物。

葡萄汁对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨葡萄汁对人前列腺癌PC-3细胞生长抑制的作用及其机制。方法:白藜芦醇及不同浓度葡萄汁作用于人前列腺癌PC-3细胞48h;采用生长曲线及噻唑蓝(MTT)法检测葡萄汁、白藜芦醇对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用,通过原位(缺口)末端标记法(TUNEL)观察凋亡细胞的形态结构变化,流式细胞仪检测细胞凋亡峰。结果:葡萄汁、白藜芦醇能显著抑制人前列腺癌PC-3细胞生长;TUNEL方法检测呈阳性;流式细胞仪分析图上出现典型的凋亡细胞峰。以上各指标中,葡萄汁随着浓度增大作用加强;低剂量组的作用比白藜芦醇组差,中、高剂量组的白藜芦醇浓度低,但作用比白藜芦醇组强。结论:葡萄汁对抗人前列腺癌PC-3细胞的作用,除白藜芦醇外,可能还存在其他抗癌成分的作用。葡萄汁、白藜芦醇对PC-3细胞生长抑制作用的机制可能与其诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡有关。

不同细胞株建立人前列腺癌裸小鼠移植模型及转移特性比较

目的比较人前列腺癌细胞DU145和CWR22Rv1(22Rv1)(下面简称22Rv1)分别在皮下和前列腺原位接种后的成瘤性和转移率。方法采用原位接种及皮下接种两种方法将前列腺癌细胞DU145和22Rv1分别接种于裸小鼠体内,以裸鼠出现恶液质、处于濒死状态作为观察终点,颈椎脱臼法处死。尸解并观察荷瘤部位肿瘤的生长情况及局部淋巴结自发性转移情况,并取皮下肿瘤、原位肿瘤、肝、肺、肾、膀胱、盆腔淋巴结标本,甲醛固定、石蜡包埋和HE染色后显微镜下观察。结果原位接种22Rv1组的裸小鼠成瘤率达到10/10,淋巴结转移率为9/10；原位接种DU145组的裸小鼠成瘤率达到10/10,而淋巴结转移率为1/10。两种细胞皮下接种法的裸小鼠成瘤率均达10/10,但未检测到任何淋巴结转移。结论对这两种细胞株采用原位接种法建立裸鼠人前列腺癌原位模型获得成功,用22Rv1细胞建立的原位模型淋巴结转移率高于DU145组,为前列腺癌转移机制的研究及筛药提供了模型。

人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用人前列腺癌细胞株PC-3细胞接种于裸鼠的颈背部皮下,计算成瘤潜伏期、成瘤百分率,观察移植瘤大体生长情况,绘制生长曲线,并对移植瘤进行病理鉴定。结果采用人前列腺癌细胞株PC-3细胞皮下接种方式建立移植瘤的平均成瘤潜伏期为24天,成瘤百分率为100%,瘤体积倍增时间为10天左右,移植瘤的形态和功能特性与原发肿瘤基本相似。结论本动物模型的建立可为前列腺癌的放射免疫显像以及放射免疫治疗提供一个有价值的实验平台。

番茄原汁对人前列腺癌PC-3细胞生长抑制作用的研究

目的 探讨番茄原汁对人前列腺癌PC -3细胞生长抑制作用及其可能机制。方法 不同浓度的番茄原汁作用于人前列腺癌PC- 3细胞4 8小时;采用噻唑蓝(MTT)法检测番茄原汁对人前列腺癌PC- 3细胞的生长抑制作用,彗星试验检测PC -3细胞DNA损伤作用。结果 番茄原汁能抑制人前列腺癌PC- 3细胞生长,与对照组相比差异有极显著性;引起PC-3细胞DNA单链断裂,出现拖尾的彗星细胞,拖尾率与尾长随着番茄原汁浓度增大而增加,表现明显的剂量反应关系。结论 番茄原汁对PC-

葡萄汁对人前列腺癌PC-3细胞的凋亡作用

目的研究葡萄汁对人前列腺癌PC-3细胞的影响。方法将低、中、高剂量(分别为16、32和64μl/ml)的葡萄汁加入体外培养的人前列腺癌PC-3细胞,检测葡萄汁对PC-3细胞的毒性作用,用单细胞凝胶电泳测其对DNA损伤作用,流式细胞术测细胞凋亡,免疫组化法测凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达。结果3种剂量的葡萄汁能抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖;DNA迁移长度与彗星细胞拖尾率逐渐增高,拖尾细胞率最高为71%;能诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡,细胞凋亡率分别是14.5%3、2.1%和40.5%,促凋亡基因Bax表达率分别是36.8%、50.4%和64.8%;抑凋亡基因Bcl-2表达率依次为39.1%、25.0%和12.4%。结论葡萄汁可抑制人前列腺癌PC-3细胞增长,诱导其细胞凋亡,能上调促凋亡基因Bax的表达,下调抑凋亡基因Bcl-2的表达。

藤茶提取物通过PI3K/Akt/Bcl-2途径抑制人前列腺癌LNCaP细胞增殖的机制研究

目的探讨藤茶提取物对人前列腺癌细胞LNCaP细胞增殖抑制的作用机制。方法 LNCaP细胞分为对照组、藤茶提取物不同浓度组,MTT法检测细胞的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC50),流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率,Western-blot法检测PI3K/Akt通路PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达。结果藤茶提取物在10~50μg/mL浓度范围内对LNCaP细胞增殖抑制作用随剂量的升高而升高,IC50为28.45μg/mL;与对照组比,藤茶提取物25、50μg/mL处理组LNCaP细胞凋亡率明显升高(P<0.05,P<0.01),p-Akt、Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论藤茶提取物对LNCaP细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt细胞信号通路下调Bcl-2蛋白表达从而促进凋亡。

RhoA蛋白和cAMP对人前列腺癌细胞株PC-3形态的影响(简报)

小G蛋白RhoA是细胞内信号转导的重要成分,参与对细胞的多种功能活动的调控[1,2,3].溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)与多种细胞的G蛋白偶连受体结合而发挥作用,除刺激细胞增殖外,还通过活化RhoA,诱导细胞骨架改变[4].cAMP是经典的第二信使,其下游激酶PKA可抑制RhoA活性,因此,cAMP在许多细胞活动中对RhoA有拮抗作用[5].本实验采用人前列腺癌细胞株PC-3,以绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)分别和不同RhoA结构(野生型RhoA、RhoA63L和RhoA188A)的cDNA共同转染细胞,在显微镜下(200倍视野)观察记录未转染细胞和转染细胞在LPA和cAMP作用下的形态变化,研究RhoA和cAMP/PKA介导的信号转导在调控癌细胞形态改变中的作用.