HPLC法测定复方乌骨藤胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

建立HPLC法测定复方乌骨藤胶囊中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1和人参皂苷Rb_1的含量。采用Kromasil C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)—水(B)为流动相进行梯度洗脱;流速1.0mL·mL^(-1),柱温40℃。结果表明:三七皂苷R_1在0.229-2.29μg范围内线性关系良好(r=0.9996),平均加样回收率(n=6)为98.7%;人参皂苷Rg_1在0.814-8.14μg范围内线性关系良好(r=1.0000),平均加样回收率(n=6)为99.2%;人参皂苷Rb_1在0.771-7.71μg范围内线性关系良好(r=0.9996),平均加样回收率(n=6)为99.3%。本方法操作简便,结果准确,灵敏度高,重现性好,可作为复方乌骨藤胶囊中所含三七的质量控制方法。

RP-HPLC法同时测定冠心丹参胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定冠心丹参中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量的方法。方法:采用Kromasil-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL.min-1,柱温23℃,检测波长203nm。结果:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1进样量分别在0.0655～1.092μg/mL(r=0.9998),0.1980～3.2997μg/mL(r=0.9998),0.1802～3.0032μg/mL(r=0.9999)范围内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率分别为98.8%,100.3%,100.4%,RSD均小于3%。结论:所建立的方法操作简便,测定结果准确,重复性好,可用于冠心丹参胶囊的质量控制。

三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的HPLC定量分析及其肠黏膜渗透性研究

目的通过前期建立的3种体外肠黏液渗透模型[纯化黏蛋白渗透模型(PIM)、人工肠黏液渗透模型(AIM)及大鼠肠黏液渗透模型(RIM)],研究三七中主要单体成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1在肠黏液层的渗透作用,以期为三七皂苷类成分的口服吸收及应用提供实验依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法建立三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的定量分析方法,并对其线性范围、精密度、稳定性、重复性、加样回收率进行考察;分别测定不同浓度三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1溶液在3种肠黏液渗透模型上的表观渗透系数(Papp),分析比较其肠黏液渗透作用。结果建立了三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的HPLC定量分析方法,精密度、稳定性、重复性、加样回收率均符合要求。3种皂苷成分在PIM、AIM、RIM模型的渗透性结果显示:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1在3种模型上的渗透作用随着药物浓度的升高均有不同程度的增加;在PIM中,与人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1相比,三七皂苷R1在不同浓度下的Papp均显著增加(P<0.05);在AIM中,20g·L-1浓度下的Papp为三七皂苷R1>人参皂苷Rb1>人参皂苷Rg1(P<0.05);在RIM中,20 g·L-1浓度下的Papp为人参皂苷Rg1>三七皂苷R1>人参皂苷Rb1(P<0.05)。结论不同浓度的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1在3种肠黏液渗透模型中的稳定性、重现性较好,且随着药物浓度的上升渗透性也随之增加;水溶性较强且分子量相对较小的三七皂苷R1在脂类成分较少的PIM和AIM中渗透作用较强,而脂溶性较强的人参皂苷Rg1在RIM中渗透作用较强。

HPLC法同时测定护肾胶囊(Ⅲ)中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

目的建立护肾胶囊（Ⅲ）中三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定护肾胶囊（Ⅲ）中三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl的含量，色谱柱SunFireC18（4．6rnin×250mm，5μm），流动相为乙腈一水，梯度洗脱，流速1mL·min^-1，检测波长203nm，柱温为30℃。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl分别在0．086～1．032μg，0．346～4．152μg，0．352～4．224μg范围内进样量与峰面积积分值线性关系良好，r分别为0．9998、0．9999、0．9999，加样回收率分别为97．4％、98．1％、97．7％，RSD分别为1．4％、1．8％、1．3％。结论该方法准确、稳定，可以用来同时测定护肾胶囊（Ⅲ）中三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl的含量。

ELSD-HPLC同时测定乳癖消片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

目的:建立乳癖消片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量测定方法。方法:采用蒸发光散射检测器-高效液相色谱(ELSD-HPLC)法,色谱柱为安捷伦XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL/min。检测器参数为漂移管温度65℃,雾化器温度36℃,氮气流速25 psi/min。结果:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1分别在0.0516~1.032μg、0.2029~4.0580μg、0.1878~3.7560μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为97.82%(RSD=1.45%)、99.02%(RSD=0.82%)和100.87%(RSD=0.61%)。结论:该方法简便、可行、重现性好,可作为乳癖消片质量控制的方法。

RP-HPLC法同时测定活血止痛散中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

目的建立RP-HPLC法同时测定活血止痛散中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量的方法。方法色谱柱为Merck C18分析柱(100 mm×4.6 mm,5μm);流动相为以(A)乙腈-(B)水二元梯度洗脱:0~15 min(18%A:82%B),15~50 min[(18%A^36%A):(82%B^64%B)];流速为1 m L/min;检测波长为203 nm。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1分别在0.118 8~2.376μg(r=0.999 8)、0.4072~8.144μg(r=0.999 9)和0.400 1~8.002μg(r=0.999 8)范围内与其峰面积均有良好线性关系;三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1平均回收率(n=6)分别为99.4%(RSD=1.8%)、97.7%(RSD=1.4%)、97.4%(RSD=1.5%)。结论本试验为活血止痛散的质量控制提供了一种准确可靠的检测方法。

HPLC-ELSD测定丹七片中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量

目的:建立用高效液相色谱配备蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定丹七片中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量的方法。方法:采用色谱柱为Ultimate^(TM)XB-C_(18)柱(150mm×4.6mm);流动相为乙腈:水,0-22min,乙腈22～45%;漂移管温度110℃,载气流速3.0L/min;柱温:35℃。结果:人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的线性范围分别为20-600μg/mL和15-500μg/mL,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1平均回收率分别为100.01%和99.66%结论:HPLC-ELSD测定丹七片中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量,不仅操作简便、准确,而且重现性好。

HPLC法测定少林跌打止痛膏中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

为了解少林跌打止痛膏中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量,引入HPLC法进行含量测定,为少林跌打止痛膏品质监测提供参考。方法 采用HPLC法,选择C18液相色谱柱色谱柱,规格为4.6×250mm,5μm;将乙腈(A)-水(B)作为流动相进行梯度洗脱;设置检测波长为203nm,流速、柱温参数分别为1.0mL?min-1、30℃。结果 采用HPLC法检测能够获得良好的分离结果,阴性对照无干扰;三七皂苷R1加样回收率、RSD分别为96.0%、3.1%,人参皂苷Rg1分别为97.7%、2.2%,人参皂苷Rb1分别为92.1%、2.7%;重复性RSD 分别为2.5%、2.7%和2.6%(n=9);三七皂苷R1在18.799~187.99μg ?mL-1 浓度范围内线性关系良好(r=0.99998);人参皂苷Rg1、Rb1分别在66.232~662.32μg ?mL-1 、73.288~732.88μg ?mL-1浓度范围可获得良好的线性关系(r=0.99998)。 结论 HPLC法具有良好的重复性、检测准确性,操作简单,用于少林跌打止痛膏药物含量检测有利于实现药物质量控制,保障产品品质。

人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

人参皂苷Rg1干预小鼠巨大肩袖损伤后的肌肉退变

背景:肩袖肌退变(肌肉萎缩、纤维化和脂肪浸润)是肩袖撕裂后出现的常见问题,严重影响肩关节功能和手术预后。人参皂苷Rg1具有抗氧化、抗细胞凋亡、降血脂等生物效应,然而人参皂苷Rg1对肩袖损伤后肌肉退变的影响未见报道。目的:探讨人参皂苷Rg1对巨大肩袖损伤小鼠肌肉退变的影响。方法:将60只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组,每组15只。假手术组小鼠切开右肩皮肤后缝合,其余3组小鼠均行右侧肩关节肩袖损伤造模,模拟巨大肩袖撕裂手术切断冈上肌肌腱和肩胛上神经压迫。术后假手术组和模型组腹腔注射生理盐水0.5 mL;人参皂苷Rg1低、高剂量组予以腹腔注射人参皂苷Rg130,60 mg/kg,1次/d,共注射6周。末次注射后次日予以步态分析评估小鼠肢体功能,安乐死后取术侧冈上肌测量肌肉萎缩率、肌肉收缩力,肌肉组织进行油红O染色、Masson染色,RT-PCR检测萎缩、纤维化、脂肪浸润相关基因的表达。结果与结论:①与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组爪印面积、步长显著增加(P<0.05);②与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组肌纤维横截面积、冈上肌收缩力显著增加(P<0.05),湿肌质量减少比率、脂肪浸润面积比率、胶原纤维面积比率显著下降(P<0.05);③与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组肌肉组织中萎缩、纤维化和脂肪浸润相关基因的表达显著下降(P<0.05);④人参皂苷Rg1低、高剂量组爪印面积、冈上肌收缩力、肌纤维横截面积无统计学差异(P>0.05),人参皂苷Rg1高剂量组其他指标均优于低剂量组(P<0.05);⑤结果说明,人参皂苷Rg1能显著减轻小鼠巨大肩袖撕裂后肩袖肌萎缩、纤维化和脂肪浸润,并有利于肌肉力量及肢体功能的改善。

人参皂苷Rb_(1)脂质体的制备及对脂肪细胞中脂滴积聚的抑制作用

[目的]制备β-谷甾醇修饰的人参皂苷Rb_(1)脂质体(β-Rb_(1)-Lip),减少Rb_(1)降解并增强人参皂苷Rb_(1)降脂效果。[方法]采用薄膜水和法制备了β-谷甾醇修饰的人参皂苷Rb_(1)脂质体,利用MTT法评估脂质体的生物安全性,借助油红O染色试验和酶标仪测量TG含量,考察了脂质体β-Rb_(1)-Lip对脂肪细胞3T3-L1的脂滴积聚抑制作用。[结果]制备的β-Rb_(1)-Lip脂质体的包封率为83.74%,平均粒径为198 nm,β-Rb_(1)-Lip在12 h内Rb_(1)释放率约为80%,表现出良好的缓释效果。对于降脂活性,50μmol/L的β-Rb_(1)-Lip表现出显著的细胞内脂滴抑制率,与同浓度Rb_(1)单体相比,β-Rb_(1)-Lip对3T3-L1细胞内脂滴的抑制效果更为显著,且对细胞没有毒副作用。[结论]β-Rb_(1)-Lip具有包封率高、粒径小和缓释效果明显的特征,能够持续释放活性成分人参皂苷Rb_(1),增强其降脂功效并减少用量。

人参皂苷Rg1和Rb1改善慢性不可预测应激致大鼠抑郁、焦虑样行为的作用比较

目的研究人参皂苷Rg1和Rb1改善慢性不可预测应激诱导大鼠的抑郁样和焦虑样行为的作用及比较。方法SPF级SD雄性大鼠70只,适应5 d后进行糖水偏爱实验检测,根据糖水偏爱指数将动物分为7组,即对照组、模型组、氟西汀组、人参皂苷Rg124 mg/kg剂量组、人参皂苷Rg148 mg/kg剂量组、人参皂苷Rb133 mg/kg剂量组、人参皂苷Rb167 mg/kg剂量组。除对照组外,其余大鼠每天随机接受1~2种不同的刺激,造模时间共35 d。于第36天进行糖水偏爱、旷场实验、新奇环境摄食抑制实验、大鼠高架十字迷宫实验、强迫游泳等行为学实验,考察其抗抑郁、抗焦虑作用。采用ELISA法测定大鼠血清和海马IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α炎症因子水平,血清皮质酮(CORT)水平。结果与模型组相比,人参皂苷Rg1、Rb1组大鼠糖水偏爱指数提升,强迫游泳不动时间显著减少,人参皂苷Rg148 mg/kg剂量组新奇抑制摄食潜伏期显著减少,人参皂苷Rg1(24和48 mg/kg)剂量组开臂时间的比例显著上升,人参皂苷Rg1、Rb1两个剂量组血清中皮质酮的含量显著减少,人参皂苷Rg124 mg/kg剂量组血清中IL⁃1β和IL⁃6的水平显著降低,人参皂苷Rb133 mg/kg剂量组血清中TNF⁃α和IL⁃6的水平显著降低,人参皂苷Rg1(48 mg/kg)、Rb1(67 mg/kg)剂量组海马中IL⁃1β、IL⁃6和TNF⁃α的含量显著降低。结论两种人参皂苷均可能通过调节HPA轴、抑制神经炎症,从而改善慢性不可预测应激致大鼠抑郁、焦虑样行为,此外人参皂苷Rg1的抗焦虑作用优于Rb1。

人参皂苷Rg1治疗多发性骨髓瘤的网络药理学预测与验证

目的:利用网络药理学和体外细胞实验,探究人参皂苷Rg1治疗多发性骨髓瘤(MM)的作用机制。方法:利用TTD、DisGeNet、GeneCards、PharmGKB、PubChem、Super-PRED、PharmMapper预测MM靶标,利用CTD和SymMap数据库预测人参皂苷Rg1靶标,取交集靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用网络。基于基因本体(GO)和KEGG-pathway数据库,富集Rg1治疗MM的主要生物功能和信号通路。分子对接验证核心靶点与Rg1之间的结合能力。利用CCK-8、流式细胞术、Western blot实验,分别检测不同剂量人参皂苷Rg1(5、10、20μmol/L)对RPMI 8226细胞的细胞活性、凋亡率、ROS水平及核心作用靶点Caspase3、Bax、Bcl-2、和NF-κB p65的相对表达。结果:筛选得到215个Rg1-MM靶点。GO和KEGG富集分析提示Rg1改善MM的作用机制可能涉及氧化应激、细胞凋亡及炎症相关信号通路。分子对接提示Rg1可能通过调控NFKB1、STAT3、AKT1、MAPK3、CASP3、BCL2等靶点发挥效用。体外实验表明,与对照组比较,Rg1组(5、10、20μmol/L)可显著抑制RPMI 8226细胞增殖(P<0.01)、促进细胞凋亡(P<0.01)和ROS产生(P<0.01),同时抑制NF-κB信号通路的活化(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1对MM有潜在的治疗作用,能够调节RPMI 8226细胞的氧化应激、细胞凋亡和增殖,其作用机制涉及对NF-κB信号通路的调控。

人参皂苷Rb1减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用研究

目的:探讨人参皂苷Rb1(GsRb1)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、GsRb1给药组(低、中、高剂量组),气管内给予LPS造模,给药组在造模前3 d分别腹膜腔注射给予不同剂量GsRb1预处理,造模12 h将其麻醉,先采集肺泡灌洗液后再处死取出肺组织,计算肺湿/干比,试剂盒检测灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及肺髓过氧化物酶(MPO)活性,Western blot检测肺组织核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结果:高剂量GsRb1能明显降低肺组织湿/干比(P<0.05);中、高剂量GsRb1能明显降低肺组织MPO活性(P<0.05);高剂量GsRb1明显降低小鼠肺泡灌洗液IL-1β和TNF-α水平(P<0.05);高剂量GsRb1能明显降低肺组织NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05)。结论:GsRb1可能通过调控NF-κB通路,减轻炎症反应,抑制LPS诱导的小鼠ALI。

人参皂苷Rg1对缺氧诱导所致人视网膜色素上皮细胞损伤的抑制作用及机制

目的探究人参皂苷Rg1(GRg1)对缺氧诱导所致人视网膜色素上皮(ARPE)细胞损伤的作用及机制。方法体外培养ARPE-19细胞,将其随机分为对照组、模型组及GRg1高、中、低剂量组与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂组。除对照组外,其余组采取氯化钴诱导ARPE-19细胞构建缺氧模型,通过CCK-8法、TUNEL法测定各组不同时间点细胞活性及凋亡情况,DCFH-DA荧光探针对各组活性氧(ROS)水平,经由RT-qPCR、Western blotting法测定各组细胞内HIF-1α、BDNF、PACAP38 mRNA与蛋白表达。结果与对照组相比,各组给药0、12、24 h时ARPE-19细胞活性均低、凋亡率高(P均<0.05);GRg1高剂量组给药12、24、48 h时ARPE-19细胞活性均高于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05),细胞凋亡率均低于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05);GRg1高剂量组给药24、48 h时细胞活性均高于GRg1中剂量组(P均<0.05)。与对照组相比,各组给药48 h时ARPE-19细胞ROS、HIF-1αmRNA及蛋白表达均高(P均<0.05);GRg1高剂量组ARPE-19细胞ROSHIF-1αmRNA及蛋白表达均低于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05);GRg1高剂量组ARPE-19细胞BDNF、PACAP38 mRNA及蛋白表达均高于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05);GRg1高剂量组与HIF-1α抑制剂组给药不同时间点细胞活性与凋亡率、细胞ROS、HIF-1α、BDNF、PACAP38表达比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论GRg1能减轻缺氧诱导所致ARPE-19细胞损伤,其机制可能与抑制细胞ROS、HIF-1α表达,上调BDNF、PACAP38表达有关。

人参皂苷Rb_(1)和Rg_(1)体外消化产物的UHPLC-TSQ MS分析

本研究采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(ultra-high-performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry,UHPLC-TSQ MS)法分析人参皂苷Rb_(1)和Rg_(1)在模拟唾液、胃液和肠液中的降解产物。在人参皂苷Rb_(1)的消化产物中发现了Rd、Rg_(3)、Rg_(5)、Rk_(1),其中在肠液中还发现了F_(2),表明F_(2)是肠液中特有的降解产物,降解途径为Rb_(1)→Rd→Rg_(3)→Rg_(5)/Rk_(1),Rb_(1)→Rd→F_(2)。在人参皂苷Rg_(1)的消化产物中发现了F_(1)和Rh_(1),降解途径为Rg_(1)→F_(1)和Rg_(1)→Rh_(1)。定量结果表明:降解产物含量在消化液中随时间而变化;在胃液中,Rg_(3)、Rd、Rg_(5)、F_(1)、Rh_(1)和Rk_(1)的达峰时间分别为1、2、4、2、2、4 h;在肠液中,7种降解产物的达峰时间均为4~6 h。另外,皂苷在唾液中的降解较胃液和肠液温和,而在胃肠道中的降解更广泛;在消化过程中,Rg_(1)比Rb_(1)更易降解。人参皂苷在消化道内会发生水解反应生成多种小分子皂苷,为Rb_(1)和Rg_(1)开发和利用提供了重要的化学与生物学基础。

人参皂苷Rg1减轻热应激致小鼠睾丸损伤的机制研究

目的探讨人参皂苷Rg1减轻热应激致小鼠睾丸损伤的机制。方法20只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为4组,每组5只。对照组(Control组)和热应激组(HS组)小鼠腹腔注射0.9%生理盐水[10 mL/(kg·d)×14 d],热应激+人参皂苷Rg1组(HS+Rg1组)和人参皂苷Rg1组(Rg1组)小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1[20 mg/(kg·d)×14 d]。HS组与HS+Rg1组小鼠在给药第7天时,将麻醉后小鼠下腹部置于43℃水浴中单次热应激30 min。小鼠精母细胞GC-2spd(ts)分为4组:对照组(Control组)细胞常规培养48 h;热应激组(HS组)细胞常规培养36 h,置于43℃水浴中单次热应激30 min,继续培养12 h;热应激+Rg1组(HS+Rg1组)在细胞培养体系中加入Rg1(终浓度50μmol/L),热应激处理同HS组;Rg1组不给予热应激处理,其余同HS+Rg1组。建模完成后1 d采集眼球血,ELISA法检测血清睾酮水平;摘取睾丸观察形态并称量,计算睾丸指数,HE染色观察睾丸组织病理学形态;制备睾丸组织匀浆检测过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;取附睾精子,计算机辅助精子分析(CASA)系统分析小鼠精子浓度和活力;TUNEL染色检测GC-2spd(ts)细胞凋亡情况;Western blot检测GC-2spd(ts)细胞Nrf2、Keap1、HO-1、Bax、Bcl-2和Caspase3蛋白表达量;RT-qPCR检测GC-2spd(ts)细胞Nrf2蛋白靶基因GCLC、GCLM和NQO1相对表达量。结果Rg1可阻止热应激所致睾丸质量和睾丸指数下降,减轻睾丸组织结构损伤,阻止精子浓度和活力下降,拮抗热应激所致睾丸间质细胞数量减少和血清睾酮水平下降,降低睾丸组织中MDA累积,提高抗氧化酶CAT和SOD的活性。Rg1还可减轻GC-2spd(ts)细胞凋亡,下调Bax、Caspase3和Keap1蛋白表达,增强Bcl-2、Nrf2和HO-1蛋白表达量,增强Nrf2蛋白靶基因GCLC、GCLM和NQO1相对表达量。结论Rg1对正常小鼠睾丸结构和功能影响不显著,但可有效提高小鼠睾丸抗热应激损伤能力,其机制可能与Rg1激活Nrf2信号通路,提高抗氧化酶活性,减少生精细胞凋亡有关。

人参皂苷Rb1通过KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进肝细胞癌HepG2细胞发生氧死亡

目的:探讨人参皂苷Rb1(Gn-Rb1)对肝细胞癌(HCC)HepG2细胞氧死亡的影响及其可能的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析氧死亡的关键基因PGAM5表达对HCC患者生存期的影响。选取辽宁省肿瘤医院收治的8例HCC患者的HCC组织与癌旁组织,通过WB法及qPCR检测氧死亡相关基因蛋白与mRNA的表达情况。将HepG2细胞随机分为对照组与Gn-Rb1组(予以200μmol/L Gn-Rb1干预),采用细胞克隆形成实验、划痕愈合实验分别检测Gn-Rb1对HepG2细胞的集落形成能力、迁移能力的影响,ELISA检测对细胞ROS生成水平的影响,微板法检测对细胞LDH释放水平的影响;WB法、qPCR法检测Gn-Rb1对HepG2氧死亡关键基因蛋白质与mRNA水平表达的影响。结果:生物信息学分析发现,PGAM5高表达肝癌患者总生存时间较低表达患者更长(P<0.05)。在临床HCC组织与癌旁组织样本中发现,相较于癌旁组织,在蛋白质与mRNA水平上,肿瘤组织KEAP1与PGAM5表达显著降低,NRF2表达显著升高(均P<0.01),p-AIFM1蛋白水平显著升高(P<0.05)。对HepG2细胞予以200μmol/L Gn-Rb1干预后,相较于对照组,Gn-Rb1组HepG2细胞的迁移能力与集落形成能力显著降低(均P<0.01),而LDH水平显著升高(P<0.05);相比于对照组,在mRNA和蛋白质水平上,Gn-Rb1组细胞中KEAP1、PGAM5表达均显著升高而NRF2表达均显著降低(均P<0.05),p-AIFM1蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:HCC组织中氧死亡被抑制,而Gn-Rb1能够通过调控KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进HepG2细胞氧死亡的发生,抑制细胞增殖和迁移能力。

HPLC法同时测定祛瘀散结片中人参皂苷Rg_1和人参皂苷Rb_1的含量

目的：建立祛瘀散结片中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，以Xterra TM RP18（4．6×250mm，5μm）为分离柱，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按标准规定进行梯度洗脱，203nm为检测波长，柱温为35℃。结果：人参皂苷Rg1和人参皂管Rb1的线性范围分别为75～750μg和75～750μg，平均回收率分别为98．0％和97．3％，RSD分别为0．54％和0．78％（n=5）。结论：该方法简便、准确、重复性好，可作为该制剂含量测定方法。

人参皂苷Rb1通过载脂蛋白M/线粒体凋亡途径对肝癌的影响及机制研究

目的:探究载脂蛋白M(ApoM)/线粒体凋亡在肝癌中的作用,以及人参皂苷Rb1(Rb1)通过ApoM/线粒体凋亡途径对肝癌影响的潜在机制。方法:生物信息学分析筛选ApoM在肝癌中的差异性表达及临床验证;分子对接技术确定Rb1与ApoM的靶向结合,体外培养人肝癌细胞(HepG2),并进行细胞活力检测(CCK-8)筛选Rb1最佳干预浓度,克隆实验用于检测HepG2细胞的增殖情况,划痕实验用于检测HepG2细胞的迁移能力,采用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测ApoM及线粒体凋亡相关基因Bcl2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达,实时萤光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测ApoM及线粒体凋亡相关基因Bax、Bcl2、Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平。结果:生存分析发现ApoM低表达肝癌预后更差,分子对接提示Rb1与ApoM之间具有较高亲和力,克隆及划痕实验提示Rb1有效抑制HepG2细胞增殖,Western Blotting及RT-qPCR验证Rb1可以干预线粒体凋亡相关基因蛋白和mRNA表达。结论:揭示了ApoM/线粒体凋亡在肝癌中发挥重要作用,人参皂苷Rb1可能通过ApoM/线粒体凋亡途径影响肝癌的可能潜在机制。