基于多生物学途径虚拟筛选人参皂苷Rg3治疗黑色素瘤的蛋白靶点

目的:采用多种生物信息学方法探讨人参皂苷Rg3治疗黑色素瘤的作用机制。方法:利用Genecards、在线人类孟德尔遗传数据库(Online Mendelian Inheritance in Man, OMIM)和治疗靶标数据库(Therapeutic Target Database, TTD)筛选黑色素瘤相关靶点。将靶点导入String数据库构建蛋白质互作(protein-protein interaction, PPI)网络,采用R语言igraph包拓扑分析后采用Cytoscape进行网络可视化。采用Discovery studio 2022(DS)分析靶蛋白的结合位点后进行Autodock Vina刚性和LibDock半柔性分子对接筛选人参皂苷Rg3治疗黑色素瘤的关键靶点。使用R语言对筛选出的关键靶点进行基因本体(Gene Ontology, GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)信号通路富集分析。采用分子动力学模拟方法探讨靶点蛋白-人参皂苷Rg3相互作用机制。结果:基于GeneCards、OMIM及TTD数据库筛选确定了341个疾病靶点。PPI网络拓扑分析鉴定出115个核心靶点。通过刚性和半柔性分子对接筛选出DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferases 3A,DNMT3A)、趋化因子CC亚家族受体2(CC subfamily receptor 2,CCR2)和趋化因子CXC亚家族受体4(CXC subfamily receptor 4,CXCR4)等19个关键靶蛋白与Rg3具有良好的结合亲和力。KEGG和GO富集分析表明CCR2、CXCR4、DNMT3A等蛋白参与机体的多种生物学功能和途径。分子动力学模拟分析证实了CCR2-Rg3、DNMT3A-Rg3与CXCR4-Rg3的稳定性。结论:DNMT3A、CCR2等为黑色素瘤治疗中人参皂苷Rg3的关键高选择性和高稳定性靶蛋白,人参皂苷Rg3可通过抗感染、调节免疫、影响细胞衰老等发挥抗黑色素瘤的作用,为进一步研究人参皂苷Rg3抗黑色素瘤的应用提供理论支持。

人参皂苷Rg3调控RANKL/RANK/TRAF6信号通路对绝经后骨质疏松症大鼠骨代谢、成骨细胞的影响

目的 分析人参皂苷Rg3调控核因子-κB受体活化体配体(RANKL)/核因子-κB受体活化体(RANK)/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)信号通路对绝经后骨质疏松症大鼠骨代谢、成骨细胞的影响。方法 选取50只健康雌性SPF级SD大鼠作为实验对象,随机取10只大鼠作为对照组,其余40只大鼠建立绝经后骨质疏松症模型,其中30只大鼠建模成功,将30只大鼠随机分为模型组、人参皂苷Rg3低剂量组、人参皂苷Rg3高剂量组,各10只。观察各组大鼠股骨病理组织,比较各组大鼠骨代谢指标、骨形态学指标、碱性磷酸酶(ALP)、甲状旁腺激素(PTH)、骨钙素、硬骨素水平,以及RANKL/RANK/TRAF6信号通路相关信使RNA(mRNA)及蛋白表达水平。结果 对照组大鼠骨小梁排列正常,成骨细胞、类骨质面积未发生变化,模型组大鼠成骨细胞数量减少。与模型组比较,人参皂苷Rg3低剂量组、人参皂苷Rg3高剂量组成骨细胞数量增多,且人参皂苷Rg3高剂量组成骨细胞数量比人参皂苷Rg3低剂量组多。各组大鼠骨小梁数量(TB.N)、骨小梁厚度(TB.Th)、总Ⅰ型胶原羧基端前肽(PⅠNP)、N-端骨钙素(N-MID)、PTH、骨钙素、硬骨素、RANKL mRNA、RANK mRNA、TRAF6 mRNA、RANKL蛋白、RANK蛋白、TRAF6蛋白水平比较,对照组>人参皂苷Rg3高剂量组>人参皂苷Rg3低剂量组>模型组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠骨小梁分离度(TB.Sp)、ALP水平比较,对照组<人参皂苷Rg3高剂量组<人参皂苷Rg3低剂量组<模型组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 人参皂苷Rg3可改善骨代谢,提高骨钙素、硬骨素水平,使大鼠骨质疏松症得到改善,其作用机制可能与调控RANKL/RANK/TRAF6信号通路有关。

人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

人参皂苷Rg3对骨质疏松大鼠骨代谢及肠钙吸收功能的影响

目的:探究人参皂苷Rg3对骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠骨代谢及肠钙吸收功能的影响。方法:60只SPF级雌性Wistar大鼠,按照随机数字法分为空白组、模型组、阳性组、实验组,每组大鼠各15只。除空白组外,其他大鼠均采用去势(OVX法)法制备OP大鼠模型。造模成功后,空白组及模型组生理盐水灌胃[10 mL/(kg·d)],阳性组给予阿仑膦酸钠维D3灌服(每周6.25 mg/kg),实验组给予人参皂苷Rg3[80 mg/(kg·d)]灌胃治疗,连续干预治疗12周。检测各组股骨、胫骨骨密度变化,酶联免疫法检测大鼠血清中骨保护素(osteoclastogenesis inhibitory factor,OPG)、Ⅰ型前胶原氨基末端肽(procollagen typeⅠNterminal propeptide,PINP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRACP)、I型胶原交联C-末端肽(TypeⅠcollagen carboxy-terminal peptide,CTX-I)含量变化;原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法分析各组肠黏膜组织细胞凋亡情况;Masson法分析各组肠黏膜组织纤维病理改变;免疫组化法检测各组肠黏膜组织中维生素D膜相关快速反应结合蛋白(membrane-associated rapid response steroid-binding,1,25-D3-MARRS)蛋白表达;蛋白免疫印迹法及RT-PCR法检测各组Jagged1、Notch1、Hes1蛋白及mRNA表达水平。结果:大鼠造模后股骨、胫骨骨密度明显下降,血清中OPG、PINP、TRACP及CTX-I含量明显变化(P<0.05);肠黏膜组织病理发生明显改变,组织纤维化增强,细胞凋亡程度增加;肠黏膜组织1,25-D3-MARRS蛋白表达降低(P<0.05)。治疗后与模型组对比,阳性组及实验组大鼠股骨、胫骨骨密度明显升高,血清中OPG、PINP、TRACP及CTX-I含量明显改善(P<0.05);肠黏膜组织病理发生明显改善,纤维化降低,细胞凋亡程度降低;肠黏膜组织中Jagged1、Notch1、Hes1蛋白及mRNA表达明显改善(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg3能够提高OP大鼠骨密度,减轻肠黏膜组织细胞凋亡及组织纤维化,增加肠黏膜1,25D3-MARRS蛋白表达,改善肠道钙吸收。

人参皂苷Rg3对乳腺癌骨转移大鼠疼痛的缓解作用及机制研究

目的:研究人参皂苷Rg3缓解乳腺癌骨转移大鼠痛觉行为的作用及机制。方法:采用大鼠乳腺癌细胞注入胫骨骨髓腔内构建乳腺癌骨转移疼痛模型;随机分成假性手术组、模型组以及人参皂苷Rg3给药组;连续3天静脉注射人参皂苷Rg3;记录大鼠痛觉行为学变化;分子对接分析人参皂苷Rg3与蛋白质的结合;免疫荧光和免疫印迹法检测各组动物脊髓组织炎症相关蛋白表达变化。结果:乳腺癌骨转移可导致骨组织损伤,诱发大鼠机械痛敏、热痛敏及自发痛。同时脊髓胶质细胞和NLRP3炎症小体激活,促炎因子IL-1β表达上调,抗氧化因子Nrf2和GPX4表达下降,线粒体氧化损伤相关蛋白DHODH和细胞色素C表达增加。人参皂苷Rg3给药后,大鼠机械痛、热痛和自发痛缓解,脊髓炎症信号下降,抗氧化Nrf2/GPX4信号增加,线粒体过氧化物信号下降。分子对接显示人参皂苷Rg3可结合Nrf2。结论:人参皂苷Rg3激活Nrf2介导的抗氧化反应,降低脊髓炎症,从而缓解癌痛。

人参皂苷Rg3治疗放射性直肠炎大鼠的作用机制研究

目的基于TNF-α/NF-κB及Caspase-8信号通路,研究人参皂苷Rg3(GRg3)治疗放射性直肠炎大鼠的机制。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、低剂量GRg3治疗组、中剂量GRg3治疗组、高剂量GRg3治疗组,每组8只。6MV X射线单次21.5 Gy腹部照射进行模型复制,照射后第8天开始给药,观察大鼠情况并称重,2周后腹主动脉取血并处死解剖。HE染色观察直肠组织病理学变化,酶联免疫吸附试验检测血清TNF-α、IL-4、IL-10水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测直肠组织IKK-β、IκB-α、Caspase-8基因表达,Western blotting检测IKK-β、IκB-α、p-IκB-α、NF-κB p50、Caspase-8蛋白表达。结果照射后第6天,与对照组比较,其他各组大鼠体重明显降低(P<0.05),且除对照组外的其他组大鼠体重比较,差异无统计学意义(P>0.05);开始灌胃后,对照组大鼠体重逐步上升,模型组大鼠体重不断下降,地塞米松组和GRg3治疗组大鼠在治疗前3天体重较治疗前无明显变化,从第4天开始逐渐增长;与模型组相比,灌胃第8、14天,地塞米松组和高剂量GRg3治疗组大鼠体重明显升高(P<0.05)。治疗2周后,地塞米松组直肠组织结构完整,黏膜层见少量的炎症细胞浸润;低剂量GRg3治疗组直肠组织大范围溃疡,肠腺形状、大小不一,数量减少,并伴大量炎症细胞浸润,少量肠腺扩张,腺腔内可见坏死细胞碎片,损伤侵及黏膜下层,黏膜肌层及黏膜下层亦可见炎症细胞浸润;中剂量GRg3治疗组见少量黏膜上皮细胞坏死脱落,肠腺形状、大小不一,伴中等量炎症细胞浸润,少量肠腺扩张,腺腔内可见坏死细胞碎片;高剂量GRg3治疗组直肠组织结构完整,见黏膜层水肿,肠腺排列疏松,伴炎症细胞浸润。与对照组比较,模型组大鼠血清TNF-α水平升高(P<0.05),IL-4、IL-10水平降低(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组及高剂量GRg3治疗组血清TNF-α水平降低(P<0.05),IL-4、IL-10水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠直肠组织IKK-β、IκB-α及Caspase-8基因表达升高(P<0.05);经过不同的干预治疗后,与模型组比较,各治疗组IKK-β、IκB-α及Caspase-8基因表达均降低(P<0.05),且随着GRg3治疗剂量的升高各因子表达呈下降趋势;地塞米松组与高剂量GRg3治疗组IKK-β、IκB-α及Caspase-8 mRNA的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组大鼠直肠组织IKK-β、p-IκB-α、胞核NF-κB p50及Caspase-8蛋白表达升高(P<0.05),IκB-α、胞浆NF-κB p50蛋白表达降低(P<0.05);经过不同治疗后,与模型组相比,地塞米松及中、高剂量GRg3治疗组IKK-β、p-IκB-α、胞核NF-κB p50及Caspase-8蛋白表达均降低(P<0.05),IκB-α及胞浆NF-κB p50蛋白表达均升高(P<0.05)。中、高剂量GRg3治疗组与地塞米松组各因子蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论GRg3通过抑制IKK-β的表达,减少IκB-α的磷酸化,增加胞浆中NF-κB p50的滞留,减轻放射性直肠炎,促进肠道组织损伤修复;GRg3能抑制电离辐射引起的肠道细胞凋亡减轻炎症反应。

人参皂苷Rg3减轻帕金森病小鼠神经系统氧化应激损伤的作用机制

目的:探究人参皂苷Rg3减轻帕金森病(Parkinson′s disease,PD)小鼠神经系统氧化应激损伤的作用机制。方法:将60只C57BL/6小鼠分为对照组、PD组、低剂量干预组和高剂量干预组,每组15只。通过腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy1-4-phenvl-1,2,3,6-tetrahvdropvridine,MPTP)构建PD小鼠模型,建模前3天,低、高剂量干预组小鼠分别腹腔注射3、12 mg/kg人参皂苷Rg3,造模后继续干预28天,对照组和PD组腹腔注射等量生理盐水。各组小鼠腹腔注射第4、8、12天时进行爬杆实验和旋转实验评估运动能力;末次腹腔注射完成后,断颈处死小鼠取脑组织制成冰冻切片,免疫组化分析黑质纹状体中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达水平;酶联免疫吸附法测定黑质纹状体中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)水平;Western blot方法检测黑质纹状体中TH、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(quinoneoxidoreductase 1,NQO1)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PD组小鼠爬杆时间延长、旋转停留时间缩短、MDA水平升高,TH阳性率、SOD、GSH-PX活性、TH、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与PD组比较,低、高剂量干预组小鼠爬杆时间缩短,旋转停留时间延长,MDA水平降低,TH阳性率、SOD、GSH-PX活性、TH、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg3可能通过激活黑质纹状体中Nrf2/HO-1/NQO1通路,减轻PD小鼠神经系统氧化应激损伤,而改善其病理状态。

黑参中人参皂苷Rg3的含量检测

目的建立HPLC法测定黑参中人参皂苷Rg3的含量,有效控制其内在质量。方法采用HPLC法对黑参中人参皂苷Rg3进行含量测定,色谱柱为Ultimate Polar RP(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)——0.01%磷酸水(B),梯度洗脱:0~5min(81%B);5~10min(76%B);10~30min(60%B);30~40min(50%B);40~60min(40%B),柱温:30℃,检测波长:203nm,流速:0.8 mL/min。结果人参皂苷Rg3含量在0.2~2μg时线性关系良好,回归方程为Y=59.819X-0.3441,R^(2)=0.9997(n=5),经测定黑参中人参皂苷Rg3的含量为0.201%。结论HPLC法测定黑神中人参皂苷Rg3的方法,可靠,稳定,简单,易行。建立了稳定的黑参中人参皂苷Rg3含量的测定方法,为黑参的质量控制和开发利用提供参考。

人参皂苷Rg3脂质体制备工艺优化

目的人参皂苷Rg3脂质体工艺优化研究。方法采用薄膜分散-超声法制备人参皂苷Rg3脂质体,通过正交试验,以包封率为评价指标,考察药物与大豆卵磷脂与胆固醇的质量比、水化体积、水化温度对人参皂苷Rg3脂质体的影响。结果人参皂苷Rg3脂质体的最佳制备工艺为药物与大豆卵磷脂与胆固醇用量比为1∶1∶6,水化体积为3 mL,水化温度40℃,此时包封率为85.05%。

人参皂苷Rg3复合水凝胶的制备及抗菌性能研究

目的选用人参皂苷Rg3为主要成分与透明质酸(Gel)水凝胶相结合,开发一种可以用于促进伤口愈合的伤口敷料。方法(1)制备负载Rg3的复合水凝胶,在乙酸溶液(0.5%w/v)中加入Cs并持续搅拌直至完全溶解,通过低温冻融的方法用P407包封Cs溶液。将HA添加到蒸馏水中,使用冷搅拌法包封P407和Cs,然后除去这些聚合物中的沉淀物,获得原位形成的水凝胶。(2)用扫描电子显微镜(SEM)检测,观察负载Rg3的Rg3-Gel的结构表征和性能表征。(3)进行复合水凝胶的体外抗菌实验,将实验组分为Blank、Blank+40℃、Gel、Rg3和Rg3-Gel组,分别进行体外抗菌实验。(4)负载Rg3的Rg3-Gel的抗菌性能体外研究—动物建模实验。本研究使用了30只健康雄性SD小鼠,无菌条件下,在每只小鼠的背部制造直径10mm的圆形全层创面。将这些小鼠随机分布在3组(n=10)中,I组未接受任何治疗(裸伤)的小鼠作为对照,II组用Blank-Gel治疗,Ⅲ组的小鼠伤口每天用Rg3-Gel治疗。结果在治疗后第4天,观察到所有动物的伤口大小都有一定程度的缩小,而Rg3-Gel组小鼠在第8、12和16天表现出最小的伤口面积。与空白凝胶组相比,Rg3-Gel组在整个愈合过程中的愈合率比其他组更快,第16天闭合率为90.68±1.3%,而原位水凝胶和对照组的伤口愈合率分别为87.63%和83.67%。结论Rg3-Gel可加速伤口愈合,将人参皂苷Rg3和透明质酸(Gel)水凝胶相结合,既可以利用微环境加速伤口愈合,又可以动态调节和响应伤口微环境的自适应性。

高效液相色谱法同时测定人参中人参皂苷F2和人参皂苷Rg3的含量

目的建立反相高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定人参中人参皂苷F2和人参皂苷Rg_(3)含量的分析方法。方法样品经高温高压蒸汽灭菌处理后,以0.4%磷酸水溶液:乙腈(90:10,V:V)为流动相,梯度洗脱,样品经C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,并于203 nm波长检测。结果人参皂苷F2在质量浓度8.46~84.56μg/mL之间呈现良好的线性关系,r^(2)=1.0000,加标回收率为97.54%~104.28%,相对标准偏差为2.4%;人参皂苷Rg_(3)在质量浓度18.61~139.60μg/mL之间呈现良好的线性关系,r^(2)=0.9999,加标回收率在96.42%~102.25%之间,相对标准偏差为2.0%。结论该方法前处理简捷、快速,色谱分析又能同时测定人参(药材)中人参皂苷F2和人参皂苷Rg_(3)含量,提高检测效率,可用于实验室对人参中人参皂苷F2和人参皂苷Rg_(3)的批量检测。

人参皂苷Rg3抑制非小细胞肺癌细胞重编程的机制研究

非小细胞肺癌(NSCLC)作为一种常见的肺部恶性肿瘤,其全球发病率和死亡率仍处于较高水平。尽管传统疗法在局部晚期和转移性NSCLC的治疗方面取得了一定进展,但鉴于肿瘤细胞具有免疫逃逸特性,治疗效果尚不理想。研究发现肿瘤细胞重编程是导致免疫逃逸的重要因素。人参皂苷Rg3作为人参的有效活性成分,是一种具有不同结构的天然小分子化合物,其主要作用为辅助抗肿瘤。通过抑制NSCLC细胞的重编程,人参皂苷Rg3的主要抗肿瘤免疫逃逸机制包括降低肿瘤细胞免疫检查点PD-L1的表达、抑制上皮间质转化(EMT)以及肿瘤细胞干性。本文将从上述三个方面对人参皂苷Rg3抑制非小细胞肺癌细胞重编程的机制展开论述。

PI3K/Akt信号通路在小檗碱联合人参皂苷Rg3诱导鼻咽癌细胞凋亡中的调控作用

目的研究PI3K/Akt信号通路在小檗碱联合人参皂苷Rg3诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用。方法RTCA法检测小檗碱联合人参皂苷Rg3对鼻咽癌CNE2、6-10B细胞增殖的影响;Hoechst 33342染色法、荧光双染流式细胞仪检测药物对CNE2细胞凋亡的影响;Western blot法检测PI3K/Akt信号通路关键蛋白及凋亡相关蛋白表达的变化。结果小檗碱联合人参皂苷Rg3可抑制鼻咽癌CNE2、6-10B细胞的增殖,诱导CNE2细胞的凋亡。与单独用药组相比,联合用药组细胞的PI3K/Akt信号通路关键蛋白PI3K p110α和p-Akt的表达明显下调(P<0.05)。加入PI3K/Akt信号通路的激活剂SC79后,小檗碱联合人参皂苷Rg3抑制CNE2细胞增殖和诱导细胞凋亡的效应降低,p-Akt、Survivin、PCNA及Bcl-2表达量增加,Bax的表达下降。结论小檗碱联合人参皂苷Rg3可通过PI3K/Akt信号通路发挥抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。

人参皂苷Rg3对结肠癌Caco-2细胞增殖和迁移的影响

目的研究人参皂苷Rg3对结肠癌Caco-2细胞的增殖和迁移能力的影响,为该药物的临床应用提供实验依据。方法MTT法检测人参皂苷Rg3处理的Caco-2细胞增殖情况,AnnexinV-PI流式细胞术检测Rg3处理的Caco-2细胞凋亡情况,实时RT-PCR和Western blot检测Bax、Bcl-2和caspase-3基因表达情况变化,ELISA检测细胞培养上清中IL-6和VEGF质量浓度,划痕实验检测细胞迁移能力。结果人参皂苷Rg3可显著降低Caco-2细胞的增殖并诱导凋亡,Rg3处理的Caco-2细胞中Bax和caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调;Rg3可以影响细胞培养上清中IL-6和VEGF因子的分泌,Rg3处理的Caco-2细胞迁移能力。结论人参皂苷Rg3促进细胞凋亡,抑制结肠癌Caco-2细胞增殖和迁移。

人参皂苷Rg3诱导膀胱癌细胞系EJ的凋亡作用

目的:探讨Rg3抑制膀胱癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。方法:用一定质量浓度的Rg3处理膀胱癌细胞系EJ细胞,MTT法检测细胞增殖活力和抑制率50%的时候药物的浓度(IC50);Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞的形态;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率;免疫细胞化学观察caspase-3的表达变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带。结果:Rg3抑制EJ细胞生长,呈浓度依赖关系,Rg3处理细胞48 h的IC50为125.5 mg.L-1;经150 mg.L-1Rg3处理细胞24 h和48 h后,观察到典型的凋亡细胞形态,即染色质凝集、核片段化、凋亡小体、核内致密的颗粒状荧光及caspase-3的表达增加;并呈时效依赖关系;用75 mg.L-1Rg3处理细胞24,48,150 mg.L-1的Rg3处理细胞48 h后,Rg3诱导了细胞凋亡和调节细胞周期,S期和G2/M期的细胞比率增加,G0/G1的细胞比率下降;凋亡率从对照组的(1.05±0.17)%分别上升到(8.41±0.98)%,(18.57±2.20)%和(33.98±1.64)%,琼脂糖凝胶电泳检测出典型的DNA梯形条带,其效应随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。结论:Rg3可通过诱导EJ细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。

人参皂苷Rg3对HSE模型鼠的治疗作用及免疫调节效应

目的:研究人参皂苷Rg3对单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型鼠的治疗作用及其免疫调节效应。方法:腹腔注射单纯疱疹病毒1(HSV-1)病毒悬液,用PBS做六个稀释度10倍递次稀释,分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6,制备小鼠HSE模型。硝酸还原酶法检测小鼠脑组织NO含量。腹腔注射人参皂苷Rg3,剂量分别为0.3、1.0和3.0 mg.kg-1,观察Rg3对HSE模型鼠存活时间的影响和脑组织病理形态的改变。MTT法检测Rg3对小鼠淋巴细胞转化功能和NK细胞毒活性的影响,鼠脾T淋巴母细胞增殖分析法测定上清中IL-2活性,细胞病变抑制法测定IFN-γ活性。结果:成功建立HSE小鼠模型。HSE模型鼠脑组织中NO含量高于对照组(P<0.05)。0.3 mg.kg-1Rg3组和疱疹性脑炎小鼠的存活时间延长,脑组织病理改变减轻。0.4 mg.kg-1Rg3组SI、IL-2和IFN-γ高于对照组(P<0.05),NK细胞毒活性高于对照,但差异无显著性(P<0.05)。结论:Rg3对HSE小鼠具有保护作用,具有免疫调节效应,是一种具有潜在开发前景的抗HSV-1药物。

人参皂苷Rg3抗肿瘤机制研究进展

人参皂苷Rg3是人参提取物中主要抗肿瘤成分,可通过多途径发挥作用,尤其抗肿瘤血管新生作用具有特色,被认为是中药血管新生抑制剂。目前该药的研究已初具规模,近年来已通过多角度研究阐述其部分作用机制,对该药抗肿瘤机制研究进展做一综述,以备临床参考。

人参皂苷Rg3的拉曼光谱研究

人参皂苷是人参的有效化学成分,其中人参皂苷Rg3因具有显著的生理活性而备受关注。运用拉曼光谱的方法,对人参皂苷Rg3的两种异构体20-(R)-Rg3和20-(S)-Rg3进行了测量和分析。因20位羟基空间位置不同,20-(R)-Rg3与20-(S)-Rg3相比,归属于亚甲基的振动峰发生了明显的变化,表明两种异构体的堆积方式不同。归属于CC振动的1674cm-1峰的强度明显降低,表明在20-(S)-Rg3中,C27和C28较20-(R)-Rg3处于分子内部。对比拉曼光谱还发现,这一对异构体中糖环的空间结构基本相同。两种异构体拉曼光谱的明显差异,使得拉曼光谱技术成为鉴别人参皂苷Rg3异构体的一种快速、简便的分析方法。

人参皂苷Rg3对人胰腺癌细胞Pim-3及Bad凋亡蛋白表达的影响

背景与目的:人参皂苷Rg3是一种抗肿瘤中药单体,有研究表明人参皂苷Rg3对肝癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌等肿瘤细胞的浸润具有明显抑制作用。本实验目的是研究人参皂苷Rg3对人胰腺癌细胞株PANC-1中原癌基因Pim-3及磷酸化Bad蛋白pBad(Ser112)、Bad(Ser136)表达的影响。方法:用浓度为0、10、20、40和80μmol/L的人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测人参皂苷Rg3对PANC-1细胞增殖的抑制作用;用倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对PANC-1细胞凋亡的诱导作用;用Western blot法检测经不同浓度人参皂苷Rg3处理后的PANC-1细胞中pim-3、Bad、pBad(Ser112)和pBad(Ser136)的表达;定向克隆Pim-3的发夹状寡核苷酸(shor thairpin RNA,shRNA)到真核表达载体形成重组质粒pSilencer 3.1-HINeo-Pim-3 shRNA,将重组质粒通过脂质体介导转染PANC-1细胞,采用Annexin V/PI流式细胞分析法检测转染后PANC-1细胞的凋亡,用Western blot法检测转染后PANC-1细胞的pim-3及pBad(Ser112)的表达。结果:10、20、40和80μmo1/L的人参皂苷Rg3对PANC-1细胞增殖的抑制率分别为20.2%、33.4%、52.8%、65.3%;经10～80μmol/L的人参皂苷Rg3处理后PANC-1细胞呈现明显的凋亡形态学改变,80μmol/L人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,与正常对照组细胞凋亡率(3.3±2.1)%比较,处理组细胞凋亡率(12.2±1.3)%增加(P<0.05);人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,Bad总蛋白表达没有明显变化。pim-3和pBad(Ser112)的表达均随人参皂苷Rg3浓度的增加而逐渐减弱。PANC-1细胞中pBad(Ser136)不表达;Pim-3 shRNA转染PANC-1细胞后,与正常对照组比较,转染组早期凋亡率和总凋亡率均增加[(11.5±3.7)%vs.(5.8±2.2)%,P<0.01;(20.8±2.6)%vs.(13.0±4.1)%,P<0.05],转染组pim-3及pBad(Ser112)表达均低于正常对照组。结论:人参皂苷Rg3可下调胰腺癌细胞PANC-1中Pim-3以及磷酸化Bad蛋白的表达,从而抑制PANC-1细胞增殖,诱导细胞凋亡。