茯苓多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用

为评价茯苓(Poria cocos)多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用,用CCK-8法测定茯苓多糖对细胞增殖的抑制率,用DAPI染色法、AOEB双荧光染色法分析茯苓多糖对细胞凋亡的影响,用细胞划伤愈合实验测定茯苓多糖对细胞迁移能力的影响,用蛋白免疫印迹实验检测茯苓多糖对细胞凋亡、迁移相关蛋白表达的影响。结果表明:茯苓多糖具有抑制NCI-H460细胞增殖、集落形成和迁移的能力,可诱导NCI-H460细胞凋亡;500、1000μg·mL^(-1)的茯苓多糖可使Bax和P53蛋白表达量升高,Bcl-2和MMP-2蛋白表达量降低。

腺病毒介导的IL-24对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的体外抑制效应

目的研究腺病毒介导的IL-24基因表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及分子机制。方法将Ad-IL-24重组腺病毒感染NCI-H460细胞。以Western blot法鉴定IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;MTT法检测重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;经Annexin-V-PE/7-AAD染色后流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率变化;RT-PCR检测NCI-H460细胞中bax、caspase-3、bcl-2、survivin等因子的表达。结果腺病毒介导的IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达;Ad-IL-24组对NCI-H460细胞的生长具有明显的抑制作用,Ad-IL-24能够上调bax、caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、survivin等因子的表达,诱导细胞凋亡。结论腺病毒介导的IL-24基因在体外可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

三氧化二砷对人大细胞肺癌NCI-H460细胞凋亡影响的研究

目的:研究在临床上,三氧化二砷(As2O3)对人大细胞肺癌(NCI-H460细胞)细胞增殖、凋亡的影响,以探讨新的肺癌治疗方法。方法配制NCI-H460细胞的细胞悬液(浓度为5×104个/mL),给予不同浓度的As2O3干预,并将其分为4组浓度分别为:10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L ,各组干预时间分别为24、48、72 h。细胞增殖抑制率通过MTT法检测,各组细胞形态学的改变通过镜下观察;细胞凋亡的形态学的变化通过原位末端标记法(TUNEL)检测,并与阴性对照组进行比较;按上述干预浓度及干预时间,使用流式细胞仪检测细胞凋亡指数。结果 As2O3对NCI-H460细胞增殖的抑制率随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05),凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05)。结论 As2O3可抑制NCI-H460细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。

鸦胆子油乳抑制肺癌NCI-H460细胞的增殖及其机制

目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制。方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作用;吉姆萨染色后光学显微镜下观察NCI-H460细胞形态学改变;流式细胞仪测定NCI-H460细胞凋亡率;caspase-3酶活性试剂盒检测NCI-H460细胞caspase-3酶活性。结果:鸦胆子油乳可剂量和时间依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,80μg/ml鸦胆子油乳作用72h时的抑制率达(91.07±1.60)%。鸦胆子油乳作用后,NCI-H460细胞呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示,10、20和40μg/ml鸦胆子油乳作用48h后,NCI-H460细胞凋亡率分别为(45.23±4.30)%、(54.14±3.09)%和(61.57±7.28)%(P<0.01)。鸦胆子油乳可剂量依赖性上调NCI-H460细胞caspase-3酶活性,40μg/ml鸦胆子油乳时caspase-3酶活性为(1.07±0.07)μmol/μg,是对照组的4.97倍(P<0.01)。结论:鸦胆子油乳可能通过活化caspase-3诱导NCI-H460细胞凋亡,抑制NCI-H460细胞增殖。

新化合物D261抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖及其作用机制

肺癌是当今恶性肿瘤死亡率最高的癌症。早期肺癌主要以手术治疗为主,并辅以放疗化疗。但是化疗药物毒副作用大,且抗药性在一些肿瘤靶向性药物中逐渐显现。因此,亟需新的抗肿瘤药物。天然产物是小分子新药的主要来源。我们在对天然小分子化合物的筛选过程中发现D261（从固体发酵物中提取,纯度大于95%）具有潜在的抗肿瘤活性,且对非小细胞肺癌的抑制作用最显著。因此,本文对D261影响非小细胞肺癌NCI-H460及其相关机制作了初步探讨。

二去水卫矛醇对肺癌NCI-H460细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制作用

目的评价二去水卫矛醇(dianhydrogalactitol,DAG)在肺癌NCI-H460细胞上的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用CCK-8法、细胞克隆形成实验,评价DAG对NCI-H460细胞的增殖抑制作用。显微拍照观察细胞形态改变;Hoechst 33342检测细胞核染色质的变化。Real time PCR法检测拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)mRNA的表达水平。Western blot法检测TopoⅡ蛋白表达水平。另外,应用计算机模拟分子对接技术来预测DAG与TopoⅡ的相互作用。结果 CCK-8法检测结果显示,DAG对NCI-H460细胞的体外抗肿瘤活性明显。细胞克隆形成实验结果表明,DAG能持续抑制肿瘤细胞的增殖。Hoechst 33342检测细胞凋亡发现细胞核染色质发生明显改变。Real time PCR和Western blot检测结果显示TopoⅡ mRNA和蛋白表达量降低。计算机模拟分子对接显示DAG与TopoⅡ有相互结合作用。结论DAG能明显抑制NCI-H460细胞的增值,作用机制研究表明DAG能降低TopoⅡ mRNA和蛋白水平,并与TopoⅡ结合,最终可能导致DNA双链断裂,引起细胞死亡。

携带IL-24的溶瘤腺病毒联合5-Fu对NCI-H460肺癌细胞的生长抑制效应

研究利用携带IL-24的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞NCI-H460生长的体外抑制效应。利用RT-PCR和Western blot法分别检测了IL-24在转录和翻译水平分析,发现IL-24在经ZD55-IL-24感染的NCI-H460中能有效表达,而未感染ZD55-IL-24的NCI-H460则无表达;用结晶紫染色法定性分析了ZD55-IL-24联合5-FU对NCI-H460的生长抑制和杀伤作用,结果表明联合应用比单用时效果更显著;通过MTT法进行的定量分析也表明ZD55-IL-24与5-FU联合处理48 h后,NCI-H460的增殖抑制率显著高于单用ZD55-IL-24或5-FU(P<0.05);最后,用Hoechst33258染色法观察了细胞凋亡,结果也显示联合应用ZD55-IL-24和5-FU组的细胞凋亡现象比单用的显著。本研究初步证实了ZD55-IL-24显著提高了NCI-H460对化疗药物的敏感性,联合疗法对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强。

抑制Bcl-2基因表达增强非小细胞肺癌NCI-H460细胞放射敏感性的研究

背景与目的:Bcl-2基因是一种重要的抑制细胞凋亡的基因,广泛存在于各种肿瘤细胞中。本研究利用短发夹RNA(shRNA)重组质粒抑制Bcl-2基因的表达,观察其对非小细胞肺癌NCI-H460的细胞凋亡和放射敏感性变化的影响。方法:将特异性抑制Bcl-2基因表达的干扰质粒Bcl-2/shRNA稳定转染NCI-H460细胞,获得H460-RNAi细胞,同时设转染含无义序列Neg-shRNA质粒的H460-Neg细胞及未转染的H460细胞为对照组,采用Westernblot法,观察Bcl-2基因在蛋白表达水平的变化;X射线照射后,采用细胞形态学及克隆形成实验,检测RNA干扰对NCI-H460细胞凋亡和放射敏感性的影响。结果:H460-RNAi细胞的Bcl-2蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05);H460-RNAi细胞的凋亡率[(10.8±0.7)%]明显高于对照组(P<0.05),4GyX线照射48h后的凋亡率[(24.9±1.4)%]明显高于对照组(P<0.05)及未照射组(P<0.05);H460-RNAi细胞的存活参数D0、Dq、N和SF2值分别为0.97、0.75、2.18和0.26,均低于其余两组,而H460细胞组与H460-Neg细胞组比较差异无统计学意义(分别为1.39、1.39、2.72、0.52和1.21、1.28、2.87、0.46)。结论:Bcl-2/shRNA重组质粒可以有效抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞的Bcl-2基因的表达,增强NCI-H460的细胞凋亡及放射敏感性。

TRAIL联合吉西他滨对肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察吉西他滨（gemcitabine）联合TNF相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡。结果：吉西他滨和TRAIL单用或联用均可浓度（0.00110μg/ml）和时间（24、48、72 h）依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,两药联用比单用时抑制率更高,3组药物作用72 h时对肿瘤的抑制率分别为14.9%77.5%、23.4%74.8%、22.3%80.5%;作用72 h时两药单用和联用对细胞增殖抑制的IC50分别为0.085 3、0.098 2、0.043 5μg/ml。两药联用对NCI-H460细胞增殖的抑制效果还与用药顺序以及两药比例有关,吉西他滨作用24 h后再加TRAIL比TRAIL作用24 h后再加吉西他滨对NCI-H460的抑制效果更好,吉西他滨与TRAIL联用的比例为1∶0.3时对NCI-H460细胞增殖的抑制率最大。吉西他滨和TRAIL联用时NCI-H460细胞的凋亡率显著高于两药单用的凋亡率（49.04%vs29.33%、25.69%,P〈0.01）。结论：吉西他滨与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞NCI-H460的增殖、促进细胞凋亡。

不同方法建立的人大细胞肺癌裸鼠移植瘤模型的生物学特点

目的比较三种常用的皮下移植瘤造模方法建立的人大细胞肺癌NCI-H460裸鼠移植瘤模型的不同生物学特点,为不同的研究寻找合适的造模方法提供实验依据。方法分别用NCI-H460细胞,NCI-H460移植瘤组织块和移植瘤匀浆液对于BALB/c-nu/nu裸鼠建立皮下移植瘤模型,运用一般生物学指标观察三种移植瘤的成瘤率、瘤重、倍增时间和组织形态;采用全自动生化分析仪检测其外周血中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血糖(G1u)、尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)等生化指标;利用血球分析仪检测白细胞总数(WBC)并进行分类,最后体外对其腹腔巨噬细胞吞噬活性和NK细胞活性进行了考察。结果本实验中细胞法和匀浆法的成瘤率及肿瘤生长速率显著高于埋块法且其生长更为均一,差异较小。接种5周后,与正常裸鼠比较,三组荷瘤小鼠血液中ALT、AST显著升高,BUN、CREA显著降低,埋块组的AST和BUN两项指标显著高于其他两荷瘤组。此外,接种2周后,荷瘤裸鼠的GLU显著低于正常裸鼠,匀浆液组的GLU降得最低。白细胞中,三种方法组荷瘤小鼠血液中LYM%、MN%、HGB均有降低,匀浆液组和细胞培养组的荷瘤小鼠血液中WBC、NEUT%、PLT显著高于埋块组。免疫细胞活性方面,两种细胞均呈现出正常细胞组>匀浆组>细胞组>埋块组的趋势。结论细胞培养法接种数量可控,肿瘤生长均匀,适合建立不同实验需求的移植瘤模型,组织块移植法适于建立中药抗肿瘤筛选的动物模型,而匀浆液移植法则不推荐使用。裸鼠的生理生化状态和免疫功能与肿瘤的生长有密切的关系。

石蒜碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡作用及其机制

目的通过研究石蒜碱在体外对人肺癌NCI-H460细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨石蒜碱抗肿瘤机制。方法 MTT法检测石蒜碱对NCI-H460细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡率,比色法检测凋亡因子相关因子Caspase 3活性。结果石蒜碱能够有效抑制肺癌NCI-H460细胞增殖,IC_(50)为(5.79±0.11)μmol/L,对NCI-H460细胞的凋亡具有诱导效应,可增强肺癌Caspase 3的活性。结论石蒜碱在体外能有效地抑制NCI-H460细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与激活Caspase 3的表达从而诱导肿瘤细胞凋亡有关。

蒙药沙参四味汤抑制人肺癌NCI-H460细胞生长机制的研究

目的:研究蒙药沙参四味汤对人肺癌NCI-H 460细胞凋亡的影响,并深入探讨其分子学机制。方法:沙参四味汤处理人肺癌NCI-H 460细胞后,通过RT-PCR分析沙参四味汤对人肺癌细胞GADD45a基因RNA表达的影响。结果:通过RT-PCR分析可以发现不同浓度蒙药沙参四味汤对人肺癌NCI-H 460细胞GADD45a基因的表达均有影响,48 h后GADD45a基因RNA的表达增强。结论:蒙药沙参四味汤可以通过调节人肺癌细胞中GADD45a的表达,诱导人肺癌NCI-H 460细胞凋亡状态,从而发挥蒙药沙参四味汤在人肺癌NCI-H 460细胞中的抗肿瘤作用。

三氧化二砷抑制人肺癌细胞NCI-H460增殖并促进其凋亡实验研究

目的:探讨三氧化二砷对人肺癌细胞NCI-H460增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:体外培养人肺癌细胞株NCI-H460,利用CCK-8法、集落形成实验、流式细胞技术分别检测三氧化二砷对NCI-H460细胞的增殖、集落形成、细胞周期和凋亡,Western bolt检测相关细胞周期因子和凋亡蛋白的表达。结果:三氧化二砷能够明显抑制NCI-H460细胞的增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡,并且呈浓度依赖性。Western bolt显示:随着药物浓度的增加,B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、周期蛋白依赖性激酶-1(CDK1)、原癌基因(c-Myc)表达下调,BCL2相关蛋白-x(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9表达上调。结论:三氧化二砷能够抑制NCI-H460细胞的增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡,其机制可能通过下调Bcl-2、CDK1、c-Myc蛋白表达,上调Bax蛋白表达,激活Caspase-9、Caspase-3蛋白酶实现的。

文殊兰叶氯仿提取物诱导NCI-H460细胞凋亡的研究

目的研究文殊兰叶氯仿提取物(CE)对非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响。方法通过MTT法检测CE对NCI-H460细胞的生长抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色法检测CE作用后凋亡细胞形态的变化;通过免疫细胞化学检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;采用流式细胞术(FCM)检测CE作用后对细胞周期的影响。结果 CE抑制NCI-H460细胞增殖,其24、48、72h的IC50分别为:(36.22±3.04)、(41.21±2.50)、(62.55±3.47)mg/L;荧光染色显示,经CE作用后的细胞出现细胞核裂解,染色质浓缩,产生凋亡小体;免疫细胞化学法显示CE能增强促进凋亡蛋白Bax和降低抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达;FCM检测表明CE作用后的细胞被阻滞在G1/S期。结论 CE在体外能有效地抑制NCI-H460细胞生长,其机制可能与改变细胞周期并诱导细胞凋亡有关。

异甘草素对人肺癌细胞株H460增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响

研究异甘草素对人肺癌NCI-H460细胞增殖、周期及凋亡的影响,并探讨其相关分子机制为其治疗肺癌提供新的科学依据。取对数生长期人肺癌NCI-H460细胞,用不同浓度异甘草素处理,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化;PCR array检测肺癌相关基因mRNA表达;Western-blot检测p-p65,IκBα、IκBβ、Bax、Bcl-2表达量变化;细胞免疫荧光实验观察异甘草素对NF-κB p65分布的影响;结果显示,异甘草素能有效抑制人肺癌H460细胞的增殖和诱导细胞周期阻滞,并促进其凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的活化,抑制NF-κB p65入核使其不能发挥转录活性,最终影响其下游凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达来实现的。

4种中药注射液逆转NCI-H460细胞对吉非替尼耐药作用影响的研究

目的研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)吉非替尼(gefitinib)分别联合中药注射液(艾迪、消癌平、榄香烯、华蟾素注射液)对非小细胞肺癌(NSCLC)耐药细胞株NCI-H460生长、凋亡的影响,进一步从分子生物学水平研究中药注射液逆转gefitinib耐药的作用。方法 gefitinib与各中药注射液单药或联合用药作用于NCI-H460,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用Western blot检测PI3K/Akt/m TOR信号通路关键蛋白表达水平。结果 gefitinib与各中药注射液单药处理组均可明显抑制NCI-H460细胞的生长,诱导其凋亡;与单药处理组相比,联合用药组可不同程度提高NCI-H460对gefitinib的敏感性,降低gefitinib对NCI-H460细胞的IC50,促进细胞凋亡,并明显抑制PI3K/Akt/m TOR通路的活化。结论艾迪、消癌平、榄香烯、华蟾素注射液分别与gefitinib联用可逆转NCI-H460细胞对gefitinib的耐药。

lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及迁移

目的:探讨lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2分子轴调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖及迁移的分子机制。方法:收集2017年6月至2018年6月承德市中心医院62例NSCLC组织及对应的癌旁组织标本,以及NSCLC细胞系A549、NCIH1299、H1650、NCI-H460和人肺上皮细胞BEAS-B,用qPCR法检测NSCLC组织及细胞系中HCG18、miR-17-5p及高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达水平。分别用Si-HCG18、miR-17-5p、miR-17-5p+HCG18或pcDNA3.1-HMGA2转染A549和NCI-H460细胞,用CCK-8法、Transwell实验、Wb检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和HMGA2及EMT相关蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因验证HCG18对miR-17-5p或miR-17-5p对HMGA2的靶向调控作用。构建敲降HCG18的A549细胞小鼠移植瘤模型,观察对移植瘤的影响。结果:lncRNA HCG18在NSCLC组织和细胞中均高表达(均P<0.01),发生淋巴结转移及晚期NSCLC患者中HCG18的表达显著提高,且HCG18高表达的NSCLC患者预后较差、生存率较低(均P<0.01)。转染Si-HCG18显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力(均P<0.01),上调上皮钙黏蛋白的表达(P<0.01)、下调神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达(均P<0.01),小鼠移植瘤体积显著减小(P<0.05)。双荧光素酶报告基因验证了HCG18与miR-17-5p靶向结合,以及miR-17-5p与HMGA2靶向结合。转染miR-17-5p后NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭受到抑制(均P<0.01),促进上皮钙黏蛋白的表达(P<0.01)、抑制神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达(均P<0.01),而转染miR-17-5p+HCG18后可抑制miR-17-5p的作用。结论:HCG18通过调控miR-17-5p/HMGA2分子轴促进NSCLC细胞的增殖及迁移。

蛇床子素联合顺铂对人肺癌细胞的杀伤效应及机制

目的探讨蛇床子素联合顺铂对人肺癌细胞NCI-H460的杀伤效应及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测蛇床子素(50、100、200μmol/L)、顺铂(1.5、3.0、6.0μmol/L)及两者联合(50μmol/L蛇床子素+1.5μmol/L顺铂)对NCI-H460细胞增殖的影响。采用膜联蛋白(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)染色法、二氢乙啶(DHE)染色法检测蛇床子素(50μmol/L)、顺铂(1.5μmol/L)及两者联合(50μmol/L蛇床子素+1.5μmol/L顺铂)对NCI-H460细胞凋亡及活性氧簇(ROS)的影响。用ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行预处理,然后检测蛇床子素(50μmol/L)、顺铂(1.5μmol/L)及两者联合(50μmol/L蛇床子素+1.5μmol/L顺铂)对NCIH460细胞的凋亡诱导能力。以未加药物的NCI-H460细胞作为对照组。结果蛇床子素和顺铂均呈剂量依赖性地抑制NCI-H460细胞的增殖。50μmol/L蛇床子素联合1.5μmol/L顺铂可明显抑制NCI-H460细胞的增殖并诱导其发生凋亡。与蛇床子素及顺铂单独作用比较,二者联合作用后ROS阳性细胞明显增加(P<0.05)。与对照组(未用NAC预处理)比较,用NAC预处理过的NCI-H460细胞在用蛇床子素联合顺铂作用后产生的ROS明显降低(P<0.05),且凋亡率和对细胞增殖的抑制作用也同样明显降低(P<0.05)。结论蛇床子素联合顺铂可通过诱导ROS的产生,引起人肺癌细胞NCI-H460发生凋亡。

对叶百部总生物碱抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用机制

目的:观察对叶百部总生物碱对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:以非小细胞肺癌NCI-H460细胞作为研究对象,设置空白组和对叶百部总生物碱组(50、100、150、200、250 mg·L^(-1))。通过噻唑蓝(MTT)比色法和平板克隆形成实验观察对叶百部总生物碱对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖的影响;Hoechst33258染色法和流式细胞术观察细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测对叶百部总生物碱对胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测对叶百部总生物碱对Caspase-3、Bax、Bcl-2、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化(p)-Akt、EGFR、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01);细胞克隆形成数目和克隆形成率明显降低(P<0.05,P<0.01);细胞核固缩、细胞质凝聚及细胞凋亡率显著增加(P<0.01);对叶百部总生物碱组(100、150、200、250 mg·L^(-1))Caspase-3 mRNA表达明显升高(P<0.05);对叶百部总生物碱组Bax mRNA表达显著升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达显著降低(P<0.01);对叶百部总生物碱组(100、150、200、250 mg·L^(-1))EGFR mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01);对叶百部总生物碱组(100、150、200、250 mg·L^(-1))Caspase-3、p-JNK蛋白表达显著上调(P<0.01);对叶百部总生物碱组Bax、p-p38 MAPK蛋白表达显著上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.01);对叶百部总生物碱组(100、150、200、250 mg·L^(-1))EGFR、p-Akt蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:对叶百部总生物碱可抑制人非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖,并能诱导其凋亡,其机制可能与抑制EGFR蛋白的表达和Akt蛋白的磷酸化及激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。

hsa_circ_001988抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡影响NSCLC发生发展

目的:本研究探究hsa_circ_001988在肺癌发生发展中的作用以及机制。方法:利用circbase生信系统,选取hsa_circ_001988作为研究对象;原位杂交FISH和qRT-PCR检测hsa_circ_001988在肺癌组织和细胞系中的表达;Transwell、细胞划痕、CCK-8及TUNEL细胞凋亡检测hsa_circ_001988过表达和基因敲减对A549、NCI-H460细胞侵袭、迁移、增殖及凋亡的影响;检测皮下瘤体体积和重量;PCNA免疫组化实验检测hsa_circ_001988过表达和基因敲减对体内细胞增殖的调控。结果:hsa_circ_001988在肺癌组织和各细胞系中呈低表达;hsa_circ_001988抑制A549细胞侵袭、迁移、增殖及促进凋亡,circ_001988敲减后则促进NCI-H460细胞侵袭、迁移、增殖及抑制凋亡;hsa_circ_001988抑制皮下瘤体生长及抑制体内细胞增殖,hsa_circ_001988敲减后则促进肿瘤生长及细胞增殖。结论:hsa_circ_001988可能通过调控肺癌细胞生物学功能从而参与NSCLC发生发展过程。