低剂量电离辐射对人淋巴细胞氧化应激及DNA损伤的影响

目的:探讨低剂量^(137)Cs γ射线照射后正常人淋巴细胞(AHH-1)是否产生氧化应激及DNA损伤,并引发DNA修复。方法:以剂量率为8.32 mGy/min的^(137)Cs γ射线照射AHH-1细胞,剂量分别为0(未照射)、0.01、0.02、0.05、0.075、0.1和0.2 Gy,照射后分别培养1、24、48和72 h。采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率变化;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)试剂盒检测细胞氧化损伤水平;免疫荧光方法分析γH2AX和53BP1焦点形成情况;实时荧光定量PCR方法检测DNA损伤修复相关基因CDKN1A、DDB2和POLH的mRNA表达水平变化。结果:与未照射组相比,照射后24和48 h,各剂量组细胞存活率显著增强(P<0.05);照射后48 h,MDA水平和SOD活性在0.2 Gy剂量组发生显著变化(P<0.05);0.02~0.075 Gy和0.2 Gy剂量组ROS相对荧光强度显著升高(P<0.05);0~0.2 Gy γ射线照后1 h,γH2AX和53BP1焦点数量随剂量增加而增加,且具有明显的剂量-效应关系(P<0.01);与未照射组相比,照射后48 h,DDB2和POLH mRNA相对表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:低剂量电离辐射引起人淋巴细胞产生氧化应激和DNA损伤,并促进DNA损伤修复相关基因在转录水平发生改变。

微核形成与细胞周期关系的初步研究 Ⅲ.丝裂霉素c诱发人淋巴细胞染色体畸变与不同周期阶段的微核形成

为了研究染色体畸变与微核形成的关系,本实验用不同浓度的丝裂霉素C(MMC,0.025—0.4μg/ml),处理人外周血淋巴细胞,观察中期染色体畸变与不同细胞周期形成的微核间的关系。获得如下主要结果:(1)MMC诱发的染色体畸变细胞率(ACF),未经培养的G_0期淋巴细胞的微核细胞率(NC-MNCF)以及培养的淋巴细胞的微核细胞率(C-MNCF),在一定剂量范围内均呈剂量依赖性增加,并可用幂回归方程描述;(2)微核形成与染色体畸变全然无关的NC-MNCF,和C-MNCF一样,与ACF呈良好的正相关;(3)用胞质分裂阻滞(CB)法,检测MMC诱发的CB-MNCF,较C-MNCF无显著提高,MNCF/ACF的比值较小,并随着MMC剂量增加从0.15左右降到0.03。所有上述结果表明,不能简单理解微核形成与染色体畸变间的关系,在分裂的细胞群体中,中期染色体畸变可能仅是微核形成的一种来源。

猪抗人淋巴细胞球蛋白与兔抗人胸腺细胞球蛋白治疗重型再生障碍性贫血的疗效比较

目的比较猪抗人淋巴细胞球蛋白（ALG）与兔抗人胸腺细胞球蛋白（ATG）治疗重型再生障碍性贫血（再障）的疗效。方法回顾分析2004~2013年接受免疫抑制治疗的重型再障患者（猪ALG组43例,兔ATG组32例）6个月有效率,χ2检验比较组间差异。Kaplan-Meier法绘制生存曲线,log-rank检验比较组间差异。结果猪ALG组6个月有效率为79.07%,高于兔ATG组（56.25%）且差异显著（P=0.034）;5年总生存率为86.047%,高于兔ATG组（72.878%）,但差异不显著（P=0.190）。结论猪ALG血液学应答优于兔ATG,预后和安全性相似。

猪抗人淋巴细胞免疫球蛋白联合环孢菌素A治疗重型再障的临床疗效

目的探讨使用国产猪抗人淋巴细胞免疫球蛋白(p-ALG)联合环孢菌素A(CsA)治疗重型再生障碍性贫血(SAA)的疗效及观察不良反应。方法应用p-ALG(30mg/kg/d,静脉滴注)联合CsA(起始量为5mg/kg/d)治疗SAA 8例,辅以促造血、成分血输注、造血生长因子等支持治疗。检测治疗前后外周血象及骨髓象变化,以流式细胞仪测定治疗前后外周血T淋巴细胞亚群的改变情况,观察不良反应及其处理效果。结果随访8例中,基本治愈2例,缓解3例,明显进步1例,早期死亡2例,总有效率75%。治疗显效时患者的外周血CD3+CD4+(Th)细胞比例升高,CD3+CD8+(Ts)细胞比例降低,Th/Ts比值升高,与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论使用国产p-ALG联合CsA作为初诊SAA的首次治疗方案效果良好,治疗费用较马或兔抗胸腺细胞免疫球蛋白(ATG)联合CsA方案更经济。

蚕豆叶尖细胞及人淋巴细胞微核率对超声波诊断仪的监测

用蚕豆叶尖细胞微核率（ＭＮＲ）及人淋巴细胞（ＭＮＲ）对比观察超声波诊断工作人员与仪器的关系，本实验结果表明，从事本工作５年即已有很显著的ＭＮＲ改变，时间愈长ＭＮＲ愈高。用蚕豆叶尖细胞之ＭＮＲ检测工作环境，距探头６０ｃｍ为直径的范围内皆能引起ＭＮＲ的显著性改变，８ｈ较４ｈ更为严重，此范围正是工作人员及患者躯干所在的位置，应该引起人们的重视。

γ射线对人淋巴细胞CD3、CD4、CD8、B7.1分子表达的影响

用间接免疫荧光－流式细胞仪测定方法，观察γ射线对人淋巴细胞CD3、CD4、CDS、B7.1分子表达的影响。结果表明：高剂量γ射线影响CD3、CD4、CD8分子的表达，预先给予低剂量γ射线；再接受高剂量照射，可减少这种影响。γ射线能激活静止的淋巴细胞表达B7.1分子。

hu-PBL-SCID小鼠体内人淋巴细胞状况及其对人肺癌移植瘤转移的影响

将人外周血淋巴细胞经腹腔移植于T、B细胞严重联合免疫缺陷的SCID小鼠后,成功地建立了hu - PBL- SCID小鼠模型。在移植后4 周,其小鼠血清中存在人免疫球蛋白,其脾淋巴细胞中,所检测的8 种免疫表型人淋巴细胞亚群均存在,表明人淋巴细胞在SCID小鼠体内出现了增殖或重建。但hu- PBL- SCID小鼠及未免疫重建的SCID小鼠体内人肺巨细胞癌PLA- 801DL的生长及转移情况未见明显差异,提示hu- PBL- SCID小鼠体内的人淋巴细胞不具有明显的抗肿瘤活性。

国产猪抗人淋巴细胞球蛋白联合环孢素治疗重型再生障碍性贫血的效果

目的探讨国产猪抗人淋巴细胞球蛋白(p-ALG)联合环孢素治疗重型再生障碍性贫血(SAA)的效果及安全性。方法分析2004年4月~2016年12月江苏省连云港市第一人民医院血液科应用国产p-ALG联合环孢素治疗30例SAA患者的有效性、安全性并长期随访统计分析五年生存率。结果 30例SAA患者中位年龄为26.5(5~65)岁,随访中位时间为60(1~252)个月,6例死亡,总有效率为73.3%,中性粒细胞>0.5×109/L,中位时间为20(2~40)d,脱离红细胞输注的中位时间为30(0~150)d,脱离血小板输注的中位时间为35.5(5~140)d。五年生存率达78%,不良反应均能耐受,花费少。结论国产p-ALG联合环孢素治疗SAA的长期效果显著,不良反应轻微,值得临床推广。

活化的人淋巴细胞与不同猪真皮共同培养的免疫反应特征

目的探讨临床应用异种无细胞真皮基质(Xeno-ADM)的免疫反应。方法用网状Xeno-ADM与超薄自体皮片复合移植于3例大面积Ⅲ度烧伤患者,成活后4～8周分离外周血单个核细胞(PBMC),以同期单纯自体皮移植的大面积烧伤患者PBMC为对照,用新鲜小猪整张真皮片(wholexenodermis)、微粒真皮(mincedxenodermis)和MincedXeno-ADM作抗原刺激物,通过不同的猪真皮→人淋巴细胞共同培养(DLCC)、3H-TdR掺入、免疫组织化学技术,检测反应细胞增殖水平和细胞类型。结果DLCC后,新鲜小猪微粒真皮组对活化和未被活化人淋巴细胞增殖刺激作用均明显强于猪整张真皮组和Xeno-ADM组(P<0.05～0.01),增殖和浸润到真皮内的细胞以CD3+CD4+/CD45RO+T淋巴细胞为主、单核细胞和B细胞次之。结论以CD3+-CD4+/CD45RO+为主的T淋巴细胞参与可能是异种真皮移植后的免疫反应特征;真皮微血管内皮细胞ICAM-1的表达可能与诱导淋巴细胞浸润和增殖有关,与未活化的淋巴细胞相比,采用活化的淋巴细胞进行DLCC,可更真实地反映宿主对Xeno-ADM的免疫反应状况。

抚仙湖有机污染物化学背景值及人淋巴细胞体外致突变性评定

用ＸＡＤ－２树脂提取抚仙湖７个采样点的有机物质水样提取物，用气相色谱／质谱（ＧＣ／ＭＳ）进行分析。在每种水样品中发现有上百种有机污染物。提取物用培养的人淋巴细胞系姐妹染色单体交换（ＳＣＥ）试验作致突变潜力检查。结果显示，仅入湖口水样在高浓度组（００６２５Ｌ／ｍＬ）⑥诱发ＳＣＥ明显增加。

小剂量电离辐射引起人淋巴细胞染色体的不分离

目的 :探讨低剂量电离辐射引起人外周血染色体数目的变化及不分离情况。 方法 :用人外周血中期染色体制备并计数 ,用 χ2检验作统计学分析 ,检测在0、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0Gyγ_射线照射后 ,不同时间给予0.5Gyγ_射线照射后及在接种前后给予不同次数0.5Gyγ_射线照射后非整倍体率及超二倍体/非整倍体变化。 结果 :在0～2.0Gy剂量范围内 ,非整倍体率随剂量增加从21.30 %增加到55.56 % ,超二倍体/非整倍体从8.70 %增加到44.00 % ;接种后照射比接种前照射非整倍体率及超二倍体/非整倍体高 ,且均比对照组高 ,在接种后不同时间照射的细胞无明显差别 ;在接种前照射 ,随照射次数增加到3次 ,非整倍体率从21.30 %增加到47.85 % ,超二倍体/非整倍从8.70 %增加到24.49 %。 结论 :小剂量电离辐射对非整倍体特别是染色体不分离的影响具有剂量效应、次数效应 。

超抗原活化人淋巴细胞疫苗在SCID鼠体内抗人脑胶质瘤研究

目的 探讨超抗原SEC激活的人外周血单个核细胞 (HuPBMC)在动物体内抗人脑胶质瘤的疗效。方法 建立人脑胶质瘤和转输人外周血单个核细胞于SCID小鼠体的人肿瘤 人淋巴细胞的嵌合模型 ,并用SEC治疗之。结果 在肿瘤增殖曲线 ,增殖比、荷瘤鼠生存期 ,瘤组织病理形态等多项指标证实SEC +HuPBMC组的疗效明显优于单纯SEC和单纯HuPBMC组。结论 SEC作为免疫治疗赋活剂 ,在荷人脑肿瘤·人淋巴细胞SCID鼠体内的联合免疫治疗作用优于任何单一治疗组 ,为其临床应用奠定了理论基础。

培养人淋巴细胞分裂阻滞与常规微核测试法的比较研究——Ⅰ.中低剂量γ-射线的效应

本研究用中低剂量γ射线体外照射4个供血员的全血,系统地比较观察了胞质分裂阻滞与常规微核测试法测得的剂量效应关系,结果表明用常规法检测,低剂量γ-射线(0.1,0.3Gy)可诱发平均MNCF的逐渐增加,和对照组相比,至0.3Gy差异显著(p<0.01);而BC法测得的平均MNCF无上升,相反在0.1Gy时明显下降(p<0.05)。在中剂量区(0.7—3.1Gy),用BC法测得的平均MNCF的增加较常规法明显,至3.1Gy时两者差异显著。

人淋巴细胞转输SCID小鼠抗人脑胶质瘤特性分析

目的 探讨人外周血淋巴细胞转输给T和B淋巴细胞均先天性缺乏的SCID鼠后抗胶质瘤的免疫学特征。方法 采用APAAP、间接荧光原位杂交和流式细胞计数等检测转输在SCID鼠体内的人淋巴细胞分布、亚群变化和抗胶质瘤细胞毒活性。结果 尾静脉转输后人CD3+、CD8+和HLA Dr+等具有细胞毒活性细胞大部分分布在外周血和脾脏中 ,而腹腔转输者大部分在腹腔。这些细胞的功能维持 1周时达高峰 ,在第 2周下降时重复转输又可得到加强并具攻击肿瘤活性。

环孢菌素联合抗人淋巴细胞球蛋白治疗重型再生障碍性贫血5年随访研究

目的 :探索环孢菌素 (赛斯平 ,CYS)联合抗人淋巴细胞球蛋白 (ALG)或单用ALG治疗重型再生障碍性贫血 (SAA)患者的远期疗效及不良反应。方法 :对 119例SAA患者分别采用ALG加CYS和单用ALG两种治疗方案进行治疗 ,随访 5年并对两组的疗效及不良反应进行对比研究。结果 :ALG加CYS组的 5年有效率为67.2 % ( 41/ 61) ,长期生存率为 70 .4% ( 43 / 61) ;ALG组 5年有效率为 40 .3 % ( 2 8/ 5 8) ,长期生存率为 3 6.2 % ( 2 1/5 8) ,ALG加CYS组的总有效率及长期生存率均明显高于后者 ( χ2 =4.3 76,P <0 .0 5 ;χ2 =14.0 5 9,P <0 .0 1) ,且联合应用无不可逆性的不良反应发生。结论 :CYS是纠正SAA患者免疫功能异常的有效药物 ,促使T淋巴细胞免疫功能的恢复。联合应用ALG是治疗SAA的理想治疗方法 ,CYS是减少SAA复发。

氟对暴露工人淋巴细胞及免疫应答能力的影响

本文用单克隆抗体技术和酶联免疫吸附试验,对某铝厂连续氟暴露12年以上的工人(38例)进行了外周血T_3、T_4、T_8、B细胞数和特异性体液免疫应答能力的检测。结果表明,暴露组工人的T_3、T_4、T_8细胞数和特异性抗体的水平与非暴露组(34例)相比,均有不同程度的降低,但B细胞数两组之间无明显差异。提示氟暴露工人免疫功能的检测,对于帮助我们评价氟暴露作业环境的卫生状况,及时发现暴露工人的亚临床损伤,及其工业性氟病的早期诊断均有一定的意义。

彗星试验对4种化学物质诱导人淋巴细胞DNA损伤的检测

目的验证彗星试验可否用于检测不同类型化学诱变剂诱发的DNA损伤。方法人淋巴细胞经4-硝基喹啉氧化物(4-NQO,拟紫外线诱变剂)、甲基甲烷磺酸酯(MMS,烷化剂)、博来霉素(BLM,拟X射线诱变剂)和丝裂霉素C(MMC,DNA交联损伤剂)染毒3h,再培养0h或21h,然后用彗星试验检测这4种化合物所诱发的DNA单链断裂(SSB)。结果彗星试验能立即检出4-NQO、MMS和BLM诱发的SSB,并具有剂量-效应关系(P<0.01),在21hDNA损伤程度减轻(与0h比较,P<0.01)。MMC诱发的DNA损伤在染毒后21h才被检出,并有剂量-效应关系(P<0.01)。结论虽然这4种化学诱变剂的作用机制不同,但彗星试验仍能检测出他们诱发人淋巴细胞DNA损伤的效应。

低pH病毒灭活工艺对抗人淋巴细胞免疫球蛋白质量的影响

对抗人淋巴细胞免疫球蛋白进行病毒灭活后的质量进行研究。抗人淋巴细胞免疫球蛋白通过低 p H孵化 2 4 d后 ( p H4 .1± 0 .3 ) ,其花环抑制免疫效价仍不小于 1:4 0 0 0 ;与灭活前相比 ,灭活后制品的纯度及 Ig G各组分含量没有显著差异 ( P>0 .0 5 ) ,并且其它各项指标均符合中国生物制品规程暂行规程的要求 ,从而表明抗人淋巴细胞免疫球蛋白通过酸孵育进行病毒灭活后的稳定性良好。