没食子水提物对人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的 探讨没食子水提物在防治口腔炎性疾病中的作用。方法 分离培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF),设立阴性对照组(PBS)、脂多糖组(1μg/mL)、没食子组(10 mg/mL)、氯己定组(0.2%,m/m)。对没食子水提物粉末进行大体检查,采用扫描电子显微镜观察没食子水提物粉末的微观特征。采用MTT法检测细胞活力,XTT法检测细胞增殖水平,以划痕伤口愈合迁移试验考察细胞迁移情况,采用酶联免疫吸试验(ELISA)法检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果 没食子水提物粉末大体检查及显微特征明显。没食子组细胞活力显著高于其他组(P <0.05)。给药后第3,5,7天,没食子组HPDLF增殖水平显著高于其他组(P <0.05)。与阴性对照组比较,没食子组IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平显著降低(P <0.05)。没食子组细胞24 h划痕伤口几乎完全闭合。结论 没食子水提物可减轻HPDLF相关炎性反应。

中药黄芩苷干预人牙周膜成纤维细胞的作用及分子机制

背景:黄芩苷作为一种重要的中药提取物,近年来的应用被越来越多的研究所提及。实验表明黄芩苷可以促进人牙周膜成纤维细胞的增殖并向成骨分化,但具体分子机制尚不清楚。目的:研究中药提取物黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞的增殖促进作用及潜在的分子机制。方法:通过细胞原代培养及光学显微镜下观察人牙周膜成纤维细胞的形态。CCK8法检测黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞增殖的促进作用;采用实时定量PCR分析黄芩苷对增殖细胞核抗原表达的影响;实时定量PCR以及流式细胞术分析黄芩苷对细胞凋亡的抑制作用;Western blot及实时定量PCR分析黄芩苷对细胞中骨形态发生蛋白2蛋白与mRNA表达的影响;加入骨形态发生蛋白2抗体来检测黄芩苷对细胞增殖凋亡的作用以及骨形态发生蛋白2表达的变化。结果与结论:(1)与对照组相比,黄芩苷能够明显促进人牙周膜成纤维细胞增殖,并上调增殖细胞核抗原的mRNA表达水平;(2)与对照组相比,黄芩苷能够上调Bcl-2 mRNA表达水平,下调Bad mRNA表达水平,流式细胞术结果也显示黄芩苷能够抑制细胞的凋亡;(3)黄芩苷能够浓度与时间依赖性地上调骨形态发生蛋白2蛋白与mRNA水平;加入骨形态发生蛋白2中和抗体可减弱黄芩苷的调控作用;(4)结果表明,黄芩苷能够促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,其发挥作用的机制可能与上调骨形态发生蛋白2表达有关。

中药黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞保护作用的实验研究

目的研究中药黄芩有效成分黄芩苷对脂多糖(LPS)抑制人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)活性及对LPS损伤HPLFs超微结构的影响,并初步探讨其可能的作用机理。方法采用原代培养人牙周膜成纤维细胞技术、四唑盐(MTT)比色试验和透射电子显微镜技术(TEM)。结果LPS浓度为100μg/ml时明显抑制细胞活性,同时加入LPS和黄芩苷后,细胞活性明显增强(P<0.05)。100μg/mlLPS对HPLFs各超微结构均有不同程度的损伤,特别是线粒体损伤严重,同时加入LPS和黄芩苷(10μg/ml)后,与LPS组比较,超微结构损伤减轻,细胞器结构表现也较正常。结论中药黄芩苷能显著促进成纤维细胞的增殖,对LPS抑制HPLFs活性和LPS损伤HPLFs超微结构具有保护作用,其作用机制可能与降解LPS及作用于细胞膜表面阻止LPS进入细胞内部有关。

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和超微结构影响的实验研究

目的:体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPLFS),观察缺氧对其生长增殖能力的影响。方法:分离培养HPLFS,随机分为21%O2对照组和10%、5%、2%O2缺氧组,采用四唑盐(MTT)比色法检测HPLFS增殖情况,透射电镜下观察细胞超微结构改变。结果:MTT法检测,与对照组比,12h、24h,缺氧对细胞增殖随缺氧程度呈依赖性增强,但重度缺氧(2%O2)24h组具有统计学差异;48h、72h,重度缺氧组细胞增殖与对照组相比明显降低,差别具有统计学意义。透射电镜下,重度缺氧24h细胞胞质内粗面内质网和线粒体明显增多,细胞突起增多;72h细胞发生退变,溶酶体增多。结论:长期重度缺氧条件下,牙周膜的改建和修复功能降低,可能是高原牙周疾病多发、牙周组织破坏较重的重要原因。

四环素对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的 探讨四环素对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的生物学作用。方法 将不同浓度的四环素(1、5、20、100、500、2 500 μg/ml)加入体外培养的HPDLFs中,孵育2 d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、考马司亮蓝法及3H-TdR掺入法,分别检测四环素对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果在1-100μg／ml的浓度范围内,细胞形态呈正常的梭形或纺锤形。在20-100μg/ml的浓度范围内,四环素可促进HPDLFs的增殖及生物合成(P<0.01)。当四环素的浓度增至2 500μg／ml,不仅使细胞的镜下形态发生了明显改变,而且严重抑制了细胞的生物学活性。结论 在合适的浓度范围内,四环素能促进HPDLFs的增殖及生物合成,而浓度过高则具有细胞毒性。

TNF-α对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,了解TNF-α在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的TNF-α处理24 h,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来观察人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达强度变化。结果TNF-α上调人牙周膜成纤维细胞的RANKL mRNA表达,RANKL/OPG比率呈上升趋势。结论TNF-α通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL/OPG的比值可间接地调节破骨细胞分化和活性,从而影响骨代谢。

不同张应力对体外培养的人牙周膜成纤维细胞形态和纤维型肌动蛋白改变的影响

目的 研究动态张应力对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)形态和微丝改变的影响,进一步了解HPDLF的应力 生物学效应。方法 利用自行设计的膜式动态张应力 体外细胞培养研究体系对体外分离培养的第6代的HPDLF进行不同应力水平、频动范围及时相点的张应力加载,所有样本经FITC Phalloidin免疫荧光染色后,以激光扫描共聚焦显微镜观察加力后不同时间细胞及其肌动蛋白形态的变化特征。结果 动态张应力作用16、2 4h后,部分人牙周膜成纤维细胞出现收缩,F actin排列等方面的变化;3 2h后,变化更明显。5kPa的静态张应力作用后,可引起细胞间隙增大等变化,F actin改变较少。结论 不同张应力可引起体外培养的人牙周膜成纤维细胞的形态和F actin发生了有规律的变化,特别是动态张应力组2 ,在细胞投影面积以及细胞平均荧光强度方面均与加力时间呈正比,微丝随加力时间的延长而逐渐变粗。

磁性附着体模拟静磁场对人牙周膜成纤维细胞的生物学效应研究

目的探讨磁性附着体静磁场对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)的生物学效应。方法对体外培养的HPDLF分别进行12.5、125和250mT静磁场持续加载4d,设无外加静磁场作用的对照组,分别测定各组细胞的碱性磷酸酶(ALP)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用流式细胞仪行细胞周期分析。结果高剂量静磁场(250mT)明显增强HPDLF的ALP活性(P<0.05)。各磁场剂量组的细胞SOD活性与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞G0/G1期、S期、G2/M期分布和增殖指数与对照组相比也无统计学差异(P>0.05)。结论在本实验条件下磁性附着体静磁场可促进HPDLF的ALP活性,而对SOD活性以及细胞周期分布无明显影响。

人牙周膜成纤维细胞对米诺环素的跨膜转运

目的研究人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)对米诺环素的跨膜转运,为通过根管局部及全身给药的假说提供实验依据。方法用米诺环素溶液孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞,超声破碎细胞后,高效液相色谱法(HPLC)测定不同时间点的胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。结果HPLC可以精确测量细胞内米诺环素的含量。细胞种类和孵育时间对细胞内米诺环素含量有显著性影响(P<0.01),胞内米诺环素含量随着时间延长而增加,两种细胞的胞内药物含量不同;胞外米诺环素浓度增加时,细胞内药物含量增加。结论米诺环素存在HPDLF的跨膜转运,这种转运与细胞外药物浓度及孵育时间有关,并存在着细胞差异。

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察不同程度缺氧对人牙周膜成纤维细胞(HPLFS)增殖、分化的影响。方法:随机将HPLFS分为4组:210mL/LO2对照组、100、50、20mL/LO2缺氧组(轻中重缺氧组),用MTT法、碱性磷酸酶试剂盒分别检测HPLFS的增殖和碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果:第24小时,重度缺氧可促进HPLFS细胞增殖,第48、72小时,重度缺氧则明显抑制了细胞增殖;中、重度缺氧对细胞碱性磷酸酶活性表达随缺氧时间则明显受到抑制。结论:缺氧时间、程度对HPDLFs增殖和ALP活性表达存在效应关系,长期中、重度缺氧不利HPLFS的生长及向成骨分化能力,提示牙周组织改建修复功能降低。

动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架变化

目的:观察不同动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的变化。方法:用Forcel四点弯曲加载装置对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态的张、压应力(强度为1000、2000、4000μstrain,加力时间为0、1、2、4、8、12h),经荧光倒置显微镜观察施加不同动态张、压应力后细胞形态变化,细胞骨架荧光染色强度测定分析细胞骨架F-actin表达量的变化。结果:加力后细胞骨架形态和微丝蛋白发生规律性变化;细胞F-actin荧光染色强度正常→下降→正常;细胞骨架对张、压应力作用的反应敏感程度无明显差异。结论:在一定的张、压应力范围内人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的形态结构具有一定的稳定性。

骨形成蛋白2基因转染的人牙周膜成纤维细胞的骨诱导作用

目的 建立表达骨形成蛋白 2 (BMP_2 )的人牙周膜成纤维细胞 (HPDLFs) ,观察其体内成骨作用 ,为牙周缺损修复基因疗法的建立提供实验依据。方法 采用脂质体载体将人BMP_2噬菌粒表达载体pBK_B2转染至HPDLFs。利用免疫组化ABC法检测转染细胞内BMP_2蛋白的表达 ,并于无菌条件下将转染细胞注射于裸鼠股部肌肉内 ,2 1d后取材 ,苏木精—伊红染色观察肌肉组织内骨形成情况。结果 BMP_2基因转染后HPDLFs内有BMP_2蛋白的表达。在注射BMP_2基因转染细胞的肌肉组织内可见明显的新骨形成。结论 BMP_2基因成功转入HP DLFs中并得到有效表达 。

人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长特性

目的 :探讨人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长特性。方法 :用倒置显微镜和MTT法观察人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长和增殖变化。结果 :人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液条件下可以生长和增殖 ,但与含血清培养液相比 ,其增殖速率变缓 ,分化明显。结论 :无血清培养液可应用于人牙周膜成纤维细胞的体外培养和实验研究中。

人牙周膜成纤维细胞对甲硝唑替硝唑的跨膜转运

目的:研究人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对甲硝唑和替硝唑的转运,为根管全身给药提供实验依据。方法:正畸拔除的前磨牙,组织块法作HPDLF原代培养。甲硝唑和替硝唑孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞一定时间后,超声破碎细胞,高效液相色谱法测定胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。结果:(1)高效液相色谱法可以精确测量细胞内甲硝唑和替硝唑含量;(2)检测不到HPDLF胞内的甲硝唑,但是可以检测到MC3T3-E1细胞内的甲硝唑;(3)两种细胞胞内的替硝唑的含量存在差异,含量与细胞外液的药物浓度以及药物作用时间有关。结论:甲硝唑不存在人牙周膜成纤维细胞的跨细胞膜转运,但是替硝唑存在,转运与胞外药物浓度有关,甲硝唑与替硝唑的跨细胞膜转运存在细胞特异性。这种差异性为指导临床用药、特别是根管全身给药的筛选提供参考。

中药黄芩苷对脂多糖刺激人牙周膜成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的研究中药黄芩苷对脂多糖(LPS)刺激人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法采用原代培养HPLFs技术和酶联免疫检测方法(ELISA),检测培养上清液中TNF-α的水平。结果0．001～10μg／ml黄芩苷和2μg／ml地塞米松均可显著抑制LPS刺激HPLFs分泌TNF-α的活性(P＜0．01),而不同浓度组之间比较,抑制作用无显著性差异(P＞0．05)。结论黄芩苷对LPS刺激HPLFs合成和分泌TNF-α有显著抑制作用,与地塞米松抗炎效果相近,作用机制与抑制TNF-α等炎性细胞因子过度产生有关,揭示了黄芩苷可能的抗炎作用机制。

五倍子提取物对人牙周膜成纤维细胞保护作用的实验研究

目的 :研究五倍子提取物对内毒素 (LPS)抑制人牙周膜成纤维细胞 (PDLCs)活性及对LPS损伤PDLCs超微结构的影响 ,并初步探讨其可能的作用机理。方法 :应用细胞培养技术、3 H -TdR掺入法以及透射电子显微镜观测五倍子提取物对LPS抑制PDLCs活性及对LPS损伤PDLCs超微结构的影响。结果 :LPS在浓度为 10 0mg/L时明显抑制细胞生长 ,加入五倍子提取物后 ,细胞活性明显增强 (P <0 .0 5 ) ;LPS (10 0mg/L)对PDLCs各超微结构均有不同程度的损伤 ,特别是线粒体损伤严重。加入五倍子提取物 (10mg/L)后 ,超微结构损伤减轻 ,细胞器结构基本恢复正常。结论 :五倍子提取物对LPS抑制PDLCs活性及对LPS损伤PDLCs超微结构具保护作用 。

激光免疫测定拉伸应变和加载时间对人牙周膜成纤维细胞形态和骨架的影响

通过体外人工培养人牙周膜成纤维细胞 ,对其施加不同时间不同值的机械拉伸应力应变 ,用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光技术观察其结构变化情况 ,寻求应力应变和时间与细胞形态、骨架的关系。结果发现在应变值为 0、0 .8%、12 %、16 %各组 ,细胞和细胞核投影面积与加力时间和应变值呈正比 ;细胞骨架随着应变值的增加和加力时间的延长而逐渐增粗、密度增加 ,排列更有规律 ;在应变值 2 0 %组 ,细胞和细胞核投影面积随着加力时间的增加而逐渐减少 ,细胞骨架结构变得模糊和紊乱 ,说明在机械拉伸应力应变作用下 ,人牙周膜成纤维细胞的形态和骨架发生了规律的改变。

机械应力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的调节

目的观察机械力刺激对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。方法用Forcel四点弯曲加载装置通过对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态张、压应力(强度为1000、2000、4000μstrain,加力时间为0、0.5、1、4、8、12h),采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。结果施加动态的张、压应力后,人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达量下调,这种下调变化与所施加应力的性质、大小和作用持续时间相关。人牙周膜成纤维细胞整合素β1对张、压应力刺激的感应不完全一致,机械力刺激越强,整合素β1表达越明显。结论动态张、压应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进目的基因mRNA表达改变,不同的机械力对细胞整合素β1效应不同。

3种髓腔穿孔修复材料对人牙周膜成纤维细胞毒性的体外研究

目的对三氧化矿物凝聚体(MTA)、Z350纳米复合树脂、银汞合金3种常用髓腔穿孔修复材料对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)毒性进行体外比较研究。方法采用甲基噻唑基四唑(MTT)法研究3种材料对HPDLF增殖的影响,并采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法研究材料对细胞碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OC)mRNA表达的影响。结果MTA的毒性最小,并能上调HPDLF中ALP mRNA和OC mRNA的表达;Z350的毒性级为1级,能够促进细胞ALP mRNA的表达,对细胞OC mRNA的表达基本无抑制;银汞合金对细胞增殖的抑制作用最大,毒性级为3级,具有中度细胞毒性,对细胞ALP mRNA和OC mRNA表达的抑制最强。结论MTA对HPDLF的毒性最小,并且能促进HPDLF的成骨功能和分化,Z350纳米复合树脂次之,银汞合金的毒性最大,并抑制牙周膜成纤维细胞的分化。

茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs,流式细胞仪检测细胞凋亡,Elisa法检测TNF一α、IL-6分泌。结果:LPS可显著诱导HPDLFs凋亡,上调TNF一α、IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、IL-6表达,且呈量效依赖性。结论:茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF一α、IL-6表达。