低浓度氟化钠对人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化的影响

目的探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成骨/成牙本质分化的影响。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。原代培养hDPCs,采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响;选取合适浓度的氟化钠加入成骨/成牙本质分化诱导培养液中,对hDPCs进行体外诱导,通过茜素红染色检测hDPCs成骨/成牙本质分化能力的变化,RT⁃qPCR检测分化相关基因的mRNA表达;同时通过RT⁃qPCR和Western blot检测hDPCs成骨/成牙本质分化过程中内质网应激相关基因的表达。结果低浓度氟化钠(0.1 mmol/L)在体外可刺激hDPCs增殖,高浓度氟化钠(5~10 mmol/L)可抑制hDPCs增殖(P<0.05)。选取0.1 mmol/L氟化钠体外混合成骨/成牙本质分化诱导培养后hDPCs的茜素红染色增加,成骨/成牙本质分化相关基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)mRNA表达水平升高(P<0.05)。同时在此过程中RT⁃qPCR检测出mRNA水平hDPCs内质网应激相关基因:剪切x盒结合蛋白1(splicing x⁃box binding protein⁃1,sXBP1)、葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)以及活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达升高(P<0.05);Western blot检测出氟化钠混合成骨/成牙本质分化培养后细胞磷酸化真核起始因子⁃2α(phosphorylated eukary⁃otic initiation factor⁃2α,p⁃eIF2α)、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated the RNA⁃activated protein kinase⁃like ER⁃resident kinase,p⁃PERK)和ATF4蛋白表达增加(P<0.05)。结论低剂量氟化钠促进人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化并伴有内质网应激水平的升高。

抑制连接蛋白43介导半通道活性促进脂多糖诱导的人牙髓细胞成牙本质分化

目的:探讨连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成牙本质分化过程中的作用和机制。方法:建立SD大鼠上颌第一磨牙损伤模型,免疫荧光(im munofluorescence,IF)染色检测Cx43在牙髓组织损伤后修复中的表达模式变化。分别采用0、1、10、100和1 000 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,筛选最适浓度,随后抑制和过表达hDPCs中Cx43的表达。实时定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹法检测Cx43和成牙本质分化相关因子牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dental matrix protein-1,DMP-1)、成骨相关转录因子(osterix,Osx)表达及细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)活性变化。进一步对hDPCs施以特异性Cx43通道抑制剂,检测Cx43介导的通道活性在hDPCs成牙本质分化中的作用,初步探讨Cx43调节LPS诱导的hDPCs成牙本质分化的作用和机制。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学处理。结果:IF结果显示,在健康牙髓组织中,Cx43主要表达于成牙本质细胞层,牙损伤3~24 h,Cx43表达减弱,随后逐渐上调,直至正常水平;损伤后3天~2周,表达呈下调趋势,并且表达于成牙本质细胞层和固有牙髓中。以10 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,可显著上调DSPP的mRNA表达(P<0.01)。抑制Cx43,可显著上调hDPCs内LPS诱导的DSPP、DMP-1和Osx mRNA表达(P<0.05);过表达Cx43,则显著抑制LPS诱导的成牙本质分化相关因子表达(P<0.01)和DSPP荧光强度。以10 ng/mL LPS激活hDPCs内ERK信号,过表达Cx43可显著减弱LPS诱导的ERK信号活性(P<0.01)。抑制Cx43介导的半通道,促进LPS诱导的hDPCs成牙本质分化相关因子mRNA表达和ERK信号活性(P<0.05);而阻断Cx43介导的细胞间通道,则抑制成牙本质分化。结论:Cx43参与调控牙髓组织的损伤后修复,并且其表达整体呈下调趋势;抑制Cx43或阻断HC,可促进LPS诱导的ERK信号活性和hDPCs成牙本质分化。

Toll样受体3处理的脐带间充质干细胞与人牙髓细胞共培养对细胞矿化与抗炎修复能力的影响

目的:探究Toll样受体3(TLR3)处理的人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)与人牙髓细胞(hDPCs)共培养后,对细胞矿化能力及抗炎修复能力的影响。方法:从健康新生儿的脐带组织中分离培养hUCMSCs,采用流式细胞术和免疫荧光染色检测细胞表面标记物CD34、CD45、CD90及CD105的表达,以对hUCMSCs进行鉴定;以TLR3激动剂Poly(I:C)(10μg/mL)处理hUCMSCs,建立hUCMSCs与h DPCs的共培养体系,测定各组细胞碱性磷酸酶(ALP)水平,茜素红染色和Von Kossa染色观察各组细胞矿化情况;利用脂多糖(LPS,10μg/mL)刺激hDPCs模拟牙髓炎症反应,MTT法检测各组细胞的增殖活性,RT-qPCR法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白-1(DMP-1)、骨钙素(OCN)及骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达情况。结果:分离的hUCMSCs中CD34和CD45呈阴性表达,CD90和CD105呈阳性表达,表明成功分离出hUCMSCs;与单独培养的hUCMSCs和hDPCs比较,hUCMSCs与hDPCs共培养体系内细胞ALP染色加深,ALP活性升高,有较多的矿化结节形成(P<0.05);与hUCMSCs与hDPCs共培养比较,经Poly(I:C)处理的hUCMSCs与h DPCs共培养中细胞ALP活性进一步升高,矿化结节形成更多(P<0.05)。相较于未经LPS刺激的细胞,经LPS刺激后的各组细胞增殖活性降低,细胞中TNF-α、IL-6及IL-10的mRNA相对表达量均升高,DSPP、DMP-1、OCN及OPN的mRNA相对表达量均下降(P<0.05);在LPS刺激下,相较于hUCMSCs与hDPCs共培养下,经Poly(I:C)处理的hUCMSCs与h DPCs共培养中的细胞增殖活性较高,TNF-α、IL-6的mRNA相对表达量均下降,IL-10 mRNA相对表达量进一步升高,同时,DSPP、DMP-1、OCN及OPN的mRNA相对表达量也均升高(P<0.05)。结论:TLR3激动剂Poly(I:C)处理的hUCMSCs与hDPCs共培养,可增强细胞的矿化能力,抑制LPS刺激下炎症因子水平,并促进炎症状态下牙本质形成相关基因的表达,这可能有利于牙髓炎症下的抗炎修复。

不同浓度葡萄糖对人牙髓细胞增殖凋亡及矿化的影响

目的:探讨人牙髓细胞(hDPCs)在不同浓度葡萄糖作用下,细胞增殖凋亡及矿化情况。方法:体外培养的第4代hDPCs分为正常组、高糖1组和高糖2组,分别用含葡萄糖浓度为0、5.5、40和50 mmol/L的培养基培养,21 d后CCK-8实验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR检测DMP1和DSPP mRNA相对表达量;茜素红染色观察矿化结节情况,试剂盒检测MDA含量及SOD和ALP活性,Wester blot检测Bcl-2、Bax及DSPP和DMP1蛋白相对表达量。结果:正常组矿化结节明显,其余2组矿化结节少。正常组细胞存活率、SOD和ALP活性、DMP1和DSPP mRNA相对表达量、Bcl-2以及DMP1和DSPP蛋白相对表达量均高于高糖1组(P<0.05)和高糖2组(P<0.05),而细胞凋亡率、MDA含量、Bax蛋白相对表达量均低于高糖1组(P<0.05)和高糖2组(P<0.05),以上指标差异在高糖2组比1组更明显(P<0.05)。结论:高糖抑制人牙髓细胞增殖和矿化,可能是高糖增强氧化应激反应引起。

人牙髓细胞与PLGA微球材料复合构建后的形态学观察

目的:观察不同浓度的人牙髓细胞(HDPCs)在可注射聚乳酸/羟基乙酸(PLGA)微球支架上的黏附生长,通过形态学观察进一步探讨PLGA微球作为组织工程支架材料用于牙髓组织再生的可行性。方法:取第4代HDPCs以3种不同浓度(2×10^(5)细胞/ml、1×10^(5)细胞/ml、5×10^(4)细胞/ml)接种于PLGA微球,在不同的时间点应用倒置显微镜下观察细胞与材料复合生长的情况,体外培养8周后,终止培养,常规固定、石蜡包埋,组织学切片,分别应用免疫组织化学染色检测牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白(DMP-1)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)三种蛋白表达情况,并对阳性率进行统计。同时应用扫描电镜观察超微结构。结果:通过显微镜特异性观察细胞在材料表面的黏附状况,结果显示随着时间的推移细胞的生长状况整体较为良好。免疫组化结果显示牙髓组织与HDPCs-微球复合体三种蛋白表达均为阳性,将细胞最高浓度组三种蛋白的阳性率进行统计学分析,结果显示无统计学差异(P>0.05)。在培养8周之后通过显微镜观察细胞和微球之间的融合度较高,但微球局部有凹陷。通过形态学观察细胞与PLGA微球材料复合生长良好,结合前期定量检测结果显示PLGA微球有利于牙髓细胞黏附生长。结论:支架材料PLGA微球能够应用在组织工程化牙髓—牙本质复合体的构建,但下一步需要对微球材料进行改性,希望能够更加全面的将其应用于组织工程牙髓—牙本质复合体的构建之中,这也在临床中有极其重要的应用价值和实践意义。

IL-6对人牙髓细胞、牙周膜细胞生长影响的实验研究

目的：了解ＩＬ－６对构成牙髓、尖周组织主要细胞生长的影响，揭示ＩＬ－６在牙髓、尖周病变过程中的作用。方法：应用细胞培养技术，采用ＭＴＴ比色法进行细胞生长及存活状态测定。结果：ＩＬ－６抑制牙髓细胞、牙周膜细胞的生长，并呈时间和剂量依赖关系，两细胞间无显著差异。结论：ＩＬ－６可能对牙髓。

3D打印明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞的黏附增殖作用

目的探讨3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞(HDPCs)的细胞毒性,及不同接种方法对细胞黏附生长的差异。方法组织块酶消化法分离培养HDPCs,利用Bioplotter三维生物打印机进行明胶海藻酸钠凝胶支架的3D打印,选取第3代HDPCs,Cell Counting Kit-8试剂检测不同浓度材料浸提液对细胞增殖的影响,扫描电镜观察、台盼蓝染色计数比较直接滴加低浓度细胞悬液与高浓度细胞浓缩液接种法,对细胞在材料表面黏附与增殖作用的差异。结果不同浓度的材料浸提液均对HDPCs细胞毒性为0,具有促进细胞增殖的作用。HDPCs在3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架上生长良好,先滴加高浓度的细胞浓缩液可以更有效的促进细胞对材料的黏附,5d后材料表面的细胞计数结果较滴加低浓度细胞悬液显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架具有良好的生物相容性,具有促进HDPCs增殖的作用,可作为牙再生的支架材料,选择高浓度细胞浓缩液接种细胞更有利于细胞黏附。

牙本质粘结剂对人牙髓细胞毒性的体外研究

目的:评价全酸蚀牙本质粘结剂和自酸蚀牙本质粘结剂对人牙髓细胞的毒性作用。方法:用人牙髓细胞为实验细胞,采用MTT比色分析法,对4种牙本质粘结剂(Prime&Bond NT,Single Bond,XenoⅢ,iBond)进行体外细胞毒性研究。结果:不同浓度的粘结剂稀释液均可使人牙髓细胞的形态有所改变。4种牙本质粘结剂的细胞毒性有显著性差异,且作用时间和浓度的改变对其细胞毒性有影响。全酸蚀粘结剂比自酸蚀粘结剂的细胞毒性强。结论:4种牙本质粘结剂在体外对人牙髓细胞均有一定程度的细胞毒性,其中Single Bond的毒性较强,临床使用粘结剂时应合理选择粘结剂和掌握固化时间。

黄芩苷对LPS诱导人牙髓细胞TLR4表达及TNF-α分泌的影响

目的:研究脂多糖(LPS)诱导人牙髓细胞(HDPCs)炎症信号受体——Toll样受体4(TLR4)表达、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌情况以及黄芩苷对其的影响,并探讨黄芩苷可能的细胞保护作用机理。方法:采用组织块法原代培养人牙髓细胞,免疫组化技术鉴定细胞来源,流式细胞术(FC)与酶联免疫法(ELISA)分别检测TLR4与TNF-α的表达。结果:正常HDPCs微量表达TLR4与TNF-α;100μg/mLLPS诱导HDPCs表达TLR4与TNF-α显著增加(P<0.01);与对照组比较,10μg/mL黄芩苷诱导HDPCs表达TLR4与TNF-α,差异无统计学意义(P>0.05);0.001～20μg/mL黄芩苷均可抑制LPS诱导HDPCs表达TLR4与TNF-α,随着黄芩苷浓度升高,TLR4与TNF-α表达逐渐降低,且不同浓度组间比较,抑制作用有显著性差异(P<0.01)。结论:LPS可能通过TLR4信号受体参与牙髓组织炎症过程。黄芩苷可抑制由LPS诱导的TLR4表达及TNF-α分泌,对LPS引起的牙髓炎可能具有潜在的治疗作用。

牵张力作用下人牙髓细胞HIF-1α和VEGF的表达

目的:研究牵张力作用下人牙髓细胞HIF-1α和VEGF基因的表达变化,探讨HIF-1α和VEGF与正畸牙髓组织维持内环境稳定的关系。方法:通过细胞牵张应力加载系统,对细胞施加频率为1.0 Hz、大小为15%形变率的牵张应力,分别加力6 h、12 h、24 h、48 h和72 h。实时定量PCR检测不同时间点HIF-1α和VEGF mRNA的表达变化。采用SPSS12.0软件包对数据进行统计学分析。结果:未加力前,HIF-1αmRNA表达极其微弱;加力6 h时,表达开始升高(P<0.05);持续增加至24 h时,表达最显著(P<0.05);加力48 h时,表达缓慢下降(P<0.01);至加力72 h时,表达下降至未加力前(P>0.05)。未加力前,VEGF mRNA表达微弱,加力6 h表达开始升高,但无显著差异(P>0.05);加力12 h时,VEGF mRNA表达开始明显增强(P<0.05),持续增加至72 h加力结束时(P<0.05)。结论:牵张力可诱导人牙髓细胞HIF-1α和VEGF mRNA的表达变化,两者可能在维持正畸受力后牙髓内环境稳定中发挥重要作用。

人牙髓细胞复合不同孔径羟基磷灰石/磷酸三钙支架材料的生物学行为

背景:有文献表明,通过组织工程的方法将人牙髓细胞复合羟基磷灰石/磷酸三钙多孔支架材料修复牙缺损具有可行性。然而究竟多大孔径的支架材料最有利于人牙髓细胞的生长及分化,至今尚无定论。目的:观察人牙髓细胞复合不同孔径羟基磷灰石/磷酸三钙支架材料后黏附、增殖和分化等生物学行为。方法:人牙髓细胞接种至3种不同孔径的羟基磷灰石/磷酸三钙材料上,采用荧光显微镜以及扫描电镜检测细胞在材料表面的黏附生长情况,然后通过细胞的黏附率实验与MTT比色法观察人牙髓细胞在材料表面的黏附与增殖特性。不同孔径的羟基磷灰石/磷酸三钙支架复合人牙髓细胞后分别用生长培养基和矿化诱导液培养,于接种后第4,7,10天检测碱性磷酸酶活性。结果与结论:人牙髓细胞在3种不同孔径支架材料表面和孔隙内均能顺利黏附并增殖。其中100～300μm组支架材料黏附率最高,MTT结果显示接种3d后300～500μm组能较好地促进细胞增殖。培养10d后,复合在100～300μm和300～500μm材料上的人牙髓细胞,其碱性磷酸酶活性显著高于500～700μm组。提示与500～700μm孔径相比,孔径为100～300μm和300～500μm的羟基磷灰石/磷酸三钙材料能更好地促进人牙髓细胞黏附、增殖和分化。

丝裂原活化蛋白激酶P38信号途径在人牙髓细胞向成牙本质细胞分化中作用的体外研究

目的:通过观察丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)p38抑制剂SB203580在对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)矿化相关基因的表达和矿化能力的影响,探讨MAPK信号通路在hDPCs向成牙本质细胞分化中的作用。方法:组织块酶消化法体外分离培养hDPCs,并随机分为两组。实验组加入含终浓度为20μmol/L的SB203580矿化液;对照组仅加入矿化液进行诱导培养。于诱导培养7、14、28 d时分别通过RT-PCR、ALP染色和茜素红染色检测各组矿化相关基因的表达水平及其矿化程度。结果:实验组牙本质涎磷蛋白(dentin Sialophosphoprotein,DSPP)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(Osteonectin,OCN)各矿化相关基因的表达水平,以及hDPCs的碱性磷酸酶活性和矿化结节形成量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:p38MAPK信号通路抑制剂SB203580具有抑制hDPCs分化和矿化的作用,提示p38MAPK信号通路可能参与hDPCs向成牙本质细胞分化。

玻璃离子、复合体、复合树脂对人牙髓细胞的细胞毒性试验研究

目的 :研究玻璃离子、复合体、复合树脂牙色材料对体外培养的人牙髓细胞的细胞毒性作用。方法 :采用MTT法测定上述 3种牙色材料的浸渍液对体外培养的人牙髓细胞的细胞毒性。结果 :与对照组相比 ,7d的牙色材料浸渍培养液对体外培养的人牙髓细胞有抑制作用 ,其中复合树脂的抑制人牙髓细胞的增殖有显著性 (P <0 .0 5 ) ;但 3d的浸渍培养液却呈现出不同的细胞毒性作用 :玻璃离子仍有一定的抑制细胞增殖作用 ,复合体基本无作用 ,而复合树脂却有显著的促进细胞增殖作用 (P <0 .0 5 )。结论 :牙色材料的细胞毒性作用与其牙色材料的种类相关。

体外持续培养对人牙髓细胞分化能力的影响

目的 :探讨人牙髓细胞在体外持续培养时 ,其分化能力的变化趋势。方法 :体外持续培养人牙髓细胞 ,检测不同代次细胞的碱性磷酸酶活性、钙化能力及Ⅰ型胶原表达 ,并对比分析。结果 :随着体外培养细胞代次的增多 ,在同等刺激分化条件下 ,人牙髓细胞的碱性磷酸酶活性整体呈下降趋势 ,钙化结节的数目和面积逐渐减少 ,Ⅰ型胶原表达合成逐渐减少。结论 :人牙髓细胞在体外持续培养时 ,分化能力逐渐下降 ,可能与其含有的未分化细胞 (人牙髓干细胞 )

胶原-生物活性玻璃-聚己内酯复合支架材料促进人牙髓细胞的增殖、迁移和分化

背景:胶原-生物活性玻璃-聚己内酯复合材料具有良好的生物相容性、机械性能及可降解性,对细胞的黏附、增殖及血管生成极为有利。目的:观察胶原-生物活性玻璃-聚己内酯复合支架材料对人牙髓细胞的增殖、迁移和分化能力的影响。方法:分离培养人牙髓细胞,接种在胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上,接种前及接种后第1,3,7,14,24天,采用MTT法检测细胞增殖,采用划痕实验检测细胞的迁移能力,采用ELISA法检测细胞上清液中的碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)与接种前比较,接种于胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞增殖能力明显增强(P<0.01);随着接种时间的延长,胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞增殖能力逐渐增强;(2)与接种前比较,接种于胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞迁移能力明显增强(P<0.01);随着接种时间的延长,胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞迁移能力逐渐增强;(3)与接种前比较,接种于胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞上清液中碱性磷酸酶水平明显增加(P<0.01);随着接种时间的延长,胶原-生物活性玻璃-聚己内酯支架材料上的细胞上清液中碱性磷酸酶水平逐渐增强;(4)结果表明,胶原-生物活性玻璃-聚己内酯复合支架材料可促进人牙髓细胞的增殖、迁移和分化过程。

Notch_2-Delta在体外人牙髓细胞分化中的表达及调控

目的 探讨Notch信号在体外牙髓细胞向成牙本质样细胞分化过程中的作用。方法 人牙髓细胞体外连续培养 ,采用免疫组化染色及Westernblot方法对该过程中人牙髓细胞Notch2 _Delta的表达及rhBMP_2对Delta表达的影响进行定性及半定量研究。结果 体外牙髓细胞增殖、分化过程中有Notch2 _Delta的表达 ,随细胞增殖、分化状态的不同 ,二者表达的部位及表达强度发生变化 ,外源性rhBMP_2在牙髓细胞结节形成后期可上调Delta的表达。结论 Notch信号途径参与了体外牙髓细胞向成牙本质样细胞分化过程 ,其介导的细胞间相互作用可能是控制牙髓细胞对信号分子反应性的机制。

血小板血浆对人牙髓细胞增殖的影响

目的:观察血小板血浆及其细化成分对人牙髓细胞增殖的影响。方法:使用因正畸而拔除的人牙的牙髓细胞,用细胞定量测定试剂盒测定细胞增殖情况。结果:5%的多血小板血浆(p latelet-rich p las-m a,PRP)、5%和10%的洗净血小板(washed p latelet,WPLT)均明显地促进了人牙髓细胞的增殖,而且WPLT的作用较PRP更显著。乏血小板血浆(p latelet-poor p lasm a,PPP)呈浓度依赖性地抑制了人牙髓细胞增殖,5%WPLT促进人牙髓细胞增殖的作用。结论:去除血浆成分的WPLT对培养的人牙髓细胞增殖有明显的促进作用;血浆中可能存在对抗血小板生长因子作用的因子。

表皮生长因子对人牙髓细胞DNA合成及细胞周期的影响

目的研究表皮生长因子(EGF)对体外培养的人牙髓细胞(HDPCs)DNA合成及细胞周期的影响.方法将培养的第5代HDPCs分成EGF(1ng/ml)实验组和对照组,分别以含5%FBS的DMEM培养48h;常规消化、固定细胞,调整细胞密度为2.0×106/ml,经DNA荧光染色后用流式细胞仪(FCM)测定DNA分子含量.结果与对照组相比,EGF实验组HDPCs的DNA合成前期细胞比例(G1%)明显降低,而DNA合成期细胞比例(S%)及细胞增殖指数PrI值(S+G2M)%均显著增高.结论EGF具有促进HDPCs的DNA合成和分裂增殖的作用,可能主要是通过促使处于G1期的细胞进入S期来实现的;提示EGF在牙髓组织的损伤修复过程中起着重要作用.

rhBMP2和rhTGF-β1联合应用对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨rhBMP2和rhTGF - β1联合应用对人牙髓细胞ALPase活性的影响。 方法 :采用酶动力学的方法 ,比较不同浓度rhBMP2和rhTGF - β1单独或联合应用对人牙髓细胞的ALPase活性的影响。 结果 :rhBMP2对人牙髓细胞的ALPase活性呈浓度依赖性增强 ,rhTGF - β1对人牙髓细胞ALPase活性的影响与其本身浓度有关。当rhTGF - β1浓度为 1μg/L与rhBMP2联合应用时 ,ALPase活性比rhBMP2单独应用明显增高。结论 :rhBMP2、rhTGF - β1单独及联合应用于人牙髓细胞时 ,对人牙髓细胞的ALPase活性作用不同 。

LPS调控人牙髓细胞矿化中PI3K信号分子作用机制的体外研究

目的:研究磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号分子在细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)调控人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)矿化中的作用机制。方法:以改良组织块培养法获得hDPCs,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)染色和茜素红染色观察LPS对hDPCs的矿化作用以及PI3K信号分子的特异性抑制剂LY294002对其的影响;通过实时定量聚合酶链反应(Real-TimePCR)检测LPS调控的hDPCs中细胞外基质矿化相关基因的表达变化。结果:矿化诱导hDPCs 4周,LPS组的ALP染色和茜素红染色均明显强于对照组,而LY294002+LPS组弱于LPS组;LPS组的矿化蛋白OCN、BSP、Collagen-I mRNA表达水平均明显高于对照组和LY294002+LPS组(P<0.05),其中LY294002+LPS组各基因表达水平均最低,但与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:PI3K信号途径参与LPS调控的hDPCs矿化过程,其机制与调节OCN、BSP、Collagen-I基因表达有关。