吴茱萸碱部分通过人白介素1所介导的途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)诱导人黑色素瘤A375S2细胞死亡的作用机制及其与细胞因子人白介素1(interleukin1,IL1)信号转导途径之间的关系。方法MTT检测法,DNA凝胶电泳法及Westernblot法。结果IL1受体拮抗因子(IL1receptorantagonist,IL1ra)在24h时能够部分抑制吴茱萸碱诱导的A375S2细胞死亡。吴茱萸碱在诱导A375S2细胞死亡的过程中,Fas配体(Fasligand,FasL)的蛋白表达量升高,激活其下游的caspase8和caspase3,进而引起DNA的损伤并激活p53蛋白,同时Bax/Bcl2的蛋白表达比例被上调。在经过IL1ra预处理后,这些变化均被部分的抑制或逆转。结论吴茱萸碱诱导A375S2细胞死亡的作用是部分通过IL1介导的信号转导途径而实现的。

低频脉冲磁场对兔膝关节软骨细胞人白介素1β、肿瘤坏死因子α表达与分泌的影响

目的探讨低频脉冲磁场对兔膝关节软骨细胞人白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达与分泌的影响。方法选择40只健康成年新西兰白兔建立兔膝关节软骨损伤模型,把右膝关节设为治疗组(n=20),每日给予低频脉冲磁场治疗;左膝关节为对照组(n=20),给予假磁场治疗,治疗后1、4周深麻醉处死动物,观察相关指标的变化。结果在同一观察时间点,IL-1β和TNF-α表达量治疗组均明显少于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗组软骨损伤程度较对照组轻微,关节活动度明显大于对照组,outerbridge积分也少于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论低频脉冲磁场治疗骨性关节炎具有简便易行,安全无创等优点,可有效遏制IL-1β、TNF-α的释放,调节分泌作用,从而对骨性关节炎软骨损伤修复具有促进作用。

重组人白介素1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)重复给药导致大鼠和食蟹猴产生结合抗体

限制大分子药物使用的关键因素之一为诱导抗体产生。新药安全性评价时往往不得不采用多种动物评价人源蛋白的安全性,因此,测定动物产生抗体水平是正确评价大分子药物的前提。为了检验重组人白介素1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)在动物体内的安全性,采用间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定rhIL-1Ra结合抗体,以纯化抗原作为包被载体,加入供试品后再加酶标抗体,用底物显色并在酶标仪上读取结果。结果显示,抗原包被浓度为10μg/mL、酶标二抗工作浓度为1∶5 000、阳性对照工作浓度为1∶10 000、待检血清样品稀释度从1∶100开始较为合适。SD大鼠肌肉注射给予rhIL-1Ra 4周试验中,剂量分别为0、5、15和30mg/kg。结果表明,剂量≥5mg/kg时给药2周后可诱导产生结合抗体。食蟹猴每天1次连续给药4周,剂量分别采用0、2.5、7.5和15.0mg/kg,当剂量≥2.5mg/kg时可诱导产生结合抗体。

重组人白介素-1α对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG影响的荧光定量RT-PCR研究

目的:通过观察重组人白介素-1α(rhIL-1α)对体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)核因子kB受体活化因子配基(RANKL)和骨保护素(OPG)表达的影响来探讨牙槽骨改建的调节机制。方法:以不同浓度rhIL-1α(0、5、10、20μg/L)作用于体外培养HPDLFs,于24 h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKLmRNA和OPG mRNA的表达。结果:rhIL-1α同时上调HPDLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,但RANKL/OPG的比值增加,这种调节作用在10μg/L的作用浓度时最明显。结论:rhIL-1α可在体外影响HP-DLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,调节RANKL/OPG比值,与牙槽骨改建密切相关。

重组人白介素-1受体拮抗剂治疗特发性间质性肺炎

目的分析重组人白介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1ra)联合醋酸泼尼松治疗特发性间质性肺炎(idiopathic interstitial pneumonias,IIPs)的疗效及对肺功能、血清细胞因子水平的影响。方法选取60例IIPs患者为对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各30例,对照组给予醋酸泼尼松治疗,观察组在对照组的基础上联合rhIL-1ra治疗。比较2组治疗后的临床疗效、呼吸功能、肺功能指标[用力肺活量(FVC)、第1秒钟用力呼气量(FEV 1)、最大自主通气量(MVV)]、血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1(IL-1)水平的变化。结果治疗后观察组总有效率为88.33%,高于对照组的65.00%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组[FEV 1(80.84±10.13)L、FVC(3.32±0.85)L、FEV 1/FVC(75.72±8.78)%],均高于对照组[FEV 1(72.52±3.68)L、FVC(2.80±0.52)L、FEV 1/FVC(70.53±7.17)%],差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组IL-6(248.82±38.85)ng/L、IL-1(562.18±45.72)ng/L,均分别低于对照组的(267.43±37.15)ng/L和(584.95±43.67)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论rhIL-1ra联合醋酸泼尼松治疗IIPs的临床疗效较好,能有效改善患者肺功能,降低炎症因子水平。

hIL-1Ra基因体内转染治疗兔颞下颌关节骨关节病的形态学研究

目的:研究人白介素-1受体拮抗剂(human Interleukin 1 Receptor Antagonist,hIL-1Ra)基因在治疗颞下颌关节骨关节病(Temporomandibular Joints Osteoarthritis,TMJOA)前后的形态学变化。方法:20只新西兰白兔随机分为4组,每只兔右侧颞颌关节腔注射Ⅱ型胶原酶诱发骨关节病。4周后第1组不接受治疗,第2组右侧颞颌关节腔内连续3次间隔24h注射生理盐水内含阳离子脂质体介导的pcDNA3.1质粒,第3组注射生理盐水内含阳离子脂质体介导的100μg hIL-1Ra基性因的质粒,第4组注射生理盐水内含阳离子脂质体介导的200μg hIL-1Ra基因的质粒。注射后4周处死动物,切取右侧颞颌关节的关节盘、滑膜、髁状突通过大体观、组织病理观察TMJOA是否有改善。结果:第3、4组髁状突标本大体观结构基本正常,表面较光滑,关节盘形态正常未见穿孔。组织病理学发现第3及第4组中关节软骨和滑膜的病损均得到改善,对照组和空白组大体观、组织病理均未得到改善。结论:含hIL-1Ra基因的质粒经阳离子脂质体包裹后直接注射兔颞颌关节骨关节病的关节腔后骨关节病有明显改善。治疗效果与质粒DNA的量呈剂量依赖性。

人白介素-1β水平与人牙周膜细胞OPG表达关系

目的:检测不同浓度重组人白介素-1β(recombinant human interleukin-1β,rh IL-1β)对体外培养人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)表达骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)的影响,研究rh IL-1β水平对牙周膜细胞骨向分化的作用。方法:正畸需要而拨除的健康前磨牙牙周膜,体外传代培养HPDLCs;ELISA法和RT-PCR法测定不同浓度rh IL-1β(0、5、10、15μg/L)下HPDLCs的OPG分泌量及m RNA表达。结果:ELISA和RT-PCR法检测结果显示,5、10、15μg/L rh IL-1β作用于HPDLCs均会下调其OPG蛋白分泌和m RNA表达。同一时间点与0μg/L对照组比较,5、10、15μg/L组OPG蛋白分泌和m RNA表达依此下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rh IL-1β水平升高会增强对HPDLCs的OPG表达抑制,对牙槽骨健康产生不利影响。

rhIL-1Ra对恒河猴肾脏毒性的病理组织学观察

目的观察重组人白介素-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)的毒性靶器官及毒性的严重程度。方法32只成年恒河猴分为rhIL-1Ra 2mg/(kg·d)(n=6)、10mg/(kg·d)(n=6)和50mg/(kg·d)(n=6)连续给药90天组,10mg/(kg·d)(n=4)连续给药30天组,正常对照组(n=5)和溶剂对照组(n=5)。rhIL-1Ra为皮下注射给药,每日1次。观察指标包括一般药物反应、尿八项、心电图、眼底检查、外周血细胞计数及白细胞分类、凝血时间、血清生化、外周血T细胞亚群和猴抗rhIL-1Ra抗体测定、脏器重量和脏器系数、常规病理组织学检查。结果给药后30天各给药组动物血清非特异性抗体明显升高。rhIL-1Ra 2mg/(kg·d)组其他检测指标均未见明显地改变。rhIL-1Ra 10mg/(kg·d)组给药后90天肾小球毛细血管基底膜明显增厚,但此剂量给药时间为30天时未见任何异常。rhIL-1Ra 50mg/(kg·d)组肾小球及肾小管中蛋白性液体量多,小球毛细血管基底膜增厚更为严重,且停药30天后基底膜增厚程度仍未见明显减轻或改善。结论rhIL-1Ra的主要毒性靶器官为肾脏。2mg/(kg·d)为安全剂量,10mg/(kg·d)给药30天时为安全剂量,给药90天为恒河猴中毒性剂量,而50mg/(kg·d)为明显的毒性反应剂量,可产生难以恢复的肾脏纤维化。

hIL-1Ra基因体内转染兔颞下颌关节骨关节病模型的免疫组化研究

目的研究人白介素-1受体拮抗剂(hIL-1Ra)基因转染兔颞下颌关节骨关节病(TMJOA)动物模型后,颞下颌关节腔内hIL-1Ra蛋白的表达和定位。方法18只新西兰白兔随机分为3组,每只兔右侧颞下颌关节腔注射Ⅱ型胶原酶诱发骨关节病。4周后第一组和第二组动物连续3次每隔24h向右侧颞下颌关节腔内注射生理盐水,第一组生理盐水中含100μL阳离子脂质体介导的200μgpcDNA3.1-hIL-1Ra基因的质粒;第二组生理盐水中含100μL阳离子脂质体介导的200μgpcDNA3.1的质粒;第三组不作处理。最后一次注射后4周处死动物,切取右侧颞下颌关节的关节盘、滑膜、髁状突,用免疫组化方法行hIL-1Ra蛋白表达和定位的观察。结果免疫组化研究发现第一组颞下颌关节的关节软骨、软骨下骨和滑膜细胞的胞浆内有棕色颗粒,表明存在hIL-1Ra蛋白。第二组和第三组未查见该蛋白。结论外源性hIL-1Ra基因能够在兔髁状突软骨和滑膜细胞甚至软骨下骨内正确翻译,表达的蛋白产物可与抗hIL-1Ra的抗体发生特异性结合,具有免疫活性。

药源性循环免疫复合物检测方法的建立

目的通过重组人白介素1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)的大鼠6mon重复给药毒性试验,建立临床前安全性评价中动物体内药源性循环免疫复合物(CIC)的检测方法,为临床CIC检测提供依据。方法从rhIL-1Ra免疫后的兔血清中纯化总IgG包被于酶标板上作为捕获抗体,SD大鼠抗rhIL-1Ra阳性血清与rhIL-1Ra以不同比例混和制成人工免疫复合物(AIC),通过双抗夹心ELISA检测AIC的效率来评价该方法有效性。定期采集连续26wk皮下注射rhIL-1Ra的大鼠血清并以上述方法检测CIC,同时用免疫组化法显示肾小球中的免疫复合物(IC)来验证该方法。结果双抗夹心ELISA法可显示AIC的数量差异,大鼠血清CIC显示出与给药时间一致的变化,并与肾小球中IC检测结果相印证。结论双抗夹心ELISA法可检测出动物因长期给予外源蛋白而产生的CIC,AIC则可作为该检测体系中的阳性对照。

COOK双球囊联合缩宫素对妊娠晚期产妇的影响研究

目的:探讨COOK双球囊联合缩宫素对妊娠晚期产妇宫颈成熟度、引产效果及血清TNF-α、IL-8和IL-1β水平的影响。方法:纳入本院收治的妊娠晚期产妇60例,纳入时间为2018年3月至2020年3月,采用数字表法分为对照组以及研究组,对照组给予缩宫素干预,研究组在对照组的基础上给予COOK双球囊干预,对比两组患者引产结果、宫颈成熟度、血清TNF-α、IL-8和IL-1β水平。结果:干预前,两组宫颈成熟度无显著差异(P>0.05),干预后,宫颈成熟度均显著增加(P<0.05),干预后研究组宫颈成熟度高于对照组(P<0.05)。研究组的自然分娩率(90.00%)高于对照组(56.67%),剖宫产率(10.00%)低于对照组(43.33%)(χ2=8.522,P<0.05)。研究组产后出血、胎儿窘迫、胎儿窒息等不良妊娠结局发生率(3.33%)低于对照组(26.67%)(χ2=66.405,P<0.05)。研究组的总产程时长、产后出血量均低于对照组,研究组新生儿Apgar评分高于对照组(P<0.05)。干预后,研究组的TNF-α、IL-8和IL-1β水平低于对照组(P<0.05)。结论:COOK双球囊联合缩宫素能有效促进妊娠晚期产妇宫颈成熟,降低炎症反应,改善妊娠结局。

IL-1、IL-6、TNF-在肩峰撞击综合征患者肩峰下滑囊的表达及意义

目的探讨IL-1、IL-6、TNF-在肩峰撞击综合征患者肩峰下滑囊的表达及临床意义。方法 26例患者被列入实验,分为实验组和对照组,实验组肩峰撞撞击综合征患者16例,对照组非肩峰撞撞击综合征肩部损伤10例,实验组采用关节镜微创术式取SAB标本,对照组采取开放手术方式取得标本,采用ELISA法测SAB中IL-1、IL-6、TNF-含量。结果与空白组相比,实验组的IL-1、IL-6、TNF-在肩峰下滑囊的表达水平明显升高(P<0.05)有统计学意义。结论肩峰下撞击综合征导致的肩峰下滑囊炎的慢性炎症反应是导致患者肩痛及功能障碍的重要病理基础,在肩峰撞击综合征患者行肩峰下成形术时应广泛、彻底地切除肩峰下滑囊。

肺炎克雷伯菌肺炎对小鼠NLRP3炎症通路的影响

目的建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,并探究肺炎克雷伯菌感染对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路的影响。方法给小鼠气管内接种肺炎克雷伯菌,观察小鼠死亡率;接种肺炎克雷伯菌48 h后,取小鼠肺部匀浆涂板检查菌落数;取小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)离心,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测无细胞上清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-6、趋化因子配体1(KC)的水平,迈格林华-姬姆萨染色计数细胞沉淀中的中性粒细胞数;取肺部病理切片并进行苏木精-伊红(HE)染色观察肺部病变;提取肺部总蛋白,蛋白质印迹法检测NLRP3、核因子(NF)-κB p65、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-1)、人白介素-1β前体(pro-IL-1β)表达水平。结果成功建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,小鼠在144 h内死亡率达到百分之百,肺部有大量细菌负载,肺部中性粒细胞浸润增加,支气管肺泡灌洗液中IL-1β、TNF-α、IL-6、KC分泌升高,肺组织IL-1β、p-p65表达升高。结论通过将肺炎克雷伯菌液接种到小鼠肺部的方法所建立的肺炎小鼠模型稳定性高、可重复性好,肺部NLRP3炎症通路反应强烈。