检验人精浆特异蛋白P_(30)免疫胶体金试剂条的研制

目的制备用于检验人精浆特异蛋白P30—主要是来自法医学案件的免疫胶体金层析试剂条。方法选取针对不同抗原决定簇的抗P30单克隆抗体细胞株,并制备其小鼠腹水,分离纯化单克隆抗体。制备胶体金并以纯化抗体包被,制成免疫胶体金,以免疫胶体金浸泡玻璃纤维。选取适宜的硝酸纤维素膜并于其上不同位置以未金标的另一株P30单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被。搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性。结果所制成的试剂条灵敏度至少可达4ng/ml;对6人份混合的人精液物质在稀释20万倍后仍出阳性结果,且无非特异性反应。结论检验人精浆特异蛋白P30的免疫胶体金试剂条可对嫌疑人精物质做出排查,有利于法医物证检验。

用酶免疫斑点法快速检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

作者用自制的辣根过氧化物酶标记的抗精浆特异蛋白P_(30) 单克隆抗体,建立了简便快速检测精斑中P_(30) 鉴定人精斑的斑点法。通过颜色变化判定结果,阳性为紫蓝色斑点,阴性为无色。结果表明,仅人类精斑和前列腺浸液出现阳性斑点,人体其他体液及组织器官浸液均为阴性。对动物血、精斑也无交叉反应。标定精斑稀释到1600倍亦可得到阳性结果。

分泌抗人精液特异蛋白P_(30)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

作者通过杂交瘤技术建立了9株产生抗精浆特异蛋白 P_(30) 单克隆抗体的杂交瘤细胞系。它们是由 SP2/0骨髓瘤与经 P_(30) 免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞按常规方法进行细胞融合、并经克隆化筛选得出.这些细胞株均经体外培养3个月以上能够稳定分泌抗 P_(30) 单克隆抗体。该抗体只能识别纯化的 P_(30) 和精液中的 P_(30) ;与人精液以外的其他体液和多种人体组织无交叉反应;与几种常见动物的精液和血液无交叉反应。这些 P_(30) 单克隆抗体均属 IgG 类和 IgG_1亚类。其培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达到320和128,000。以 ELISA 法应用这些单克隆抗体能很好地鉴定精液和精斑。

抗人精浆特异蛋白血清的制备与纯化

本文报导检验混合斑中精斑ABO 血型所用抗人精浆特异蛋白(anti-human seminal peculiarprotein,ASPP)血清的制备及用溴化氢活化琼脂糖4B 为载体的亲和层析纯化抗血清方法,并指出纯化时的最佳条件。该血清可准确地分离混合斑中精斑的ABO 血型。

免疫酶斑点法检测人精浆P30及封闭物选择

免疫酶斑点法是免疫学检验中常用的方法,国外法医界有用以检测种属和血型等。但目前在我国法医学界尚未被普遍应用。本文作者用斑点法检测人精浆p30;并对斑点法中所需的封闭的牛血清白蛋白(BSA)和鸡蛋清的封闭效果进行了比较,以获得简便、实用的检测人精浆p30的斑点法。

p30的分离纯化、抗血清制备及其法医学应用

人类精浆特异性抗原p30,又称为前列腺特异性抗原,是由前列腺分泌的,存在于精液中的一类糖蛋白。它在精液斑中稳定,并具有种属特异性和男性生殖器官特异性。它是法医学确证精液斑的理想标志。为了完成大量的法医血清学精液斑确证试验,需要制备抗p30血清。本文报道一种改良的从人精浆中分离纯化p30的方法,抗p30血清的制备以及法医学实践中应用抗p30血清检查精液斑的研究。 30ml混合人精浆离心后取上清液。p30的纯化步骤包括两步离子交换层析(CM-Sephadex-C50和DEAE-Sephadex-A50