目的探讨乌索酸(UA)对高糖诱导人系膜细胞损伤的保护作用。方法人系膜细胞复苏后,用MCM 4201完全培养基常规培养,置于37℃、饱和湿度5%CO_2的孵箱内贴壁传代培养,隔天换液1次,取5~9代对数生长期细胞,分为正常糖组(5.5mmol·L^(-1)...目的探讨乌索酸(UA)对高糖诱导人系膜细胞损伤的保护作用。方法人系膜细胞复苏后,用MCM 4201完全培养基常规培养,置于37℃、饱和湿度5%CO_2的孵箱内贴壁传代培养,隔天换液1次,取5~9代对数生长期细胞,分为正常糖组(5.5mmol·L^(-1)葡萄糖),高糖组(30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖),高渗对照组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+24.5 mmol·L^(-1)甘露醇),乌索酸治疗A、B、C组(30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖,A、B、C组分别给予0.5、1.0、2.0μmol·L^(-1)乌索酸)。6组均给药48 h。利用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测系膜细胞凋亡,采用实时PCR及Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-x L、Bax、survivin m RNA及蛋白表达,细胞损伤相关蛋白TGF-β1、FN m RNA及蛋白表达。结果 0.5μmol·L^(-1)乌索酸治疗组与正常糖组、高渗对照组系膜细胞增殖程度差异无统计学意义(P>0.05),2.0μmol·L^(-1)乌索酸治疗组大部分系膜细胞已经死亡。1.0μmol·L^(-1)乌索酸组抑制高糖诱导的系膜细胞增殖和TGF-β1、FN、Bcl-xl、survivin m RNA及蛋白表达,增强促凋亡基因Bax m RNA及蛋白表达,促进系膜细凋亡。结论乌索酸通过促进系膜细胞早期凋亡抑制系膜细胞增殖,抑制TGF-β1表达和FN聚集,减轻系膜细胞损伤。展开更多
目的:研究冬虫夏草(cordyceps sinensis)提取物对乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)诱导的人系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)增殖和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)积聚的作用及潜在机制。方法:用重组表达载...目的:研究冬虫夏草(cordyceps sinensis)提取物对乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)诱导的人系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)增殖和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)积聚的作用及潜在机制。方法:用重组表达载体pCMV-HBx稳染人系膜细胞建立HBx过度表达模型,用空载体转染对照组。用MTT法和DNA合成法检测细胞增殖。蛋白质印迹法用于检测磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白和细胞外基质的表达。结果:HBx转染人系膜细胞可诱导系膜细胞增殖、基质积聚。HBx转染的HMCs可增强系膜细胞PI3K/Akt通路的活性,应用冬虫夏草可抑制这种作用。结论:冬虫夏草可通过抑制PI3K/Akt信号通路减弱HBx诱导的人系膜细胞增殖和细胞外基质的产生。展开更多
文摘目的探讨乌索酸(UA)对高糖诱导人系膜细胞损伤的保护作用。方法人系膜细胞复苏后,用MCM 4201完全培养基常规培养,置于37℃、饱和湿度5%CO_2的孵箱内贴壁传代培养,隔天换液1次,取5~9代对数生长期细胞,分为正常糖组(5.5mmol·L^(-1)葡萄糖),高糖组(30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖),高渗对照组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+24.5 mmol·L^(-1)甘露醇),乌索酸治疗A、B、C组(30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖,A、B、C组分别给予0.5、1.0、2.0μmol·L^(-1)乌索酸)。6组均给药48 h。利用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测系膜细胞凋亡,采用实时PCR及Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-x L、Bax、survivin m RNA及蛋白表达,细胞损伤相关蛋白TGF-β1、FN m RNA及蛋白表达。结果 0.5μmol·L^(-1)乌索酸治疗组与正常糖组、高渗对照组系膜细胞增殖程度差异无统计学意义(P>0.05),2.0μmol·L^(-1)乌索酸治疗组大部分系膜细胞已经死亡。1.0μmol·L^(-1)乌索酸组抑制高糖诱导的系膜细胞增殖和TGF-β1、FN、Bcl-xl、survivin m RNA及蛋白表达,增强促凋亡基因Bax m RNA及蛋白表达,促进系膜细凋亡。结论乌索酸通过促进系膜细胞早期凋亡抑制系膜细胞增殖,抑制TGF-β1表达和FN聚集,减轻系膜细胞损伤。
文摘目的探讨exendin-4对高糖条件下人系膜细胞(HMC)细胞外基质(ECM)代谢的影响及其可能的机制。方法取对数生长期的HMC分为正常对照(NG)组、渗透压对照(Man)组、高糖(HG)组和高糖联合不同浓度exendin-4(1、10、100 nmol/L)组。体外培养HMC,采用cck8法测24 h HMC增殖情况;Western Blotting检测细胞培养15 min后细胞外调节激酶(ERK)/p-ERK蛋白表达情况,24 h后Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达情况。结果 CCK-8结果显示高糖诱导HMC 24 h后可见细胞增殖明显增强(1±0.06 vs 1.20±0.07,P<0.001),加入exendin-4后可抑制细胞增殖(1.12±0.02 vs 1.20±0.07,P<0.05,1.05±0.08 vs 1.20±0.07,P<0.001)。细胞培养24 h后,与NG组相比,HG组细胞Ⅰ型胶原、FN、TGF-β1蛋白表达量均显著增加(P<0.001);与HG组相比,高糖联合exendin-4组Ⅰ型胶原、FN、TGF-β1蛋白表达量均显著降低(P<0.01)。细胞培养15 min后,与NG组相比,HG组细胞ERK磷酸化蛋白表达量较NG组显著增加(P<0.001);与HG组相比,高糖联合exendin-4组ERK磷酸化蛋白表达量显著下降(P<0.001)。渗透压对照组与正常对照组各指标间差异均无统计学意义。结论 Exendin-4可能通过抑制TGF-β1/ERK通路活性对高糖条件下HMC ECM代谢起到了保护性的调节作用。
文摘目的:研究冬虫夏草(cordyceps sinensis)提取物对乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)诱导的人系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)增殖和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)积聚的作用及潜在机制。方法:用重组表达载体pCMV-HBx稳染人系膜细胞建立HBx过度表达模型,用空载体转染对照组。用MTT法和DNA合成法检测细胞增殖。蛋白质印迹法用于检测磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白和细胞外基质的表达。结果:HBx转染人系膜细胞可诱导系膜细胞增殖、基质积聚。HBx转染的HMCs可增强系膜细胞PI3K/Akt通路的活性,应用冬虫夏草可抑制这种作用。结论:冬虫夏草可通过抑制PI3K/Akt信号通路减弱HBx诱导的人系膜细胞增殖和细胞外基质的产生。
文摘目的·研究来源于IgA肾病患者的聚集性IgA1(P-aIgA1)对人肾系膜细胞(human renal mesangial cells,HMCs)分泌炎症因子及细胞增殖的影响,并观察组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylation,HDAC)抑制剂丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)体外抗炎和抗细胞增殖作用。方法·应用亲和层析法制备N-IgA1(来自健康对照者的IgA1)和P-IgA1(来自IgA肾病患者的IgA1),用热聚合法制备P-aIgA1和N-aIgA1(来自健康对照者的聚集性IgA1)。取HMCs,加入不同类型的IgA1及同体积的PBS(对照组),或者VPA干预。应用人炎症因子蛋白芯片检测各组HMCs培养上清液中炎症因子表达。用MTT法检测HMCs增殖情况。采用免疫印迹法或ELISA法检测相关蛋白的表达。结果·炎症因子蛋白芯片结果显示:与对照组比较,P-aIgA1组HMCs培养上清液中白介素-6可溶性受体(interleukin-6 soluble receptor,IL-6sR)、受激活调节的正常T细胞表达和分泌因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted factor,RANTES)、金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)、金属蛋白酶组织抑制因子2(tissue inhibitor of metalloproteinase 2,TIMP2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和肿瘤坏死因子Ⅱ型受体(tumor necrosis factor typeⅡreceptor,TNFRⅡ)的表达水平均显著上调,分别为对照组的34倍、124倍、269倍、100倍、1.6倍和52倍;与对照组比较,N-aIgA1,P-IgA1,P-aIgA1都能促进TIMP2的表达,差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.000,P=0.001)。用MTT法观察HMCs的增殖程度,结果显示:①与对照组相比,N-IgA1组对HMCs的增殖无显著的影响,P-IgA1及PaIgA1都能显著促进HMCs的增殖(P=0.045和P=0.003);与N-IgA1相比,P-aIgA1组HMCs出现了显著的增殖,差异有统计学意义(P=0.036)。②不同浓度的P-aIgA1对HMCs增殖影响的结果显示:25μg/mL的P-aIgA1就可以显著促进HMCs的增殖(P=0.038),呈剂量依赖性。③400μg/mL的VPA能够显著抑制HMCs的增殖(P=0.028)。不同的IgA1对HMCs中HDAC1的影响结果显示:各组HDAC1的表达量分别是对照组的(8.64±0.59)倍(P-aIgA1)、(5.42±0.16)倍(P-IgA1)和(5.87±0.58)倍(N-IgA1);与N-IgA1组相比,P-aIgA1组显著增加了HDAC1表达(P=0.021)。VPA对系膜细胞分泌TNF-α蛋白的影响结果显示:与正常对照组相比,P-aIgA1组TNF-α蛋白表达明显升高(P=0.001);与P-aIgA1组比较,P-aIgA1+VPA组TNF-α蛋白表达水平显著下降(P=0.035)。结论·P-aIgA1能显著促进系膜细胞释放促炎症因子和系膜细胞增殖,且促细胞增殖作用呈浓度依赖。体外IgA肾病细胞模型中存在乙酰化修饰异常,其参与了系膜细胞增殖和炎症反应。HDAC抑制剂VPA可以部分逆转上述反应,提示其在IgA肾病疾病干预方面有一定应用前景,可为从表观遗传学角度防治IgA肾病提供新的思路。
