巢式PCR法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体

目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM -T载体。方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM- 000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5α,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定, 再行测序分析。结果重组质粒PCR扩增得到1568 bp的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%。结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法, 可用于基因的检测和载体的构建。

吸烟和细胞色素P4501A1-MspⅠ、谷胱甘肽硫转移酶T1基因多态性与口腔癌的相关性研究

目的探讨吸烟和细胞色素P450（CYP）1A1-MspⅠ、谷胱甘肽硫转移酶（GST）T1基因多态性与口腔癌发病之间的关系。方法采用病例-对照研究的方法,以300例口腔癌患者（病例组）及300例非癌对照者（对照组）的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应（PCR）技术检测Ⅰ相代谢酶CYP1A1-MspⅠ和Ⅱ相代谢酶GSTT1基因多态性,并分析吸烟和2种代谢酶基因多态性与口腔癌的相关性。结果病例组CYP1A1-MspⅠ突变纯合型（m2/m2）和GSTT1基因缺陷型[GSTT1（-）]的频率分布分别为38.33%、69.33%,而对照组的频率分布分别为21.00%、44.33%,二者差异有统计学意义（P〈0.01）。CYP1A1-MspⅠ（m2/m2）者患口腔癌的风险显著增加（OR=2.34,95%CI为1.76~4.07）。GSTT1（-）者患口腔癌的风险也显著增加（OR=2.84,95%CI为1.98~4.54）。基因突变的协同分析发现CYP1A1-MspⅠ（m2/m2）/GSTT1（-）在病例组和对照组中的分布频率分别为30.67%和6.67%,二者差异有统计学意义（P〈0.01）。CYP1A1-MspⅠ（m2/m2）/GSTT1（-）者患口腔癌的风险显著增加（OR=8.27,95%CI为3.63~11.29）。病例组的吸烟率显著高于对照组的吸烟率（OR=2.71,95%CI为1.31~4.52,P〈0.01）,CYP1A1-MspⅠ（m2/m2）及GSTT1（-）与吸烟有协同作用（OR=25.00,95%CI为11.87~35.64）。结论 CYP1A1-MspⅠ（m2/m2）和GSTT1（-）是口腔癌的易感因素,吸烟与口腔癌的易感性也有关,CYP1A1-MspⅠ（m2/m2）和GSTT1（-）与吸烟在口腔癌的发生上有相互促进的作用。

细胞色素P4501A1基因多态与肾癌遗传易感性的关系

目的：探讨细胞色素P4501A1（CYP1A1）酶的基因多态与肾癌易感性的关系。方法：采用病例对照设计，以175名肾癌患者为病例组，200名来患任何肿瘤的健康人为对照组。应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术，检测CYP1A1基因A4889G（M2）、C4887A（M4）的多态性。结果：病例组M2、M4备基因型分布与对照组相比无统计学差异。携带M2／M2基因型者与肾癌的发生呈正相关（OR=2．225，95%CI：1．134-4．365，P=0．020）。结论：CYP1A1基因M2／M2基因型可能是肾癌的遗传危险因素。

苦参对大鼠细胞色素P4501A2体内代谢活性的影响

目的以咖啡因作为探针药物,研究苦参对大鼠细胞色素P450 1A2(CYP1A2)体内代谢活性的影响。方法将Wistar大鼠随机分为4组:空白对照组、苦参组(实验组)、苯巴比妥组(诱导剂阳性对照组)和西咪替丁组(抑制剂阳性对照组)。苦参组,灌胃给予苦参溶液100 mg.kg-1;空白对照组,灌胃给予与苦参组体积相同的生理盐水;苯巴比妥组,腹腔注射苯巴比妥注射液50 mg.kg-1;西咪替丁组,每日腹腔注射西咪替丁注射液50 mg.kg-1,各组均为每日1次,连续5 d。第6 d,各组大鼠均经尾静脉注射咖啡因溶液2.5 mg.kg-1,于给药前及给药后不同时间,眼内眦静脉取血0.8 mL,用高效液相色谱法,测定血浆中咖啡因的浓度。结果给予大鼠苦参5 d后,苦参组的咖啡因AUC、MRT、Cmax明显低于空白对照组和西咪替丁组(P<0.05),明显高于苯巴比妥组(P<0.05);而CL明显高于空白对照组和西咪替丁组(P<0.05)而明显低于苯巴比妥组(P<0.05)。结论苦参可明显诱导大鼠CYP1A2的体内代谢活性;但诱导强度低于苯巴比妥。

剑尾鱼脑细胞系的建立及细胞色素P4501A的诱导表达

为了构建剑尾鱼脑细胞系并探讨其细胞色素P4501a(CYP1A)基因的诱导效应,实验通过胰蛋白酶消化法对剑尾鱼脑组织进行体外培养,经连续继代培养,建立了可稳定传代的脑细胞系,命名为SFB。SFB最适培养液为含有15%胎牛血清(FBS)的DMEM/F-12和L-15等比混合培养液,培养条件为27℃,5%CO2。生长特性研究表明,第65代细胞的群体倍增时间为43.048h,显示出旺盛的生长和分裂能力。染色体分析发现,培养细胞的染色体众数为48条,SFB核型公式为2n=2st+46t,臂指数(NF)=48,与剑尾鱼一致。诱导实验表明,SFB在10-8～10-5mol/L的苯并(a)芘诱导下,CYP1A mRNA表达量显著提升,且表现出良好的剂量效应关系。脑细胞系的建立为剑尾鱼的毒理学评价研究提供了便利,也为其系统的生态毒理学应用打下基础。

错配杂交化学发光法检测细胞色素P4501A1基因多态性

建立一种检测细胞色素P4 5 0 1A1基因多态性的新方法。针对每个多态位点设计两根寡核苷酸探针 ,两根探针的区别仅在于突变位点处一个碱基。每个样品分别与两根探针进行杂交 ,采用化学发光法检测杂交体 ,通过两根探针的杂交信号强度之比确定基因型。与参考方法比较 ,该法具有快速、简便。

早发性帕金森病与细胞色素P4501A1和N-乙酰基转移酶2基因多态性及个体易感危险性

目的:探讨细胞色素P4501A1(CYP1A1)和N-乙酰基转移酶2(NAT2)基因多态性及其交互作用与早发性帕金森病的关系.方法:用病例对照研究方法及聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析了126例散发的早发性帕金森病患者(发病年龄＜50岁)与122例正常健康成人对照组CYP1A1基因MspI位点3种多态(A,B,C)及NAT2基因常见的3个突变所导致的慢乙酰化基因型在早发性帕金森病患者与正常人之间的分布差异及其交互作用.结果:CPY1A1基因各基因型在两组中分布差异无显著性意义;NAT2基因慢乙酰化基因型在帕金森病组中的分布频率(23.0%)明显高于对照组(10.7%),OR值为2.507;协同分析发现在帕金森病组中携带NAT2慢乙酰化基因型兼CYPIA1基因杂合型B的频率(62.1%)明显高于对照组(23.1%),OR值达5.455,显著提高了患帕金森病的危险度.结论:CYP1A1基因杂合型B与NAT2慢乙酰化基因型之间有协同作用,共存时可能增加个体患帕金森病的危险性.

细胞色素P4501A的研究进展

目的 介绍细胞色素P45 0 1A的研究进展。方法 对近 10年有关细胞色素P45 0 1A的文献进行综述。结果 对影响细胞色素P45 0 1A活性的诱导剂、抑制剂、受其介导代谢的药物、1A的多态性以及其与疾病的关系等作了介绍。结论 对细胞色素P45 0

芳基烃受体及其转录调控的细胞色素P4501A在环境污染物所致毒性中的作用

芳基烃受体属于碱性螺旋-环-螺旋蛋白超家族的转录因子。环境污染物激活芳基烃受体,上调cyp1a的表达,诱导自身的Ⅰ相代谢,增加代谢中间体的生成,代谢中间体与生物大分子结合,造成机体损伤。环境污染物同时可激活芳基烃受体并改变一系列与细胞增殖、细胞周期进程和凋亡相关基因的表达,导致机体损伤并诱发肿瘤。

维生素E、硒对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P4501A1及脂质过氧化的干预作用

目的:研究维生素E、硒对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P4501A1及脂质过氧化的干预作用.方法:♂SD大鼠,随机均分为5组:对照组(普通饲料)、模型组(高脂饲料)、VE干预组、Se干预组、VE+Se干预组,建模5wk处死全部大鼠.生化方法检测血清及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝细胞色素P4501A1mRNA表达的变化,免疫组化方法测定肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)表达的变化.结果:与对照组比较,模型组血清及肝组织中SOD显著降低(312.72±49.51kU/Lvs583.23±63.37kU/L;8.13±0.63U/mgprot.vs13.99±2.33U/mgprot.,P<0.01),MDA增高(13.40±4.24mmol/Lvs6.43±1.76mmol/L;9.79±0.94nmol/mgprot.vs6.80±0.97nmol/mgprot.P<0.01),细胞色素P4501A1mRNA表达水平,肝组织TNF-α、NF-κB蛋白表达明显增强(0.628±0.116vs0,0.230±0.013vs0.03±0.006,0.069±0.01vs0.003±0.001;P<0.05).与模型组比较VE组、Se组的血清及肝组织中SOD增高,MDA降低,细胞色素P4501A1mRNA表达水平略下降;肝组织TNF-α、NF-κB蛋白表达下降(P<0.05).VE+Se组与模型组比较,血清SOD明显增高,其值接近对照组水平;细胞色素P4501A1mRNA表达水平显著下降(0.324±0.070vs0.628±0.116,P<0.05).结论:非酒精性脂肪肝的脂质过氧化损伤及相关因子的表达可能与肝细胞色素P4501A1表达上调有关.VitE和硒能提高机体的抗氧化能力,对非酒精性脂肪肝有保护作用,二者联合作用更明显.

姜黄对肝细胞色素P4501A2的影响

目的 研究姜黄对肝细胞色素P4501A2的影响。方法 以咖啡因为工具药,HPLC法检测其药代动力学变化。结果 咖啡因因体内代谢减慢,半衰期延长。结论 姜黄可以抑制肝药酶,减慢咖啡因的代谢。

中国北方汉族人细胞色素P4501 A1基因MspⅠ多态性的研究

目的 探讨中国北方汉族人细胞色素P(cytochromeP ,CYP) 4 5 0 1A1基因MspⅠ多态性。方法 用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术 ,分析了 172名北方汉族正常健康成人CYP1A1基因 3′端限制性内切酶MspⅠ位点的3种基因型 (A、B、C)的分布频率。结果 MspⅠ等位基因m1、m2分别占 6 0 8%、39 2 %。MspⅠ基因型A占 34 9% ,基因型B占 5 1 7% ,基因型C占 13 4 %。结论 本研究结果提示中国北方汉族人解毒酶CYP1A1基因存在MspⅠ多态性。

氯氮平疗效与细胞色素P4501A2酶基因多态性的关联研究

目的 探讨氯氮平临床疗效的个体差异与其代谢酶细胞色素P4 5 0 1A2 (cytochromeP4 5 01A2 ,CYP1A2 )酶基因单核苷酸多态性的相关性。方法 对 99例符合CCMD 2 R精神分裂症诊断标准的患者和 10 6例健康对照者作病例 对照研究。分裂症患者给予氯氮平治疗 2个月 ,用阳性和阴性症状量表 (positiveandnegativesymptomscale,PANSS)评分评价氯氮平疗效。采用聚合酶链反应扩增及限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术对CYP1A2 /C734A单核苷酸突变进行检测 ,分析氯氮平临床疗效的个体差异与其主要代谢酶CYP1A2 /C734A酶基因单核苷酸多态性的相关性。结果 (1)中国上海地区人群的CYP1A2 /C734A突变率为 6 1 3% ,患者组和健康对照组之间的基因型和等位基因频率无显著性差异 (χ2 =2 4 8,df=2 ;χ2 =1 80 ,df=1,P >0 0 5 ) ,CYP1A2 /C734A突变的多态性分布在分裂症的易感性及年龄、性别、发病年龄、病程、最大日用药剂量等其他相关因素中亦无显著性差异。 (2 )有阳性家族史的分裂症患者其纯合突变基因型 (AA)的频率较健康对照组有明显增多 (χ2 =5 2 8,df=1,P <0 0 5 )。 (3)CYP1A2 /C734A基因型、等位基因频率总体分布与氯氮平疗效之间无相关性 (χ2 =3 4 7,df=2 ;χ2 =2 77,df=1,P >0 0 5 )。 (4 )

细胞色素P4501A1基因多态性与帕金森病关系的研究

目的 研究细胞色素P45 0 1A1(CYP1A1)MspⅠ基因型和第 7外显子 4889位异亮氨酸 (Ile) 缬氨酸 (Val)基因型与帕金森病 (PD)的关系。方法 采用PCR RELP和ASA技术检测 78例PD患者和 15 2例健康人CYP1A1MspⅠ和Ile Val基因多态性 ,并分析 2组基因型和等位基因分布频率。结果 CYP1A1基因MspⅠ、Ile Val多态位点 ,各基因型和等位基因频率在PD组和对照组间比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 细胞色素P45 0 1A1MspⅠ和Ile Val基因多态性与PD患者的遗传易患性可能无关 ,CYP1A1基因多态并不是PD的遗传易患因子。

抵抗素基因启动子-420C/G、细胞色素P4501A1-MspI多态性与吸烟的交互作用对非酒精性脂肪性肝病的影响

目的:探讨抵抗素基因启动子-420C/G、细胞色素P4501A1-Msp I(CYP1A1-Msp I)基因多态性与吸烟的交互作用与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的关系。方法:采用病例-对照研究的方法,以1 200例NAFLD患者及1 200例健康对照者的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术分析了抵抗素基因启动子-420C/G和CYP1A1-Msp I基因多态性。结果:-420C/G(GG)基因型和CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型频率分布分别为49.75%、50.08%(病例组)和24.00%、24.25%(对照组),两者经χ2检验差异显著(P<0.01)。-420C/G(GG)基因型者患NAFLD的风险显著增加。CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型者患NAFLD的风险也显著增加。基因突变的协同分析发现-420C/G(GG)/CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型者在NAFLD组和对照组中的分布频率分别为39.83%和12.83%,两者经χ2检验有显著差异(P<0.01)。-420C/G(GG)/CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型者患NAFLD的风险显著增加。病例组的吸烟率显著高于对照组的吸烟率(P<0.01),吸烟与-420C/G(GG)和CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型均有交互作用。结论:-420C/G(GG)、CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型和吸烟是NAFLD的易患因素,基因多态性与吸烟的交互作用增加了NAFLD的发病风险。

细胞色素P4501B1基因多态性与乳腺癌易感性研究进展

细胞色素P450(cytochrome,CYP)1B1是P450超基因家族酶系的一个重要成员,广泛分布于肝外组织,其代谢受到外源性致癌物、雌激素等多种因素的调控。该基因存在遗传多态性,目前已对CYP1B1基因多态性与乳腺癌易感性进行了多项研究。本文就CYP1B1基因的多态性、调控机制及其与乳腺癌的关系进行了综述。

miR-141-5p影响黏膜黑色素瘤细胞生物学行为的机制研究

目的探讨miR-141-5p在黏膜黑色素瘤(MM)组织及细胞中的表达及其意义,分析其影响MM细胞生物学行为的机制。方法回顾性收集2015年1月至2020年12月温州医科大学附属第一医院手术切除的MM和色素痣组织标本。qRT-PCR法检测并比较MM和色素痣组织、MM细胞株A375和人角质形成细胞株HaCaT中miR-141-5p、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2 mRNA的相对表达量。采用Pearson相关分析miR-141-5p与ERK1/2 mRNA相对表达量的相关性。A375分别用miR-141-5p模拟物(模拟物组)、miR-141-5p模拟物对照(模拟物对照组)、miR-141-5p抑制物(抑制物组)和miR-141-5p抑制物对照(抑制物对照组)处理;采用qRT-PCR检测并比较4组细胞中miR-141-5p相对表达量;采用细胞计数(CCK)-8法、克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验观察并比较4组细胞存活率、增殖能力、细胞凋亡比例和细胞迁移、侵袭能力;采用Western blot法观察并比较4组细胞ERK1/2、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白相对表达量。采用HE染色、免疫组化染色观察MM和色素痣组织形态并检测p-ERK1/2、ERK1/2表达水平,比较不同p-ERK1/2、ERK1/2表达情况MM患者临床病理特征差异。结果miR-141-5p和ERK1/2 mRNA在MM组织和A375中表达下调(均P<0.01);Pearson相关分析显示,miR-141-5p与ERK1/2 mRNA相对表达量呈正相关(P<0.05)。相比对照组,模拟物组细胞增殖和迁移、侵袭能力显著降低,细胞凋亡比例升高,抑制物组细胞增殖和迁移、侵袭能力升高,细胞凋亡比例降低(均P<0.05)。相比对照组,模拟物组细胞p-ERK1/2蛋白相对表达量显著升高,抑制物组显著降低(均P<0.05)。MM组织中ERK1/2与p-ERK1/2蛋白表达明显减少(均P<0.05)。p-ERK1/2阴性组和阳性组、ERK1/2阴性组和阳性组不同临床病理特征比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论miR-141-5p可能通过ERK1/2通路影响MM细胞生物学行为。

细胞色素P4501A1在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨细胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1,CYP1A1)在子宫颈鳞状细胞癌(SCC)中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测18例正常子宫颈组织、33例子宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和124例SCC组织中CYP1A1的表达。分析其表达与SCC的临床病理学参数及预后的关系。结果:CYP1A1在SCC组织中的阳性率(59.7%)高于正常子宫颈组织(11.1%)(P<0.05);在SCC病理分级细胞分化Ⅲ级中CYP1A1的阳性率(69.8%)高于SCC细胞分化Ⅰ级者(34.8%)(P<0.05)。在有淋巴结转移SCC组织中CYP1A1的阳性率(73.6%)高于无淋巴结转移者(49.3%)(P<0.01),CYP1A1表达在SCC的年龄、浸润程度、临床分期和肿瘤大小间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:CYP1A1的高表达可能与SCC的发生、发展等生物学行为有关。

细胞色素P4501A1基因多态性及其与肿瘤易感性研究进展

细胞色素P450（Cytochrome P，CYP）1A1是一种重要的P450系氧化代谢酶，广泛分布于肝外组织，催化多种前致癌物的活化并且在雌激素代谢中起作用。目前发现4个重要的多态性位点，即3801 T→C、4889A→G、3205T→C、2453C→A，CYP1Al基因多态性与多种肿瘤的易感性相关。

阿尔茨海默病患者细胞色素P4501A1基因与载脂蛋白E基因多态性的关联分析

目的:探讨细胞色素P4501A1(CP1A1)和载脂蛋白E基因多态性及其交互作用与阿尔茨海默病的关系。方法:实验于2004-11/2005-05在南方医科大学珠江医院中心实验室进行。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测了135例散发性阿尔茨海默病患者和138例正常老年人细胞色素P4501A1基因和载脂蛋白E基因多态性分布特征。结果:阿尔茨海默病组135例,健康对照组138例,均进入结果分析。①细胞色素P4501A1等位基因m1,m2频率:散发性阿尔茨海默病组分别为63%,37%,对照组分别为68.1%,31.9%,各等位基因频率分布差异无显著性(χ2=1.605,P>0.05)。②散发性阿尔茨海默病组载脂蛋白Eε4等位基因频率与对照组比较有统计学意义(10.74%,5.80%,χ2=4.41,P<0.05,OR=1.95),散发性阿尔茨海默病组和对照组各基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。③研究对象按携带载脂蛋白Eε4状况分层后,在带有ε4等位基因的人群中,散发性阿尔茨海默病组细胞色素P4501A1m2等位基因频率与对照组比较差异有显著性意义(7.4%,2.2%,χ2=6.825,P=0.009),患病风险增加3.417倍(OR=3.417)。结论:细胞色素P4501A1基因MSP1多态性与中国汉族人散发性阿尔茨海默病发病无明显关联,但在携带有载脂蛋白ε4基因型的个体,细胞色素P4501A1m2等位基因可能是散发性阿尔茨海默病的危险基因。