甲基莲心碱体外抑制人肝癌细胞增殖和侵袭的作用机制研究

目的探讨甲基莲心碱(neferine,Nef)对人肝癌HepG2和Bel-7402细胞侵袭的影响和作用机制。方法人肝癌HepG2和Bel-7402细胞体外培养,经不同浓度的甲基莲心碱处理后,CCK-8法检测细胞的增殖,Transwell细胞体外侵袭实验观察Nef对细胞侵袭能力的影响;免疫印迹检测Rho相关蛋白的表达。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,甲基莲心碱干预组抑制人肝癌HepG2和Bel-7402细胞增殖,并呈剂量-效应关系(P<0.05);Transwell细胞体外侵袭实验显示,3μmol·L^(-1)甲基莲心碱明显抑制HepG2和Bel-7402细胞的侵袭;免疫印迹结果显示,3μmol·L^(-1)甲基莲心碱作用HepG2和Bel-7402细胞12 h后,RhoA、RhoC和ROCK表达明显降低。结论甲基莲心碱可体外抑制HepG2和Bel-7402细胞的增殖和侵袭,其抑制肝癌细胞的侵袭可能与抑制RhoA、RhoC和ROCK蛋白的表达有关。

和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响

目的探讨和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响,揭示可能的分子机制。方法使用和枢消积方作用于人肝癌细胞系HepG2,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、平板克隆实验检测细胞增殖能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、丙型肝炎病毒(HCV)非结构5A蛋白(NS5A)反式激活基因13(NS5ATP13)及蛋白激酶B(AKT)/糖原合酶激酶(GSK)/雷帕霉素靶蛋白(MTOR)相关通路蛋白的表达水平。结果和对照组相比,和枢消积方各组可使HepG2细胞活性、增殖率显著降低(P<0.05);同时可上调BAX的蛋白表达,下调BCL-2及磷酸(p)-AKT、p-GSK、p-MTOR及NS5ATP13的表达(P<0.05),呈浓度依赖性。结论和枢消积方可以抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,这可能与和枢消积方抑制NS5ATP13的表达,继而抑制AKT/GSK/MTOR信号转导通路的活化有关。

红藤脂酸钠对人肝癌细胞系SMMC-7721体外抑瘤作用的实验研究

目的研究中药制剂红藤脂酸钠在体外对人肝癌细胞系SMMC-7721的生长抑制作用并初步探讨其作用机制。方法MTT法测定SMMC-7721细胞生长的抑制百分率,并运用AnnexinV法和TUNEL法检测凋亡发生率。结果MTT法测得对照组与红藤脂酸钠处理组吸光值(A值)分别为:对照组(0.385±0.03),红藤脂酸钠处理组中的250μg/ml组(0.31±0.019)、500μg/ml组(0.199±0.022)、1mg/ml组(0.15±0.033)和2mg/ml组(0.048±0.026);各组间比较有显著性差异(P<0.01)。AnnexinV法测定红藤脂酸钠(1mg/ml作用1h)处理后细胞凋亡90%,对照组细胞凋亡17.36%。TUNEL法测定红藤脂酸钠(1mg/ml作用1h)处理后细胞凋亡(60.3±6.0)%,与对照组细胞凋亡(6.6±3.5)%相比,差异有显著性(P<0.01)。结论红藤脂酸钠在体外对7721细胞生长有明显的抑制作用,其作用机制可能主要是诱导肿瘤细胞发生凋亡。

不同扶正药物及其配伍对SMMC-7721人肝癌细胞P53、N-ras基因的调控作用(摘要)

目的:探讨不同扶正药物及其配伍对SMMC-7721人肝癌细胞P53、N-ras基因的调控作用。方法:选取临床上治疗肝癌常用的益气,温阳、补肾、养阴类扶正药物,并根据阴阳治则理论将其分别配伍为益气养阴、温阳养阴及补肾(阳)养阴等复合方药,煎为汤剂,采取大鼠灌胃给药后分离药物血清的方法制备药物血清,作用于体外培养的SMMC-7721人肝癌细胞,以正常大鼠血清和维甲酸作对照。流式细胞仪分析P53、

阿霉素对热处理的人肝癌细胞-7721/Adm耐药株细胞毒性的影响

目的： 探讨比较阿霉素（ ADM）与 43℃加热单独或合并处理人肝癌细胞 7721敏感株（简称 7721细胞）和人肝癌细胞 7721/Adm耐药株（简称 7721/Adm细胞）的细胞毒作用。方法：以体外培养的人肝癌细胞 7721敏感株和已经建立的人肝癌细胞 7721/Adm耐药株为研究对象，采用水浴加温法 ,体外细胞毒试验（ MTT法） ,观察 ADM与加热处理对细胞生长抑制的影响；采用流式细胞技术检测热处理对 7721细胞和 7721/Adm细胞胞内阿霉素浓度的影响。结果： (1)热处理可以明显提高两种细胞对阿霉素的敏感性： 7721细胞、 7721/Adm细胞经阿霉素及 43.5℃热处理，其细胞存活率分别下降 35.2％（ 30 min）、 24.8％（ 60 min）和 29.4％（ 30 min）、 22.8％（ 60 min）； (2)流式细胞仪检测显示，热处理可明显提高这两种细胞尤其是 7721/Adm细胞内的阿霉素浓度： 7721细胞组提高 30.8％， HCC 7721/Adm组提高 51％。结论：热处理可以显著提高人肝癌细胞 7721敏感株和人肝癌细胞 7721/Adm耐药株对阿霉素的敏感性。

β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的研究β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡作用。方法 MTT法观察β-谷甾醇、豆甾醇对细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率、细胞内活性氧ROS、钙离子Ca2+含量、线粒体膜电位ΔΨm变化。结果β-谷甾醇、豆甾醇均明显抑制SMMC-7721细胞增殖,使细胞形态发生典型凋亡变化,凋亡率和细胞内Ca2+、ROS的含量均显著增加,线粒体膜电位降低。β-谷甾醇使细胞周期阻滞在G2/M期,而豆甾醇则同时阻滞在S期和G2/M期。结论β-谷甾醇、豆甾醇具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导细胞凋亡的作用。

应用基因芯片技术研究白花蛇舌草豆甾醇抑制人肝癌细胞体外生长的靶基因调控

目的:应用基因芯片技术研究白花蛇舌草豆甾醇(Stigmasterol from Hedyotis diffusa willd.,SHD)抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长的靶基因调控。方法:MTT法评价SHD在0、5、10、50、100mg/L浓度下,于24、48、72h对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率变化。分别提取人正常肝细胞、人肝癌SMMC-7721细胞和SHD作用后的SMMC-7721细胞的总RNA,逆转录合成单链、双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA与人HO4基因表达谱芯片杂交,扫描杂交芯片图像,利用软件获得SHD抑制人肝癌的靶基因,对其进行生物信息学分析。结果:SHD对SMMC-7721具有体外抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性;SHD使癌基因fos、myc、ras、pim-1、met、rel下调至正常水平,使抑癌基因NF-2和磷酸激酶MAP2K6的表达上调至正常水平。结论:SHD对人肝癌细胞SMMC-7721具有显著的体外抑制作用;SHD抑制SMMC-7721细胞的作用由多条靶基因协同,并通过胞内外信号转导途径协调完成。

紫甘薯汁抗肿瘤活性及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究

目的:研究紫甘薯汁的抗肿瘤活性及其诱导肝癌细胞HepG2凋亡机制。方法:采用Alamar Blue、倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电镜、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR和Western blotting法检测不同体积分数的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞的增殖抑制作用及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究。结果:与对照组相比,体积分数5%和10%的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞具有抑制作用,呈体积分数依赖性;作用HepG2细胞48h后,能观察到细胞皱缩和凋亡小体以及凋亡细胞典型的梯状DNA条带。RT-PCR和Western blotting法检测结果显示,紫甘薯汁可以诱导HepG2细胞中Fas、FADD、Caspase-3、Caspase-8和p53 mRNA表达水平上调和蛋白表达量增加,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性裂解片段明显增高且Caspase-3酶活性显著提高。结论:紫甘薯汁体外对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过细胞表面死亡受体途径诱导HepG2细胞凋亡,同时p53在此凋亡过程中也起着重要的作用。

白花蛇舌草总黄酮抑制人肝癌细胞的靶基因调控

目的:研究白花蛇舌草总黄酮(flavonoids from Hedyotis diffusa willd．,FHD)抑制人肝癌细胞SMMC-7721的靶基因调控．方法:分别提取人正常肝细胞、人肝癌SMMC-7721细胞和FHD作用后的SMMC- 7721细胞的总RNA,逆转录合成单链、双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA与人HO4基因表达谱芯片杂交,扫描杂交芯片图像,利用软件获得FHD抗肝癌的靶基因,对靶基因进行生物信息学分析．结果:共找到20条FHD抑制肝癌细胞的有效靶基因,即给予FHD后,通过上调或下调,这些显著异常表达的基因被恢复至正常水平．其中,癌基因pim-1(Hs．81170)、rel(Hs．858)、ras(Hs．204354)、fos(Hs．25647)、myc (Hs．79070)、met(Hs．285754)以及编码Bcl-2相关蛋白的基因(Hs．227817)被显著下调;成纤维细胞生长因子(Hs．284244)、胰岛素样生长因子1受体(Hs．239176)、胰岛素样生长因子结合蛋白(Hs．1516)、G蛋白偶联受体(Hs．23016)、酪氨酸蛋白磷酸化酶(Hs．227777)、转录因子12(Hs．21704)、转录因子CP2(Hs．154970)等与细胞生长相关的信号转导分子被显著下调;细胞因子IL-1(Hs．1722)被显著下调;丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路成员MAP2K6(Hs．118825)和MAP3K12(Hs．211601)被显著上调;抑癌基因NF-2(Hs．902)被显著上调;编码T细胞活化共刺激信号分子的TNFSF9(Hs．1524)、TNFSF7(Hs．99899)基因被显著上调．这些基因均与肝癌的发生、发展密切相关．结论:FHD抑制SMMC-7721细胞的作用由多条靶基因协同,并通过胞内、胞外信号转导途径协调完成．

4种天然药物对人肝癌细胞HepG2增殖抑制作用的比较

目的比较吉马酮、芝麻素、淫羊藿素、褐藻多糖硫酸酯等4种天然药物对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制效果,并探讨其作用机制。方法通过MTT法比较4种药物对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪分析其对细胞凋亡的影响。Western blot法检测药物处理前后细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达变化。结果 4种药物均呈浓度依赖性地抑制HepG2细胞的增殖,其中淫羊藿素对HepG2的抑制效果最为明显,作用48h半抑制浓度IC50为30μmol/L;4种药物均诱导HepG2细胞凋亡,淫羊藿素诱导细胞凋亡的效果最显著,30μmol/L淫羊藿素处理48h后,细胞凋亡率达到51.1%;4种药物均不同程度抑制周期相关蛋白Cyclin A、Cyclin B1、CDK1、CDK2和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,提高促凋亡蛋白Bax的表达。结论 4种天然药物在体外能明显抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,诱导其凋亡,淫羊藿素效果最为显著;其分子机制与调节抑制细胞增殖和促凋亡相关蛋白的表达有关。

三氧化二砷诱导人肝癌细胞株凋亡的初步研究

细胞凋亡在肿瘤治疗学上的意义日益得到人们的重视。我们观察了中药砒霜的主要成分——三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株的诱导凋亡作用，以探索药物治疗肝癌的新途径。

黄芪多糖对人肝癌细胞HepG2凋亡相关基因表达的影响

目的研究黄芪多糖(APS)联合斑蝥酸钠(SCA)对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响。方法实验分为对照组、SCA处理组、APS处理组、APS联合SCA处理组,采用免疫组化染色法(IH)观察APS联合斑蝥酸钠对HepG2细胞增殖的抑制作用,采用Western印迹法检测各组细胞Bcl-2基因表达的变化。结果与对照组相比,各处理组HepG2细胞中Bcl-2基因表达均明显减少,APS联合SCA处理组减少最为明显。结论 APS联合SCA可明显抑制HepG2细胞Bcl-2基因的表达。

黄芩苷对人肝癌细胞HepG2.0的抑瘤作用

目的研究黄芩苷对人肝癌细胞系HepG2.0的生长抑制作用并初步探讨其作用机制。方法将黄芩苷配制成0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0 mg/mL的工作浓度处理HepG2.0e肝癌细胞,于37℃、5%CO2培养后分别在12、24、48、72 h于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用CCK-8法检测上述各种浓度黄芩苷在处理HepG2.0细胞株48 h后的生长抑制率,观察其对细胞株增殖抑制作用;采用流式细胞技术检测经4.0 mg/mL(IC50)黄芩苷处理、48 h培养的HepG2.0细胞株,观察各细胞周期所占百分比,分析其对HepG2.0细胞周期的影响。并与阴性对照组(只加含10%小牛血清的DMEM培养液的HepG2.0细胞)、阳性对照组(12μg/mL顺铂处理的HepG2.0细胞)、空白组(仅有10%小牛血清DMEM培养液)比较。结果 (1)1.0～10.0 mg/mL黄芩苷对人肝癌HepG2.0细胞增殖均具有明显抑制作用,与阳性对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。8.0～10.0 mg/mL黄芩苷与阳性对照组比较,生长抑制率差异无统计学意义(P>0.05),当黄芩苷浓度为10.0 mg/mL时,其对肿瘤细胞的生长抑制率最高,为96.25%;黄芩苷作用48 h的半数抑制浓度约为4.0 mg/mL。(2)4.0 mg/mL黄芩苷能使处于G0～G1、G2～M期的细胞减少,S期细胞显著增加。结论黄芩苷对人肝癌HepG2.0细胞生长具有明显抑制作用,其机制可能与影响细胞增殖周期有关。

加热对人肝癌细胞-7721Adm耐药株阿霉素的增敏作用

探讨比较阿霉素 (ADM)与 43℃加热单独或合并处理人肝癌细胞 772 1敏感株 (简称 772 1细胞 )和人肝癌细胞 772 1 Adm耐药株 (简称 772 1 Adm细胞 )的细胞毒作用。以体外培养的人肝癌细胞 772 1敏感株和已经建立的人肝癌细胞 772 1 Adm耐药株为研究对象 ,采用水浴加温法 ,体外细胞毒试验 (MTT法 ) ,观察阿霉素 (ADM)与加热处理对细胞的生长抑制的影响 ;采用流式细胞技术检测热处理对 772 1细胞和 772 1 Adm细胞胞内阿霉素浓度的影响。1 热处理可以明显提高两种细胞对阿霉素的敏感性 :772 1细胞、772 1 Adm经阿霉素及 43 5℃热处理 ,其细胞存活率分别下降 35 2 % (30min)、2 4 8% (6 0min)和 2 9 4% (30min)、2 2 8% (6 0min) ;2 流式细胞仪检测显示热处理可明显提高这两种细胞 ,尤其是 772 1 Adm细胞内的阿霉素浓度 :772 1细胞组提高 30 8% ,HCC 772 1 Adm组提高 5 1%。热处理可以显著提高人肝癌细胞 772 1敏感株和人肝癌细胞 772 1

龙胆苦苷等6种中草药提取物对SMMC-7721人肝癌细胞增殖的影响

目的 研究龙胆苦苷等 6种中药有效成分对 SMMC- 772 1人肝癌细胞增殖的影响。方法 MTT法测定不同浓度的 SMMC- 772 1人肝癌细胞活力 ,观察药物对癌细胞增殖的影响。结果 10 2 ,10 4和 10 6nmol.L-1的土贝母皂苷、10 4nmol.L-1和 10 2 nmol.L-1的龙胆苦苷、10 2 nmol.L-1的白屈菜红碱、 3个不同浓度的血根碱及 1g.L-1的败酱草提取物作用于细胞 4 8h后对细胞具有明显的杀伤效应 ;10 mg.L-1的败酱草提取物和 1g.L-1和 10 mg.L-1的威灵仙提取物对肝癌细胞具有促生长作用。结论 龙胆苦苷、土贝母皂苷、白屈菜红碱和血根碱能抑制 SMMC- 772 1人肝癌细胞增殖 ;败酱草提取物能促进肝癌细胞增殖 ;低浓度威灵仙提取物抑制、高浓度促进肝癌细胞增殖。

榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG_2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响

目的 :研究榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响。方法 :免疫荧光和FCM观察榄香烯 (5 0 μg ml,1h)或热休克 (42℃ ,1h)处理后肿瘤细胞HSP70的膜表达 ,放线菌素D阻断基因转录。应用人类基因表达谱芯片分析经榄香烯或热休克处理的人肝癌细胞HepG2 多种热休克蛋白基因及与热休克蛋白调控相关基因表达谱的改变。结果 :榄香烯或热休克处理 1h后 ,肿瘤细胞膜表面HSP70的表达均有增高 ,而以榄香烯处理为明显 ,放线菌素D的加入在两种处理中均增高了HSP70膜表达的阳性率。两种处理均使细胞的HSP70HP(EnhancerProtein)基因表达增高 ,而以热休克处理为更明显 ,HSPA2的表达均有所下降 ,也以热休克处理更明显 ,HSF1基因在热休克处理为上调 ,而在榄香烯处理则为下调 ,与肿瘤免疫密切相关的HSP70、HSP72、HSP75及HSP90、gp96基因的表达则没有变化。结论 :榄香烯较热休克处理早期能更多地促进HepG2 细胞HSP70的膜表达 ,其机制可能是与其改变胞内已存在的HSP70的分布 ,和 或促进HSP70mRNA的翻译有关。两种处理均能改变与HSPs调控相关基因的表达 ,并可引起HSPA2基因表达下调。

藤黄酸促进bax和p53表达诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡(英文)

目的:观察藤黄酸(gambogicacids,GA)对肝癌细胞凋亡的诱导作用并探讨其分子作用机制。方法与结果: 采用MTT比色法检测藤黄酸对人肝癌和人正常肝细胞增殖作用的影响,结果表明,藤黄酸对人肝细胞性肝癌SMMC 7721 细胞株和QGY 7701细胞株有明显增殖抑制作用,并呈剂量依赖性,而对正常人肝组织L 02细胞株作用相对较弱;光镜及电镜形态学观察结果显示,给予GA后,肝癌细胞发生明显的细胞凋亡形态学变化,如细胞体积变小,细胞核固缩,出现凋亡小体等;采用RT PCR和Westernblotting方法检测baxmRNA以及bax和p53蛋白表达变化,结果表明GA可诱导baxmR NA及bax和p53蛋白表达上调;琼脂糖凝胶电泳显示,给予GA后,SMMC-7721裸小鼠移植瘤组织呈现典型的DNAladder 电泳梯状条带。结论:藤黄酸可显著抑制人肝癌细胞的增殖,其分子作用机制可能通过促进bax和p53表达上调,从而诱导人肝细胞性肝癌细胞凋亡。

陡脉冲电场对体外人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用

为研究陡脉冲电场的诱导凋亡作用,以体外人肝癌细胞SMMC-7721为实验对象,采用Annexin V-FITC/PI双染色并利用流式细胞术检测磷脂酰丝氨酸(PS)外翻,采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解片段化。实验发现,陡脉冲电场能有效(P<0.05)地使PS外翻,并且微秒级陡脉冲(μsSPEF)比纳秒级陡脉冲(nsSPEF)更有效(P<0.05);陡脉冲电场能使DNA降解片段化,且nsSPEF比μsSPEF更有效。实验结果表明,陡脉冲电场能有效诱导体外人肝癌细胞凋亡,其机理与陡脉冲电场非热效应及其频谱特性有关。μsSPEF主要作用于细胞膜,而可能通过外源性通路诱导细胞凋亡;nsSPEF主要作用于细胞核和线粒体等胞内细胞器,可能通过内源性通路诱导细胞凋亡。实验结果为陡脉冲电场杀伤肿瘤细胞的机制和参数选择提供了依据。

眼镜蛇毒细胞毒素对人肝癌细胞增殖抑制活性及作用机制的研究

目的研究眼镜蛇毒细胞毒素(CTX)在体外诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用及其可能机制。方法不同浓度CTX作用于人肝癌BEL-7404细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖情况;TUNEL法和透射电镜观察检测肿瘤细胞凋亡;并对caspase-3、-9活性、细胞色素C分布变化进行检测。结果眼镜蛇毒细胞毒素对人肝癌BEL-7404细胞具有明显的抑制增殖作用,12、24和48 h的IC50分别为2.56、1.94和1.35 mg·L-1,TUNEL法和透射电镜均观察到肿瘤细胞的凋亡;caspase-3,-9酶活性增高,Western blot检测到caspase-3,-9酶的表达增强,线粒体内Cytochrome C表达减少,而细胞质内Cytochrome C表达增强。结论 CTX首先通过线粒体细胞色素C释放到细胞质内,进一步诱导效应性caspase-3,-9酶激活,可能是其诱导人肝癌细胞凋亡而产生抗肿瘤作用的机制之一。