组织块移植法建立人肺癌裸鼠移植瘤模型

肺癌对人类的健康构成了严重的威胁,人肺癌裸鼠移植瘤模型的建立对于肺癌的研究是一项重要的工具.建立肺癌移植瘤模型的方法主要有细胞培养移植法、组织块移植法和匀浆液移植法.组织块移植法建立的模型能最大限度地模拟人体内环境,是一种理想的模型.就组织块移植法建模的操作方法及当前研究进展作一综述.

肺癌脑转移瘤人源异种移植模型的构建及应用研究进展

肺癌脑转移瘤是中枢神经系统最为常见的继发性恶性肿瘤,目前共识的治疗方式是在安全范围内通过手术最大程度切除肿瘤组织,术后进行化学治疗以及局部或全身放射治疗,但其治疗效果仍不理想。人源异种移植瘤模型能够很好地保留患者原发肿瘤异质性、组织学特性和分子多样性,能够为研究新的治疗方法提供新思路及新的研究工具。本文就移植瘤模型的建立、模型在肺癌脑转移瘤治疗中的应用研究以及模型的应用前景和局限性进行综述。

MicroRNA-133b调节FGFR1-ERK1/2-SOX2信号通路对裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长的影响

目的探讨microRNA-133b(miR-133b)对裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长的抑制作用以及对成纤维细胞生长因子受体1-细胞外信号调节激酶1/2-性别决定区Y-box蛋白2信号通路(FGFR1-ERK1/2-SOX2)的影响。方法q RT-PCR检测人肺成纤维细胞、肺癌细胞株miR-133b表达。miR-133b过表达NCIH1975细胞。将NCI-H1975细胞分为对照组、mimic NC组、miR-133b mimic组、miR-133b mimic+pcDNA3.1组、miR-133b mimic+pcDNA3.1 FGFR1组。CCK-8法检测NCI-H1975细胞增殖抑制率,Transwell实验观察NCI-H1975细胞侵袭、迁移情况。复制裸鼠移植瘤模型并分组,将裸鼠分为对照组、mimic NC组、miR-133b mimic组、miR-133b mimic+AZD4547组,观察各组裸鼠肿瘤体积与重量,HE染色观察各组裸鼠肿瘤组织变化,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法观察裸鼠肿瘤组织Ki-67、Cyclin D1、VEGF-A的表达,Western blotting检测各组肿瘤组织FGFR1、p-ERK1/2/ERK1/2、SOX2蛋白相对表达量。结果与人肺成纤维细胞HLF-α比较,肺癌细胞株NCI-H1975、A427、NGE-1、A549中miR-133b mRNA相对表达量降低(P<0.05),其中以NCI-H1975细胞中miR-133b mRNA相对表达量最低。miR-133b mimic组miR-133b mRNA相对表达量较对照组和mimic NC组升高(P<0.05)。miR-133b可通过负调控FGFR1抑制肺癌NCIH1975细胞增殖和迁移。miR-133b mimic组移植瘤重量较对照组降低、体积缩小,miR-133b mimic+AZD4547组移植瘤重量较miR-133b mimic组降低、体积缩小(P<0.05)。miR-133b mimic组空泡样变性程度较对照组、mimic NC组减轻(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组空泡样变性程度较miR-133b mimic组减轻(P<0.05)。miR-133b mimic组肿瘤组织细胞凋亡率较对照组升高(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组肿瘤组织细胞凋亡率较miR-133b mimic组升高(P<0.05)。miR-133b mimic组VEGF-A、Cyclin D、Ki-67阳性细胞比例较对照组降低(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组VEGF-A、Cyclin D、Ki-67阳性细胞比例较miR-133b mimic组降低(P<0.05)。miR-133b mimic组FGFR1、p-ERK1/2/ERK1/2、SOX2蛋白相对表达量较对照组降低(P<0.05),miR-133b mimic+AZD4547组FGFR1、p-ERK1/2/ERK1/2、SOX2蛋白相对表达量较miR-133b mimic组降低(P<0.05)。结论miR-133b过表达可能通过抑制FGFR1-ERK1/2-SOX2轴,抑制裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长。

不同方法建立的人大细胞肺癌裸鼠移植瘤模型的生物学特点

目的比较三种常用的皮下移植瘤造模方法建立的人大细胞肺癌NCI-H460裸鼠移植瘤模型的不同生物学特点,为不同的研究寻找合适的造模方法提供实验依据。方法分别用NCI-H460细胞,NCI-H460移植瘤组织块和移植瘤匀浆液对于BALB/c-nu/nu裸鼠建立皮下移植瘤模型,运用一般生物学指标观察三种移植瘤的成瘤率、瘤重、倍增时间和组织形态;采用全自动生化分析仪检测其外周血中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血糖(G1u)、尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)等生化指标;利用血球分析仪检测白细胞总数(WBC)并进行分类,最后体外对其腹腔巨噬细胞吞噬活性和NK细胞活性进行了考察。结果本实验中细胞法和匀浆法的成瘤率及肿瘤生长速率显著高于埋块法且其生长更为均一,差异较小。接种5周后,与正常裸鼠比较,三组荷瘤小鼠血液中ALT、AST显著升高,BUN、CREA显著降低,埋块组的AST和BUN两项指标显著高于其他两荷瘤组。此外,接种2周后,荷瘤裸鼠的GLU显著低于正常裸鼠,匀浆液组的GLU降得最低。白细胞中,三种方法组荷瘤小鼠血液中LYM%、MN%、HGB均有降低,匀浆液组和细胞培养组的荷瘤小鼠血液中WBC、NEUT%、PLT显著高于埋块组。免疫细胞活性方面,两种细胞均呈现出正常细胞组>匀浆组>细胞组>埋块组的趋势。结论细胞培养法接种数量可控,肿瘤生长均匀,适合建立不同实验需求的移植瘤模型,组织块移植法适于建立中药抗肿瘤筛选的动物模型,而匀浆液移植法则不推荐使用。裸鼠的生理生化状态和免疫功能与肿瘤的生长有密切的关系。

人非小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型的建立

目的探讨手术切除的肺癌组织块移植于裸鼠皮下建立人肺癌裸鼠移植瘤模型的方法可操作性及移植瘤的生物学特性.方法将术中切除4例非小细胞肺癌标本无菌条件下移植于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况,记录生长曲线.通过常规病理学检查、免疫组化分析及荧光定量PCR分析,将成瘤的移植瘤与原肿瘤进行对比,观察其生物学特性变化.结果 4例肺癌标本中建模成功2例,成瘤率为50%.病理检查及免疫组化分析结果提示移植瘤生物学特性与原肿瘤保持较高的相似性,荧光定量PCR检测结果提示移植瘤所表达的基因为人源基因.基因及蛋白表达证实建模成功,移植瘤为人源性肿瘤.结论组织块法皮下移植建立人非小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型是一种高效可行的方法,成瘤率高,所建模型能最大程度模拟原肿瘤的生物学特性.

肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立

目的探讨肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立方法,为克服肿瘤多药耐药新药的筛选提供体内研究的模型。为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法使用顺铂诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验检测细胞对顺铂的敏感性;皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;绘制移植瘤生长曲线,观察其增值特性。结果经过8个月的诱导建立了肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂约耐药8倍,并且A549/DDP耐药细胞建立的裸鼠移植瘤仍然保持对顺铂的耐药性;生长曲线结果显示A549/DDP细胞裸鼠移植瘤的增殖速度与A549细胞之间没有显著性差异。结论成功建立了肺癌A549/DDP耐药细胞裸鼠移植瘤模型,可为肺癌耐药的研究提供较理想的动物模型。

人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的 建立成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。方法 初代移植后 ,通过皮下埋块法进行裸鼠体内连续传代移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、染色体核型进行观察和检测。结果 通过连续传代移植建立了成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。移植瘤的组织形态和超微结构特点符合NCI_H4 4 6细胞特点 。

裸鼠颅内小细胞肺癌移植瘤模型的建立

目的建立裸鼠颅内小细胞肺癌（SCLC）移植瘤模型,为今后开展SCLC相关实验研究提供动物模型。方法培养LTEP/P人SCLC细胞株,传代3~4代,收集细胞,并制成1×108/ml的细胞悬液共1 ml。14只裸鼠麻醉后,用牙科钻在裸鼠颅脑钻一小孔,然后用10μl微量注射器抽取3μl肿瘤细胞悬液,利用立体定位仪缓慢接种于BALB/C SPF裸鼠颅内,放置入SPF环境内继续饲养,观察7 d后脱颈处死,取完整脑组织,行病理检测。结果所有裸鼠在术后1 h内逐渐苏醒并恢复活动和饮食,第5天出现活动、饮食减少,第7天出现神软、萎靡、反应迟钝等症状,并死亡1只。病理检测证实所有裸鼠脑组织内可见SCLC细胞。结论通过立体定位仪向裸鼠颅内接种SCLC细胞能建立稳定可靠的裸鼠颅内SCLC移植瘤模型。

肺癌A549裸鼠移植瘤模型高效建立方法的应用

目的:探讨裸鼠高效移植瘤模型的建立方法,为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法:肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下,出瘤后制备单细胞悬液和组织块分别接种和塞入皮下,观察初次培养细胞成瘤组、二次单细胞悬液成瘤组和二次组织块成瘤组的出瘤率和移植瘤的生长情况,PI单染流式细胞仪检测细胞周期的变化,细胞毒实验采用MTT法。结果:3组中二次组织块成瘤组的出瘤率显著高于另外两组,细胞增殖块,移植瘤的变异小;细胞周期分析显示二次组织块成瘤组的细胞S和G2/M期比例增高,细胞增殖指数显著高于另外两组;但细胞毒MTT的实验结果显示3组肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性差异无显著性(P>0.05)。结论:二次组织块成瘤可显著提高A549的成瘤率,且不影响肿瘤细胞对化疗药物的反应性,是一种高效的裸鼠移植瘤模型建立方法。

蛇葡萄素对人肺癌GLC-82裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 :为了进一步研究蛇葡萄素体内抗肿瘤作用 ,我们进行了人肺癌GLC 82裸小鼠移植瘤的抑瘤实验研究。方法 :人肺癌GLC 82细胞接种于裸鼠腋窝建立移植模型。荷瘤BALB/C裸鼠随机分成 6组 ,蛇葡萄素以 3个剂量腹腔给药。观察肿瘤体积、相对肿瘤体积、瘤重、相对肿瘤增殖率以及肿瘤生长曲线 ,以此评价蛇葡萄素的抗瘤作用。结果 :2 5 0mg/kg蛇葡萄素对裸鼠移植瘤的抑制率 ,二次实验结果分别为 35 5 % (P <0 0 1)和 37 1% (P<0 0 1) ,相对肿瘤增殖率则分别为 5 5 2 4 % (P <0 0 1)和 5 7 71% (P <0 0 5 )。结论 :蛇葡萄素对人肺癌GLC 82裸鼠移植瘤具有显著的抑制作用。

人卵巢癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性的实验应用研究

研究用１例人卵巢癌淋巴转移的癌组织直接移植于裸鼠皮下，建成一株人卵巢癌移植瘤动物模型，已传至５经２６代。移植成功率达１００％，平均裸带瘤存活中位数为１０２。肿瘤倍增时间为７．１７天。组织学和超微结构形态证实保持了原人肿瘤的特征，有淋巴结转移行为。人类肿瘤染色体特征。保留了分泌癌胚抗原的能力。具有Ｐ５３癌基因蛋白的异常表达。移植瘤细胞可在体外培养并传至５例。流式细胞仪及显微光光度计检测移植瘤。

人颅咽管瘤裸鼠皮下移植瘤模型的初步建立

目的初步建立人颅咽管瘤(CP)的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用胰蛋白酶消化法将新鲜颅咽管瘤组织进行原代细胞培养,然后将纯化的第3代颅咽管瘤细胞接种于到BALB/c裸小鼠背部皮下。观察接种成瘤后瘤组织生长情况和特点,明确肿瘤性质。结果 CP细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后8d可见有移植瘤形成,成瘤率为33.3%,病理切片显示肿瘤样鳞状上皮细胞团增生。结论利用颅咽管瘤细胞初步建立了人颅咽管瘤裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究颅咽管瘤的生长特性奠定了基础。

人成釉细胞瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用组织块直接贴壁法将新鲜成釉细胞瘤组织进行原代细胞培养,反复贴壁法和胰酶消化法使之纯化。然后将纯化的成釉细胞瘤细胞接种于裸鼠颈背部皮下。观察接种成瘤后瘤组织大体生长情况以及常规病理切片观察瘤细胞的侵袭生长情况。结果成釉细胞瘤细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后第23天见有移植瘤形成,成瘤率为25%。病理切片显示瘤细胞可向裸鼠肌间生长,保持了其侵袭性生长的特性。结论初步建立了人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究成釉细胞瘤的侵袭生长特性奠定了基础。

人U87-MG脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型的建立

目的应用不同数量U87-MG细胞接种裸鼠脑内,建立裸鼠脑胶质瘤模型,观察其生长特性。方法采用立体定向技术,分别将3.0×10^(10)·L^(-1)、4.0×10^(10)·L^(-1)、5.0×10^(10)·L^(-1)浓度的人脑胶质瘤细胞U87-MG单细胞悬液,接种于18只♂裸鼠的右侧尾状核区,每只接种体积为5μL,另取6只裸鼠作为对照,接种同体积Hanks液。观察不同接种量实验鼠的生存状态、成瘤情况及脏器转移灶、带瘤生存期,测量肿瘤的最大径,计算肿瘤体积,将获取的全脑标本制作病理切片,行HE染色和免疫组化检查。结果各接种量的实验组成瘤率均为100%,未见颅外转移病灶,3组裸鼠的平均生存时间分别为(46.50±3.27)d、(38.50±3.28)d、(30.67±3.51)d;病理学检查符合人脑胶质瘤细胞的形态学特征和免疫表型;免疫组化GFAP和S-100蛋白呈阳性表达。结论立体定向脑内定量注射U87-MG细胞制备的人脑胶质瘤裸鼠原位移植模型成瘤率高、颅内生长稳定、颅外远隔部位转移率低,与人脑胶质瘤病理学及形态学特征相似,能为研究胶质瘤的发生、发病机制、生物学特性以及探寻有效的治疗措施提供可靠的动物模型。

人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型的建立及耐药性检测

目的建立人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型,并检测其多药耐药性,为进行肿瘤多药耐药逆转剂的筛选和体内实验研究奠定基础。方法采用皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;观察裸鼠生长状况;移植瘤生长情况;进行瘤重及瘤体积比较;移植瘤P-gp耐药蛋白表达;原代培养细胞,检测移植瘤模型多药耐药性。结果人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤组织病理学检查为低分化腺癌,移植瘤组织原代细胞培养后,P-gp表达强阳性+++,具有多药耐药性,模型建立成功。结论成功建立了人胃癌SGC7901/VCR裸鼠多药耐药移植瘤模型,为胃癌耐药研究提供了较理想的动物模型。

口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移灶裸鼠移植瘤模型的建立

目的:建立口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移灶移植瘤原代模型,探讨建立模型的方法。方法:将口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移组织,通过组织块皮下接种法建立颈部淋巴结转移灶模型。观察其生长状况,对移植瘤、裸鼠肝、肾、肺及淋巴结行系列检查并与来源肿瘤组织进行比较。结果:成瘤率87.5%(7/8),移植瘤具有来源肿瘤组织类似的形态学特征,肝、肾、肺未见转移,腋下及腹股沟淋巴结反应性增生。结论:通过组织块皮下接种法,成功建立了口腔疣状癌伴灶性鳞癌颈淋巴结转移灶移植瘤原代模型。

黄芩苷对高致瘤HL-60细胞裸鼠移植瘤模型的体内抑瘤作用和机制探讨

本研究旨在探讨黄芩苷对高致瘤人白血病HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的体内抑瘤作用及其作用机制。制备高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为6组:阴性对照组(注射5%NaHCO3),黄芩苷25、50和100 mg/kg剂量组,联合用药组(黄芩苷50 mg/kg+VP16 2 mg/kg)和VP16 4 mg/kg阳性对照组,每组10只裸鼠。采用腹腔注射方式给药,14 d后每组处死5只裸鼠,对剥取的瘤块称重计算抑瘤率;通过电子显微镜观察瘤组织超微结构,病理组织学观察裸鼠各主要脏器结构改变,瘤块组织蛋白检测信号转导通路指标。观察裸鼠生存时间。结果表明,黄芩苷可抑制裸鼠HL-60细胞皮下移植瘤的生长,呈剂量依赖性。瘤组织病理组织学和透射电子显微镜检查结果显示,黄芩苷组和联合用药组的肿瘤坏死和细胞凋亡现象较阴性对照组多见。黄芩苷可能通过抑制Akt活性,下调p-Akt、mTOR和p-mTOR的表达来抑制裸鼠异种移植瘤的增长。联合用药组裸鼠中位生存时间明显长于阴性对照组(P<0.05)。结论:黄芩苷可抑制高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的生长,诱导瘤组织中HL-60细胞的凋亡,其机制之一可能与抑制Akt活性并下调PI3K/Akt/mTOR信号通路有关;黄芩苷与VP16联用可明显提高荷瘤裸鼠的中位生存期,具有协同抗高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的作用。

原代人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用组织块直接贴壁法将新鲜人结肠癌组织进行原代细胞培养,反复贴壁法和胰酶消化法使之纯化。纯化后的结肠癌细胞接种于裸鼠左侧腋处皮下。观察成瘤时间、肿瘤生长情况、移植肿瘤大小及裸鼠摄食、活动状况。实验结束后取移植瘤以HE染色和CEA及CK20免疫组化检验。结果本实验原代结肠癌细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后第8天见有移植瘤形成,成瘤率为80%。病理切片显示组织细胞排列成不规则腺体状,有核分裂相。CEA及CK20检验阳性。结论初步建立了人结肠癌的裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究结肠癌奠定了基础。

人肺癌组织免疫缺陷鼠移植瘤模型的建立

背景与目的:目前提倡对肿瘤实行靶向药物个性化治疗,建立不同通路异常肿瘤的动物模型成为必需。本研究探讨人非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型的建立及建模的适宜条件和方法。方法:选取BALB/c裸小鼠、SCID小鼠及NOD/scid小鼠各16只,采用套管针四点左边两块、右边一块式接种法,16例患者中每例患者的肿瘤组织标本分别接种于每个鼠种的一只。观察不同种免疫缺陷鼠移植瘤成瘤率、成瘤潜伏时间、肿瘤体积倍增时间、自然病亡率及左右两边接种点的成瘤率和头尾部成瘤点处死时大于1cm的比率,并鉴别移植瘤形态结构与来源组织的一致性及鉴定移植瘤是否为上皮来源。结果:总成瘤率为75%,其中4个病例只有SCID小鼠成瘤,2个病例只有BALB/c裸小鼠成瘤,NOD/scid小鼠无一例单独成瘤。不同种免疫缺陷鼠移植瘤成瘤率、成瘤潜伏时间和肿瘤体积倍增时间及左右两边接种点的成瘤率差异无统计学意义。SCID小鼠成瘤率最高,为56.25%;NOD/scid小鼠自然病亡率为25%,BALB/c裸小鼠、SCID小鼠在观察期内无一例病亡;处死时头部成瘤点大于1cm的比率(56.52%)与尾部成瘤点大于1cm的比率(25%)相比差异有统计学意义(P=0.037);所有移植瘤苏木精-伊红染色显示其形态结构均与来源组织一致,所有移植瘤角蛋白免疫组化均为阳性,显示移植瘤均为上皮来源。结论:四点两块套管针接种BALB/c裸小鼠和SCID小鼠各一只的方法能很好地建立非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型,头部移植瘤的生长速度明显快于尾部。