当归挥发油对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨当归挥发油对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及凋亡的作用。方法:MTT比色法检测当归挥发油对GLC-82细胞的细胞毒作用;流式细胞术检测GLC-82细胞凋亡;吖啶橙/溴化乙锭(AO/BE)双荧光染色法观察GLC-82细胞凋亡。结果:当归挥发油在浓度6.25~200μg/m L范围内对GLC-82细胞的增殖具有浓度依赖性抑制作用,对GLC-82细胞的IC_(50)为113.03μg/m L。流式细胞术检测结果表明,当归挥发油可诱导GLC-82细胞凋亡、坏死,且细胞凋亡、坏死率随药物浓度增高而升高。AO/BE双荧光染色法结果显示,用药组随着药物浓度的升高,细胞结构固缩加重,凋亡、坏死细胞增多。结论:当归挥发油具有诱导GLC-82细胞凋亡的作用。

蛇葡萄素钠联合卡铂对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨蛇葡萄素钠(AMP-Na)单用及其与卡铂(CBP)合用对人肺腺癌GLC-82细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定两药单用及合用对GLC-82细胞的体外杀伤活性;透射电子显微镜(TEM)观察GLC-82细胞超微结构的变化;流式细胞仪(FCM)检测GLC-82细胞凋亡和caspase-3的表达。结果对于GLC-82细胞,AMP-Na与CBP合用,CBP的IC50由(17.10±4.78)mg·L-1降低到<3.12 mg·L-1(P<0.01),表明Amp-Na对卡铂抑制GLC-82细胞增殖的作用具有协同效应(CDI<1)。TEM及FCM检测结果表明,单用AMP-Na及与卡铂合用均可诱导GLC-82细胞凋亡、坏死,两药合用后坏死率由(2.56±0.41)%升高到(71.83±5.43)%(P<0.01)。AMP-Na单用及与卡铂合用作用于GLC-82细胞48 h后,caspase-3的表达均明显增高。结论AMP-Na和CBP具有协同诱导GLC-82细胞凋亡的作用,机制可能与激活细胞内caspase-3介导的信号转导通路相关。

当归挥发油对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨当归挥发油对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及细胞周期的作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测当归挥发油对GLC-82细胞存活率的影响;倒置显微镜下观察细胞生长形态;流式细胞仪检测当归挥发油对GLC-82细胞周期的影响。结果:在6. 25～200μg/m L浓度范围内当归挥发油对GLC-82细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用,当归挥发油对GLC-82细胞的I C50为113. 03μg/mL;倒置显微镜下观察发现阴性组细胞具有GLC-82细胞典型的形态特征,多边形,成片生长,随着当归挥发油浓度的升高,细胞数量减少,散在生长,形态发生变化,逐渐皱缩;经当归挥发油处理后GLC-82细胞表现出明显的G2期周期阻滞。结论:当归挥发油可抑制GLC-82细胞生长,引起细胞周期G2期的阻滞。

三氧化二砷(As_2O_3)诱导人肺腺癌GLC-82细胞凋亡及分子机制的研究

目的： 探讨Ａｓ２ Ｏ３ 对人肺腺癌ＧＬＣ８２ 细胞系抑制生长、诱导凋亡的生物学效应及作用机制。方法：通过ＭＴＴ 还原法检测Ａｓ２ Ｏ３ 对该细胞系生长的影响；用光学显微镜、流式细胞仪、ＤＮＡ 凝胶电泳和细胞凋亡原位检测（ＴＵＮＥＬ） 研究Ａｓ２Ｏ３ 诱导细胞凋亡的情况；用ＲＴＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 或Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析Ａｓ２ Ｏ３ 对ｃｍｙｃ、ｐ５３、ｐ１６ 和ｂｃｌＸ 等基因表达的影响。结果：Ａｓ２ Ｏ３ 能抑制ＧＬＣ８２ 细胞的生长。Ａｓ２ Ｏ３ 处理ＧＬＣ８２ 细胞后，光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞，细胞周期的Ｇ１ 期前有低于２ 倍体的凋亡峰，ＤＮＡ 凝胶电泳显示出典型的凋亡特征：ＤＮＡ 有规律断裂形成的梯状图谱，蛋白水平的检测表明Ａｓ２ Ｏ３ 可使细胞ｃｍｙｃ 基因表达下降，ｐ１６ 和ｐ５３ 表达升高。结论：Ａｓ２ Ｏ３ 能显著抑制ＧＬＣ８２ 细胞生长、诱导细胞凋亡，并主要通过调节ｃｍｙｃ，ｐ１６ 和ｐ５３ 等基因的表达来实现。

人肺腺癌GLC-82细胞热休克蛋白70多肽复合物的提取及对细胞毒性T淋巴细胞作用的实验研究

摘 要:目的 探讨GLC -82细胞中HAC 70的提纯方法及其诱导的CTL表型变化和CTL及其上清液抗瘤效应。方法 GLC- 82 细胞热休克诱导 HSP 表达,离子交换层析提纯 HAC 70, SDS -PAGE 和ELISA法进行定量和定性检测,活化PBMC,T淋巴细胞亚群试剂盒测定 HAC- 70 诱导 CTL细胞表型变化情况,MTT法测定CTL及上清液杀瘤活性。结果 热休克处理能使 GLC- 82 细胞 HAC- 70 表达增加,离子交换层析可提纯 GLC-82 细胞中 HAC- 70。经热休克处理的 HAC -70 诱导 T淋巴细胞,其CD3+、CD^(4+)、CD^(8+)细胞与对照组的CTL细胞阳性率明显提高,其诱导的 CTL杀瘤活性显著提高,且其CTL培养上清液肿瘤杀伤活性最高。结论 离子交换层析可提纯 GLC -82 的 HAC -70;HAC- 70 可使CTL细胞CD^(4+)/CD^(8+)倒置,活化的CTL及上清液有较高的杀瘤活性,为肺癌肿瘤疫苗的制备和临床应用提供了实验依据。

Ad-p53与Ad-p16联合对人肺腺癌GLC-82细胞作用的研究

目的：探讨腺病毒介导的ｐ５３与ｐ１６基因联合对人肺腺癌ＧＬＣ－８２疗效提高的可能性。方法：将分别携有ｐ５３基因、ｐ１６基因重组腺病毒（Ａｄ－ｐ５３与 Ａｄ－ｐ１６）联合使用，通过细胞生长和存活实验、克隆形成实验、流式细胞分析、ＴＵＮＥＬ检测、ＲＴ－ＰＣＲ分析、免疫组织化学实验，观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用。结果：在总感染强度相同的前提下，Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合导入ＧＬＣ－８２细胞，对细胞生长存活及克隆形成能力的抑制、以及所造成的凋亡效果比施用单种基因的效果强，表明ｐ５３基因与ｐ１６基因在体外疗效上互为协同。结论：Ａｄ－ｐ５３与Ａｄ－ｐ１６联合，可以提高对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的疗效。

蛇葡萄素钠协同卡铂体外诱导人肺腺癌GLC-82细胞凋亡研究

目的:考察蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用对人肺腺癌GLC-82细胞增值的抑制作用,初步探讨蛇葡萄素钠抑瘤作用机制。方法:应用MTT法考察蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用对人肺腺癌GLC-82细胞的细胞毒作用;使用流式细胞仪检测凋亡相关基因Bax以及Bcl-2表达。结果:MTT实验结果表明,蛇葡萄素钠单独应用及与卡铂联合应用对GLC-82细胞的增殖均具有浓度依赖性的抑制作用;流式细胞仪检测结果表明,蛇葡萄素钠(100、50、25μg/ml)单用组及与卡铂25μg/ml联合用药组作用于GLC-82细胞48 h后,Bax表达上调,且有浓度依赖性;AMP-Na 50μg/ml单独用药组、卡铂25μg/ml单独用药组以及AMP-Na(50、25、12.5μg/ml)与卡铂25μg/ml联合用药组作用于GLC-82细胞48 h后,Bcl-2蛋白的表达下调,但无浓度依赖性。AMP-Na各剂量组(100、50、25、12.5μg/ml)单用组及AMP-Na各剂量组与卡铂25μg/ml联合用药Bax/Bcl-2的比率增高,且有浓度依赖性。结论:蛇葡萄素钠单用对GLC-82细胞的增殖具有一定的抑制作用,与卡铂合用,对GLC-82细胞增殖具有协同抑制效应;蛇葡萄素钠可能是通过下调Bcl-2并上调Bax从而促进肿瘤细胞凋亡。

蛇葡萄素钠协同卡铂体外抑制人肺腺癌GLC-82细胞增值的作用

目的：考察蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用对人肺腺癌GLC-82细胞增值的抑制作用,初步探讨蛇葡萄素钠抑瘤作用机制。方法：应用MTT法考察蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用对人肺腺癌GLC-82细胞的细胞毒作用;使用流式细胞仪检测凋亡相关基因Caspase-3的表达。结果：MTT实验结果表明,蛇葡萄素钠在浓度为12.5~200μg/ml的剂量范围内对GLC-82细胞的增殖有浓度依赖性的抑制作用;卡铂在浓度为3.13~100μg/ml的剂量范围内对GLC-82细胞的增值有浓度依赖性的抑制作用;25、50μg/ml的蛇葡萄素钠对卡铂25μg/ml抑制GLC-82细胞增殖的作用具有协同效应;流式细胞仪检测结果表明,12.5~50μg/ml的蛇葡萄素钠与卡铂25μg/ml联合用药组作用于GLC-82细胞12 h后,Caspase-3表达上调,且有浓度依赖性。结论：蛇葡萄素钠单用对GLC-82细胞的增殖具有一定的抑制作用,与卡铂合用,对GLC-82细胞增殖具有协同抑制效应;蛇葡萄素钠诱导细胞凋亡的机制之一可能是通过激活细胞内的Caspase-3,从而促进凋亡的发生。

蛇葡萄素钠协同卡铂对人肺腺癌GLC-82细胞增殖的抑制作用

目的：研究蛇葡萄素钠（AMP-Na）协同卡铂对人肺腺癌GLC-82细胞增殖的抑制作用。方法：以25、50、100μg/ml AMP-Na,3.12、6.25、12.5、25、50μg/ml卡铂,25、50、100μg/ml AMP-Na＋3.12、6.25、12.5、25、50μg/ml卡铂作用于GLC-82细胞48h,采用MTT法测定细胞增殖抑制率。以25μg/ml卡铂,12.5、25、50、100μg/ml AMP-Na,12.5、25、50、100μg/ml AMP-Na＋25μg/ml卡铂作用干细胞48 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：25~100μg/ml AMP-Na对GLC-82细胞的增殖具有抑制作用,且呈浓度依赖性。25μg/ml卡铂与AMP-Na（12.5、25、50、100μg/ml）对GLC-82细胞增殖的抑制作用较单用卡铂增强。结论：AMP-Na单用对GLC-82细胞的增殖具有一定的抑制作用;与卡铂合用,对GLC-82细胞增殖具有协同抑制效应。

抑癌基因p53与癌基因mdm2在肺腺癌细胞系GLC-82中的相互作用

目的：探讨抑癌基因ｐ５３和癌基因ｍｄｍ２在肺腺癌细胞系ＧＬＣ８２中的相互关系和作用．方法：采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法，用含有野生型ｐ５３基因和ｍｄｍ２基因的ＰＤＯＲｎｅｏ逆转录病毒载体分别或共转染ＧＬＣ－８２细胞．结果：转染野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ８２细胞生长；抑制ＧＬＣ８２细胞ＤＮＡ合成；软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤性减慢，而ｍｄｍ２基因的转染可拮抗野生型ｐ５３的功能．结论：将ｍｄｍ２表达载体转染含有野生型ｐ５３基因的ＧＬＣ８２细胞后，ｍｄｍ２可部分地解除野生型ｐ５３对ＧＬＣ８２细胞生长的抑制作用．

RAB5A基因表达改变对人肺腺癌细胞系GLC-82和SPC-a1的分化和侵袭特性影响

为探讨RAB5A基因对两种人肺腺癌细胞系GLC 82和SPC al分化及侵袭特性的影响 ,利用细胞转染技术将构建的RAB5A反义RNA重组质粒 (pcDNA3 AntiRAB5A)和RAB5A正义真核表达载体分别转染入低分化人肺腺癌细胞系GLC 82和低转移人肺腺癌细胞系SPC al中 ,在稳定筛选后 ,通过裸鼠体内实验和体外人工基底膜侵袭和细胞趋化运动实验 ,观察转染后细胞分化和转移特性的改变。观察转染前后细胞 ,发现转染后GLC 82细胞体外侵袭重组基底膜能力及趋化运动能力降低 (t检验P <0 .0 2 ) ;裸鼠体内成瘤实验 ,瘤块切片病理观察转染后GLC 82细胞出现腺腔样及基底模样结构 ,分化程度增高。转染后SPC al细胞体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力均增强 (t检验P <0 .0 2 )。RAB5A基因通过影响细胞的体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力等对GLC 82和SPC al细胞的侵袭转移表型形成及GLC 82细胞的分化性发挥重要作用。

琼玉膏对肺腺癌细胞珠GLC-82的细胞周期及凋亡的影响

目的 :观察琼玉膏对顺氨氯铂在肺腺癌细胞珠GLC 82培养中的细胞增殖抑制的影响。方法 :用血清药理学 ,流式细胞等方法技术研究古方琼玉膏对肺腺癌细胞株GLC 82的细胞周期及凋亡的影响。结果 :流式细胞仪的分析结果表明 ,琼玉膏可明显加强化疗药物顺氨氯铂 (DDP)延长癌细胞G1期 ,降低S期的作用 ;并且琼玉膏还可明显加强顺氨氯铂诱发癌细胞的凋亡。结论

琼玉膏加强顺氨氯铂对肺腺癌细胞株GLC-82的体外抑制作用

目的:观察琼玉膏对顺氨氯铂抑制肺腺癌细胞株GLC-82增殖的影响。方法:使用血清药理学分别观察空白对照组(生理盐水)、化疗组(顺氨氯铂)及联合组(顺氨氯铂加琼玉膏)细胞形态学的变化;使用活细胞计数方法记录各组癌细胞6日的生长情况并绘制其生长曲线;使用流式细胞等方法分析各组癌细胞株GLC-82的凋亡情况。结果:对照组癌细胞生长良好,化疗组癌细胞数基本不增长,联合组活癌细胞数则下降。流式细胞仪的分析结果表明,琼玉膏可明显加强化疗药物顺氨氯铂(DDP)诱发癌细胞的凋亡。结论:琼玉膏有加强化疗抑制癌细胞分裂及诱发癌细胞凋亡的作用。

ndr2基因在肺腺癌细胞GLC-82中的诱导表达

目的 构建蜕皮素诱导的抑癌基因 ndr2哺乳动物真核表达载体 (p IND- ndr2 ) ,转染肺腺癌细胞 GL C- 82 ,观察ndr2基因表达 ,为进一步研究 ndr2的生物学功能打下基础 .方法 以 RT- PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌 GL C- 82细胞 ndr2的表达高低 . PCR方法扩增 ndr2 ,以 Bam HI+Eco RI双酶切连接入 p U C19载体中 ,测序正确后 ,插入到蜕皮素诱导的真核表达载体 p IND中 .连有 ndr2基因的载体(p IND- ndr2 )用脂质体方法转染到培养的肺腺癌细胞 GL C-82中 .经 G4 18和 zeocin双抗生素筛选后 ,挑取单克隆进行培养 ,用蜕皮素诱导 ndr2表达 ,用 RT- PCR,western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株 .结果 PCR的方法扩增获得大小约 12 0 0 bp的片段 ,连接入预先插入 HA- tag的 p UC19载体的 ndr2基因经 H ind +Eco RI酶切后 ,构建到真核表达载体 p IND中 ,酶切鉴定后证明连接片段正确 .通过双载体转染和双抗生素筛选后 ,培养的细胞经诱导后检测到实验组 ndr2的高表达 ,而对照组和未诱导的实验组 ndr2表达均较低 .结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌 GL C-82细胞 ,建立了

肺腺癌患者胸水肿瘤细胞PD-L1/TTF-1表达及应用分析

目的探讨肺腺癌患者胸水肿瘤细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)/甲状腺转录因子1(TTF-1)、PD-L1免疫组化染色的表达及与组织标本PD-L1表达一致性及其应用研究。方法选取2021年1月至2023年4月间首都医科大学附属北京朝阳医院收治的符合入组条件的50例肺腺癌患者为研究对象,比较同一病例组织标本中肿瘤细胞的PD-L1表达和胸水细胞蜡块中肿瘤细胞的PD-L1、PD-L1/TTF-1表达情况,评估它们之间表达的一致性。结果50例肺腺癌组织标本PD-L1的表达与患者性别、年龄、标本类型、病灶性质、标本来源和EGFR突变对比差异无统计学意义(P>0.05);胸水细胞蜡块中肿瘤细胞PD-L1/TTF-1免疫组化双染的表达与组织标本PD-L1表达的一致性较好(κ=0.846,P<0.05),明显高于PD-L1免疫组化单染(κ=0.754,P<0.05),与手术或活检切除标本一致性较好(κ=0.90,P<0.05),高于胸腔镜或穿刺小标本(κ=0.82,P<0.05),与原发病灶标本的一致性适中(κ=0.689,P<0.05),与转移病灶标本的一致性较好(κ=0.779,P<0.05)。结论胸水细胞学标本采用PD-L1/TTF-1免疫组化双染与组织标本PD-L1表达一致性较高,细胞蜡块PD-L1/TTF-1双染可在组织不易获取时作为一种有益补充,供临床制定免疫治疗方案参考。

区分肺腺癌和肺鳞状细胞癌的潜在基因分析

目的对非小细胞肺癌(NSCLC)潜在基因进行分析,寻找区分肺腺癌(LUAD)和肺鳞状细胞癌(LUSC)的相关基因,探索NSCLC诊断与治疗的更有效方法。方法利用3个基因表达综合(GEO)数据库(GSE4882、GSE7339和GSE40275)分析LUAD和LUSC组织样本中的差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体(GO)富集分析并构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络来寻找关键枢纽基因。最后在临床样本中验证关键枢纽基因的差异表达。结果在GSE4882、GSE7339和GSE40275数据集中发现22个LUAD和LUSC的DEGs,通过构建PPI网络发现了6个关键枢纽基因(KRT18、RAN、NME1、NME2、MIF和CFB),进一步在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中分析枢纽基因表达与生存之间的关系,发现KRT18可能是区分LUAD和LUSC的潜在基因,同时构建了KRT18基因突变与LUAD和LUSC患者预后的风险预测模型。最后采用新乡医学院第一附属医院临床组织样本对KRT18表达进行验证。结论KRT18可能是区分LUAD和LUSC潜在基因。

莫诺苯宗对肺腺癌细胞自噬和凋亡的分子机制研究

目的:探究莫诺苯宗和自然杀伤细胞激活受体基因(KLRC3)对肺腺癌(LUAD)细胞凋亡和自噬的影响,为LUAD的治疗提供理论基础。方法:分别使用不同浓度莫诺苯宗处理LUAD细胞,并采用CCK-8法检测莫诺苯宗对LUAD细胞活力的影响;随后,使用80μmol/L的莫诺苯宗、50 nmol/L的KLRC3干扰质粒(si-KLRC3)、和100 nmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)1.5μg/ml KLRC3过表达载体(pcDNA-KLRC3)处理细胞后采用流式细胞术和Western blotting检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白的表达量。结果:莫诺苯宗浓度大于20μmol/L时可有效减弱LUAD细胞活力,且以剂量依赖性地促进了LUAD细胞的凋亡和自噬(均P<0.05)。KLRC3在LUAD细胞中低表达,干扰KLRC3减弱了莫诺苯宗对LUAD细胞自噬和凋亡的促进作用,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。此外,过表达KLRC3也促进了LUAD细胞的凋亡和自噬,而KLRC3和莫诺苯宗对LUAD细胞凋亡和自噬的促进作用均可被3-MA所抵消,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:莫诺苯宗可能通过促进KLRC3的表达诱导自噬进而促进LUAD细胞的凋亡。

反义P^(53)和mdm_2基因对肺腺癌细胞GLC-82超微结构的影响

目的：研究反斗P53和mdm2基因对肺腺癌细胞的抑制作用．方法：用透射电饨（TEM）观察经转染PDOR－FP53和PDOR－mdm2的GLC－82细胞超微结构变化．结果：转染PDOR－FP53／mdm2的GLC－82细胞出现部分分化现象，胞浆中有明显的空泡及线粒体肿胀，转架空载体和GLC－82亲本超微结构无此变化．结论：反义P53和mdm2基因对GLC—82细胞恶性表型有逆转和抑制作用．

程序性细胞死亡蛋白-1抑制剂联合化疗治疗晚期肺腺癌的疗效

目的探究程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death receptor 1,PD-1)抑制剂联合化疗治疗晚期肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)的临床疗效。方法回顾性分析98例晚期LUAD患者的临床资料,随机从予以化疗治疗(培美曲赛联合顺铂)的患者中抽取51例纳入对照组,从接受PD-1抑制剂(卡瑞利珠单抗)联合培美曲赛和顺铂治疗的患者中抽取47例纳入观察组,将2组患者按照倾向性匹配法进行匹配。记录2组患者的近期和远期临床疗效;比较2组治疗前及治疗后6个月时的肿瘤标志物[血清癌胚抗原(serum carcinoembryonic antigen,CEA)、组织多肽特异性抗原(tissue polypeptide specific antigen,TPS)、细胞角蛋白19片段抗原(cytokeratin 19 fragment antigen,CY-FRA21-1)]水平、免疫功能指标、肺功能差异;记录治疗期间2组患者不良反应的发生情况。结果治疗6个月后,2组疾病控制率比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组的客观缓解率显著高于对照组(P<0.05);随访2年,观察组的生存率、无进展生存期、总生存时间均显著长于对照组(P<0.05);2组患者血清肿瘤标志物水平均显著降低,且观察组均低于对照组(P<0.05);2组的免疫功能指标、肺功能指标水平均显著升高,且观察组均高于对照组(P<0.05);2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于晚期LUAD患者,进行PD-1抑制剂联合化疗治疗能够获得更高的近远期临床疗效,且安全性较好。