大麻素受体2激动剂对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖和分化的影响及机制

目的探讨大麻素受体2(CB2)激动剂JWH133对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖、分化的影响及机制。方法取对数生长期HLF1细胞株,采用细胞计数试剂-8(CCK8)法检测不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00及20.00μmol/L)JWH133及CB2(0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L)拮抗剂AM630对HLF1的增殖能力影响;取对数生长期HLF1细胞分为正常(N)组、5μg/L转化生长因子β1(TGF-β1)组(即0μmol/L JWH133)、10.00μmol/L JWH133(J10)组及J10+5.0μmol/L AM630(AM630)组,培养48 h,采用Western blot和逆转录-聚合酶链反应PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中胶原蛋白1α1(Col1α1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化-AKT(p-AKT)蛋白及Col1α1、α-SMA mRNA,采用细胞免疫荧光检测各组细胞中α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞百分比。结果随着JWH133浓度的增大,HLF1细胞的吸光度(OD)值逐渐降低,0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L AM630组HLF1存活率均在1附近(P>0.05);J10组HLF1细胞中Col1α1、α-SMA蛋白及p-AKT表达均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞Col1α1、α-SMA mRNA均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞占总细胞比值均较TGF-β1组减少(P<0.05),J10+AM630组则较J10组增多(P<0.05)。结论CB2受体激动剂JWH133可抑制HLF1细胞的增殖及分化,其机制可能与下调PI3K-AKT通路有关。

COX-2基因对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞生长及Notch信号通路的影响及其作用机制

目的探讨抑制环氧合酶-2(COX-2)基因表达对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系MRC-5活力、胶原合成和转化及Notch信号通路的影响。方法将MRC-5细胞分为对照组、TGF-β1组、NC组和COX-2-siRNA组,各组细胞处理48 h,Western blotting检测COX-2、胶原合成相关的COL-Ⅰ和COL-Ⅲ、 EMT标志物α-SMA及Notch信号通路受体Notch1及配体Jagged1的蛋白表达;CCK8法检测各组细胞活力。结果 TGF-β1组COX-2的表达显著高于对照组,COX-2-siRNA组COX-2的表达显著低于TGF-β1组(P<0.05),NC组COX-2的表达与TGF-β1组差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,TGF-β1组细胞活力及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、Notch1和Jagged1的蛋白表达均显著升高(P<0.05),与TGF-β1组比较,COX-2-siRNA组细胞活力及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、Notch1和Jagged1的蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论抑制COX-2基因表达中可能通过降低MRC-5细胞活力、抑制细胞胶原合成和转化,并下调Notch信号通路,从而对肺纤维化起保护作用。

肺癌H460细胞与胚肺成纤维细胞相互作用对基质金属蛋白酶-2的表达影响

目的:研究肺癌H460细胞和胚肺成纤维细胞相互作用对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法:在单层平面培养条件下,H460细胞和胚肺成纤维细胞条件培养基或胚肺成纤维细胞和H460细胞条件培养基共同培养,胚肺成纤维细胞分别按1∶1,1∶2,1∶4,1∶8与H460细胞共同培养.三维胶原立体培养条件下,H460细胞和胚肺成纤维细胞共同培养,72 h后明胶酶谱法测定培养基中MMP-2的表达.结果:胚肺成纤维细胞条件培养基不能促进H460细胞MMP-2酶原和活化酶的表达,但H460细胞条件培养基能促进胚肺成纤维细胞MMP-2酶原和活化酶的表达.胚肺成纤维细胞分别按1∶1,1∶2,1∶8与肺癌H460细胞时共同培养时,MMP-2酶原和活化酶的表达均增强;按1∶4与肺癌H460细胞共同培养时MMP-2酶原表达有所增加,但活化酶未见改变.三维胶原立体H460细胞和胚肺成纤维细胞共同培养时MMP-2酶原和活化酶的表达均增强且高于单层平面培养.结论:肺癌H460细胞与胚肺成纤维细胞相互作用能通过上调MMP-2的表达和活化影响肺癌侵袭和转移.

发酵黄芪对人胚肺二倍体成纤维细胞增殖及衰老相关蛋白表达的影响

目的探讨发酵黄芪对人胚肺二倍体成纤维细胞增殖及衰老相关蛋白表达的影响。方法体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(HDF),并根据代龄和加药情况分为青年组(30代前的HDF细胞),模型组(40代后的HDF细胞),对照组(用10%正常血清处理的40代后的HDF细胞),实验组(用10%发酵黄芪干预血清处理的40代后HDF细胞)。培养至40代时开始干预,光学倒置显微镜观察各组HDF细胞形态;采用活细胞计数(CCK-8)法检测各组HDF细胞增殖情况;采用分光光度法检测各组HDF细胞β-半乳糖苷酶(β-gal)活性;采用蛋白免疫印迹(Wb)法检测各组HDF细胞p16、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的蛋白表达。结果与青年组比较,模型组、对照组及实验组HDF细胞增殖能力及CDK4蛋白相对表达量均显著降低,且实验组高于模型组和对照组(P<0.05);HDF细胞β-gal活性及p16、CyclinD1蛋白相对表达量均显著升高,且实验组低于模型组和对照组(P<0.05),模型组与对照组间差异无显著性(P>0.05)。结论发酵黄芪可促进HDF细胞增殖,降低β-gal活性,同时抑制衰老相关蛋白的表达,进而发挥抗细胞衰老的作用。

槲皮素抑制人胚肺成纤维细胞ERK1/2的激活和PDGF的表达

目的探讨槲皮素对人胚肺成纤维细胞(HELF)表达血小板源性生长因子(PDGF)和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的调节作用。方法以支气管肺泡灌洗法收集硅肺患者肺泡巨噬细胞(AM),在体外用含有SiO2(50μg/mL)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养18 h,收集AM上清液,加入不同浓度槲皮素。用组织贴块法获取培养HELF,将HELF分为5组:空白对照组、AM组、SiO2联合AM处理组、槲皮素(10、20、40)μmol/L组。WST-1法检测HELF增殖情况,Western blot法检测HELF中PDGF的表达,免疫细胞化学法检测HELF中p-ERK1/2的表达。结果与SiO2联合AM处理组、AM组相比,各浓度槲皮素组都能抑制HELF增殖,且随浓度增大抑制作用增强,差异有统计学意义(P<0.01)。各种浓度槲皮素均能降低HELF中PDGF的表达、减少HELF中p-ERK1/2的量,呈现剂量-效应关系,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论槲皮素可以抑制人胚肺成纤维细胞PDGF表达和ERK1/2的激活。

淫羊藿苷对人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的干预作用研究

目的观察淫羊藿苷对人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5)衰老的干预作用与机制,为明确淫羊藿苷作为有效干预衰老的候选中药单体提供实验依据。方法 MRC-5进行体外培养,利用淫羊藿苷进行干预,观察细胞的传代次数;利用β-半乳糖苷酶染色观察衰老细胞阳性率;MTT法检测细胞活力;分别使用单细胞凝胶电泳和流式细胞仪检测H2O2诱导细胞DNA损伤和凋亡变化。结果淫羊藿苷能够延缓MRC-5细胞的复制性衰老,促进细胞增殖,减轻H2O2诱导的细胞DNA损伤,促进受损细胞的凋亡。结论淫羊藿苷能够延缓二倍体细胞的复制性衰老,这可能与其能够减轻细胞DNA损伤有关。

敲减HMGA2基因抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞生长及胶原合成

目的:探讨敲减高迁移率族蛋白A2( HMGA2 )基因表达对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞活力、凋亡、胶原合成和氧化应激的影响。方法:实验分为空白组、TGF-β1组、阴性转染对照组和HMGA2 siRNA(si-HMGA2)组。Western blot 检测HMGA2、AKT和p-AKT蛋白水平;MTT法及流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率;RT-qPCR检测Ⅰ型胶原蛋白(COL -Ⅰ)和COL-Ⅲ的mRNA表达;DCFH-DA探针检测细胞活性氧簇(ROS)的含量。结果:与空白组比较,TGF-β1组HMGA2和p-AKT的蛋白水平、细胞活力及COL -Ⅰ和COL-Ⅲ的mRNA表达均明显升高,细胞凋亡率及ROS水平则明显降低( P <0.05);与TGF-β1组比较,si-HMGA2组HMGA2和p-AKT的蛋白水平、细胞活力及COL -Ⅰ和COL-Ⅲ的mRNA表达均明显降低,细胞凋亡率及ROS水平则明显升高( P <0.05)。结论:敲减HMGA2 基因可抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞生长和胶原合成,促进细胞凋亡及ROS产生,其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。

烹调油烟挥发性有机物对人胚肺二倍体成纤维细胞活性氧水平的影响

目的:研究烹调油烟挥发性有机物(COF VOCs)对人胚肺二倍体成纤维细胞(HELF)活性氧(ROS)水平的影响。方法:用活性炭采集烹调油烟挥发性有机物,对HELF进行染毒,采用MTT试验测得半数抑制浓度(IC50),设计剂量和暴露时间,设立添加和不添加维生素C组,以2',7'-二氯双氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)和双氢罗丹明123(DHR123)进行标记,通过流式细胞术检测细胞ROS水平。结果:COFVOCs刺激HELF12、24、48h的IC50分别是104.9、111.9和127.2μg/mL;HELF胞质内ROS平均荧光强度随COFVOCs剂量增加而增高;线粒体内ROS24、48h暴露于0.8、4μg/mL剂量与阴性对照组相比有统计学差异;维生素C预处理后,ROS平均荧光强度较未预处理时均有所降低,100μg/mL剂量组前后差异有统计学意义。结论:COFVOCs可引起HELF内ROS水平升高,维生素C对细胞的ROS升高有一定的抑制作用。

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老作用研究——Ⅱ.超微形态研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,在用扫描和透射电镜观察细胞衰老过程中超微结构变化的同时,动态观察黄芪抗细胞衰老效应。结果表明,体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞成活至52代,而含0.2%黄芪制取液的培养基使细胞成活至77代。扫描电镜下可见细胞随增龄而由扁平长梭形变为圆球形,伪足、微绒毛递增,细胞胞体变小,细胞凹陷增多且逐步加深。透射电镜显示细胞增龄变化主要为细胞核逐渐变小,核进行性凹陷加深,核膜从部分融合到全部崩解;异染色质渐增,而常染色质递减;核仁变小且疏松;线粒体减少,嵴少,基质凝聚,肿胀,空泡化;粗面内质网减少,脱粒,游离核糖核蛋白体增多;高尔基复合体减少,其囊泡排列紊乱且肿胀;溶酶体递减;脂褐质递增.黄芪组细胞衰老过程中细胞器的变化与上述非黄芪组细胞的衰老变化规律基本相同;但其改变程度显然较轻,变化速率相对缓慢.特别是黄芪组细胞之高尔基复合体、中心体特别发达,虽细胞已衰老而它们却不甚衰老.研究证明黄芪具抗衰延寿的良好效应,以其做为抗衰老延寿命的药物值得高度重视和大力开发.

胚肺成纤维细胞对肺癌细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的:研究体外胚肺成纤维细胞对肺癌H460细胞增殖及MMP-2的影响。方法:在单层平面培养条件下,H460细胞和与胚肺成纤维细胞条件培养基共同培养;单层平面及三维立体培养条件下,H460细胞和胚肺成纤维细胞共同培养,MTT或明胶酶谱法测定H460细胞的增殖活力及MMP-2的表达。结果:胚肺成纤维细胞条件培养基不能促进肺癌H460细胞的增殖和MMP-2的表达。胚肺成纤维细胞与肺癌H460细胞共同培养时出现了MMP-2的表达明显增强。结论:胚肺成纤维细胞能通过促进H460细胞MMP-2的表达影响肺癌的侵袭和转移。

海藻多糖对H2O2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5氧化损伤的影响及其机制

目的探讨海藻多糖对H_2O_2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5氧化损伤的影响及机制。方法将体外培养的人胚肺成纤维细胞MRC-5随机分为空白组、H_2O_2组、海藻多糖组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组。空白组正常培养,H_2O_2组给予H_2O_2处理,海藻多糖组给予海藻多糖处理,海藻多糖+H_2O_2组先给予海藻多糖干预1 h、再给予H_2O_2处理,H_2O_2+海藻多糖组先给予H_2O_2干预1 h、再给予海藻多糖处理。各组H_2O_2浓度均为600μmol/L,海藻多糖浓度均为0.312 5 mg/m L。各组均于干预0、24、48、72 h时采用MTT法检测细胞增殖抑制率;处理24 h时检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)表达,采用免疫荧光法检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达,采用RT-PCR法检测Nrf2、Kelch样ECH联合蛋白1(Keap1)、NADP(H)醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素氧合酶1(HO-1)、CGLC mRNA表达。结果培养24、48、72 h时,H_2O_2组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组细胞增殖抑制率均高于空白组及海藻多糖组,海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组均低于H_2O_2组,组间比较P均<0.05。与空白组及海藻多糖组比较,H_2O_2组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组MDA、ROS表达增加,SOD表达降低;与H_2O_2组比较,海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组MDA、ROS表达降低,SOD表达增加,组间比较P均<0.05。与空白组及海藻多糖组比较,H_2O_2组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组Nrf2 mRNA和蛋白相对表达量均降低,海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组均较H_2O_2组升高,组间比较P均<0.05。与空白组及海藻多糖组比较,H_2O_2组、海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组Keap1 mRNA相对表达量均升高,NQO1、CGLC、HO-1 mRNA相对表达量均降低;与H_2O_2组比较,海藻多糖+H_2O_2组、H_2O_2+海藻多糖组Keap1 mRNA相对表达量均降低,NQO1、CGLC、HO-1 mRNA相对表达量均升高;组间比较P均<0.05。结论海藻多糖可抑制H_2O_2诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5的氧化应激损伤,上调Nrf2表达、激活Nrf2/Keap1/抗氧化反应序列元件信号通路可能是其作用机制。

Mfn2通过Ras-Raf-ERK1/2信号通路抑制ARDS肺纤维化及其机制

目的探讨线粒体融合蛋白(Mfn)2通过细胞外信号调节激酶(Ras-Raf-ERK)1/2信号通路抑制急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化及其机制。方法离体培养人胚肺成纤维细胞(HELF),给予脂多糖(LPS)刺激建立ARDS细胞模型,构建腺病毒重组体Adv-Mfn21-264-GFP、Adv-Mfn2265-757-GFP、Adv-Mfn21-757-GFP,分别转染HELF,使其分别过表达Mfn2的N端GTP酶结构域(aa1-264)、C端跨膜区(aa265-757)及Mfn2的全长氨基酸残基(aa1-757),将细胞分为:Control组、Adv-vector组、LPS组、Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组;噻唑蓝(MTT)法观察各组HELF细胞增殖情况,并检测细胞内胶原蛋白的表达情况,Western印迹及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Ras信号通路Ras、Raf-1及ERK1/2的表达。结果Control组与Adv-vector组细胞增殖水平无明显差异(P>0.05);与Control组比较,LPS组第2、3、4、5、6天细胞增殖水平均明显增加(P<0.01);转染不同Mfn2基因片段后,与LPS组比较,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组肺成纤维细胞增生受到抑制,细胞增殖水平明显下降(P<0.01);且LPS组较Control组细胞内胶原蛋白含量明显增加,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组较LPS组细胞内胶原蛋白含量明显减少(均P<0.01);Western印迹及RT-PCR检测结果显示,与Control组比较,LPS组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显增加,而转染不同Mfn2基因片段腺病毒后,与LPS组比较,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显下调(均P<0.05)。结论Mfn2可能通过N端GTP酶结构域、C端跨膜区调控Ras-Raf-ERK1/2信号通路影响成纤维细胞异常增殖抑制ARDS肺纤维化。

蜂毒素对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及其机制探讨

目的研究蜂毒素(melittin)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对MRC-5细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测细胞中Cyclin D1、CDK4及E2F-1mRNA的表达变化;Western blot法检测Cyclin D1、CDK4、p21及E2F-1蛋白表达。结果与对照组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05);流式细胞仪检测结果发现,随着浓度的增大,G0/G1期细胞百分比逐渐上升,S期细胞百分比逐渐下降;同时Western blot结果提示蜂毒素(1,2,4 mg.L-1)可以明显降低Cyclin D1、CDK4及E2F-1表达,而上调p21表达。结论蜂毒素能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与干扰该细胞G0/G1期相关基因的转录相关且抑制Cyclin D1/E2F信号转导。

青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡的分子机制研究

目的研究青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(HELF)系HFL-I细胞株体外生长的影响,为青蒿琥酯抗纤维化提供实验依据。方法采用CCK-8法检测青蒿琥酯对体外培养的HFL-I细胞的生长抑制作用,用流式细胞术测定细胞凋亡率;RT-PCR法测定Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达。结果青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制HFL-I细胞增殖,HFL-I细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P<0.01),Bcl-2 mRNA的表达显著低于对照组,Bax mRNA的表达显著高于对照组。结论青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Bcl-2 mRNA和上调Bax mRNA表达抑制HFL-I细胞增殖,促进HFL-I细胞凋亡。

p38MAPK信号通路在人胚肺成纤维细胞表达Ⅰ型胶原中的调控作用

目的：探讨p38MAPK信号通路在调控人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖和Ⅰ型胶原表达中的作用。方法：收集矽肺患者肺泡巨噬细胞（AM），在体外用含有SiO2的DMEM培养液和不含SiO2的DMEM培养液培养18h，然后收集培养的AM上清液。用该上清培养HELF，WST-1法检测HELF增殖情况，用免疫细胞化学法检测HELF中Ⅰ型胶原的表达。结果：经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF增殖和Ⅰ型胶原的表达（平均A值为0．304±0．032），与空白对照组（平均4值为0．153±0.021）、对照组（平均吸光度值为0．213±0．021）比较增加，差异有统计学意义（P〈0．01）；预处理组加入了10μmol／L p38 MAPK特异性抑制剂SB203580后，HELF增殖能力和Ⅰ型胶原的表达下降（平均A值为0．176±0．020），与处理组相比差异明显（P〈0．01）。结论：经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清可促进HELF增殖和Ⅰ型胶原的表达，p38MAPK信号通路在此过程中起重要的调控作用。

喙尾琵琶甲乙醇提取物对人胚肺二倍体成纤维细胞增殖的影响

目的:通过体外实验,初步研究喙尾琵琶甲乙醇提取物A、B、C对人胚肺二倍体成纤维细胞增殖的抑制作用,并比较3种提取物的抑制效果。方法:用浓度为3.9～1 000.0μg/mL的A、B、C提取物作用于体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞,采用MTT(噻唑蓝)法检测3种喙尾琵琶甲乙醇提取物对细胞增殖的影响。结果:高浓度的3种喙尾琵琶甲乙醇提取物对人胚肺二倍体成纤维细胞的生长均有显著的抑制作用,并且呈时间-剂量-效应的依赖关系。在质量浓度为1 000.0μg/mL、72 h时,A、B、C对细胞的抑制率达到最大,分别为49.87%、50.13%、42.34%,A、B、C抑制细胞增殖的活性差异无统计学意义。结论:喙尾琵琶甲乙醇提取物可显著抑制人胚肺二倍体成纤维细胞的增殖,不同浓度乙醇提取物之间对细胞增殖的抑制作用相差不大。

姜黄素对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的:研究A549与肺泡上皮细胞共培养条件下姜黄素对经转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞生长、凋亡及分泌细胞外基质的影响,为姜黄素抗纤维化提供实验依据。方法:将利用与肺泡上皮细胞来源的A549细胞进行transwell跨室共培养的人胚肺成纤维细胞分为5组:对照组、模型组、不同浓度姜黄素(5、10、20μmol·mL-1)进行干预的治疗组。CCK-8法检测吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;ELISA法测定细胞外基质Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)的分泌。结果:姜黄素对人胚肺成纤维细胞有抑制作用,呈剂量依赖式。姜黄素处理组细胞凋亡率较对照组、模型组明显增加(P<0.01)。与模型组相比,姜黄素治疗组Bcl-2蛋白的表达明显减弱,而Bax蛋白的表达明显增强,Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)浓度下降。结论:姜黄素能抑制TGF-β1刺激的与A549细胞共培养的人胚肺成纤维细胞的增殖,降低细胞外基质的形成,促进其凋亡,具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达来实现。

不同pH值对人胚肺二倍体成纤维细胞MRC-5生长的影响

目的在不同pH值培养液中培养人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5),观察其生长情况,选出最有利于MRC-5细胞生长的pH值范围。方法采用细胞培养技术,分别在pH值为6.8,6.9,7.0,7.1,7.2,7.3,7.4,7.5,7.6的培养液中培养MRC-5细胞,通过显微技术观察细胞形态、对细胞进行计数,然后对MRC-5细胞的生长情况进行分析比较。结果在不同pH值的培养液中,MRC-5细胞的生长状况不同,细胞数量和细胞形态都有差异,当培养液的pH值为7.2-7.3时,细胞生长形态最好,细胞数量最高可达2.37×106/ml。结论研究表明,培养液的pH值为7.2-7.3时,MRC-5细胞的生长状况最佳。

化纤方对人胚肺二倍体纤维母细胞的增殖抑制作用

目的:探讨中药化纤方对人胚肺二倍体纤维母细胞(2BS)增殖的抑制作用及其机理,为中医药介入肺纤维化防治提供实验和理论支持。方法:采用中药血清药理学实验方法,观察化纤方含药血清对2BS细胞的细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:经化纤方含药血清作用后,2BS细胞增殖受到显著抑制,并出现明显的细胞凋亡现象;化纤方各组S期细胞数显著增加,而G2/M期细胞数则明显下降,提示该方药可阻抑S期细胞向G2/M期的移行,从而抑制其分裂增殖。结论:化纤方有明显的抗肺纤维化作用,其作用机制可能是阻抑细胞增殖周期并诱导其发生细胞凋亡。

骨形成蛋白-2基因转染对成纤维细胞表型影响的实验研究

目的探讨腺病毒载体介导的骨形成蛋白-2(Ad-BMP-2)基因转染人胚肺成纤维细胞(HELFs)后,对HELFs的表型特别是矿化能力的影响。方法原代培养HELFs,并用Ad-BMP-2进行转染。观察转染前后HELFs的形态学变化;用四唑盐比色法、碱性磷酸酶染色、蛋白印迹以及体外矿化实验,检测转染BMP-2基因后HELFs增殖活性、碱性磷酸酶活性、BMP-2蛋白表达和矿化能力的变化。结果HELFs经Ad-BMP-2转染后,胞体变大,由单一细长梭形转变为多种形态,由单层生长变为复层生长;转染后HELFs增殖受到明显抑制;碱性磷酸酶染色见大部分细胞呈现阳性反应;蛋白印迹检测到明显的BMP-2蛋白条带;细胞经茜素红S染色后出现桔红色的矿化结节。结论经Ad-BMP-2转染后,HELFs向成骨细胞表型转变,具有了矿化能力。