PPA制剂对人PBMC分泌细胞因子水平的影响

目的 探讨绿脓杆菌菌毛制剂 (PPA)对正常人外周血单核细胞 (PBMC)分泌细胞因子水平的影响 ,了解该制剂的免疫作用。方法 采用ELISA法 ,测定PPA刺激下 ,体外培养的正常人PBMC分泌IL -2 ,IFN -γ和IL -10的水平变化。结果 培养上清液中刺激组IL -2 ,IFN -γ和IL -10含量分别为 ( 163 74± 2 3 5 1)pg/ml ,( 92 4 12± 2 14 3 2 )pg/ml和 ( 3 3 76± 9 83 )pg/ml,而对照组则分别为 ( 3 0 80± 14 42 )pg/ml ,( 4 6 80± 15 2 9)pg/ml和 ( 4 1 61± 10 75 )pg/ml。刺激组IL -2和IFN -γ含量明显增高 ,而IL -10的含量则下降 ,其差异均有显著性 (P <0 0 1)。结论 PPA能促进Th1细胞因子的产生 ,抑制Th2细胞因子的分泌 ,能有效增强机体的细胞免疫功能。

荧光定量RT-PCR检测糖尿病病人PBMC中TGF-β1表达水平

目的:应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),检测糖尿病病人外周血单个核细胞 (PBMC)中TGF-β1mRNA的表达水平。方法:分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,逆转录为cDNA,在扩增体系中加入SYBR Green I,应用FQ-RT-PCR定量检测TGF-β1mRNA。结果:重组质粒测序证明插入的片断为TGF-β1特异性片断,荧光定量RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的灵敏度达105拷贝/ml, 线性范围为105-1011拷贝/ml,批内、批间变异系数分别为2.27%-2.56%和4.78%-5.22%,临床应用显示,糖尿病患者PBMC中TGF-β1 mRNA含量显著高于正常。结论:FQ-RT-PCR检测TGF-β1mRNA具有灵敏、特异、快速等特点,为临床应用提供了方法学依据。

Itk蛋白在人PBMC增殖和细胞因子产生中的作用研究

利用RNA干扰的方法抑制人外周血单个核细胞(PBMC)中Itk基因的表达,探讨其抑制Itk后对人PBMC增殖和炎症性相关细胞因子产生的影响。设计针对Itk基因的siRNA序列,与外源表达Itk的pEGFP-C1-hItk质粒共转染至HeLa细胞,筛选出有效的干扰序列;利用电转染的方法将有抑制Itk作用的siRNA转染至人PBMC,检测Itk抑制状态,同时观察细胞增殖率及炎症性细胞因子产生水平的变化。实验表明,Itk-siRNA有效地抑制了Itk蛋白的表达;Itk受到抑制后细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05);几种重要炎性细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-5、IL-10和IL-4产生水平下降。实验验证了Itk蛋白在人PBMC增殖和炎性细胞因子产生方面的重要作用。

SLE患者外周血单一核细胞CD43基因的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)免疫功能异常与CD43分子基因的关系。方法采用反向聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对SLE患者外周血单一核细胞(PBMC)CD43基因的表达进行检测。结果SLE患者与正常人PBMC均检测到CD43基因的表达,且前者的表达水平为0.8662±0.3992,高于后者的0.3451±0.3310,有非常显著性差异(t=7.109,P<0.01)。结论活动期SLE患者PBMC的CD43基因表达水平显著升高,导致淋巴细胞免疫功能异常。

卡介苗多糖核酸对过敏性支气管哮喘外周血单个核细胞T_H1/T_H2反应的作用

目的观察卡介苗多糖核酸(BCGPSN)对支气管哮喘患者外周血淋巴细胞TH1/TH2反应的作用,并与结核菌素纯蛋白衍生物(TBPPD)进行比较。方法缓解期过敏性支气管哮喘患者16例,对照组健康成人13例,分离外周血单个核细胞(PBMC),分别加入不同浓度的BCGPSN(1、10、100、1000μg/ml)、TBPPD(10μg/ml)、尘螨抗原(DerP,10μg/ml)体外培养4d,不加刺激剂者为阴性对照。收集培养上清,ELISA检测IFNγ、IL5浓度的变化。结果PSN(1～100μg/ml)刺激正常人PBMC分泌IFNγ水平均高于哮喘患者(P<0.05)。BCGPSN(10μg/ml)可以刺激哮喘患者PBMC分泌IFNγ(358.7pg/ml,范围0～2433.0pg/ml),但显著低于同等浓度的TBPPD刺激作用(13036pg/ml,范围600.5～35100.0pg/ml,P<0.01)。PSN刺激PBMC分泌IFNγ呈浓度依赖性,当浓度达到100μg/ml时,与低浓度相比刺激作用显著增强(P<0.01),与TBPPD的刺激作用类似。DerP刺激哮喘患者PBMC分泌IL5水平显著高于正常人(P<0.05)。BCGPSN刺激PBMC分泌IL5的作用较弱,显著低于TBPPD和DerP的刺激作用。结论BCGPSN具有一定的TH1刺激作用,但低于TBPPD的刺激作用,有待对BCGPSN组分进一步优化以增强疗效。

胃癌患者外周血单个核细胞和肿瘤组织表面分化抗原44变异体6检测的临床意义

目的探讨测定胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)及肿瘤组织细胞表面分化抗原44变异体6(CD44v6)含量(%)的临床意义。方法用流式细胞术(FCM)检测50例胃癌患者术前和术后1周及20名正常人PBMCCD44v6含量(%),以及术后胃癌及癌旁正常组织CD44v6含量。结果胃癌患者术前PBMCCD44v6含量(9.72%±6.65%)比正常对照组(3.11%±1.15%)及术后1周(4.44%±2.33%)明显增高(分别P<0.001和<0.01);胃癌及癌旁正常组织CD44v6含量分别为3.67%±0.63%及1.33%±0.51%(P<0.01);Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者PBMC及胃癌组织CD44v6含量(分别为12.56%±6.97%及3.91%±0.87%)均明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(分别为6.89%±3.37%和2.86%±0.65%,均P<0.05)。胃癌淋巴转移患者PBMC及胃癌组织CD44v6含量(分别为11.29%±5.36%和4.41%±0.79%)均明显高于无转移者(7.32%±4.28%和2.61%±0.78%,均P<0.05)。结论用FCM检测胃癌患者PBMCCD44v6含量能反映胃癌组织CD44v6改变,对胃癌诊断、进展与转移评价及术后疗效观察具有重要的临床意义。

SLE患者Th2细胞活化相关基因的表达

本研究通过检测SLE患者和正常人PBMC中IL-4、IL-4R、STAT6、GATA3、MBD2的mRNA的表达水平，探讨SLE患者Th2细胞异常活化情况。

激活蛋白-1在皮肌炎患者外周血单一核细胞中的表达及糖皮质激素对其表达的影响

目的探讨激活蛋白一1（AP一1）在皮肌炎患者外周血单一核细胞（PBMC）中的表达及糖皮质激素对其表达的影响。方法分别提取15例正常人和20例皮肌炎患者（为未使用过糖皮质激素的初发患者或停止糖皮质激素治疗1个月以上者，初发12例，复发8例）的PBMC，每例的PBMC等分为2份，一份加入含80I．Lmol／L地塞米松和10％小牛血清的RPMI1640培养液培养48h后待用，另一份直接一80℃保存待用。用电泳迁移率改变实验检测不同组别PBMC中AP一1的活性。结果AP-1在正常人PBMC中为低表达（灰度面积值为4．93±0．15mm2）。皮肌炎初发组和复发组患者PBMc加地塞米松前的AP-1表达（灰度面积值分别为30．23±0．49mm。和34．79±0．61mm。）均明显高于地塞米松处理后AP-1表达（灰度面积值分别为5．59±0．39mm。和5．69±0．39mm。），地塞米松处理前复发组PBMC的AP-1活性高于初发组（P〈0．01）。结论AP-1活性增强可能是导致皮肌炎炎症反应及复发的重要因素之一。糖皮质激素可以一定程度抑制AP-1活性。