初级纤毛介导成骨前体细胞系MC3T3-E1传代衰老减低成骨分化能力

背景:在大段骨缺损修复中,由于种子细胞传代等多种因素可引起成骨类细胞衰老,造成组织工程骨植入体内后成骨分化活性降低。近年来,初级纤毛介导细胞衰老的机制已被广泛研究,但“传代衰老-成骨活性减低”的初级纤毛相关机制尚未完全明了。目的:探讨初级纤毛调控成骨性MC3T3-E1细胞传代衰老的可能机制。方法:成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞传代至第10代(早期传代)及第40代(晚期传代),同时使用siRNA沉默IFT88阻碍初级纤毛生成,即将细胞分为第10代组、第40代组、第10代+siRNA IFT88-组、第40代+siRNA IFT88-组。各组细胞成骨诱导3 d,采用RT-PCR和Western blot检测衰老标志物CDKN2A(P16)的表达、成骨活性标志物骨形态发生蛋白2和碱性磷酸酶的表达、Hedgehog通路IHH的表达;茜素红染色和初级纤毛免疫荧光染色分析初级纤毛形态;对初级纤毛阳性率与IHH、骨形态发生蛋白2的表达进行Spearman相关性分析。结果与结论:①成骨诱导3 d,第40代组MC3T3-E1细胞的CDKN2A(P16)表达显著高于第10代组,而在siRNA IFT88-干预后差异消失;②第10代组的初级纤毛细胞阳性率高于第40代组,siRNA IFT88-则显著性抑制第10代与第40代细胞的初级纤毛表达;③第10代组MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶及骨形态发生蛋白2的转录活性和蛋白表达均高于第40代组,通过siRNA抑制初级纤毛表达后,上述差异减低或者消失;④初级纤毛细胞阳性率与IHH蛋白表达及骨形态发生蛋白2蛋白表达呈正相关。结果表明:初级纤毛介导了成骨性MC3T3-E1细胞的传代衰老,可调控成骨分化能力。

长期传代培养对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

背景:人骨髓间充质干细胞体外长期传代培养后是否能保持其生物学特性、能量代谢方式和多向分化潜能等仍存在争议,有待于进一步全面系统研究。目的:观察体外长期传代培养对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响。方法:人骨髓间充质干细胞体外培养至第5,10,15代,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期;成脂、成骨、成软骨诱导分化检测细胞多向分化潜能;划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力;能量代谢分析仪检测细胞线粒体氧化磷酸化和糖酵解能力;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;Western blot检测细胞衰老标记蛋白p21、p16、p53表达。结果与结论:第5,10,15代骨髓间充质干细胞均呈贴壁生长,第15代细胞体积增大,增殖能力降低,S期细胞百分比减少(P<0.05);随着传代次数的增加,细胞划痕愈合和侵袭能力逐渐减弱(P<0.05),成脂、成骨和成软骨分化潜能未见显著性差异,细胞线粒体氧化磷酸化和糖酵解能力逐渐降低(P<0.05)。随着传代次数的增加,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞增多(P<0.05),衰老标记蛋白p21、p16、p53表达逐渐增加(P<0.05)。结果表明:长期传代培养的骨髓间充质干细胞的生物学特性发生变化,第10代以后骨髓间充质干细胞可能由于衰老导致活性降低。采用第10代以内的骨髓间充质干细胞更适合于临床研究/治疗。

大口黑鲈鰤鱼诺卡氏菌传代弱毒株特性及免疫效果评价

为探究鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)强毒株LY20810 F1与其传代弱毒株LY20810 F110的特性差异,比较了两个菌株的生物学特征、毒力基因序列、致病力及引起大口黑鲈免疫反应的差异,并评价了弱毒株LY20810 F110对大口黑鲈的免疫保护效果。结果表明,通过BHI培养基连续传代培养110代次后,菌株LY20810 F110的菌落、菌体形态发生显著变化,其生长速度较原始毒株LY20810 F1快1倍以上。通过比较两株菌的10个毒力基因序列,发现菌株LY20810 F110的SodC和ESAT6基因发生了单位点突变。致病力测试结果显示,强毒株LY20810 F1以0.1 mL 1×10^(7) cfu/mL攻毒剂量感染大口黑鲈,30d内鱼累积死亡率为100%,而传代弱毒株LY20810 F110在相同剂量下未造成鱼死亡。强毒株LY20810 F1攻毒3d后引起脾脏、头肾中IL-1β、IL-10、TNF-α、IFN-γ等炎症细胞因子显著上调,表明细菌感染引起炎症风暴。传代弱毒株LY20810 F110在感染中后期(14d和28d)诱导包括IgM、CD4-α、CD8-α、MHCI-α等8种免疫因子的上调。免疫效果评价结果显示,弱毒株LY20810 F110的注射、浸泡免疫(1×10^(8) cfu/mL)对大口黑鲈的相对保护率分别为75.0%和66.7%,有效降低了鰤鱼诺卡氏菌入侵造成大口黑鲈脾脏和头肾的病理损伤。以上结果表明,鰤鱼诺卡氏菌传代弱毒株LY20810 F110是安全有效的弱毒疫苗候选株,将为诺卡氏菌减毒疫苗的研制提供科学依据。

人胚胎生殖细胞的传代培养

目的探求人胚胎生殖细胞最适宜的传代时间及最佳的传代方法。方法取8周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养人胚胎生殖细胞,选择原代培养第8天和第16天的细胞,采用挑取传代法和消化传代法,其中的消化传代法采用三种不同的消化液进行传代培养,记录各代培养的细胞集落数。结果在原代培养第8天时,挑取传代法传2代后获得的细胞集落数减少;消化传代法传4代后获得的细胞集落数明显增多。原代培养第16天时未能传代培养,但却看到人胚胎生殖细胞集落的分化。结论人胚胎生殖细胞传代培养最适宜的传代时间为原代培养第8天,最佳的传代方法为消化传代法。

肾综合征出血热Vero传代细胞疫苗的研究

目的 研究肾综合征出血热 (HFRS)Vero传代细胞疫苗。方法 将HFRS双价沙鼠肾细胞灭活疫苗的生产疫苗株Z10 (Ⅰ型 )、Z3 7(Ⅱ型 )适应到Vero细胞上进行连续传代 ,并用不同代次的Vero细胞适应株制备Vero传代细胞疫苗。结果 Z10 、Z3 7株感染Vero细胞后第 1代即可达到较高病毒滴度 ,并且在Vero细胞中持续传代适应 ,病毒滴度分别维持在 6.2 5～ 6.75和 6.5 0～ 7.0 0logTCID50 /ml之间 ,较为稳定。用不同代次的Vero细胞适应株制备而成的HFRSVero细胞灭活疫苗抗原效价和疫苗的病毒滴度有较大提高 ,反向间接血凝效价从Z10 Cp1Vero细胞疫苗的阴性上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的 1∶64 ,从Z3 7Cp1Vero细胞疫苗的 1∶2上升到Z3 7Cp10 Vero细胞疫苗的 1∶64 ;疫苗病毒滴度(logTCID50 /ml)从Z10 Cp1Vero细胞疫苗的 4.2 5上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的 6.5 0 ,从Z3 7Cp1Vero细胞疫苗的 6.2 5上升到Z3 7Cp10 Vero细胞疫苗的 7.5 0。疫苗在抗原量和病毒滴度上基本符合中国生物制品的要求。结论 HFRSVero传代细胞疫苗的生产 ,疫苗株在Vero细胞中的连续传代适应起关键性作用。

老面传代发酵过程中细菌菌群结构及其功能预测

该研究以老面为研究对象,采用高通量测序技术解析了老面传代1代(SD1)、2代(SD2)和4代(SD3)发酵过程中的细菌菌群多样性,对高通量测序结果进行α多样性及β多样性分析,并对其细菌菌群进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果表明,老面样品共获得538981条优化序列,得到495个操作分类单元(OTU);从SD1到SD3代的优势菌门依次为厚壁菌门(Firmicutes)、蓝藻菌门(Cyanobacteria)和变形菌门(Proteobacteria);优势菌属均为乳杆菌属(Lactobacillus);优势菌种均为旧金山乳杆菌(Lactobacillus sanfranciscensis)、干酪乳杆菌(L.sakei)、短乳杆菌(L.brevis)和加氏乳杆菌(L.gasseri);优势菌门、属和种的平均相对含量变化不显著(P>0.05)。β多样性分析表明,老面传代发酵过程中细菌群落结构较为相似,丰度变化不显著(P>0.05)。从SD1到SD3老面样品中细菌菌群主要功能为碳水化合物代谢,其次为维生素及辅酶因子代谢、分子排序、结构折叠与降解、氨基酸代谢,磷酸戊糖途径是最主要的三级代谢功能。

市售酸奶与传统酸奶传代发酵性能的比较研究

目的 比较研究市售酸奶与传统酸奶传代发酵性能。方法 将新疆南疆农民自制传统酸奶与当地市售酸奶在13%的脱脂乳中连续传代发酵10次。对发酵过程中的乳酸菌菌落数和理化指标进行检测,并对其凝乳状态、品质滋味进行分析评价。结果 传代发酵10次后,市售酸奶和传统酸奶的乳酸菌菌落数、持水力、总酸度值均显著增加, pH降低,传统酸奶较市售酸奶总酸度高16.33°T,持水力高7.67%,但整体感官评分较低。结论 2种酸奶中的乳酸菌群在传代过程中没有出现衰退现象,传统酸奶随着传代次数的增加,凝乳品质提升,但由于酸度较高,可接受程度较低。

R-spondin 1对食管鳞癌类器官培养的影响和传代消化酶的选择

目的优化食管鳞癌类器官的培养方法。方法收集郑州大学第二附属医院胸外科2023年5月至2024年3月食管鳞癌手术标本20例,用含/不含R-spondin 1的培养基培养类器官,观察二者对类器官生长的影响,同时比较市售的0.25%Trypsin-EDTA、1×Tryple和自配的组织消化液对类器官的消化效果。结果用含/不含R-spondin 1培养基培养食管鳞癌类器官时,两者的类器官大小、生长速率无明显差别(P>0.05)。0.25%Trypsin-EDTA消化细胞球时,细胞分散状态好,所生成的细胞球的数量均多于组织消化液和1×Tryple,1×Tryple消化细胞球的效率和所生成的细胞球的数量均大于组织消化液。结论R-spondin 1对食管鳞癌类器官的形成无明显影响;类器官传代扩增时,用0.25%Trypsin-EDTA有较好的消化效果。

猪伪狂犬病病毒变异株传代致弱JS18-150株的获得与鉴定

为获得安全性良好、免疫原性高的变异株弱毒苗,采用鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养的方法对猪伪狂犬病病毒流行毒株JS18株进行传代,最终获得JS18-150株,随后通过PCR鉴定、测序、致病力试验和免疫效力试验对JS18-150株的体外生长特性、安全性和免疫原性进行初步研究。试验结果显示,在CEF上连续传代后,JS18株的gI、gE、US9基因缺失,获得的JS18-150株毒力已致弱,在CEF上适应性显著提高,与JS18株生长动力学相似;将JS18-150株以107.0TCID50/mL接种仔猪,所有仔猪均未观察到任何临床症状,且体温均未超过40.5℃;JS18-150株以106TCID50/mL接种仔猪后能保护仔猪有效抵御JS18株和HBZL05株的攻击。结果表明,JS18-150株对仔猪安全性良好,可作为PRV弱毒疫苗研制的候选毒株。

综述DF-1传代细胞在禽用疫苗研制和病毒检测中的应用

本文系统综述了DF-1传代细胞在禽用疫苗研制和病毒检测中的应用。详细阐述了DF-1细胞的特性、培养方法,强调了其在疫苗研制和病毒检测中的重要性。深入分析了这种细胞系在病毒鉴别培养中的具体应用及优势,并对未来的发展前景进行了合理展望,为相关领域的研究和实践提供了有价值的参考。

超声引导下组织块接种制作兔肾VX_2瘤模型及传代保存

目的 探讨术中组织块包埋和超声引导下穿刺组织块接种制作兔肾VX2 瘤模型的方法 ,并对这两种方法进行比较。方法 采用剪切法制备兔VX2 瘤组织块悬液 ,应用超声引导下经皮组织块推注法建立 5 8只兔肾VX2 肿瘤模型 ,应用术中组织块包埋法建立 8只兔肾VX2 肿瘤模型 ,应用自然组织谐波技术观察肿瘤生长 ,并观察浅表淋巴结转移及动物的一般情况 ;3周内自然死亡者立即行尸体解剖 ,未死者种植后 3周处死行尸体解剖 ,获得兔肾VX2 肿瘤标本 ,进行HE切片染色。结果 两种方法建立的兔肾VX2 瘤模型组织学表现与传代种兔相同 ;术中包埋组种植成功率 5 0 % ,超声引导下穿刺组种植成功率 96.5 5 % ;术中包埋组腹壁种植率 2 5 % ,超声引导下穿刺组腹壁种植率 5 .17%。结论 超声引导下穿刺法建立兔肾VX2 肿瘤模型方法简便 ,成功率高 。

麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的犬肾传代细胞凋亡的影响

目的:探讨麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的犬肾传代(MDCK)细胞凋亡的影响。方法:运用原位末端标记技术和流式细胞术分别检测最大无毒限量的麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的MDCK细胞凋亡百分率与细胞周期变化的影响。结果:麻杏石甘汤能显著降低A型流感病毒感染的MDCK细胞的凋亡百分率,下调其G1/G0期细胞比例,上调其S期、G2/M期细胞比例以及细胞增殖指数(PI)值。结论:麻杏石甘汤通过调整流感病毒感染的MDCK细胞的细胞周期,降低细胞凋亡百分率而发挥抗流感病毒作用。

HMA分析体外传代HIV亚型变异

目的:了解体外传代HIV-1亚型的变异性,以深入了解HIV-1在自然状态下的生物学性状,为艾滋病的预防和治疗提供基础资料。方法:经MT4细胞连续传代、反复冻融传代、反复更换宿主细胞传代、施加灭活因素(酸性条件及S/D)传代等多种不同方式体外传代培养HIV。套式PCR扩增其包膜基因,用异源双链泳动分析法(HMA)分析基因亚型的变异。结果:各种方式传代HIV-1包膜基因亚型不变。结论:体外传代HIV基因亚型不变;HMA适用于体外传代HIV型别鉴定。

猪支气管黏膜上皮细胞的分离培养和传代研究

利用气管-支气管扎结灌注酶冷消化法分离气管黏膜上皮细胞,比较胰蛋白酶和链霉蛋白酶消化效果,并研究含不同细胞生长因子和血清浓度的培养体系来寻找经济、易重复的气管上皮细胞最适培养技术。用抗8/18细胞角蛋白免疫组化法鉴定气管上皮细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡来分析本研究中气管上皮细胞最大传代次数。研究结果表明胰蛋白酶消化气管所得的目的细胞量小、活性差、细胞贴壁和生长困难,链霉蛋白酶灌注冷消化法可获得数量大、活性高、纯度好的目的细胞;基础的上皮细胞培养体系中含低浓度血清、转铁蛋白和人表皮生长因子可以有效保证气管上皮原代和传代生长。本研究所分离的气管上皮细胞可连续传到第6代,传代细胞活性好、纯度高,可为进一步的气管上皮细胞永生化研究提供材料和奠定技术基础。

转生长激素基因鲤的快速生长效应及传代

报道了转生长激素基因鲤阳性群体的建立和"超级鲤"的获得。给出了"超级鲤"和对照组连续4年的生长实验结果及"超级鲤"子代连续3年的生长对照的体重数据。结果显示,外源生长激素基因对受体鲤具有快速生长效应,但具有这种超速生长作用的个体在转基因鲤群体中占极少数。此效应能传递给子代,子代中快速生长个体的比例大大高于转基因实验群体。

多种肿瘤传代细胞中lg样物质存在与检测

目的：探讨lg样物质是否在多种肿瘤细胞内存在广泛的表达，筛选出lg样蛋白高表达细胞株。方法：通过免疫组织化学方法（直接法、APAAP法），分别用抗人IgG多克隆抗体、抗人IgG重链、轻链单抗，对乳腺癌（T47－D、MCF－7）、大肠癌（HT－29、HCT－8）、卵巢癌（SKOV3、Ca）、肺癌（A549）、口腔上皮样癌（A431）、肝癌（BC－7402）、宫颈癌（S3、MR）等上皮性恶性肿瘤及部分造血系统肿瘤传代细胞（Ran、HL－60、K562）的胞浆内屹样物质进行了检测。结果：当用抗人IgG多抗进行检测时，所有的上皮性恶性肿瘤细胞同阳性对照（杂交瘤）一样，都呈阳性反应；而在造血系统肿瘤中，除Ran细胞呈弱阳性反应外，K562、HL－60为阴性反应。用抗人IgG轻、重链单抗进行APAAP法检测时，所得结果基本同直接法，但在上皮性恶性肿瘤细胞株中显示了明显的阳性强度差异，如：HeInMR、CaOV3、MCF－7、T47－D、对抗人IgG重链单抗呈强阳性反应；而HCT－8、A549、A431、BCL－7402、等细胞株为弱阳性，SKOV3则为阴性。抗人IgG。链阳性率高于λ链。结论：Ig样物质在所检测的上皮性恶性肿瘤传代细胞系中存在广泛的表达。

白僵菌经不同基质传代后对桑天牛幼虫的侵染力比较

以诱集自土壤中的对桑天牛(Apriona germari)幼虫具有较高致病性的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)Bb00菌株为原发菌株R0,通过反复接种桑天牛幼虫分别获得菌株R1、R2、R3和R4,并反复在普通查氏培养基上传代分别获得菌株M1、M2、M3和M4。将R0、R2、R4和M2、M4菌株感染桑天牛幼虫进行生物测定,发现在普通培养基上传代,会导致菌株致病力的降低,而通过桑天牛幼虫传代培养可以提高菌株的致病力。R4、R2、R0、M2、M4菌株的LT50分别为3.23、4.01、4.13、4.78和6.34d,LC50分别为0.686×106、1.470×106、3.050×106、7.940×106和9.580×106mL-1。表明通过菌株在桑天牛幼虫虫体上反复接种可以提高白僵菌对桑天牛幼虫的侵染力。

日本血吸虫成虫体外传代培养细胞的生物学鉴定

本研究结果显示:血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态,4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%,并在各代培养中均可见细胞分裂相;传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞,也可见形态异常细胞。表明1640-40特定培养基对血吸虫成虫中的部分细胞体外传代培养获得成功。

人bcl-xl转基因小鼠外源基因的复制及传代的稳定性观察

显微注射法建立转 bcl- xl基因小鼠 ,将 PCR及 Southern- blot检测阳性的小鼠与正常鼠交配并传代 ,然后检测子代中外源基因的遗传情况。结果发现 :10号小鼠传代过程中 PCR阳性率保持稳定 ,符合孟德尔遗传规律 ,外源基因能够稳定遗传。 6号小鼠 PCR阳性率呈轻微下降趋势 ,但能够保持相对稳定遗传。 13号和 5号小鼠 PCR阳性率均呈现明显的下降趋势。该二小鼠存在外源基因遗传丢失现象。结果提示

胰酶对皮肤角质细胞分离和传代的影响

考察不同的胰酶浓度及其作用时间对角质细胞分离和传代的影响。实验发现在胰酶浓度 0 2 5 %时作用5min可获得的总活细胞量和有克隆形成能力的细胞量均优于其它培养条件 ;而在胰酶浓度 0 0 5 %时作用 5min可获得最大的原代角质细胞贴壁率。随着胰酶浓度的提高 ,传代角质细胞的贴壁率和贴壁速率常数以及克隆形成率均随之增加 ,因此在传代培养时使用 0 2 5