伪原薯蓣皂苷对Ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞COX-2表达的影响及机制研究

为探究伪原薯蓣皂苷对Ox-LDL诱导的内皮细胞COX-2表达的影响。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),加入伪原薯蓣皂苷预处理细胞24 h,再以氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导HUVEC细胞表达COX-2;采用Real-time PCR和western blot分别检测了COX-2的mRNA和蛋白表达水平,以及与COX-2炎症信号通路相关的激酶活性。结果显示,伪原薯蓣皂苷剂量依赖的下调COX-2的表达,同时抑制p38MAPK的激酶活性。这些结果表明,伪原薯蓣皂苷可能通过抑制TLR2/p38MAPK通路而抑制内皮细胞炎症介质COX-2的表达,提示其对内皮细胞的抗炎效应。

伪原薯蓣皂苷对双侧卵巢切除诱导的apoE-/-小鼠心脏功能损伤的保护作用

目的探讨伪原薯蓣皂苷(PPD)对双侧卵巢切除(OVX)诱导的apoE-/-小鼠心脏功能损伤的保护作用。方法采用8周apoE-/-雌鼠进行双侧卵巢切除手术,并随机分为假手术组(sham)、OVX组、OVX后给予伪原薯蓣皂苷组(OVX加PPD)、OVX后给予17β-雌二醇组(OVX加E2)。手术后高胆固醇饮食12周,建立绝经后雌鼠心脏损伤模型,最后4周隔天给予伪原薯蓣皂苷(2 mg/kg,腹腔注射)或E2 (0.5 mg/kg,肌注)。检测血浆中载脂蛋白和血脂含量;组织学观察心脏形态;心电图和超声心动检测心功能指标;实时定量RT-PCR法检测心房利钠因子(ANF)及炎症因子表达水平。结果与sham组相比,OVX显著增加了血浆中总胆固醇(TG)的含量,给予伪原薯蓣皂苷可以有效抑制该作用[(115±9)、(68±8)mg/d L](P <0.05)。心脏形态、心电图和超声心动结果显示,OVX术后导致小鼠心肌肥厚和心脏功能紊乱,给予伪原薯蓣皂苷后,心率[(266±8)/min、(468±11)/min]、P-R间期[(0.071±0.001)、(0.057±0.002)s]、QRS间期[(0.031±0.003)、(0.018±0.002)s)]、左室舒张末期内径(LVIDd)[(4±0.07)、(3.59±0.06)mm]、左室收缩期内径(LVIDs)[(2.42±0.07)、(2.03±0.04)mm](P <0.05)等心功能指标都得到了有效恢复。与OVX组相比,给予伪原薯蓣皂苷降低了ANF的m RNA的表达水平[(4.06±0.71)、(2.64±0.23)],同时抑制了炎症因子TNF-α[(13.43±1.01)、(6.12±0.95)]、IL-1β[(5.03±0.97)、(2.45±0.57)]和IL-6[(7.41±0.92)、(5.85±0.65)]的m RNA表达(P <0.05)。结论伪原薯蓣皂苷能有效缓解OVX诱导的apoE-/-小鼠血脂紊乱及心脏功能损伤。其作用与雌激素受体通路及下游炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)和心肌肥厚的检测标志物ANF的m RNA的表达水平密切相关。

伪原薯蓣皂苷联合运动对高脂血症大鼠肝脏脂代谢和抗氧化功能的影响

伪原薯蓣皂苷(pseudoprotodioscin, PPD)是盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis)中的一种甾体皂苷,可抑制胆固醇和甘油三酯合成。本研究考察了伪原薯蓣皂苷联合运动对高脂血症(HLP)大鼠肝脏脂代谢和抗氧化功能的影响。将大鼠分为C组、HLP组、E组、L-PPD组、M-PPD组、H-PPD组、E+H-PPD组,每组12只大鼠。C组为对照大鼠,其他组为高脂血症模型大鼠。C组和HLP组大鼠安静饲养。E组大鼠进行跑台运动。L-PPD组、M-PPD组、H-PPD组大鼠分别灌胃25、50、100 mg·kg-1·d-1的伪原薯蓣皂苷。E+H-PPD组大鼠在跑台运动前1 h灌胃100 mg·kg-1·d-1的伪原薯蓣皂苷溶液。干预时间为8周。分别检测各组大鼠的体重、血清脂代谢标志物(TC, TG, LDL-c, HDL-c, FFA)、肝脏抗氧化标志物(SOD, CAT和MDA)水平。通过HE染色观察大鼠肝脏形态。通过RT-qPCR检测肝脏SREBP1c、FAS、ABCA1、HMGCR、CYP7A1和ACC m RNA水平。通过Western blot检测肝脏Nrf2和Keap-1蛋白表达水平。结果显示,与E组和H+PPD组比较,E+H-PPD组大鼠的体重降低,血清TC、TG、LDL-c和FFA水平降低,血清HDL-c水平升高,肝脏空泡化脂滴减少,肝脏SOD和CAT水平升高,肝脏MDA水平降低,肝脏SREBP1c、FAS、HMGCR和ACC m RNA水平降低,肝脏ABCA1和CYP7A1 mRNA水平升高,肝脏细胞核Nrf2蛋白表达水平升高,肝脏Keap-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。本研究表明,伪原薯蓣皂苷联合运动可纠正高脂血症大鼠肝脏脂代谢紊乱并提高抗氧化功能。

HPLC法测定穿山龙中伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的含量

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定穿山龙中伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的含量。方法:采用Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～18 min,25%A线性变为36%A;18～40min,36%A线性变为90%A;40～55 min,90%A保持不变),流速1.0 mL.min-1,检测波长210 nm,柱温30℃。结果:伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,线性范围分别为9.80～588.0μg.mL-1(r=0.9994),20.20～1212μg.mL-1(r=0.9995),5.330～319.8μg.mL-1(r=0.9999);平均回收率(n=9)分别为97.3%,99.4%,97.6%。结论:该方法简便、准确,为穿山龙药材的质量评价提供了方法。

地奥心血康中薯蓣皂苷及伪原薯蓣皂苷的分离与鉴定

目的:分离鉴定地奥心血康中主要甾体皂苷成分。方法:应用常压及加压硅胶柱色谱技术进行分离与纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定其结构。结果:分离并鉴定了2个化合物:薯蓣皂苷(Dioscin)(1)和伪原薯蓣皂苷(Pseudoprodioscin)(2)。结论:化合物1和2为地奥心血康中含量较高的2种主要成分,对控制和评价中药地奥心血康的品质有重要意义。

近红外光谱技术快速测定盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量

目的:建立一种快速测定盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷含量的方法。方法:首先扫描76份盾叶薯蓣样本的近红外光谱(NIRS)图,通过对光谱预处理方法及建模波段的考察,选择标准归一化+一阶导数作为最优光谱预处理方法,10118.36～4007.37cm-1为建模最佳波段。在此基础上,以高效液相色谱(HPLC)法测定的伪原薯蓣皂苷的含量为参考值,结合偏最小二乘法(PLS)建立NIRS与HPLC分析值之间的定量分析模型。结果:所建模型具有良好的预测能力(r=0.97596),内部交叉验证均方差为0.16975,预测均方差为0.0896。结论:利用NIRS技术可以快速、准确地测定盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量。

HPLC测定黄山药中伪原薯蓣皂苷的含量

目的:建立HPLC测定中药黄山药中伪原薯蓣皂苷含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法,Merck Puro-spher STARRP-18e色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速1mL·min-1,检测波长203nm,柱温40℃。结果:伪原薯蓣皂苷在此色谱条件下获得良好分离,含量测定的线性范围0.08～4.00μg(R2=0.9999),平均加样回收率为99.9%,RSD2.3%。结论:首次建立了高效液相色谱法测定黄山药药材中伪原薯蓣皂苷含量的方法,该方法准确、可靠,可用于黄山药药材及其制剂质量控制的方法。

HPLC-ELSD测定盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量

目的:建立盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),Dikma C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(30∶70),流速1.0 mL.min-1;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度60℃,气压4.5 kPa。结果:伪原薯蓣皂苷在10～40μg(r=0.999 8)线性关系良好,平均回收率98.7%(RSD 1.6%,n=6)。结论:该方法简便、快速、灵敏、准确,可作为盾叶薯蓣的质量控制方法。

RP-HPLC同时测定穿山龙药材中原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷的含量

目的:建立测定产地黑龙江大兴安岭穿山龙供试品中水溶性皂苷含量的方法。方法:采用RP-HPLC,Diamonsil(钻石)C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温30℃。结果:原薯蓣皂苷浓度在50～500 mg·L-1、甲基原薯蓣皂苷在35～350 mg·L-1、伪原薯蓣皂苷质量浓度在15～150 mg·L-1与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9(n=6)。方法学考察中各项实验结果的RSD均<3%。结论:方法重复性好,具有良好的回收率,稳定性佳,为穿山龙药材的质量控制提供了参考。

HPLC法测定不同产地穿山龙中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷

目的建立HPLC法同时测定不同产地穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷。方法穿山龙药材粉末经50%甲醇超声处理。采用Agilent SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–水,梯度洗脱;检测波长203 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;进样体积20μL。结果原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷在1.054 0~10.540 0、0.519 0~5.1900、0.287 0~2.870 0、0.021 2~0.212 0、0.061 4~0.614 0、0.061 4~0.614 0μg线性关系良好,r均大于0.999 0。平均加样回收率分别为100.19%、100.24%、99.87%、100.92%、99.36%、100.03%,RSD值分别为2.03%、2.51%、2.33%、3.07%、2.77%、3.41%。不同产地的穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的质量分数分别为1.587~4.837%、0.260~1.950%、0.477~1.317%、0.037~0.187%、0.801~3.813%、0.088~0.524%。结论该方法快速、简便、准确,可用于穿山龙药材的质量控制。

伪原薯蓣皂苷对OX-LDL诱导人冠动脉平滑肌细胞COX-2表达的影响

目的:研究伪原薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导人血管平滑肌细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响及机制。方法:培养人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC),加入伪原薯蓣皂苷预处理细胞24小时,加入OX-LDL诱导COX-2表达,采用RT-q PCR和Western blot方法分别检测COX-2的m RNA和蛋白表达水平,检测了与COX-2炎症信号通路相关的激酶活性。结果:伪原薯蓣皂苷(60、30、15μg/ml)为有效剂量,可显著降低OX-LDL诱导的COX-2表达,呈现剂量依赖。伪原薯蓣皂苷(60、30、15μg/ml)也明显抑制与COX-2表达相关的TLR2表达和p38MAPK等激酶活性。结论:伪原薯蓣皂苷通过影响TLR2/p38MAPK通路而抑制下游炎症介质COX-2表达,可能是抑制OX-LDL引起的平滑肌细胞炎性损伤的机制。

UPLC法同时测定云南重楼栽培品中11种皂苷的含量

目的:建立超高效液相色谱法同时测定云南重楼栽培品中伪原薯蓣皂苷、伪原纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅴ共11种甾体皂苷的含量。方法:采用CORTECS UPLC C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.6μm)色谱柱,以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0~18 min,30%A→50%A;18~28 min,50%A),流速0.3 mL·min^(-1),检测波长203 nm,柱温30℃,进样量1μL。结果:伪原薯蓣皂苷、伪原纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅴ线性范围分别为2.006~401.2、2.024~404.8、1.972~394.4、1.912~382.4、1.896~379.2、1.772~354.4、2.056~411.2、2.016~403.2、1.970~394.0、1.736~347.2、1.756~351.2μg·mL^(-1);平均回收率(n=6)分别为98.73%、100.30%、101.90%、99.52%、98.33%、100.25%、98.57%、97.70%、101.63%、100.16%和98.80%,RSD分别为2.09%、2.41%、1.77%、2.74%、1.50%、2.35%、2.06%、1.76%、2.82%、2.05%和1.86%。云南重楼栽培品中上述11种甾体皂苷的含量分别为0~0.874、0~0.764、1.066~5.144、0~0.327、1.192~1.952、0~0.455、2.442~6.182、0.394~0.954、0~0.681、2.182~10.105、0~0.674 mg·g^(-1)。结论:该方法可用于同时测定云南重楼栽培品中11种甾体皂苷的含量,为云南重楼药材的质量评价提供参考。

穿龙薯蓣中抗血栓活性成分研究

目的为进一步寻找穿龙薯蓣Dioseorea nipponica抗血栓活性成分,对其甾体皂苷类化学成分进行了系统的分离。方法采用正相、反相等色谱分离手段进行分离纯化,通过物理化学方法,根据MS、NMR谱数据,对得到的化合物进行结构鉴定。结果共分离得到9个化合物,分别鉴定为薯蓣皂苷元(1)、薯蓣皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖苷(2)、薯蓣皂苷元-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(3)、薯蓣皂苷元-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→4)]-β-D-葡萄糖苷(4)、薯蓣皂苷(5)、纤细皂苷(6)、伪原薯蓣皂苷(7)、26-O-β-D-葡萄糖基-3β,26-二醇-25(R)-Δ5,20(22)-二烯-呋甾-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(8)、26-O-β-D-葡萄糖基-3β,26-二醇-25(R)-Δ5,20(22)-二烯-呋甾-3-O-[α-L-鼠李糖基(1→4)]-O-β-D-葡萄糖苷(9)。结论化合物3、4及7～9为首次从该植物中分离得到。大鼠静脉旁路血栓形成试验表明,化合物2和5显示出一定的抗血栓活性。

基于UPLC指纹图谱结合化学计量学评价不同产地盾叶薯蓣药材质量

目的建立盾叶薯蓣Dioscorea zingiberensis的UPLC指纹图谱,分析不同产地盾叶薯蓣质量特征的共有性和差异性,为盾叶薯蓣药材的质量评价提供科学依据。方法采用色谱柱Infinity Lab Poroshell 120 EC-C18(150mm×2.1mm,2.7μm),以乙腈(B)-水(A)为流动相梯度洗脱,体积流量0.3mL/min,检测波长203nm,柱温30℃,建立65批不同产地盾叶薯蓣药材的UPLC指纹图谱;利用SPSS19.0和SIMCA14.1软件对不同产地的盾叶薯蓣药材进行质量评价及差异性分析。结果盾叶薯蓣药材UPLC指纹图谱共标定31个共有峰,指认出的5种皂苷类成分和其他未知成分均作为主要信息参与了盾叶薯蓣的质量表达,主成分载荷值的综合得分表明不同产地盾叶薯蓣药材的综合质量差异较大,主成分分析(PCA)结果显示不同产地盾叶薯蓣的化学质量特征存在差异,且各自聚为一类,其中湖北丹江口地区盾叶薯蓣与其他产地样品均存在较大差异;偏最小二乘法分析(PLS-DA)模型筛选出的5、28、11、12、29、18、16、31、13号色谱峰所代表的成分是造成盾叶薯蓣样品间差异的主要标志性物质,其中28、29号峰分别为盾叶新苷和三角叶薯蓣皂苷。结论本研究建立的盾叶薯蓣UPLC指纹图谱可以较为全面地表征其化学质量特征,指纹图谱的化学计量学分析结果为盾叶薯蓣质量标志物的筛选及质量标准的制定提供科学依据。

HPLC-DVD变波长法同时测定跌打止痛散中6种指标成分

目的建立HPLC-DVD波长切换联合梯度洗脱法同时测定跌打止痛散（DZS）中6种指标成分羟基红花黄色素A、薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的量。方法采用HPLC-DVD法,Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱;乙腈-0.4%甲酸水溶液为流动相,体积流量0.9 m L/min,梯度洗脱;羟基红花黄色素A的检测波长为403 nm,薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的检测波长为203 nm;进样量为20μL。结果 6种指标成分羟基红花黄色素A在3.46-69.20μg/m L（r=0.999 4）、薯蓣皂苷在9.52-190.40μg/m L（r=0.999 7）、原薯蓣皂苷在8.74-174.80μg/m L（r=0.999 6）、甲基原薯蓣皂苷在4.45-89.00μg/m L（r=0.999 9）、伪原薯蓣皂苷在2.64-52.80μg/m L（r=0.999 5）、纤细薯蓣皂苷在3.28-65.60μg/m L（r=0.999 8）质量浓度与峰面积具有较好的线性关系;精密度、重复性良好,RSD均小于2.0%;供试品溶液在室温条件下12 h内稳定;平均加样回收率和相应的RSD分别为98.57%、1.59%;97.64%、1.28%;99.43%、1.07%;97.98%、1.64%;98.57%、1.16%;97.17%、1.37%。结论建立的HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定DZS中的6种成分,方法操作简便、快速、准确,可作为DZS全面可靠的质量控制方法。