伴刀豆球蛋白A识别正常与肝癌γ-谷氨酰转移酶的实验观察

目的 :观察伴刀豆球蛋白A是否能有效的区分出正常与肝细胞肝癌特异γ 谷氨酰转移酶 (HCC SGGT) ,为进一步建立简便、快速、灵敏、特异的检测肝癌特异GGT的方法奠定基础。方法 :用植物凝集素亲和微柱法 ,二步洗脱 ,分离 10例正常人、5例肝细胞肝癌病人、5例良性肝病病人血清中的GGT ,用速率法检测酶活性。得到层析图谱、总酶活性比和亲和率。结果 :正常与良性肝病病人血清第一步洗脱的酶活性较低(平均峰高分别为 1 62 ,1 2 6) ,而肝癌病人血清第一步洗脱的酶活性较高 (平均峰高为 16 8)。总酶活性比分别为 0 2 4,0 13 ,0 48;亲和率分别为 80 6% ,88 1% ,67 6%。结论 :伴刀豆球蛋白A与正常人、良性肝病病人血清中的GGT亲和性较强 ,与肝癌病人血清中的GGT亲和性较弱 ,伴刀豆球蛋白A能有效的区分出正常与肝癌特异GGT ,利用该特性可建立检测肝癌特异GGT的植物凝集素亲和法。

脂多糖及伴刀豆球蛋白A诱导脾淋巴细胞增殖试验方法用于免疫毒性评价的可行性研究

目的研究脂多糖（LPS）及伴刀豆球蛋白A（ConA）诱导脾淋巴细胞增殖试验的两种方法用于免疫毒性评价的可行性。方法雄性Wistar大鼠40只，体重180～200g，随机分为对照组和2，5，10mg／kg环磷酰胺染毒组，每组10只大鼠，各剂量组每日灌胃染毒1次，连续28d，对照组给予生理盐水。染毒结束后24h，断头处死大鼠，取脾脏，制浓度为3×10^6个／ml的脾细胞悬液，用MTT方法进行LPS及ConA诱导脾淋巴细胞增殖试验。结果10mg／kg环磷酰胺染毒组大鼠的B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖能力（吸光度值，分别为0．032±0．037和0．028±0．050）低于对照组的B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖能力（分别为0．124±0．093和0．458±0．320），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论LPS及ConA诱导脾淋巴细胞增殖试验的两种方法用于免疫毒性评价具有可行性。

伴刀豆球蛋白A-糖复合物的模拟分析

主要分析 Con A与不同的糖特异性结合时其活性位点构象变化的特征。模拟分析了 Con A糖结合活性中心氨基酸残基结构特征 ,同时对相应残基原子可及性表面进行了计算和分析。结果表明 :(1) Con A在和不同的糖结合时 ,存在不同的结合方式 ;(2 )不管 Con A和什么糖结合 ,主要的作用是由活性中心的 Tyr12、Asn14、Asp2 0 8和 Arg2 2 8提供的 ;(3)无论是结合单糖还是寡糖 ,活性中心总是与第一个糖环起主要的结合作用。

三种品系小鼠对伴刀豆球蛋白A所致急性肝损伤的耐受性比较研究

目的应用不同剂量伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导三种不同品系小鼠急性肝损伤,比较肝酶变化、死亡率和肝组织病理学变化。方法分别用6、12、20和30 mg·kg-1 ConA处理C57BL/6J、BABL/c和KM小鼠,8 h后对比观察急性肝损伤动物血清酶学及肝组织病理学变化情况。结果在6 mg·kg-1 ConA的作用下,三个品系小鼠均被成功制造出急性肝损伤模型;在12 mg·kg-1ConA作用下,KM小鼠血清ALT和AST分别为(1006.8±12.1)U/L和(1391.8±13.4)U/L,显著高于BABL/c小鼠[(75.7±0.5)U/L和(284.7±23.4)U/L)和C57BL/6J小鼠(104.4±32.2)U/L和(492.2±12.3)U/L,P均<0.05];同样,KM小鼠肝指数和脾指数分别为(5.4±0.3)和(0.7±0.5),均显著高于BABL/c小鼠[(5.2±0.4)和(0.6±0.3)和C57BL/6J小鼠(5.0±0.6)和(0.6±0.2),P均<0.05];在20 mg·kg-1ConA作用下,三组小鼠血清AST和ALT水平无统计学差异,但BABL/c小鼠(4/10)和C57BL/6J小鼠(5/10)死亡率显著高于KM小鼠(1/10);在30 mg·kg-1ConA作用下,三个品系小鼠死亡率均较高(KM小鼠为30%,BABL/c和C57BL/6J小鼠均为100%)。结论不同品系的小鼠对ConA的耐受性不同,KM小鼠对ConA的耐受性明显优于BABL/c小鼠和C57BL/6J小鼠,且呈剂量依赖性。

二甲双胍激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)缓解伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠急性爆发型肝炎

目的研究二甲双胍(Met)对伴刀豆球蛋白A(ConA)所致急性爆发型肝炎小鼠的保护作用并探索其机制。方法C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(NC组)、ConA组、Met组,每组8只。后两组分别灌饲0.2 mL生理盐水和100 mg/kg Met连续5 d后,尾静脉注射0.1 mL ConA(25 mg/kg)建立小鼠急性爆发型肝炎模型,18 h后处死。全自动生化分析仪检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及总胆红素(TB)水平;HE染色观察小鼠肝组织病理改变;免疫组织化学染色法检测肝组织巨噬细胞浸润;实时定量PCR检测肝脏组织白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达;血细胞分析仪检测小鼠外周血白细胞(WBC)总数及其中淋巴细胞数量,流式细胞术检测脾细胞中Th17细胞比例;免疫荧光组织化学染色检测肝组织胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达;Western blot法检测肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和磷酸化的AMPK蛋白表达。结果与ConA组相比,Met组小鼠血清ALT、AST及TB明显下降,肝病变减轻,巨噬细胞浸润减少,外周血白细胞总数及其中淋巴细胞数量增多,脾脏中Th17淋巴细胞比例下调,IL-1β、IL-6及TNF-α的水平降低,凋亡下降,磷酸化的AMPK的表达升高。结论Met通过激活AMPK,降低Th17细胞比例,抑制肝脏炎细胞浸润和炎细胞因子产生,减轻ConA诱导的肝损伤。

乳过氧化物酶与伴刀豆球蛋白A共修饰电极的电化学活性研究

用乳过氧化物酶（LPO）和伴刀豆球蛋白A（Con A）共修饰金电极,首次得到了乳过氧化物酶的直接电化学响应,在此基础上研究了乳过氧化物酶对过氧化氢（H2O2）的电催化活性,并研究了一氧化氮（NO）对LPO电催化活性的影响。在Con A的作用下,乳过氧化物酶在循环伏安图中显示1对准可逆的氧化还原峰,表现出薄层电化学行为。在pH 7.4的磷酸缓冲溶液中的表观氧化还原电位为-190 mV。该共修饰电极对H2O2表现出电催化还原活性,由此构建的传感器对H2O2的检测范围是2.0×10^-5-4.0×10^-3mol/L。实验发现,微摩尔量级的NO会抑制乳过氧化物酶对H2O2的催化活性。

伴刀豆球蛋白A刺激高胆固醇血症兔的单核细胞释放高水平的生长因子

复制高胆固醇血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ，ＨＣ）兔模型，取其血液分离单核细胞（ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ，ＭＣ），培养于含或不含伴刀豆球蛋白Ａ（ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ，ＣｏｎＡ）的无血清ＤＭＥ／Ｆ１２培养基中，收集不同条件的ＭＣ条件培养基（ＭＣ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉｕｍ，ＭＣ－ＣＭ）。并检测其促有丝分裂活性。结果表明。

伴刀豆球蛋白A与感染抗青蒿酯钠伯氏疟原虫红细胞的凝集反应

伴刀豆球蛋白Ａ与感染抗青蒿酯钠伯氏疟原虫红细胞的凝集反应吕丽莉刘爱如赵东坡隋在云山东省中医药研究所２５００１４关键词伴刀豆球蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）感染伯氏疟原虫抗青蒿酯钠株红细胞感染伯氏疟原虫正常株红细胞正常红细胞凝集反应中国图书资料分类法分类号Ｒ３２...

伴刀豆球蛋白A/葡聚糖修饰的金纳米颗粒自组装膜增强信号的表面等离子体共振葡萄糖传感器

通过特异性识别作用在表面等离子体共振传感器的金膜表面构建了伴刀豆球蛋白A/葡聚糖修饰的金纳米颗粒自组装膜。当有葡萄糖存在时,膜被分解,从而实现对葡萄糖的灵敏检测。结果表明:由于金纳米颗粒和金膜之间的等离子体波耦合作用,修饰了金纳米颗粒的自组装膜上,葡萄糖的检测信号有明显增强。该传感器可以选择性地检测0.1～100mmol/L浓度范围内的葡萄糖溶液,且敏感膜可以多次再生使用。

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜受体结合对膜下F－actin的影响

配体与膜受体结合可启动细胞信息传递通路，激活细胞并产生生物学效应。应用共聚焦激光扫描显微术，流式细胞分光光度计，生物活性测量等技术，研究ＭＡ与巨噬细胞膜受体结合后，膜下肌动蛋白丝构筑和含量随时间变化，以及细胞热能量改变。结果是ＣｏｎＡ结合巨噬细胞膜受体后，膜下肌动蛋白多聚化加快，构筑成细胞内Ｆ－ａｃｔｉｎ立体空间网络，Ｆ－ａｃｔｉｎ含量增加具有时间相关性，细胞热能量增加。巨噬细胞内这些变化提示ＣｏｎＡ通过膜受体诱导膜下肌动蛋白多聚化和构筑过程有信息传递和激活细胞等重要作用。

伴刀豆球蛋白A中铽(Ⅲ)和钴(Ⅱ)之间的能量转移——一种新的金属离子之间距离的探针

基于Frster偶极-偶极无辐射能量转移机理估测溶液状态下能量给予体和接受体之间的距离已广泛应用于生物大分子的构象分析中,但仍局限于有机物基团之间的距离测定,Horrocks等人用铽和钴离子作为探针测定了嗜热菌蛋白酶分子内一个钙离子与锌离子之间的距离。

诸葛菜花粉粒表面伴刀豆球蛋白A受体扫描电镜观察

诸葛菜花粉粒表面伴刀豆球蛋白Ａ受体扫描电镜观察刘智慧，郑常文，董长江，黄玉祥，罗鹏（四川大学生物系，成都６１００６４）张明珍（四川师范大学生物系，成都６１００６６）有花植物的有性生殖过程是从花粉粒与柱头表面某些识别物质的特异性作用开始的，尽管花粉粒和...

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜上受体作用下膜变形性及细胞吞噬能力变化

本文采用图像分析、相差显微、生物活性测定等技术,研究ConA与巨噬细胞膜受体结合后对细胞行为与功能的影响. ConA与受体结合后巨噬细胞膜面积增大、变形性和吞噬能力增强、细胞产热量增加,表明细胞膜结构与功能发生变化.本实验是将图像分析技术用来研究相对图像采集速度要慢得多的活细胞特性的一次成功尝试.

呕吐毒素处理对伴刀豆球蛋白A刺激鸡脾脏淋巴细胞的体外影响

本试验研究了呕吐毒素(DON)处理对伴刀豆球蛋白A(CoA)刺激脾脏淋巴细胞的体外影响。鸡脾脏分离得到的淋巴细胞用12.5μg/mL CoA刺激,然后用不同浓度(0~50μg/mL)DON处理18小时,测定了细胞内钙离子浓度、pH值、钙调蛋白(CaM)mRNA水平和Na^+,K^+-ATP酶及Ca^(2+)-ATP酶活性。结果显示,随着DON处理水平提高,细胞内钙离子浓度和CaM mRNA水平呈剂量依赖性升高,也相同程度提高了ATP酶活性,处理组和对照组间差异达到显著或极显著水平(P<0.05或P<0.01)。试验结果提示,细胞内钙稳态失调和酸化是DON对鸡淋巴细胞毒性的关键机制。

伴刀豆球蛋白A诱导肝细胞损伤的磷酸化蛋白质组学研究

目的·研究伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导肝细胞损伤过程中全细胞蛋白质的磷酸化修饰水平的变化规律。方法·将小鼠肝细胞株AML12与ConA(10μg/mL)共培养,诱导肝细胞损伤模型,12 h后提取细胞的总蛋白,经消化酶解后富集肽段,并使用高效液相-质谱联用分析仪进行检测。采用非标定量法对磷酸化位点和肽段进行鉴定与相对定量分析。筛选出单位点磷酸化修饰水平差异达到2倍以上的蛋白进行生物学功能富集分析和蛋白互作调控网络分析。结果·在ConA诱导的AML12细胞损伤模型中,共鉴定到磷酸化修饰肽段11200条,可定位定量的肽段2685条。其中差异性调控的磷酸化修饰肽段82条,对应77个蛋白。这77个磷酸化蛋白主要与蛋白质结合、酶活动等相关,且主要通路与细胞凋亡以及RAS激酶通路相关。结论·AML12细胞在ConA诱导的肝细胞损伤过程中发生了磷酸化修饰变化,差异磷酸化修饰的蛋白可能与肝细胞凋亡相关。

伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜受体结合引起膜蛋白和膜脂分子运动及电荷的变化

本文利用荧光漂白恢复,顺磁共振和细胞电泳等技术研究外源性配体伴刀豆球蛋白A与巨噬细胞膜受体结合后膜蛋白及膜脂分子运动以及细胞表面电荷变化,结果表明,细胞膜表面蛋白分子侧向扩散速度减慢;膜脂分子流动性减慢,烃链有序性增强;细胞电泳速度加快。此等对阐明伴刀豆球蛋白A作为外源信息导致细胞膜分子动力学变化以及电荷改变有重要的生物学意义。

伴刀豆球蛋白A和层粘连蛋白与膜受体结合下膜分子运动及微丝组装变化的比较

研究伴刀豆球蛋白A和层粘连蛋白分别与小鼠腹腔巨噬细胞膜受体结合下引起细胞膜分子运动的变化和对微丝组装的影响.结果表明,伴刀豆球蛋白A和层粘连蛋白作用下均导致膜表面蛋白分子的侧向扩散速率减慢,膜脂流动性降低,加快膜内微丝组装并使微丝含量增加.两配体作用下引起细胞上述反应有相似性.

伴刀豆球蛋白A，核糖和腺嘌呤协同促进缺血后心功能不全的恢复

急性缺血后心功能不全可能与细胞膜损害及高能化合物的合成障碍有关。用Ｗｉｓｔａｒ大鼠进行离体心脏灌注，３０ｍｉｎ全心缺血和３０ｍｉｎ再灌注导致心肌收缩力显著下降，细胞内钙含量升高和肌酸激酶漏出。用核糖（１ｍｍｏｌ·Ｌ１）和腺嘌呤（１ｍｍｏｌ·Ｌ１）进行再灌注，上述各项指标均无改善。用伴刀豆球蛋白Ａ（４０ｍｇ·Ｌ１）进行再灌汁，细胞内钙负荷减轻，肌酸激酶漏出减少，同时心肌收缩力增加，但ＡＴＰ含量无改善，用核糖，腺嘌呤和伴刀豆球蛋白Ａ联合进行再灌注，不但心肌收缩力显著升高，细胞内钙负荷减轻，肌酸激酶漏出减少，而且高能磷酸化合物含量显著恢复。实验表明，ＡＴＰ前体不能在短时间内使急性缺血后心功能不全恢复，但在伴刀豆球蛋白Ａ的协同作用下，能快速地恢复心肌收缩力和ＡＴＰ含量。

水飞蓟素对伴刀豆球蛋白A致免疫性肝损伤小鼠的保护作用

目的研究水飞蓟素对伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的免疫性肝损伤小鼠的保护作用,探讨其可能的肝保护机制。方法将实验小鼠30只随机分为对照组、模型组、水飞蓟素组(200 mg·kg^(-1)),各10只。对照组和模型组小鼠按10 m L·kg^(-1)灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水溶液,水飞蓟素组小鼠灌胃同等容量的水飞蓟素(200 mg·kg^(-1),0.5%CMC-Na混悬),每日1次,共10 d。实验末期,模型组和水飞蓟素组小鼠尾静脉注射Con A(15 mg·kg^(-1))建立小鼠免疫性肝损伤模型,检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色法观察肝组织病理学变化。ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果水飞蓟素明显降低Con A所致免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST和ALP水平(P<0.01),还可增加肝组织SOD、CAT、GSH的活性,降低肝组织MDA水平(P<0.05或P<0.01),明显改善肝脏病理组织状况;显著降低小鼠血清TNF-α、IL-4和IL-6含量(P<0.01)。结论水飞蓟素能明显减轻Con A诱导的小鼠免疫性肝损伤,该作用与其增加肝组织中抗氧化酶的活性、降低脂质过氧化水平、降低TNF-α、IL-4和IL-6等促炎因子水平有关。

成人骨髓来源间充质干细胞对伴刀豆球蛋白A诱导小鼠免疫性肝损伤的影响

问充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一群来自中胚层的具有强大自我更新和分化潜能的成体干细胞，因其兼具可跨越个体及种属的免疫调节特性，而在组织再生及免疫损伤修复领域被视为重要的种子细胞。近年来，多个研究小组分别采用自体、同种异体乃至异种异体MSCs通过不同给药途径（局部／静彬腹腔）治疗多种免疫损伤性疾病的实验研究均获成功。