14株苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白对猪蛔虫第3期幼虫的毒性比较

14株苏云金芽孢杆菌经培养提取伴胞晶体蛋白并测定其蛋白含量。感染性蛔虫卵经胃感染小鼠 ,3d后宰杀并从小鼠肝脏内分离蛔虫第 3期幼虫 (L 3)。设置空白对照 ,将不同剂量的 Bt伴胞晶体蛋白与 L 3置于培养孔在 37℃的二氧化碳培养箱中 (含 5 % CO2 )培养 ,间隔 12 h检查幼虫活性 ,计算死亡率、校正死亡率及半数致死量。L D50 随着作用时间的延长而逐渐减小。14株细菌伴胞晶体蛋白对 L 3的毒力差异很大。 0 17株对 L 3的杀虫作用快速而持久、毒力最强 ,其 L D50 是所有 14个菌株中最小的 ,作用 12、2 4和 36 h时分别为 1.135 7、0 .2 32 2和 0 .15 32 g/ L。

苏云金芽孢杆菌中华亚种CT-43菌株伴胞晶体蛋白的特性

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)为革兰氏阳性细菌,在其芽孢形成过程中可产生一种对鳞翅目、双翅目和鞘翅目幼虫有高毒力的蛋白质伴胞晶体,近来又发现它对动、植物寄生线虫以及扁形动物门的一些种类有毒,现已成为芽孢杆菌的第二大研究对象。

苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白提取方法比较研究

采用液体双相分层法和等电点沉淀法提取苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白．原子力显微镜观测，发现液体双相分层提取的晶体蛋白具有完整典型的晶体结构；等电点法提取的得率高，不能检测到完整的晶体结构．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，等电点法提取的蛋白质含量是液体双相法提取的蛋白含量的1～2倍．将2种方法提取的晶体蛋白对初孵棉铃虫幼虫生物测定均表现杀虫生物活性，经统计分析，液体双相法提取的蛋白质生测毒力比等电点法的高1．5～3倍．

紫外分光光度法测定苏云金杆菌187菌株伴胞晶体蛋白的应用研究

用紫外分光光度法测定187菌株的晶体蛋白含量,借此推算其制剂的效价,并将此法与常规的生物测定法进行平行比较,发现两者所得结果的符合率达90%以上,紫外分光光度法具有更为简便、快速等突出优点。

紫外分光光度法测定苏云金杆菌187菌株伴胞晶体蛋白的应用研究

用紫外分光光度法测定187菌株的晶体蛋白含量,借此推算其制剂的效价,并将此法与常规的生物测定法进行平行比较,发现两者所得结果的符合率达90%以上,紫外分光光度法具有更为简便,快速等突出优点.

苏云金芽胞杆菌伴胞晶体毒素对小鼠体内猪蛔虫三期幼虫的作用及其免疫组织化学定位

将培养好的感染性猪蛔虫卵以每只5×103个虫卵感染小鼠,于次日以不同方式(灌胃、肌肉注射、静脉注射和腹腔注射)注入苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白(insecticidal crystal proteins,Icps),对照组静脉注射BSA(小牛血清白蛋白),每只0.5mL,连续3d。小鼠于第6天剖杀,肝脏分离幼虫,计算减虫率。取肝脏,以4%多聚甲醛固定48h,制作石蜡切片,应用免疫组织化学SABC法定位蛔虫幼虫体内的Icps。研究结果显示,静脉注射晶体蛋白毒素效果最好,减虫率达到72.7%;肌肉注射、灌胃、腹腔注射效果次之,分别为19.1%、14.6%、14.36%。免疫组织化学研究显示,Icps结合到虫体的体表及肠道。

苏云金芽孢杆菌的伴胞晶体形成过程分析

通过对苏云金芽孢杆菌的伴胞晶体的染色形成过程的观察,分析其形成的影响因子,掌握伴胞晶体形成和积累的因素。

对植物寄生线虫具有活性的苏云金芽胞杆菌研究进展

植物寄生线虫是重要的植物病原物之一,给农业生产带来了巨大的经济损失。长期以来,一直缺乏有效防治植物寄生线虫的手段。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是重要的昆虫病原细菌,广泛应用于鳞翅目、双翅目、鞘翅目害虫等农林及卫生害虫的防治;部分Bt菌株对植物寄生线虫具有很高的活性。本文总结了杀植物寄生线虫Bt菌株筛选的模型与方法的建立、Bt菌株杀植物寄生线虫的作用机理及其相关应用、以及杀植物寄生线虫的伴胞晶体蛋白与相关基因等,可望为杀植物寄生线虫Bt制剂的研究与开发提供借鉴。

响应面法优化苏云金芽胞杆菌YC-10发酵培养基

为获得杀线虫Bt菌株YC-10最佳培养基配方,以发酵液中伴胞晶体蛋白浓度为评价指标,利用Plackett-Burman实验设计和响应面分析法对YC-10的培养基配方进行室内摇瓶优化筛选.实验结果表明:大豆饼、玉米粉、氯化钙和磷酸氢二钾为4个显著影响因子,YC-10最优培养基配方为:黄豆饼25.73 g/L,玉米粉12.57g/L,CaCl_20.25 g/L,K_2HPO_40.43 g/L,ZnSO_40.20 g/L,MgSO_40.20 g/L,MnSO_40.25 g/L,FeSO_40.25 g/L.

杀线虫苏云金芽胞杆菌的作用机理及研究进展

综述了国内外杀线虫苏云金芽胞杆菌的作用机理及研究进展,介绍了杀线虫Bt菌株的发现及其活性成分,阐述了Bt对植物寄生线虫的作用机理以及相关基因的研究现状,并对其发展进行了展望。

海南岛热带雨林区芽孢杆菌收集及Bt菌鉴定

本研究系统地对海南岛热带雨林自然保护区进行了土壤样品的采集、芽孢杆菌的分离收集和Bt菌株的鉴定。从尖峰岭热带雨林区、五指山热带雨林区、吊罗山热带雨林区、霸王岭热带雨林区总共采集了土壤样品1882份,采用醋酸钠培养基结合高温方法分离出芽孢杆菌3924份,鉴定出Bt分离株158份,Bt菌株的分离率和出菌率分别为4.03%和8.40%。结果分析表明,海南岛热带雨林区芽孢杆菌及Bt菌株分布对环境和生态表现出一定的规律性,一般海拔900m至1400m的Bt菌株含量高、植被覆盖率高,土壤腐殖质含量高的热带沟谷雨林带Bt菌株含量最高。显微观察发现,获得的Bt菌株其伴胞晶体有菱形、球形、方形、椭球形、不定性等多种形状。利用SDS-PAGE方法对获得的Bt分离株进行了伴胞晶体进行分析,发现伴胞晶体的分子量有20kD到150kD不等。进一步利用PCR-RFLP技术对Bt分离株进行了cry基因型的分析,初步发现这些Bt菌株含有cry1、cry3、cry4、cry6、cry30、cry40等基因型。我们还利用鳞翅目昆虫小菜蛾和鞘翅目昆虫椰心叶甲进行部分Bt分离株的生物测定,初步结果显示本研究鉴定出的Bt分离株具有不同的抗虫靶标,对同一靶标昆虫也表现出不同的杀虫活性。整体而言,本研究结果显示出海南岛热带热带雨林自然保护区因其独特的热带地理生境、自然的生物演化系统,使得热带雨林区蕴藏了Bt菌株资源多样化,值得期待挖掘出一些新的菌株和新的基因资源。

黑龙江凉水自然保护区苏云金芽孢杆菌的收集与鉴定

黑龙江凉水自然保护区是我国现有保存下来的较大片原始红松林基地之一，总面积6394hm^2，森林覆盖率95％以上。本研究从小兴安岭凉水自然保护区采集土样782份，采用醋酸钠培养基结合高温方法筛选土壤中的芽孢杆菌，通过光学显微镜观察鉴定产生伴胞晶体的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis．Bt）。总计分离得到芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌分别为1735株和33株，Bt菌株的分离率和出菌率分别为1．90％和4．22％。利用SDS-PAGE和PCR—RFLP方法对筛选获得的成分离株进行了杀虫晶体蛋白和基因型分析，结果表明14株产菱形伴胞的＆菌株，SDS-PAGE电泳分析芽孢后期产生分子量大小130kD蛋白带，PCR-RFLP分析初步鉴定为crylAc基因，其它产圆形或其它不定形晶体蛋白的＆分离菌中，芽孢后期主要蛋白大小为20～150kD不等，PCR—RFLP方法鉴定结合PCR片段测序分析这些菌株含有新型cry4、cry39和cry40基因等。本研究是“中国助资源收鉴与利用”项目组成部分之一，凉水自然保护区苏云金芽孢杆菌的收集与鉴定目的是要对整个东北地区成资源分布和多样性作一个初步评估，实验结果表明东北森林地区具有丰富多样的威菌株和杀虫基因资源。

苏云金芽孢杆菌防治蠕虫的研究进展

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)能在菌体内形成具有芽孢性质的伴胞晶体,晶体对动植物寄生线虫和原生动物具有特异的杀虫活性,而对人畜无毒,不污染环境。利用苏云金芽孢杆菌伴胞晶体制剂来防治蠕虫病是一个全新的领域,如果这种制剂能治疗蠕虫病,必将推动蠕虫净化的进程。

海南岛中南部热带雨林杀秀丽隐杆线虫Bt菌株筛选

植物寄生线虫对全世界的农作物造成了严重破坏并且难以防治,迫切需要开发高效并对环境友好的生物防治策略。本研究从海南中南部的尖峰岭、五指山、大里山、鹦哥岭热带雨林共采集1613份土壤样品,筛选分离出芽孢杆菌4399份,鉴定出Bt分离株224株,Bt菌株的分离率为5.09%。以模式生物秀丽隐杆线虫作为生物测定的靶标,筛选鉴定6株Bt菌株芽孢期蛋白对秀丽隐杆线虫有较好的杀虫活性。本研究在国内是首次对海南岛热带雨林杀线虫细菌资源进行调查,获得的杀线虫Bt菌株将来有可能进一步应用于植物线虫的生物防治。