Attacin抗菌肽基因体内抗菌活性研究

目的建立Attacin基因体内抗菌活性检测系统,并初步研究其抗菌活性。方法PCR扩增Attacin编码区目的序列,并构建原核表达重组质粒,转化大肠埃希菌,在体内检测Attacin的抗菌活性,同时SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果与未诱导对照相比,包含重组质粒的宿主菌生长受到抑制,含pET30a(+)/Attacin宿主菌诱导表达后,提纯不到His-Attacin融合蛋白,而含pGEX-4T-1/Attacin宿主菌可获得GST-Attacin融合蛋白。结论建立灵敏、简便的Attacin体内抗菌活性检测方法,为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定基础。

促红细胞生成素定点突变及活性考察

促红细胞生成素（EPO）是一种多效细胞因子,具有促进红细胞生成和组织修复作用,在用于组织修复时会导致血粘度升高,改变其结构降低副作用是其应用的关键。我们对EPO进行定点突变,筛选能够降低促红细胞生成的突变体,为进一步组织修复研究提供基础。本实验中我们利用定点突变试剂盒分别将人源性促红细胞生成素中7个赖氨酸突变为谷氨酰胺;原核表达并纯化突变蛋白;所得产物腹腔注射KM小鼠体内,通过检测小鼠血中的网织红细胞指数考察mEPO（mutantEPO）的活性。rhEPO（recombinantEPO）及7个mEPO组的网织红细胞指数与阴性对照组比较,p值均小于0.05,有显著性差异;mEPO（K97Q）与rhEPO阳性对照组比较,p〈0.05有显著性差异,这说明原核表达的rhEPO及mEPO均具有促红细胞生成活性,mEPO（K97Q）的促红细胞生成作用明显降低,可能在组织修复过程中减少副作用的发生,为进一步多点突变奠定了基础。

近交系小鼠C57BL/10和C57BL/6的全基因组学差异研究

目的:利用全基因组测序方法比较近交系小鼠C57BL/10和C57BL/6的基因组差异,并筛选免疫应答差异基因,对建立药物体内活性评价动物模型具有重要参考意义。方法:采用Illumina Hiseq 2500测序平台对近交系小鼠C57BL/10进行全基因组测序,与近交系小鼠C57BL/6参考全基因组进行比对。将变异检测得到的SNP位点,去掉同义突变之后,利用NCBI中BioMart进行功能注释。提取出免疫相关的转录本ID、基因ID和功能注释的信息,并与近交系小鼠C57BL/6参考全基因组进行比对。结果:获得C57BL/10小鼠原始数据量80.871G,过滤后的有效数据量79.322G,通过与C57BL/6小鼠参考基因组比对和基因功能分类,筛选出4个免疫应答差异基因。结论:本研究发现近交系小鼠C57BL/10和C57BL/6基因组的免疫应答基因存在显著差异。在分析中筛选出4个小鼠免疫应答差异基因,为建立生物制品体内评价实验动物模型和标准化提供了新的线索和技术手段。

近交系小鼠C57BL/6和C57BL/10的转录组差异研究

目的:对近交系小鼠C57BL/6和C57BL/10进行转录组测序,对比其转录组差异,发现免疫反应相关差异基因,为药物体内活性评价动物选择提供参考。方法:采用Illumina Hiseq 2000测序平台进行测序,通过短序列分析获取转录本,通过基因功能分类(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行测序结果分析。结果:获得38 553 614个C57BL/6小鼠的原始序列和37 721 318个C57BL/10小鼠的原始序列。获得118 002个转录本,注释了46 193个差异基因。38 106个转录本注释到2 196个GO分类中,GO分类主要分为3类:细胞成分,分子功能和生物过程。1 600个转录本注释到254个KEGG通路中。另外,发现了4 651个单核苷酸(SNP)位点。结论:通过二代测序方法发现近交系小鼠C57BL/6和C57BL/10转录组存在显著差异基因。在KEGG通路分析中筛选了一系列与小鼠免疫应答相关的差异基因,为建立小鼠免疫评价模型积累了数据,对药物实验动物体内活性检测分析具有参考意义,为生物制品评价用实验动物的标准化提供技术支撑。