ATP浓度和缺氧暴露对大鼠脑线粒体RNA和蛋白质体外合成的影响

本文探讨介质中ATP浓度和急、慢性缺氧暴露对大鼠脑线粒体内RNA和蛋白质合成的影响。用差速离心法分离正常和低压舱模拟 4 0 0 0m高原急性连续缺氧暴露 3d和慢性连续缺氧暴露 40d大鼠脑线粒体 ,用体外无细胞 (cell freeinvitro) 3H UTP和3H Leucine掺入法分别测定线粒体RNA和蛋白质合成活性。结果显示 ,大鼠急性缺氧暴露后大脑皮质线粒体RNA体外合成活性降低 40 % ,蛋白质合成活性降低 60 % ;慢性缺氧暴露后线粒体RNA和蛋白质合成活性分别为对照的 72 %和 76% ;ATP对正常大鼠脑线粒体RNA以及蛋白质的体外合成活性的影响均呈双相性 ,大于或小于 1mmol/L均可产生不同程度的抑制效应。结果提示 ,缺氧可在转录和翻译两个水平上影响脑线粒体mtDNA的表达 ,而慢性缺氧暴露时 ,线粒体半自主性功能的改善可能是机体对缺氧适应的细胞机制之一 ;

某些香辛料精油抑制N-二甲基亚硝胺体外合成的研究

模拟在胃液条件下，８种香辛料精油对Ｎ－二甲基亚硝胺（ＮＤＭＡ）体外合成的阻断作用。结果表明，除丁香外，其余７种香辛油都有不同程度阻断ＮＤ－ＭＡ合成的作用。其中，韭菜籽、芫荽籽、姜和小茴香的阻断效果明显优于等剂量的抗坏血酸。７种香辛油均有消除亚硝酸钠的作用，但其消除作用小于等剂量的ＶｉｔＣ液。这表明香辛料精油中的有效成分能消除反应液中的亚硝酸盐。

我国新城疫强毒株F糖蛋白基因的体外合成及其抗原性研究

将我国新城疫强毒株Ｆ４８Ｅ９在ＳＰＦ鸡胚增殖后提取ＲＮＡ，用自行设计的一对寡聚核苷酸引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，合成了Ｆ糖蛋白基因片段。将此片段与ｐＵＣ１９质粒重组，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，从阳性克隆中提取重组质粒，再用ＰＣＲ法扩增，获得了同样大小的ＤＮＡ片段。经用特异性抗体探针检测。

体外合成JSRV mRNA及其体内表达特异性中和抗体的研究

目的:应用假病毒中和法检测体外合成JSRV-env mRNA免疫小鼠产生的特异性抗体。方法:优化PT7TS载体序列,插入目的序列经电泳测序验证后,体外转录合成JSRV-env mRNA,将mRNA与鱼精蛋白结合后皮下注射免疫BALB/c小鼠。采用慢病毒包装系统制作JSRV假病毒,测定假病毒滴度,取不同组免疫小鼠血清进行假病毒为基础的抗体中和实验,检测小鼠体内针对JSRV-env mRNA的特异性抗体。结果:成功体外合成具有稳定性的JSRV-env mRNA;重组了基于慢病毒质粒结构的JSRV假病毒,且具有感染能力;假病毒体外中和实验检测出JSRV-env mRNA免疫小鼠体内产生了针对JSRV的特异性抗体。结论:针对JSRV病毒包膜的信使RNA,经皮下注射到小鼠体内,能够表达产生针对JSRV-env的中和抗体。

卫星RNA对黄瓜花叶病毒基因组RNA体外合成的影响

卫星ＲＮＡ对黄瓜花叶病毒基因组ＲＮＡ体外合成的影响杨海花，康良仪，赵大健，田波（中国科学院微生物研究所，北京１０００８０）关键词卫星ＲＮＡ，黄瓜花叶病毒，依赖ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶，体外合成利用卫星ＲＮＡ生防制剂控制田间的番茄、青椒、烟草等由黄瓜花叶病...

免疫反应性脑啡肽在猪体外合成和分泌

试验证明,脑啡肽ir—MENK不但存在于猪的子宫、卵巢中,而且也存在于由SV40 DNA转染的猪子宫上皮细胞中。用生理盐水冲洗猪子宫腔并收集子宫液,用0.1N乙酸抽提猪卵巢及子宫上皮细胞获得抽提液。细胞培养液经纯化、冻干后再溶解作为分析液。以上几种样本在RIA系统分析。显示子宫液、卵巢、传代细胞的抽提液或培养液的抑制曲线均平衡于已知的MENK标准曲线。G—15葡聚糖凝胶过滤可见它们有相同的峰位,较大部分其分子量与标准的脑啡肽吻合Va=0.38,小部分接近孔隙率(VO)。结果显示,体外培养的猪子宫传代细胞及细胞培养液中的脑啡肽与活体的猪子宫及卵巢的脑啡肽相同。说明猪子宫上皮传代细胞不但可以合成,而且可以分泌脑啡肽。

NADP(H)相关的体外合成乳酸途径构建以及性质研究

活体细胞体内代谢途径调控机制复杂,若能将目的代谢途径移到胞外,则能进行直观研究。选用嗜热酶来源的10条基因,构建一个能实现自我能量ATP和辅酶NADP(H)循环平衡,葡萄糖代谢生成乳酸的体外合成途径。对该途径初步研究表明,最适反应p H7.0,最适反应温度50℃,该条件下添加少量的辅酶NADP+,8 h内能将12.4 g的葡萄糖转化生成9.5 g的乳酸。

牙釉质和羟基磷灰石晶体的体外合成

牙釉质是一种独特的非细胞组成的矿化组织，它是由许多羟基磷灰石晶体（ＨＡ）组成的。尽管人们已在扫描电镜下观察羟基磷灰石晶体的结构，但对羟基磷灰石晶体的具体化学结构仍然不十分清楚。现人们已在体外合成ＨＡ晶体，但多是工业制备。本文将就ＨＡ晶体的体外合成原料、条件等方面作文献回顾。

N-亚视黄基-N-视黄基-乙醇胺的体外合成

组织衰老的过程中由于各种细胞的代谢产物清除不足,细胞内外的代谢产物会出现堆积现象。1842年Han-nover发现随着机体的衰老,组织中的色素会不断积聚增加。这些色素具有脂溶性,可以发出棕色或者黄色的荧光,因此被命名为脂褐素（lipofucin）。脂褐素是细胞衰老过程中出现的具有特征性的物质,其含量增加反映了细胞老化的程度。

天津工业生物所在体外合成昆布二糖方面取得新进展

昆布二糖是β-1,3糖苷键连接的还原性二糖,是一种功能多样的高价值寡糖。它可以作为合成透明质酸的前体物质应用于制药及化妆品行业,作为促发芽剂和天然防腐剂应用于农业领域,且其具有益生作用,可以作为食品添加剂应用于食品保健品行业,另外,还可以调控嗜热菌热纤维梭菌的蛋白表达。

天津工业生物技术研究所体外合成功能性二糖研究取得进展

功能性二糖是一类具有特殊功效的低聚糖,由两个单糖通过不同糖苷键连接而成,具有高甜度、低卡路里、低升糖指数的特点,可作为益生元和功能性甜味剂用于食品领域。此外,某些功能性二糖还因其独特的功能,被广泛应用于化妆品、生物技术和制药等领域。二糖的传统制备方法是天然聚糖的酸解纯化,但对应的天然聚糖供应有限,且酸解产物复杂,纯化成本很高。随着酶催化技术的发展,人们愈发倾向于寻找合适的酶催化制备二糖。目前,在合成糖苷键方面拥有优良特性的糖苷磷酸化酶逐渐引起关注,但是其催化底物1-磷酸糖价格昂贵,导致合成二糖成本较高。

二糖磷酸化酶及其在体外合成生物学中的应用

二糖磷酸化酶是以二糖为底物,催化磷酸向糖基转移,生成糖1-磷酸的一类酶。根据催化反应的立体化学过程可以分为保留型和翻转型,即供体底物二糖的异头构型可以在糖1-磷酸产物中保留或翻转。目前已发现的超过10种的二糖磷酸化酶均分布在糖苷水解酶和糖苷转移酶家族中。根据二糖磷酸化酶的功能设计体外生物合成体系,不仅可以用于制备高价值化学品,例如直链淀粉、肌醇、昆布二糖等,还可生产一些大宗产品,例如在氢能和酶燃料电池开发等方面已取得了进展。随着蛋白质工程的不断发展,对二糖磷酸化酶的研究越来越深入,相信未来二糖磷酸化酶将在体外生物合成平台扮演更重要的角色。

3MP组分可控的共聚酯P(3MP-co-3HB)体外合成及产物性质分析

[目的]以3-巯基丙酸(3MP)作为第二组分,利用设计的单相反应体系实现共聚酯P(3MP-co-3HB)中3MP组分的可控合成,并分析3MP组分掺入对聚羟基丁酸酯(PHB)性质的影响。[方法]根据设计的P(3MP-co-3HB)体外合成途径,利用体外重组表达纯化的乙酰辅酶A合成酶(ACSPt)、CoA转移酶(PCT_(Cp))、PHA合酶(PhaCRe)作为催化剂,以不同摩尔比的(R)-3-羟基丁酸[(R)-3HB]和3MP作为底物,合成共聚物P(3MP-co-3HB)s。利用1H-NMR、GPC、DSC和TG等测试手段分析产物的结构与热性质。[结果]产物的1H-NMR结果表明,3MP∶3HB的摩尔比为0∶1、1∶3和1∶1时,分别合成PHB、P(55.4 mol%3MP-co-3HB)和P(70 mol%3MP-co-3HB),产量分别为2.00 g/L、0.72 g/L和0.26 g/L。产物的GPC结果表明,随着3MP摩尔组分的增加,共聚物的Mn由40.10 kDa增加至45.40 kDa,Mw由91.00 kDa增加至102.80 kDa,PDI在2.25~2.27范围。DSC、TG测试结果表明,P(55.4 mol%3MP-co-3HB)和P(70 mol%3MP-co-3HB)的Tm、Td分别为134.90℃、112.50℃和239.70℃、271.40℃。[结论]利用设计的OPRS可合成含高3MP摩尔比例的P(3MP-co-3HB)s,其3MP组分在0 mol%~70 mol%范围内可控。含有3MP组分的共聚酯能很好地改善PHB的加工性能。

多肽类药物体外合成方法的研究进展

多肽药物因具有相对成本低,生物活性强,副作用小,不蓄积中毒,作用靶点专一等特点而被人们广泛应用。但天然存在的多肽类药物含量较少、纯度较低,无法满足临床的需求。经研究发现,通过体外合成的多肽药物具有合成周期短、生产量大等优势,能够有效克服天然多肽药物的不足,对于推广多肽类药物的应用有重要意义。本文对多肽类药物体外合成方法进行综述,为其今后的发展和临床应用提供参考。

第一个在体外合成的蛋白质——结晶胰岛素全合成的个人追忆

结晶牛胰岛素的全合成于1958年开始，到1965年完成．这项艰巨工作是中国科学院生物化学研究所、有机化学研究所和北京大学化学系合作完成的．参与这项工作的确切人数很难统计，因为很多工作人员没有在发表的文章中署名，其中包括中国科学院生物化学研究所的王应睐所长和曹天钦副所长．我只参与了这个项目的启动和天然猪胰岛素的重合成，因此我的追忆只限于我经历过的和我知道的一些事.

RNA干扰用siRNA的体外转录合成

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具,而获得符合干扰要求的短双链干扰RNA(smallinterferenceRNA,siRNA)是进行RNA;研究的首要步骤。本研究建立了体外转录合成siRNA方法,并用其生成的siRNA干扰鸡成纤维细胞外源绿荧光蛋白(GFP)基因和内源3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的表达。结果显示,siRNA能特异性降低鸡成纤维细胞中内外源基因的表达。本实验认为这种以DNA为模板体外转录合成siRNA方法操作简单、成本低、产物得率高,值得从事RNA研究者参考借鉴。

体外合成mRNA高效电转人胚胎干细胞

建立体外合成mRNA高效转染人胚胎干细胞(h ESCs)的方法,为高效基因转染h ESCs提供一种新选择。体外合成绿色荧光蛋白mRNA(e GFP mRNA)通过脂质体和电转的方法转染h ESCs,流式检测阳性率,台盼蓝染色检测细胞存活率。HN4人胚胎干细胞中转染不同剂量的e GFP mRNA和e GFP质粒,流式检测阳性率和荧光强度。将e GFP mRNA转染HN4和i PS细胞系,流式检测其转染效率。免疫荧光检测电转e GFP mRNA对HN4细胞干性的影响。体外合成红色荧光蛋白(DsRed mRNA)和e GFP mRNA共转HN4细胞荧光显微镜观察共转效果。体外合成e GFP mRNA可通过电转的方式高效进入HN4细胞中,并且电转后细胞状态良好,细胞存活率为94.6%±0.67%,在h ESCs和i PS细胞系中转染效率均达到99%以上。HN4细胞中电转低剂量的e GFP mRNA即可高效进入细胞并持续高效表达4 d。电转e GFP mRNA的HN4细胞可保持良好的干细胞特性,并且多种体外合成mRNA可高效共转h ESCs。体外合成mRNA可通过电转的方式高效转入h ESCs中,体外合成mRNA技术为h ESCs高效基因转染提供了一个新思路。

化学品体外生物合成途径设计、元件组装和应用

随着合成生物技术的发展,体外生物合成逐渐成为化学品合成的重要方式之一,具有环境友好、催化效率高、原子经济性好、可控性强等优点。途径设计是构建整个体外生物合成系统的关键所在,本文分析总结了体外生物合成中应遵循的两个重要原则,包括原子经济性原则和能量最优原则。利用生物大分子将酶元件组装构建成多酶复合体,可提高体外生物合成的反应速率、减少副反应的发生,本文介绍了用于酶元件组装的3类常见生物大分子,包括连接肽、蛋白支架、DNA等。通过近年来体外生物合成在大宗化学品(糖类化学品、有机酸类化学品以及醇类化学品等)生产中的应用案例的介绍,展示了体外生物合成在化学品合成中的应用前景。随着体外生物合成设计能力的不断提高,体外生物合成的途径设计将朝着智能化、高效化发展,化学品体外生物合成的效率也将逐步提高,有望涵盖所有化学品的生物合成,成为未来化学品合成的主要方式之一。

酶法体外高效制备信号分子(pp)pGpp

针对目前信使分子(pp)pGpp提取和合成成本高、时间长、技术难的问题,以现有的体外酶合成(pp)pGpp的方法为基础,建立和优化了新的体外合成技术。结果显示,通过(pp)pGpp合成酶RelA、GppA和YvcI在25 mmol/L Tris-HCl(pH 9.0)、15 mmol/L MgCl_(2)、100 mmol/L NaCl条件下于37℃反应30 min,经阴离子交换进一步纯化,即可获得高纯度(pp)pGpp分子。此方法与传统的细菌或植物体内直接提取、现有的体外酶法制备流程相比,具有操作简单、快速、成本低、环境友好等优势,能够满足下游生化分析和结构生物学实验需求,为微生物信号通路及开发新的抗菌药物研究提供物质基础。