原花青素对青春期前羔羊卵母细胞体外成熟的影响

青春期前羔羊的卵母细胞发育能力低于成年母羊的卵母细胞,这限制了幼畜体外胚胎移植(Juvenile in vitro Embryo Transfer,JIVET)技术的广泛应用。为探讨原花青素B2(Procyanidin B2,PCB2)对提高青春期前羔羊卵母细胞发育能力的影响及其机制,本研究收集了经促性腺激素刺激的4~8周龄羔羊卵母细胞,在体外成熟液中培养。在卵母细胞成熟液中添加5μg/mL PCB2作为PCB2组,未添加PCB2组为对照组,培养24 h后测定卵母细胞第一极体排出率、孤雌激活后的卵裂率和囊胚率,并进一步测定胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)含量、线粒体活性和线粒体膜电位水平等。结果表明:PCB2组卵母细胞第一极体排出率高于对照组(36.76%vs 31.11%,P<0.05),但卵裂率(49.17%vs 49.68%)及囊胚率(47.47%vs 54.06%)与对照组无显著差异;进一步研究发现在IVM液中添加5μg/mL PCB2降低了卵母细胞ROS水平(P<0.01),并提高了GSH水平(P<0.05)、线粒体活性(P<0.01)以及线粒体膜电位水平(P<0.05)。由此可见,在IVM过程中添加5μg/mL PCB2能有效降低青春期前羔羊卵母细胞的氧化应激,提升线粒体功能和成熟效率。

不同培养基对小鼠卵母细胞体外成熟质量及发育潜能的影响

背景:近年,未成熟卵母细胞体外成熟技术的需求逐渐增加。卵母细胞成熟受多种因素影响,其中培养基的选择尤为重要,目前尚无统一方案。目的:用不同成熟培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,研究其对卵母细胞质量及发育潜能的影响。方法:用G-1^(TM)PLUS培养基、CZB培养基和M16培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,并以体内成熟卵母细胞为对照组,比较各组间的体外受精和早期胚胎发育能力。对于各组成熟后卵母细胞,采用免疫荧光方法评估线粒体功能,共聚焦显微镜实时成像系统检测钙震荡情况。结果与结论:①3组之间第一极体排出率无明显差异(P>0.05);②G-1^(TM)PLUS组体外受精率(52.86±11.24)%高于M16组(37.76±6.70)%和CZB组(30.62±5.51)%;CZB组的囊胚率(36.23±6.63)%低于对照组(78.16±4.17)%、G-1^(TM)PLUS组(55.75±7.63)%和M16组(53.36±6.33)%;③与对照组相比,仅CZB组的纺锤体长宽比增加;④CZB组线粒体功能差于对照组、G-1^(TM)PLUS组及M16组,并出现CZB组线粒体异常凝集现象;⑤受精后CZB组及M16组的钙震动频率显著高于G1组和对照组。综上所述,在小鼠卵母细胞体外成熟过程中,G-1^(TM)PLUS、CZB及M16培养基的体外成熟率无差异,但G-1^(TM)PLUS培养基有更高的受精率和囊胚形成率。

丹皮酚对大鼠卵母细胞体外成熟体系氧化应激的调控

目的 研究中药提取物丹皮酚对大鼠卵母细胞体外培养体系氧化应激的改善作用,旨在确定丹皮酚改善氧化应激作用的最佳浓度,以期优化卵母细胞的体外培养体系,提高生产效率。方法 在卵母细胞的体外培养体系中分别添加2 mmol/L、4 mmol/L、6 mmol/L、8 mmol/L、10 mmol/L的丹皮酚,研究体外成熟后卵母细胞的成熟质量和氧化应激水平。结果 添加丹皮酚均能提高卵母细胞的成熟率(P<0.05)。添加8 mmol/L的丹皮酚获得卵母细胞的GVBD率、受精率和囊胚率高于其他组(P<0.05);添加6 mmol/L、8 mmol/L和10 mmol/L组的活性氧水平较低,与2 mmol/L、4 mmol/L组具有极显著差异(P <0.01)。添加丹皮酚能够显著提高成熟卵母细胞BCL-2基因和蛋白的表达水平,降低BAX基因和Caspase-3基因和蛋白的表达水平(P<0.01)。添加8 mmol/L、10 mmol/L组较其它组差异极显著(P<0.01)。结论 在大鼠卵母细胞体外成熟液中添加8 mmol/L的丹皮酚可以提高卵母细胞的体外成熟的生产效率和质量,且能够有效改善氧化应激水平、降低卵母细胞的凋亡。

千金藤素对牛卵母细胞体外成熟中抗氧化能力的影响

为探究千金藤素(Cepharanthine,Ceph)对牛卵母细胞抗氧化能力的影响及作用机制,本实验在牛卵母细胞体外成熟培养基中添加0、10、100、500、1000μmol/L Ceph进行培养,统计第一极体排出率,筛选出Ceph的最佳浓度,根据浓度将分为对照组和Ceph处理组,通过免疫荧光染色法检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)表达水平以及线粒体膜电位水平(JC-1);使用实时荧光定量PCR检测囊胚内抗氧化相关基因(SIRT-1、SOD-1、SOD-2)mRNA转录水平。结果表明:与对照组相比,添加500、1000μmol/L Ceph可显著提高牛卵母细胞第一极体排出率,而10、100μmol/L Ceph组第一极体排出率显著降低,后续采用500μmol/L Ceph用于实验;与对照组相比,添加500μmol/L Ceph显著降低了ROS水平,GSH及JC-1水平显著升高,SIRT-1、SOD-1、SOD-2 mRNA表达水平也显著升高。由此可知,在体外成熟培养基中添加500μmol/L Ceph可以缓解氧化应激损伤,维持线粒体膜电位,从而提高卵母细胞体外发育质量。

玉米赤霉烯酮影响绵羊卵母细胞体外成熟的分子机制研究

实验旨在研究玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对绵羊卵母细胞体外成熟相关基因表达及活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平的影响。采集绵羊卵巢,收集卵母细胞,分为4组,包括对照组(CG组)和实验组(TG1、TG2和TG3组)。CG组不做任何处理,TG1、TG2和TG3组分别在成熟液中添加10、20、30μmol/L ZEA进行体外成熟培养,qPCR技术检测减数分裂成熟和凋亡等相关基因mRNA的相对表达量,ROS检测试剂盒检测卵母细胞内ROS水平。结果表明:与CG组相比,当培养液中ZEA浓度达到20μmol/L时,卵母细胞成熟率显著降低,GPX、SOD1、SOD2、Caspase3、ATG3和ATG7的mRNA表达水平显著升高,而CDC20、GDF9和BMP15的mRNA表达水平显著降低,但LC3、BAX和BCL-2的mRNA表达水平在统计学上没有显著差异;与CG组相比,添加ZEA后卵母细胞内ROS含量极显著升高。以上结果提示,ZEA能通过诱导绵羊卵母细胞发生凋亡和氧化应激,抑制细胞分裂从而影响卵母细胞的体外成熟。

葡萄籽原花青素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

本文旨在研究葡萄籽原花青素(OPC)对绵羊卵母细胞体外成熟的影响。将采集的绵羊卵母细胞分为5组,对照组培养液中不添加OPC,处理组培养液中分别添加20、25、30、35μmol/L OPC,检测体外成熟24 h后卵母细胞成熟率、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、线粒体膜电位,以及卵母细胞抗氧化、卵丘扩张相关基因的表达情况。结果表明:与对照组相比,25μmol/L组卵母细胞成熟率提高,ROS水平降低(P<0.05);25μmol/L组GSH含量高于对照组及其他组(P<0.05);20μmol/L组线粒体膜电位低于对照组(P<0.05),25μmol/L组线粒体膜电位高于对照组(P<0.05);与对照组相比,25μmol/L组卵母细胞中GPX-3、SOD-2、PTX-3、HAS-2mRNA表达水平均升高(P<0.05)。由此可见,绵羊卵母细胞体外成熟培养液中添加25μmol/L OPC可提高卵母细胞体外成熟的效率。

哺乳动物小卵泡卵母细胞体外成熟的研究进展

体外成熟是哺乳动物胚胎工程获得成熟卵母细胞的主要途径,卵母细胞质量直接影响早期胚胎发育,妊娠的建立及维持,胎儿的发育等。哺乳动物卵巢表面数量众多的小卵泡可以作为胚胎工程卵母细胞的来源,但从哺乳动物卵巢获取的卵母细胞成熟差异较大,存在处于发育各个时期的卵母细胞,小卵泡卵母细胞体外成熟质量差,发育能力不足。如何提高小卵泡卵母细胞体外成熟的发育能力以充分挖掘优良母畜的遗传资源,提高胚胎工程效率成为研究热点。基于此,文章概述哺乳动物小卵泡卵母细胞体外成熟的研究进展,比较大、小卵泡卵母细胞物质积累差异、卵泡的卵泡液成分及含量差异以及卵泡颗粒细胞和卵丘细胞的差异,分析哺乳动物小卵泡卵母细胞体外成熟质量差的原因,分析总结提高哺乳动物小卵泡体外成熟卵母细胞发育能力的措施,包括抑制核成熟、成熟前培养、颗粒细胞及卵丘细胞与卵母细胞共培养,期望能够为小卵泡卵母细胞发育调控机制的研究及发育能力的提高提供理论指导。

不同组分体外成熟培养基对绵羊卵母细胞成熟、代谢及孤雌胚胎发育的影响

为了探究不同组分体外成熟培养基对绵羊卵母细胞体外成熟的影响,试验从健康绵羊卵巢中分离卵丘-卵母细胞复合体(COCs),将分离的COCs分为V-FSH+LH+E_(2)+FBS组、V-FSH+FBS组、V-FSH+LH+E_(2)+BSA组、P-FSH+LH+E_(2)+FBS组、P-FSH+FBS组、P-FSH+LH+E_(2)+BSA组,每组分别添加以V-促卵泡素(FSH,垂体中提纯的FSH)和P-FSH(体外基因重组表达的FSH)为基础设计的体外成熟培养基以进行体外成熟试验,即各组依次添加V-FSH+促黄体素(LH)+雌激素(E_(2))+胎牛血清(FBS)、V-FSH+FBS、V-FSH+LH+E_(2)+牛血清白蛋白(BSA)、P-FSH+LH+E_(2)+FBS、P-FSH+FBS、P-FSH+LH+E_(2)+BSA体外成熟培养基,体外成熟后检测各组卵丘扩展指数(CEI)、第一极体排出率、卵母细胞氧化还原态、乳酸生成量、葡萄糖消耗量、ATP生成量;统计孤雌胚胎的卵裂率、囊胚率、囊胚细胞数,比较不同组分体外成熟培养基对卵母细胞成熟、代谢及孤雌胚胎发育的影响。结果表明:V-FSH+LH+E_(2)+FBS组CEI最高,除与P-FSH+FBS组差异不显著外(P>0.05),与其他组均差异显著(P<0.05)。V-FSH+LH+E_(2)+FBS组和P-FSH+FBS组卵母细胞的第一极体排出率较其他组高,但各组间均差异不显著(P>0.05)。V-FSH+LH+E_(2)+FBS组、P-FSH+FBS组、P-FSH+LH+E_(2)+BSA组的相对氧化还原比均接近1且差异不显著(P>0.05),但均显著低于其他组(P<0.05)。P-FSH+FBS组的COCs乳酸生成量/COCs葡萄糖消耗量最高,除与V-FSH+LH+E_(2)+FBS组、P-FSH+LH+E_(2)+FBS组差异不显著(P>0.05)外,显著高于其他组(P<0.05)。V-FSH+LH+E_(2)+FBS组与P-FSH+FBS组的COCs ATP生成量差异不显著(P>0.05),但均显著高于其他组(P<0.05)。V-FSH+LH+E_(2)+BSA组、P-FSH+LH+E_(2)+BSA组卵裂率差异不显著(P>0.05),但均显著低于其他组(P<0.05)。V-FSH+LH+E_(2)+FBS组与P-FSH+FBS组囊胚率均显著高于其他组(P>0.05),但各组的囊胚细胞数差异不显著(P>0.05)。说明不同来源的FSH与不同组分协同作用会对绵羊卵母细胞的成熟、代谢及孤雌胚胎发育产生不同的效果,并影响了其后续胚胎的发育能力。

滩羊卵母细胞体外成熟和孤雌激活试验

为建立滩羊卵母细胞体外成熟和孤雌激活培养体系,对离体卵巢来源的滩羊卵母细胞进行体外成熟培养,并用化学激活法进行孤雌激活。结果显示:滩羊离体卵巢平均得卵数为3.07枚,卵母细胞成熟率为54.78%,卵裂率为61.92%,囊胚率为17.72%,试验各重复之间差异不显著(P>0.05)。研究认为,本试验建立的培养体系较稳定,适合滩羊卵母细胞体外成熟培养,为体外受精胚和克隆胚生产奠定实验基础。

体外成熟卵母细胞质量和胚胎发育潜能影响因素的研究进展

随着生殖医学的迅速发展,卵母细胞体外成熟(IVM)技术取得了显著进步,但目前IVM卵母细胞仍然面临成熟率低、受精率低和受精后胚胎发育潜力低等挑战。本文总结影响IVM卵母细胞质量、受精及胚胎发育潜能的因素,旨在为增强卵母细胞IVM能力和胚胎发育潜能提供创新思路。

未成熟卵母细胞体外成熟不同培养结局的多因素分析

目的应用多因素分析探讨人未成熟卵母细胞进行体外成熟(IVM)培养后不同培养结局(卵母细胞成熟和D3可利用胚胎)的影响因素。方法收集2020年6月至2023年6月于中山市人民医院生殖中心进行常规助孕治疗、有未成熟卵母细胞剩余患者的临床资料。按照纳排标准共纳入45例患者的207枚未成熟卵母细胞,使用商品化IVM培养液和自配IVM培养液进行IVM培养。培养24 h和48 h后,观察卵母细胞成熟情况。当卵母细胞成熟后,行常规卵胞浆内单精子注射(ICSI)、胚胎培养和胚胎观察,记录D3可用胚胎数。并采用Logistic回归分析不同培养液、女性年龄、不孕因素、体质量指数(BMI)等因素对卵母细胞成熟率和D3可用胚胎率的影响。结果纳入研究的207枚未成熟卵母细胞进行IVM培养后,获得成熟卵母细胞159个,成熟率为76.81%;获得D3可用胚胎73个,D3可用胚胎率为35.27%。不同IVM培养液、女方年龄、促排卵方案、BMI、基础FSH(bFSH)、基础LH(bLH)、FSH/LH比值、抗苗勒管激素(AMH)、不孕年限、不孕类型、不孕因素及未成熟卵状态的卵母细胞成熟率无显著性差异(P>0.05)。使用商品化IVM培养液的D3可用胚胎率为42.86%,显著高于使用自配IVM培养液的27.45%(P<0.05);不同女方年龄、促排卵方案、BMI等因素的D3可用胚胎率无显著性差异(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,IVM培养液、女方年龄等都不是卵母细胞成熟的独立影响因素;而IVM培养液和女方年龄是D3可用胚胎率的独立影响因素(P<0.05)。结论经HCG刺激的未成熟卵母细胞进行IVM培养时,使用商品化IVM培养液比使用自制培养液可能更有利于后续D3可利用胚胎的形成;且随着女方年龄增加,IVM成熟卵母细胞来源的D3可用胚胎率下降。

未成熟卵母细胞的体外成熟技术研究进展

随着我国人口出生率显著下降,辅助生殖技术在缓解生育力低下方面的作用日益显著。未成熟卵母细胞体外成熟技术作为辅助生殖技术的一部分,临床应用逐渐增多。本文介绍了未成熟卵母细胞体外成熟技术的发展历史,总结了双相培养体系、培养体系添加剂、3D培养体系等未成熟卵母细胞体外成熟现有培养体系技术,并对未成熟卵母细胞体外成熟培养在多囊卵巢综合征、卵巢抵抗综合征、女性生育力保存、常规取卵过多的补救等方面的临床应用进行概述,以期为未成熟卵母细胞体外成熟培养的相关研究和临床应用提供理论依据。

熊果苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育潜能的影响机制

目的探究熊果苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响。方法使用含有不同剂量的熊果苷(0、10、20、40µmol/L,分别设为对照组、10µM组、20µM组、40µM组)培养基对生发泡(germinal vesicle,GV)期小鼠的卵母细胞进行16 h体外培养,监测卵母细胞成熟率和活性氧物质(reactive oxygenspecies,ROS)含量。体外受精后将受精卵转移到相同的培养基中,观察卵裂率和囊胚率的变化。结果补充熊果苷培养基的卵母细胞的体外卵母细胞成熟度高于对照卵母细胞,其中40µM组(100%)明显高于对照组(50%),差异有统计学意义(χ^(2)=10.526,P=0.001)。4组的第一极体排出率比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。10µM组、20µM组、40µM组卵母细胞内的ROS荧光强度均低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。4组囊胚率比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论在成熟液中添加适量熊果苷能降低卵母细胞中的ROS水平,但对小鼠胚胎发育无明显影响。

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植胚胎发育的影响

将体外成熟的卵母细胞按不同成熟时间进行分组处理,并进行克隆胚胎的生产,实验表明,成熟时间为20～22h并在23～25h完成融合及激活的重构胚其融合率,卵裂率及体外培养到达桑葚胚/囊胚的比例分别为76.2%(176/231)、51.1%(118/231)和21.7%(23/106).而成熟时间为16～18h及24h以上的卵母细胞进行核移植胚胎的生产,其重构胚各种相应的数据分别为44.9%(84/187)、20.9%(39/187)、10.8%(4/37)以及71.1%(263/367)、48.0%(176/367)、和8.5%(14/176)。

诱导猪卵母细胞体外成熟因素的研究进展

卵母细胞的体外成熟（in vitro maturation，IVM）是指在体外人工设定的条件下，卵母细胞经过一系列的生长发育最终形成具有受精能力的成熟卵母细胞的过程。哺乳动物卵母细胞的体外成熟培养是胚胎体外生产的基础环节。

牛卵母细胞体外成熟的培养体系及影响因素的研究

目前牛卵母细胞体外成熟培养（IVM）技术体系已经建立起来，并在不断的探索与完善当中。国内外的研究热点主要集中在各种因素对体外生产步骤的影响上，尤其是对卵母细胞IVM和胚胎发育阻滞的研究，突破这些难点将有利弄清卵母细胞成熟的机理，促进胚胎操作技术和商业化胚胎IVP快速发展，在奶牛与肉牛的扩繁与母畜资源利用方面发挥巨大作用。本文将就现阶段牛卵母细胞体外成熟培养体系及影响因素的研究情况加以综述。

保存温度对卵母细胞体外成熟率的影响及牦牛卵母细胞体外成熟培养方式初探

【目的】探索不同卵巢保存温度对卵母细胞体外成熟的影响以及两种培养方式对牦牛卵母细胞体外成熟的影响。【方法】通过对绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛卵母细胞进行体外成熟培养，比较两种保存温度对5种卵母细胞成熟率的影响，并以牦牛卵母细胞为研究对象比较两种培养方式对牦牛卵母细胞成熟率的影响。