膜表达IL-21的饲养层细胞对NK细胞体外扩增的影响

目的:探究膜表达IL-21的饲养层细胞对NK细胞体外扩增的影响。方法:通过电转法构建膜表达IL-21的K562稳转细胞系,细胞灭活后与NK细胞共培养,观察NK细胞增殖情况。通过乳酸脱氢酶(LDH)和干扰素-γ(IFN-γ)释放实验检测扩增获得的NK细胞体外杀伤功能。构建NOD/SCID小鼠异种移植肠癌肿瘤模型,设置空白对照组、NK细胞组和扩增NK细胞组,检测扩增NK细胞体内肿瘤杀伤功能。结果:通过电转法成功构建了膜表达IL-21的K562细胞。与膜表达IL-21的K562细胞共培养17 d后,NK细胞的扩增倍数可达700倍,与对照组相比扩增能力明显增强(P<0.001)。体外肿瘤细胞杀伤实验检测结果显示,NK细胞和扩增后的NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用无明显差异,对小鼠体内肿瘤的杀伤效果也无明显差异。结论:膜表达IL-21的K562细胞可显著增强NK细胞的体外扩增能力,但不影响NK细胞的体内外杀伤功能,可用于后续NK细胞的体外规模化扩增。

低氧支持的脐带间充质干细胞对脐血单个核细胞体外扩增的影响

目的:探讨低氧支持的脐带间充质干细胞(UC-MSC)对人脐血单个核细胞的体外扩增的影响。方法:将分离的脐血单个核细胞(MNC)接种在预先建立的UC-MSC层上,在低氧(3%O2)条件下分组培养,实验分组为常氧(常氧^(+)脐血MNC)、低氧(低氧^(+)脐血MNC)、UC-MSC(常氧^(+)UC-MSC^(+)脐血MNC)、UC-MSC^(+)低氧(低氧^(+)UC-MSC^(+)脐血MNC)共4组。为进一步探讨SCF^(+)FL^(+)TPO(SFT) 3种因子组合在低氧支持的UC-MSC培养体系中脐血MNC体外扩增的作用,实验进一步分组为A(常氧^(+)UC-MSC^(+)SFT^(+)脐血MNC)、B组(低氧^(+)UC-MSC^(+)脐血MNC)、C(低氧^(+)UC-MSC^(+)SFT^(+)脐血MNC)共3组,培养0、7、10、14 d检测各组总有核细胞数(TNC)、 CD34^(+)细胞数、集落形成单位(CFU)数及CD34^(+)CXCR4^(+)、CD34^(+)CD49d^(+)、CD34^(+)CD62L^(+)细胞数并进行比较分析。结果:UC-MSC^(+)低氧组较低氧组、UC-MSC组能有效地扩增脐血TNC、CD34^(+)细胞、CFU数(P<0.05),并可明显提高脐血CD34^(+)细胞上黏附分子和CXCR4的表达(P<0.05);经过14 d的培养,C组各时间点检测指标水平均明显高于A、B组(P<0.05),A组7、10 d扩增效果明显优于B组(P<0.05)。结论:低氧支持的UC-MSC可有效扩增脐血造血细胞,加入SFT因子组合可明显扩增脐血MNC并能提高脐血CD34^(+)细胞上黏附分子和CXCR4的表达。

造血干细胞体外扩增的研究进展

造血干细胞数量限制了其临床应用。随着各种造血调控因子的问世、细胞分选技术的进步及体外扩增技术的不断改进和完善,有望通过体外扩增技术来解决成人HSC移植的数量问题。造血干细胞体外扩增主要因素包括细胞因子调控造血,滋养层细胞支持造血,三维空间立体培养优化造血等影响因素。

人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定

树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞,在激发T细胞免疫应答及T细胞依赖性抗体生成中起重要作用,骨髓及外周血的CD34造血前体细胞在GM-CSF和TNF-α的作用下,可在体外分化发育,生成树突状细胞.本研究从正常人外周血分离获得单核细胞,加入100ng/ml hGM-CSF、500U/ml hIL-4,体外培养1周后,获得大量高纯度的树突状细胞,其高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子及共刺激分子B7-1和CD40,能强烈激发同种异体T淋巴细胞增殖,培养条件以应用自体血清或胎牛血清为最佳;单独应用hGM-CSF只能生成巨噬细胞;在培养末期加入TNFα可促进DC进一步成熟.本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础.

一种体外扩增人γδΤ细胞的新方法

目的:建立一种简单快速的体外扩增人外周血γδΤ细胞的方法,以便进一步对γδΤ细胞生物学特性和肿瘤免疫治疗的研究。方法:取健康人外周血100mL,分离单个核细胞,置于含100mL/L小牛血清,50mL/L人AB血清,异戊烯焦磷酸(2μg/L)和IL-2(100IU/mL)RPMI1640培养液中培养,进行细胞毒杀伤活性测定和流式细胞术分析。结果:细胞培养10d时γδΤ细胞从扩增前4·21%增加到70·35%,增殖倍数可达80倍,悬浮生长γδΤ细胞CD44表达为86·39%、贴壁生长γδΤ细胞为94·0%。效靶细胞比为40:1时,对K562细胞和SGC-7901胃腺癌细胞的杀伤活性分别为75%和61%。结论:用一种简单、快速和特异性的体外扩增人外周血中γδΤ细胞新方法,培养的γδΤ细胞具有较强的抗肿瘤活性。

核酸体外扩增技术

核酸体外扩增是分子生物学研究的基础。随着生物技术的发展 ,出现了越来越多的核酸体外扩增技术。根据其特点可分为两类 :一类是靶核酸的直接扩增 ,如聚合酶链式反应、链替代扩增、连接酶链式反应、核酸依赖的扩增、Qβ复制、转录介导的扩增和滚环扩增等 ;另一类是信号放大扩增 ,如支链DNA、侵染探针等。就现有的核酸扩增技术的原理。

猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建的调节效应

目的:人脐血造血干细胞得以移植于小鼠体内,其理论基础是放射线照射使小鼠骨髓枯竭,龛位腾出,为移植的脐血造血干细胞提供空间,而猪苓多糖是从中药猪苓中提取的多糖成分,具有免疫调节抗肿瘤作用,也是一种非T细胞促有丝分裂素,对放射线照射有一定的防护作用。观察猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建效应。方法:实验于2004-06/2006-05在兰州大学基础医学院免疫研究所完成。①实验材料:清洁级BALB/c小鼠由兰州生物制品研究所提供,8周龄,体质量约20g,雌雄各半,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。脐血样本由兰泰医院妇产科提供,产妇及家属对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准。猪苓多糖由兰州大学第一医院提供。②实验方法:应用20,17.5,12.5,7.5mg/L猪苓多糖体外扩增培养脐血造血干细胞,并测定细胞增殖率及CD34+细胞数。将BALB/c小鼠分为正常对照组:尾静脉、腹腔注射等量生理盐水;照射空白组:3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合尾静脉、腹腔注射等量生理盐水;照射药物组:3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合尾静脉注射等量生理盐水、腹腔注射猪苓多糖;照射移植组(n=15):3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射等量生理盐水;照射移植药物组:3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射猪苓多糖。③实验评估:观察小鼠生存状况及血常规变化,流式细胞仪测定CD3、CD4、CD8、CD19水平。结果:57只小鼠均进入结果分析。①12.5mg/L猪苓多糖增殖效率最为显著(P<0.01),流式细胞仪测定显示CD34+细胞数扩增了6.33倍。移植药物组小鼠死亡率最低,死亡高峰集中在照射移植后7~14d左右。②移植药物组小鼠血象恢复正常,并且时间明显短于其他实验组(P<0.05)。③细胞及体液免疫恢复情况,移植药物组小鼠各项指标水平与正常小鼠无差别(P>0.05),与其他各组小鼠比较,除CD4、CD19水平与照射移植小鼠无差别外均有差别(P<0.05)。结论:猪苓多糖对脐血造血干细胞有明显扩增作用,并能促进脐血造血干细胞移植小鼠免疫造血重建。

大豆单染色体的显微分离及体外扩增

采用玻璃针分离法，通过显微操作器成功地分离到大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）单染色体。将分离到的两条大豆染色体分别放入两个０．５ｍＬＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，经Ｓａｕ３Ａ酶切，并在染色体ＤＮＡ片段两端加上Ｓａｕ３Ａ人工接头后，进行两轮ＰＣＲ扩增，得到０．３～３ｋｂ之间的ＤＮＡ片段。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明，这些大豆单染色体扩增片段与大豆基因组ＤＮＡ之间有同源性，从而证明两条单染色体ＤＮＡ确实已被成功地扩增了，同时表明两条不同的大豆单染色体扩增产物存在一定的差异。在常规的倒置显微镜下对小型染色体进行了显微分离，为小型单染色体ＤＮＡ的体外扩增及微克隆奠定了基础。

IL-11基因修饰的基质细胞对造血细胞体外扩增的影响

目的 研究造血因子白介素 11(IL 11)基因修饰的基质细胞对造血细胞体外扩增的影响。方法 采用逆转录病毒载体将IL 11基因转入基质细胞HFCL ,用Northernblot检测基质细胞HFCLIL 11基因的表达 ,用流式细胞仪检测IL 11基因修饰的HFCL支持的脐血CD3 4 + 造血细胞体外扩增中表型为CD3 4 + CD3 8- 早期祖细胞和表型为CD3 4 + CD41+ 巨核系定向祖细胞的比例。结果 基质细胞HFCL能够表达逆转录病毒介导的IL 11基因 ,并且在这种IL 11基因修饰的基质细胞支持下 ,脐血CD3 4 + 造血细胞经过7d扩增 ,扩增细胞中表型为CD3 4 + CD3 8- 的早期祖细胞和表型为CD3 4 + CD41+ 巨核系祖细胞的比例分别为 (1.62± 0 .2 3 ) %、(9.9±1.1) % ,高于未转基因HFCL的 (0 .8± 0 .2 3 ) %、(6.5± 1.8) % ,而在相同条件下细胞因子支持的扩增细胞中则分别为 (0 .19±0 .14 ) %、(6.0± 1.1) %。结论 基质细胞能够表达经逆转录病毒载体介导的IL 11基因 ,而且经IL 11基因修饰的基质细胞能显著促进CD3 4 + CD3 8- 的早期祖细胞和CD3 4 + CD41+ 巨核系祖细胞扩增。

多种细胞因子组合对脐血干/祖细胞体外扩增的影响

目的 探讨在体外培养液中不同细胞因子组合对脐血 CD34+ 细胞的扩增作用以及扩增后的 CD34+ 细胞的造血功能。方法 用 FL、SCF、TPO、IL - 3、TL - 6组合成不同的实验组 ,对脐血中分离纯化的 CD34+ 细胞经 6d的短期体外扩增 ,扩增后经流式细胞仪分析 ,L TC- IC、祖细胞集落群计数 ,从而求得较好的细胞因子组合组。结果CD34+ 细胞扩增倍数为 3 .1～ 8.6倍 ,16份脐血 CD34+ 细胞数达到 10× 10 6 以上的细胞总数 ;扩增的 CD34+ 细胞再造血功能与原始 CD34+ 细胞无显著差异。FL是扩增组合中不可缺少的细胞因子 ,同时还证实 TPO与其他细胞因子组合有扩增 CD34+ 细胞的作用 ,但单独使用 TPO稍长时间会使 CD34+ 细胞过多向巨核细胞分化。结论 FST3 6细胞因子组合能使部份单位体积的脐血 CD34+细胞体外扩增达一定数量 。

不同来源CIK细胞的体外扩增和杀伤活性的比较

目的:比较两种不同来源的CK细胞的体外扩增速度、杀伤活性和机制. 方法:脐血和正常人外周血各16例,经单个核细胞,以抗CD3mAb、重组人白细胞介素2和干扰素γ为诱导剂制备CIK细胞,直接活细胞计数法比较二者的细胞动力学效应,MTT法比较二者对胃癌细胞株BGC823的杀伤活性,透射电镜下观察肿瘤细胞的变化.结果:脐血CIK细胞的扩增速度、杀伤活性均显著优于外周血CIK细胞,CMNCCIKvsMNCCIK,P<0. 05;脐血CIK细胞以诱导肿瘤细胞坏死为主,外周血CIK细胞以诱导肿瘤细胞凋亡为主,二者的差异有统计学意义. 结论:脐血CIK细胞体外扩增快,杀伤活性强,对肿瘤细胞的作用优于外周血CIK细胞,不同来源的CIK细胞杀伤肿瘤细胞的机制不同.

不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响

为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化,将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天,在0天,7天检测有核细胞数,CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD49d+的细胞数和集落形成单位(CFU)数.根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组;SF组(SCF+FL);SFT组(SCF+FL+TPO)和SFT6组(SCF+FL+TPO+IL-6)。结果表明,和对照组相比,SF组合仅能低水平支持脐血造血细胞扩增,加入TPO后即SCF/FL/TPO组合能有效的扩增脐血细胞,但SFT和SFT6两组之间差异却无明显发生(P>0.05);SF,SFT和SFT63组的细胞因子组合均可提高脐血CD34+细胞CD49d,CXCR4的表达,但3组之间差异无显著性(P>0.05)。结论:SF组合可协同扩增人造血细胞,但协同作用较弱;TPO在脐血造血干/祖细胞体外扩增中起重要调节作用,而IL-6作用不显著;SCF/FL/TPO3种因子组合不仅可促进脐血造血祖细胞的扩增,而且可上调脐血造血细胞CD49d,CXCR4表达。

人骨髓、脐血CD34^+干细胞体外扩增的树突状细胞的表型及其T细胞刺激活性分析

目的:从人骨髓造血前体细胞体外培养扩增树突状细胞(dendritic cells,DCs),测定其表型及T细胞刺激活性.方法:采用Mini-MACS分离技术,从正常人骨髓、脐血分离CD34^+造血干细胞,体外以重组hGM-CSF,hTNF-α,hIL-3诱导培养2周,流式细胞术检测扩增细胞的表面表型及细胞内IL-12的表达,体外同种混合淋巴细胞反应检测扩增DCs的T细胞刺激活性.结果:从正常人骨髓、脐血分离得到高纯度(>90%)的CD34^+造血干细胞,经重组hGM-CSF,hTNF-α的共同诱导培养,扩增得到大量DCs,加人hIL-3可以进一步增加DCs产量;FACS检测表明,扩增的DCs表达HLA-DR,CD40,CD54,CD80,CD86分子,细胞内有hIL-12的P35,P40亚基的表达;与外周血单核细胞培养生成的DCs相比,由CD34^+干细胞扩增的DCs具有更强的激发同种T细胞增殖的能力.结论:人CD34^+干细胞体外经诱导培养,可以生成大量功能成熟的DCs,从而为进一步开展DCs的基础及临床研究打下了基础.

大剂量化疗和体外扩增的骨髓细胞移植对小鼠Lewis肺癌的实验性治疗研究

目的本文比较常规剂量和大剂量ＶＩＰ方案化疗对小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的疗效，同时分析应用体外扩增的骨髓细胞进行移植治疗的可行性。方法骨髓细胞采用微血管内皮细胞共培养方法进行体外培养扩增。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠皮下接种１×１０６Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞，接种后第３天和第１４天分别进行常规剂量和大剂量ＶＩＰ方案化疗。常规剂量ＶＩＰ方案（ＶＩＰＣＤ）为顺铂（４ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，第１天），异环磷酰胺（２００ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，第２天）和依托帕甙（２ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，第１～２天）。大剂量ＶＩＰ方案（ＶＩＰＨＤ）是将上述药物的剂量分别提高２．５倍，用法同上。ＶＩＰＨＤ化疗后２４ｈ经尾静脉移植３×１０６体外扩增的骨髓细胞。采用定期测量肿瘤体积和随访小鼠生存时间进行疗效评定。结果对早期肿瘤（接种后３天，平均肿瘤直径为０．５ｃｍ），ＶＩＰＣＤ化疗明显抑制肿瘤生长；但对接种后２周的巨大肿瘤（平均肿瘤直径１．５ｃｍ），应用该方案间隔２周连续治疗３个疗程仍不能有效控制肿瘤生长。上述实验中ＶＩＰＣＤ治疗组的中位生存期与对照组相比无统计学显著差异（Ｐ＞０．０５）。与此相反，单次ＶＩＰＨＤ化疗和骨髓移植显著控制了早期肿瘤生长，使治愈率达到９?

基质细胞衍生因子-1和血小板第4因子对体外扩增后脐血CD34^+细胞黏附特性和趋化功能的影响

为了研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和血小板第4因子(PF4)对扩增后脐血CD34+细胞归巢相关功能的影响,将纯化的脐血CD34+细胞接种入无血清培养液中,加入不同组合的细胞因子FST(FL+SCF+TPO)、FST+SDF-1、FST+PF4或FST+SDF-1+PF4,分别于培养第7、10、14天检测CD34+细胞扩增倍数、集落形成能力、细胞的黏附分子表达、总黏附性、趋化功能。结果表明:①加入SDF-1的实验组CD34+细胞及造血祖细胞集落扩增倍数高于对照组;②加入SDF-1明显上调扩增的CD34+细胞CD49e的表达,加入PF4明显上调扩增的CD34+细胞CD49e、CD54的表达,在扩增体系中加入SDF-1或PF4均能够明显提高扩增的CD34+细胞的总黏附性;③在扩增体系中加入SDF-1能够明显提高扩增的CD34+细胞的自发迁移率,但导致CXCR-4的表达和SDF-1诱导迁移率降低;而PF4能够明显提高扩增的CD34+细胞的CXCR-4的表达和SDF-1诱导迁移率;在扩增体系中同时加入SDF-1和PF4能够明显提高扩增的CD34+细胞自发迁移率和SDF-1诱导迁移率。结论:体外扩增体系中加入SDF-1和PF4能够上调部分归巢相关黏附分子的表达,保持扩增的CD34+细胞的黏附和迁移能力,有利于降低体外扩增对造血干/祖细胞(HSPC)归巢相关功能的不利影响,维持扩增的HSPC的归巢潜能。

基质细胞对小鼠骨髓单个核细胞体外扩增的促进作用

目的 阐明基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用。方法 采用骨髓基质细胞培养、骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮＣ）体外液体培养和各种造血祖细胞集落培养技术，进行基质细胞支持条件下骨髓单个核细胞体外扩增的研究，并与单纯细胞因子支持下的细胞扩增进行比较。结果 在照射后基质细胞层存在的条件下，同时含有细胞因子组合的培养体系，对细胞总数和集落形成细胞数的扩增作用明显高于其它各组。结论 基质细胞对细胞因子作用下的造血细胞体外扩增有明显的促进作用。

诱导体外扩增的小鼠骨髓CD34^+造血细胞分化为树突状细胞

诱导体外培养扩增后的小鼠骨髓ＣＤ３４＋造血细胞分化为树突状细胞（ＤＣ）。方法Ｃ５７ＢＬ／６ｊ小鼠骨髓ＣＤ３４＋细胞采用血管内皮细胞共培养方法进行体外扩增，扩增后的ＣＤ３４＋细胞经磁性细胞分选技术纯化，并用ＧＭ┐ＣＳＦ等细胞因子诱导其向ＤＣ分化。结果小鼠骨髓ＣＤ３４＋造血细胞不论是否经过体外培养均可被诱导分化为ＤＣ，后者具有典型的树突状形态特征，表达高水平的ＭＨＣⅠ、Ⅱ类抗原和ＣＤ８６共刺激分子，在混合白细胞反应（ＭＬＲ）中能有效地刺激静息期Ｔ淋巴细胞增殖。结论小鼠骨髓ＣＤ３４＋细胞经体外培养扩增后仍然具有向ＤＣ分化的能力，通过骨髓细胞体外培养扩增可以显著提高ＤＣ产量。

血管紧张素Ⅱ对脐血CD34^+细胞体外扩增的作用

血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )是肾素 血管紧张素系统的一种主要生物活性物质。为了研究它在造血系统中的影响 ,本实验通过体外细胞培养的方法 ,探讨AngⅡ与不同的细胞因子联合刺激脐血CD34+ 细胞生长和分化的作用。研究结果发现 ,悬浮培养体系中的AngⅡ可同时刺激BFU E和CFU GM的扩增 ,BFU E和CFU GM的数量在一定范围内随AngⅡ浓度 (0 0 1- 0 1μmol/L)的升高而增多 ;在半固体培养基中的AngⅡ则仅刺激CFU GM的形成 ,却不影响BFU E ;悬浮培养体系中AngⅡ与细胞因子SCF +G CSF +GM CSF +IL 3联合可使CFU GM的扩增倍数由 2 3± 0 8升高到 7 8± 1 9倍 ,与SCF +EPO +TPO +IL 3联合 ,BFU E的扩增倍数由 3 1± 1 8提高到 9 2± 2 3倍。结论 :AngⅡ与其他细胞因子联合可刺激脐血造血干 /祖细胞体外扩增。

血管内皮祖细胞的体外扩增特性研究

目的 :探讨血管内皮祖细胞 (EPCs)在体外扩增特性。方法 :利用磁性活化细胞分选系统 (MACS)系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批的单个核细胞 (MNC)、CD34+ 和CD34-混和细胞进行对照培养 ,比较EPCs体外扩增效果。另外研究血管内皮生长因子 (VEGF)和传代培养对细胞分化、扩增动力学和细胞凋亡的影响。应用细胞免疫化学和流式细胞术对细胞定性定量分析。结果 :MNC培养、CD34+ 和CD34-细胞混和培养明显高于CD34+细胞单独培养EPCs扩增率 (P <0 0 5 ) ,一旦细胞形成线索样结构行传代培养明显低于未传代的细胞凋亡 (P <0 0 5 )。VEGF对细胞凋亡 (P >0 0 5 )无明显影响 ,这些分化的EPCs免疫细胞化学染色CD34、vWF、KDR、CD31阳性 ,并且吞噬乙酰化低密度脂蛋白 (Ac -LDL)。培养 7d流式细胞检查CD34+ 、AC133+ 分别占贴壁 (AT)细胞的 6 8 2 %±6 3% (n =6 )、5 7 2 %± 9 8% (n =6 )。结论 :MNC培养、CD34+ 和CD34-细胞混和培养提高了EPCs扩增率 ,早传代使凋亡率明显降低。VEGF对EPCs体外扩增无明显影响。

IL-2、IL-7和IL-15联合对T细胞的体外扩增效应

为了建立一种快速有效的体外T细胞扩增方法,本研究比较了不同培养条件对T细胞增殖及其功能和特性的影响。取外周血T细胞,用自体的树突状细胞(DC)和EB病毒转化的B细胞进行周期性刺激,用细胞增殖试验、PI和AnnexinV双标记流式细胞术、Cr释放测定及ELISPOT试验分别测定不同培养条件下细胞的增殖程度、IFN-γ分泌细胞的频率、抗原特异性T细胞的杀伤活力、细胞的凋亡状态和分化能力。结果显示:T细胞在周期性刺激后,用CD3/28微珠的短期扩增效应最好,但多轮刺激后联合应用IL-2,IL-7和IL-15对细胞的扩增最强。Cr释放试验表明,CD3/28微珠扩增的T细胞不具有杀伤活力,高浓度IL-2诱导的T细胞杀伤活性最强,其次为联合应用IL-2,IL-7和IL-15。ELISPOT显示不同培养条件诱导出的分泌IFN-γ的T细胞频率从高到低依此为高浓度IL-2>联合应用IL-2,IL-7和Il-15>低浓度的IL-2>CD3/28微珠。细胞表型分析显示高浓度IL-2和联合应用IL-2,IL-7和Il-15扩增的细胞含有较高比例的CD3+CD8+T细胞。对细胞的凋亡测定表明联合应用IL-2,IL-7和IL-15获得的T细胞的存活率最高,处于凋亡早期的细胞比例最低。细胞增殖试验显示联合应用IL-2,IL-7和IL-15扩增的细胞分化能力最强。结论:本研究建立了一种快速有效地体外扩增T细胞的方法,其中联合应用IL-2,IL-7和IL-15对T细胞的扩增最显著,获得的T细胞存活率最高,分化能力最强,该细胞同时也含有较高频率的IFN-γ分泌细胞且表现出较强的杀伤活力。