适宜肉鸭全价料发酵的益生菌体外筛选

本试验利用乳酸杆菌和酵母菌体外发酵肉鸭全价料,通过发酵前后活菌数、pH、粗蛋白质、酸溶蛋白、总酸含量等指标的比较,筛选出适宜肉鸭全价料发酵的乳酸杆菌和酵母菌。结果表明:(1)适宜肉鸭全价料发酵的最适乳酸杆菌为BLCC2-0111和BLCC2-0112,发酵至72 h时,pH达到最低,分别为4.03和4.13,活菌数最高,分别为33.61×10^(8)CFU/g和25.68×10^(8)CFU/g。(2)适宜肉鸭全价料发酵的最适酵母菌为BLCC4-0050和BLCC4-0021,发酵至72 h时,粗蛋白质含量最高,分别为17.78%和17.77%,活菌数最高,分别为30.23×10^(8)CFU/g和35.54×10^(8)CFU/g。(3)适宜肉鸭全价料发酵的最适混菌组合为BLCC2-0111+BLCC4-0021,发酵至72 h时,pH降至最低4.12,乳酸杆菌活菌数38.00×10^(8)CFU/g,总酸含量20.61 mg/g,酸溶蛋白含量13.49%,混菌发酵的饲料营养价值显著优于单菌发酵。

酸菜中降胆固醇功能植物乳杆菌的体外筛选

以分离自东北家庭自制酸菜中的9株植物乳杆菌为研究对象,采用邻苯二甲醛法筛选具有降胆固醇功能的乳杆菌,并通过耐酸、耐胆盐及抗生素敏感性实验,分析菌株的益生特性。结果表明,多株植物乳杆菌具有良好的降胆固醇功能,其中菌株S56的脱除胆固醇的量最高,达到22.40μg/mL。实验菌株均能耐受pH 3.0的酸度和10 g/L的牛胆盐。其中菌株S2-6、S2-5、S4-1和S56在pH 2.0的环境中能保持生长1 h,具有较强的耐酸性。

陆地棉枯萎病抗源的体外筛选研究Ⅰ抗性细胞系的筛选及植株再生

利用棉花枯萎病菌毒素作为选择剂，对经诱变的外植体而形成的愈伤细胞进行了筛选研究。不同的细胞群体需要不同的筛选压。诱变扩大了变异源，１．０～１．５Ｋ伦γ射线、０．１５％～０．３％ＥＭＳ处理４小时、１ｍｍｏｌ／ＬＮａＮ３处理２～３小时能有效地对外植体进行诱变。在一定的筛选程序下，获得了多个耐毒细胞系。耐毒细胞系及其再生株均表现出较好的耐毒性。

降血脂功效成分体外筛选方法研究进展

高通量降血脂活性成分筛选为高脂血症治疗药物和保健品开发提供了便捷通道。本文从受体筛选模型、胆固醇代谢筛选模型、模拟胆汁胶束法和脂质代谢调控酶的抑制剂方面,对近年来国内外降血脂成分体外筛选方法进行了介绍,为降血脂活性成分的筛选研究提供参考。

人角朊干细胞体外筛选及鉴定的实验研究

目的 探讨体外筛选及鉴定人角朊干细胞 (KSC)的方法。 方法 利用 KSC对细胞外基质的快速黏附性 ,选择不同时间黏附的细胞分为 5、2 0和 6 0分钟 3组 ,并以不进行筛选的细胞作对照组。体外培养扩增后 ,以 KSC的相对特异性标识分子 β1 整合素、角蛋白 19(Ck19)的单克隆抗体 ,免疫组织化学方法对各组细胞进行鉴定 ,利用图像分析系统测平均灰度值。并用流式细胞仪、透射电镜对各组细胞进行检测。 结果 各组细胞在 10～ 14天均有克隆形成 ,组间比较 5分钟组细胞生长较慢 ,但形成克隆较大 ,细胞体积较小。免疫组织化学β1 整合素、Ck19在各组都有表达 ,各组平均灰度值统计学分析显示 ,β1 整合素在 5分钟组的表达与另 3组间有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,Ck19的表达在 5分钟组与 2 0分钟组间无差异 (P>0 .0 5 ) ,6 0分钟组与对照组间差异不显著 ,而前两组与后两组之间比较有统计学意义 (P<0 .0 5 )。流式细胞仪检测提示 5分钟组细胞大部分处于 G1 期 ,与其它 3组有区别。透射电镜显示 5分钟组细胞体小 ,核浆比大 ,细胞器不成熟。 结论 利用细胞外基质筛选的 5分钟组细胞处于幼稚状态 ,并有强克隆形成能力 ,符合预期的KSC特点 ,可利用 KSC对细胞外基质的快速黏附性对其纯化筛选 ,同时利用 β1 整合素。

节丛孢属真菌抗反刍动物消化菌株的体外筛选

利用食线虫真菌对动物寄生线虫病进行生物防治是寄生虫学当今的研究热点之一。获得能够通过动物消化道的食线虫菌株是取得成功的前提。本文采用模拟反刍动物瘤胃和真胃的消化道作用，对８４株节丛孢属的食线虫真菌进行了体外抗消化筛选。结果表明：共有２３株通过了２４ｈ瘤胃液的处理，通过率为２７．３８％；１６株同时还通过了４ｈ盐酸－胃蛋白酶的处理，通过率为１９０４％。

环氧化酶Ⅱ抑制剂体外筛选模型的研究

目的 建立环氧化酶Ⅱ活性的检测模型 ,提供环氧化酶Ⅱ抑制剂的筛选模型及非甾体类抗炎药 (nonsteoroidalanti in flammatorydrug ,NSAID)筛选的方法。 方法 利用NIH 3T3细胞在血清存在情况下能诱导生成环氧化酶Ⅱ的特性 ,通过加入底物花生四烯酸 ,检测终产物前列腺素E2 (PGE2 )含量的变化 ,判断化合物对环氧化酶Ⅱ的作用。以rofecoxib(罗非昔布 )为阳性药来判断该模型能否用于环氧化酶Ⅱ活性的检测。结果 Rofecoxib能明显的抑制环氧化酶Ⅱ的活性。

中药活性成分抗耐药肿瘤细胞体外筛选研究

我们以两种耐药机制不同的多药耐药瘤株MCF-7/ADR和HL60/ADR为研究对象,对多种中药皂甙,大黄蒽醌和部分生物碱等成分进行了细胞杀伤实验和耐药逆转研究。结果表明,常现剂量下,皂甙体外对耐药和敏感细胞均没有杀伤作用,其中大多数不具备耐药逆转活性,少部分具有很低的耐药逆转活性;大黄蒽醌类对耐药和敏感细胞均有很强的杀伤作用,而且对耐药细胞的杀伤作用似乎更强,但也不具备逆转耐药活性;生物碱类普遍对耐药细胞生长有轻度抑制作用,并首次发现甾类生物碱PM1或PM2对上述两种不同耐药细胞的耐药性有明显逆转作用。

乳制品中具有降胆固醇功能乳酸菌的体外筛选

用改良的o-phthalaldehyde法对pH3.0和0.3%牛胆酸钠有一定耐受性的10株乳酸菌的体外降胆固醇活性进行了测定。这些菌在含0.3%胆盐的培养基中,37℃厌氧培养24h后,均表现出较强的降胆固醇活性。胆固醇脱除率从30.4%￣43.6%不等。其中鸟肠球菌WZ38-2对胆固醇的脱除率最高;其次为植物乳杆菌WH13-1和WH23-1。

一种结合代谢的抗疟药体外筛选方法

目的 :建立一种结合肝微粒体代谢的抗疟药体外筛选方法。方法 :在恶性疟原虫体外培养筛选抗疟药的常规方法基础上 ,加入以大鼠肝微粒体及氧化型辅酶 等辅助因子组成的体外代谢系统 ,分别检测常用抗疟药氯喹、咯萘啶、环氯胍与氯胍的抗疟活性。结果 :除氯胍外 ,其它 3药的原药即有抗疟活性 ,但氯胍必须经代谢转化成代谢产物后才有抗疟作用。结论 :结合代谢的抗疟药体外筛选方法可以避免漏筛那些需经代谢转化后才具抗疟作用的化合物。

抗HIV药物的体外筛选和研究方法

合适的体内外药物研究方法是研究和开发新药中最关键的环节之一。由于至今尚无理想的艾滋病(AIDS)动物模型 ,目前抗人免疫缺陷病毒 (HIV)药物的筛选和研究仍然主要依赖于各种体外的筛选和研究方法。本文简要综述了抗HIV药物的体外筛选和研究方法。

血管紧张素转化酶抑制剂体外筛选模型的建立

目的 :本文通过紫外法与荧光法测定血管紧张素转化酶 (ACE)活性 ,建立血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)的体外筛选模型。方法 :采用紫外法和劳光法测ACE的活性。结果 :两种方法均有良好的线性关系 ,测定卡托普利对ACE活性的抑制作用结果相符。荧光法避免了样品色素的干扰 ,可测定丹参提取液对ACE的抑制作用。结论 :本筛选模型采用微量法 ,用酶标板进行测定 ,操作简便、快速、节约试剂和样品 ,具有高效、快速、可靠的特点。

单胺氧化酶抑制药物体外筛选模型的建立

目的:构建一种能用于治疗神经退行性变疾病单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)抑制药物的体外筛选模型。方法:采用紫外分光光度方法,以苄胺或5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)分别作为MAO-B或MAO-A的反应底物,测定其活性,并对MAO浓度、底物浓度、缓冲液浓度、pH值、反应时间和温度等进行优化。结果:研究确定的模型反应体系条件为:在温度37℃、酶预孵育时间20 min和反应时间60 min下,测定MAO-B活性最佳条件为100 mmol/L磷酸钾缓冲液(pH 7.6),MAO和底物苄胺的终浓度分别为0.15 mg/ml和2.00 mmol/L;测定MAO-A活性最佳条件为100 mmol/L磷酸钾缓冲液(pH 7.4),MAO和底物5-HT的终浓度分别为0.40 mg/ml和5.00 mmol/L。结论:建立了一种MAO抑制药物体外筛选的模型,该模型具有成本低、操作简便等特点,适合于大规模筛选MAO-B和MAO-A的抑制药物。

口服胰岛素微球促吸收剂的体外筛选

目的 :筛选用于口服胰岛素的促吸收剂 .方法 :以胰蛋白酶为模型药物 ,通过体外肠囊翻转实验 ,以肠囊内外液中酶活力的比值为评价指标 ,考察胆盐、脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、氮酮、脑磷脂、EDTA及其复方的促吸收效果 .结果 :单独使用时 ,胆盐Ⅲ号 (BSⅢ )的促吸收效率最低 ,3h仅为 11.8% ,脱氧胆酸钠的促吸收率最高 ,3h为 5 9.7% ;复合促吸收剂脱氧胆酸钠 +氮酮 +脑磷脂能在 3h内达到最佳促吸收效果 ,吸收率为 81.3% .结论 :复合促吸收剂的效果优于单一促吸收剂 ,脱氧胆酸钠 +氮酮 +脑磷脂的促吸收效果最好 .

5α-还原酶抑制剂体外筛选模型的建立

目的:建立5α-还原酶抑制剂体外筛选模型。方法:通过紫外分光光度法,考察待筛物是否引起反应体系340 nm处吸光度发生变化,以此反映待筛物能否抑制5α-还原酶活性。结果:该方法能反映待筛物对5α-还原酶活性的影响。结论:该方法可广泛用于5α-还原酶抑制剂的初筛。

一个简捷的甾体5α-还原酶抑制剂体外筛选模型

通过模拟睾丸酮经甾体5α-还原酶催化,从NADPH(辅酶)中获得H^+还原成双氢睾丸酮(DHT)这一反应,参照文献资料以酶动力学原理,分别测定反应底物NADPH和产物[~3H]-DHT含量变化的初始速率以代表酶活性,建立了“分光光度计法”和“同位素法”体外筛药模型,通过这两种模型对比,以非那甾胺为阳性对照药物,对爱普列特进行了体外模型验证研究。两种筛选模型结果一致,确定非那甾胺和爱普列特的抑制常数:用测定OD_(340)nm值的“分光光度计法”求得爱普列特抑制常数Ki=24.9±1.3nmol/L,半数抑制浓度IC_(50)=39.0 nmol/L;非那甾胺Ki=15.3±2.3 nmol/L,IC_(50)=58.6 nmol/L。用测定[~3H」-DHT dpm值的“同位素法”求得爱普列特Ki=67.4±13.2 nmol/L,IC_(50)=49.6nmol/L;非那甾胺Ki=25.0±1.9 nmol/L,IC_(50)=5.1nmol/L。该结果与国外文献中报道的爱普列特Ki=5～23 nmol/L,非那甾胺Ki=23.6 nmol/L相接近。

降血脂益生菌体外筛选模型的建立

心血管疾病是对人类危害最大的疾病之一,而血清胆固醇含量的升高是引起这一疾病的重要因素。实验证明特殊种类益生菌具有降低血清胆固醇的功能,不过还需要大量的人体临床实验来证实。本文的工作是建立一种筛选具有降血清胆固醇功能益生菌的体外模型。在前人实验结论的基础上,经过大量实验我们建立了从菌种分离、培养、扩增到最后培养物中胆固醇含量测定的一整套实验方法:茵源经过72小时的平板厌氧培养后分离出单菌落,再经72小时的平板划线扩增,然后接种到含有胆固醇和牛胆汁的液体培养基中培养24小时,最后用高铁硫酸比色法测定培养物中的胆固醇含量。目前这个体外模型已经通过动物实验的验证,是行之有效的。

几种治疗猪附红细胞体病临床药物的体外筛选试验

为筛选出有效的治疗猪附红细胞体的临床用药,选用感染率在90%以上的阳性血液,通过体外培养的方法,分别用附弓血虫清、原虫净、金诺米先、血呼平、三氮脒对猪附红细胞体进行体外杀灭作用研究。结果表明,血呼平效果最佳,其次是三氮脒、金诺米先,附弓血虫清、原虫净效果不佳。

抗病毒中药体外筛选噬菌体-细菌模型的初步探索

目的:运用噬菌体技术对建立抗病毒中药体外筛选噬菌体-指示菌模型进行初步尝试。方法:采用双层琼脂平板-纸片法,利用枯草杆菌噬菌体-枯草杆菌和大肠杆菌噬菌体-大肠杆菌两种噬菌体-指示菌模型,对三氮唑核苷和氟脲嘧啶进行抗病毒阳性对照物筛选;对板蓝根和大蒜进行中药抗病毒初步试验。结果:氟脲嘧啶筛选结果呈阳性,三氮唑核苷的筛选结果呈阴性;中药受试物为大蒜汁试验结果呈阳性,板蓝根试验结果呈阴性。结论:以噬菌体-指示菌系统为模型进行抗病毒中药的筛选工作,尚需进行大量试验来建立较为完善的对照模型和筛选模型;但作为一种全新的筛选体系,噬菌体-指示菌系统具有一定的良好应用前景。

抗肿瘤药物体外筛选方法

肿瘤的化疗目前还是一项有效的治疗措施.但用于临床的抗肿瘤药物普遍存在选择性差、毒副作用大、易产生耐药性等问题,因此继续寻找选择性高、毒副作用小的抗癌药是抗肿瘤新药研究的重点.每年都有大量的植物提取物以及化合物出现,如何进行药物初筛仍是工作的一个重要环节.本文就常用抗肿瘤药物的体外筛选方法进行简要介绍.