肉羊体外胚胎生产技术规模化应用中品种的影响

旨在分析品种因素对OPU-IVEP商业化快繁效率的影响。本研究以经品种鉴定的健康8月龄至3周岁黑头萨福克、黑头杜泊、德克赛尔肉用种母羊为试验供体,在内蒙古赛诺种羊科技有限公司,采用OPU技术获取卵母细胞并进行体外胚胎工厂化生产或经腹腔镜输精和手术冲胚获得体内胚胎,进行胚胎移植,记录卵母细胞回收、胚胎发育以及移植妊娠的相关数据,进行统计分析。比较不同品种在体外胚胎规模化生产中卵母细胞回收效率、卵母细胞体外受精和胚胎发育能力、胚胎移植妊娠和产羔效率等方面的差异;同时,还比较了不同品种体内、外胚胎生产技术的应用效果。结果表明:1)3个品种间卵母细胞回收率差异极显著(P<0.01),黑头杜泊回收效率最高;2)3个品种的体外受精卵裂率无显著差异(P>0.05),但德克赛尔羊的囊胚发育率极显著高于其他两个品种(P<0.01);3)无论体内胚胎还是体外胚胎生产移植,各品种间胚胎移植受胎率和平均产羔数均无显著差异(P>0.05),且各品种内,体内胚胎和体外胚胎移植的平均受胎率和产羔率均无显著差异(P>0.05)。综上所述,在工厂化、规模化应用绵羊体外胚胎生产技术过程中,不同品种间卵泡发育、回收卵母细胞数、囊胚发育率等存在差异,平均卵泡数和平均回收卵母细胞最少的德克塞尔羊的囊胚发育率最高;移植后受胎和产羔情况在不同品种间无显著差异,体内胚胎和体外胚胎单次生产获得的后代数也无显著差异,但OPU-IVEP的供体利用率远大于MOET。

羊活体采卵及体外胚胎生产技术研究进展

近年来,集约化养羊业发展迅速,对具有优良性状的羊需求量逐年增加。高效的繁殖技术为羊群体的扩大提供了重要技术基础,特别是超数排卵-胚胎移植技术已经在羊的繁育中得到了高效应用,同时以羊的活体采卵技术、体外胚胎生产技术、幼畜超数排卵胚胎和移植技术等为核心的技术体系也取得了重要进展。活体采卵是指从活体家畜体内回收卵母细胞的技术,是羊体外胚胎生产的重要前提环节。文章对近年来羊体外胚胎生产的发展历程、相关技术应用现状及前景进行综述,以期为羊活体采卵、体外受精和胚胎移植技术的进一步完善提供参考。

BO液-CR1aa体系在鹿体外胚胎生产中的使用效果

为探索BO液-CR1aa体系是否可用于鹿的体外胚胎生产,试验于5%CO_(2)气态条件(单气条件)下,用BO液-CR1aa体系对梅花鹿和非繁殖季节马鹿进行体外胚胎生产,同时于5%O_(2)、5%CO_(2)、90%N_(2)气态条件(三气条件)下,分别用BO液-CR1aa体系和BO液-20%绵羊血清(SS)-SOFaa体系对梅花鹿进行体外胚胎生产,并以SOFaa液-CR1aa体系、SOFaa液体系作为对照,从体外受精开始算起,第48小时检测卵裂情况,第5~7天检测胚胎发育情况。结果表明:单气条件下,将在体外成熟22~24 h的COCs在BO液中受精,在CR1aa培养液及CR1aa-10%FBS-输卵管上皮细胞(OEC)培养液中共培养的卵母细胞中仅有1个发生卵裂并在4-cell阶段停滞,总卵裂率为2%。梅花鹿COCs在BO液-CR1aa体系中的卵裂率为20%,有1个受精卵发育到了4-cell阶段;在SOFaa液-CR1aa体系中的卵裂率为17%,有1个受精卵发育到了2-cell阶段;而在SOFaa液体系中的卵裂率为50%,并有1个受精卵成功发育到了桑囊胚阶段,有2个受精卵在BO液(20%SS)-SOFaa体系中发育到了8-cell阶段,卵裂率提高到33%。用0.02 IU/mL LH代替成熟液中0.001 IU/mL LH使1个非繁殖季节马鹿受精卵发育到了4-cell阶段。说明在单气条件和三气条件下,BO液-CR1aa体系均不能用于梅花鹿体外胚胎生产,在BO液中添加20%SS可以提高梅花鹿卵母细胞的体外受精效果;BO液-CR1aa体系或许可用于我国马鹿的体外胚胎生产,但想要受精卵发育到桑囊胚阶段,还需对BO液-CR1aa体系进行进一步改良。

人类体外胚胎利用活动的私法回应——以《民法典》第一千零九条为中心

面对人类体外胚胎利用活动,《民法典》不仅选择积极介入而且决定有限开放。为避免潜在风险,《民法典》不仅直接规定了多种风险预防机制,如提高合法标准、设置三大底线和强调人格尊严,而且还间接引致了多种风险预防机制,如划定行为禁区、限制利用对象和实施伦理审查。即便是在《民法典》的框架下,对人类体外胚胎的利用活动所引发的损害进行救济依然是可能的。但是,《民法典》所能供给的侵权责任方案存在很多局限。因此,后续立法应同时引入其他损害救济方案。从我国现行立法来看,潜在选择有强制责任保险方案、商业保险方案、社会救助基金方案和国家补偿方案。后续立法甚至可以建立同时包含四者的综合救济体系。为确保受害人能获得救济,应由国家兜底。

科尔沁肉牛体外胚胎冷冻保存的研究进展

科尔沁肉牛主要产于中国内蒙古东部地区的科尔沁草原,是当地主要养殖对象,养殖质量更是直接关系到当地的农业经济发展水平。随着养殖技术的不断提升,当地相关技术部门也开始通过胚胎移植等先进技术来促进科尔沁肉牛的遗传改良,其中体外胚胎冷冻保存技术是重要的环节之一,常规冷冻以及玻璃化冷冻方法虽然可以有效地提高保存效果,但是冷冻过程中存在脂质含量过高、活性氧水平升高及机械损伤等问题,这会降低体外胚胎的冷冻效率,不利于提高冷冻后胚胎的存活率和发育能力。基于此,笔者就科尔沁肉牛体外胚胎冷冻保存进行了研究,以期可以为当前肉牛繁殖工作的高效开展提供科学的参考依据。

牛供体细胞的来源、血清饥饿和预激活对核移植卵体外胚胎发育的影响

牛皮肤成纤维细胞经血清饥饿或预激活处理后获得核胞体 ,并注入去核卵母细胞内构建重组胚。检查重组胚 2 4h和 36h卵裂率以及 8d囊胚率 ,以评估供体细胞及其处理方法对体细胞核移植效果的影响。实验结果表明 :来自 3个年龄 (6、 18和 36月龄 )、 2个品系 (红安格斯肉牛和荷斯坦奶牛 )的 4头供体牛皮肤细胞重组胚的卵裂率和囊胚率均无差异。生长到完全汇合的 36月龄荷斯坦牛供体细胞血清饥饿 10～ 13d组重组胚的 36h卵裂率显著低于 0d (对照 )、 3～ 5d和 6～ 9d组 ,囊胚率显著低于 3～ 5d组 ;经 5 μmol/L离子霉素或7%乙醇预激活 5min重组胚的卵裂率和囊胚率均与对照组无差异。

全日制放牧BMY牛的活体采卵-体外胚胎生产-胚胎移植研究

为建立BMY牛的活体采卵(OPU)-体外胚胎生产(IVP)-胚胎移植(ET)快速扩繁技术体系,从人工草地全放牧牛群中选择健康的经产空怀BMY牛作为供体(n=14)集中OPU一次;卵母细胞经TCM-199体外成熟培养(IVM)、Fert-TALP液体外受精(IVF),受精卵用合成输卵管液(SOF)体外培养(IVC)生产胚胎;BMY牛受体(n=81)用CUE-MATETM孕酮阴道栓+EB+FSH+PG方法同期发情处理,对黄体合格的移植OPU-IVP来源鲜胚。研究结果表明:①OPU头均获卵母细胞23.50枚,获10枚以上卵母细胞的供体占85.7%;IVP的平均囊胚数和可用胚数分别为5.21和4.00枚;OPU前8～9d卵巢上有黄体(CL)的供体,头均获卵母细胞数及IVP的囊胚数、可移植胚数、囊胚率和可移植胚率分别比对照组高7.28枚(P<0.05)、7.29枚(P<0.05)、6.00枚(P<0.05)、27.3%(P<0.01)和23.2%(P<0.01);②受体黄体合格率69.1%(56/81),胚胎移植妊娠率37.5%(21/56),产犊率35.7%(20/56);③受体在胚胎移植时注射GnRH,其妊娠率比对照组高16.2%(P>0.05)。结果显示,BMY母牛具有良好的OPU潜力,但个体间差异较大;可通过严格供体选择及改善IVP技术等措施,实现OPU-IVP效率最大化。CUE-MATETM+EB+FSH+PG同期发情处理方法适于在牛规模化胚胎移植(ET)和人工授精(AI)中应用。综合应用OPU、IVP、同期发情和ET技术是加快优良BMY牛扩繁的重要途径之一。

猪体外胚胎生产的研究进展

与牛羊等动物的体外胚胎生产(invitroproduction,IVP)技术相比,猪IVP技术尚不成熟。猪IVP主要存在卵母细胞的细胞质成熟差、多精子受精率高和胚胎质量差的问题,这严重制约了该繁殖生物技术在转基因猪生物反应器领域的应用。笔者在查阅近10年的国内、外相关研究后,从如何优化猪卵母细胞的体外成熟(invitromaturation,IVM)、体外受精(invitrofertilization,IVF)和胚胎的体外培养(invitroculture,IVC)3个方面进行了探讨。

牛体外胚胎高效生产技术优化研究

为了探讨小卵泡液、放线菌酮(CHX)对卵母细胞预成熟、囊胚滋养层细胞囊泡(TVS来源于体外受精培养14 d的滋养层细胞)、维生素对牛体外胚胎质量的影响。在B超仪下进行牛活体取卵(OPU),从牛活体卵巢采集卵母细胞,进行体外成熟、体外受精、早期胚胎体外培养。结果表明:10%小卵泡液及8%CHX的卵母细胞预成熟4 h组显著优于对照组;在体外受精及早期胚胎培养液CR1aa中添加10μg/m L维生素C组与TVS共培养组的卵裂率和囊胚发育率均高于其他试验组(P<0.05);体外胚胎与TVS共移植受胎率显著高于对照组(P<0.05)。说明活体采集的卵母细胞经体外预成熟处理,可以达到核质同期化的目的,早期胚胎的培育过程中加入TVS、抗氧化剂等可以克服早期胚胎的发育阻滞,提高体外胚胎的囊胚发育率。

绵羊体外胚胎对移植受胎率及后代生长性能的影响

【目的】为了在不影响后代生产性能的基础上最大限度地提高体内、体外胚胎移植效率,从而为体外胚胎在生产中的应用奠定基础。【方法】从移植胚胎数量方面着手,比较其对体内、体外胚胎移植受胎率和产羔率的影响;并以常用的胚胎移植作为对照,研究体外胚胎与其生产效率存在的差距;并对不同来源的后代生产性能进行测定,对比体外胚胎在生产中的生产效率。【结果】(1)移植2枚体外早期胚胎的受胎率(60.42%)显著高于移植1枚胚胎的结果(48.54%)(P<0.05),前者的产羔率也极显著高于后者(74.68%vs 41.96%,P<0.01);(2)移植单枚体外胚胎的受胎率和产羔率皆显著低于体内胚胎(P<0.05);(3)受体移植双枚体内或体外胚胎,受胎率和产羔率都没有差异(P>0.05)。(4)体外胚胎移植后代的公羔比例与体内胚胎没有差异,但显著高于自然繁殖(P<0.05)。(5)体外胚胎的后代虽然初生重要显著低于体内胚胎(4.98 vs 6.2,P<0.01),但其3月龄体重和存活率与体内胚胎后代皆没有差异(P>0.05),且与自然繁殖组间都没有差异(P>0.05)。【结论】相对于早期胚胎,体外胚胎移植2枚,体内胚胎移植1枚的生产效率较高。并且对后代生产性能没有影响。

瘦素对牛体外胚胎早期发育阻滞的克服

旨在研究瘦素(Leptin)对于牛早期体外胚胎发育阻滞的影响。本研究采用:(1)卵母细胞受精后在不含血清情况下加入不同浓度的Leptin(0、1、10、100ng·L-1 Leptin并以血清组为对照),观察胚胎的发育能力;(2)用RT-PCR方法对正常发育胚胎及阻滞胚胎的Leptin mRNA表达量进行检测;(3)用RT-PCR方法对添加外源性Leptin胚胎的L-R、STAT3mRNA表达量进行检测。结果表明:(1)在卵母细胞受精后加入10或100ng·L-1Leptin胚胎的卵裂率及囊胚率显著高于对照组(P<0.05);(2)正常发育胚胎的Leptin mRNA的表达量显著高于阻滞组(P<0.05);(3)添加外源性Leptin胚胎L-R、STAT3mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05)。综上表明:Leptin在牛早期胚胎发育过程中起到重要作用,Leptin和L-R表达量降低预示着胚胎发育停止,并通过JAK/STAT3途径发挥作用。

论类型化视角下体外胚胎之法律属性

体外胚胎区别于人,又无法等同于物,已成为对传统人、物二分格局的最大挑战。对体外胚胎之法律属性,我国立法并未涉及,国内学界众说纷纭,在个案审理中法院之观点也各有不同,由此折射出其定性之困。面对用途各异之体外胚胎和日益多元化之个案情形,单一的法律属性无法全面覆盖,无论是主体说、客体说,抑或中介说均有所缺憾。对此,可以类型化分析为视角,以人、物转化说与分离目的说为基础,区分胚胎存放之目的以及胚胎供体是否存活,对体外胚胎之法律属性予以区别对待。

体外胚胎的法律属性与处置权

随着人类辅助生殖科技的飞速发展,体外受精-胚胎移植技术给饱受不孕之苦的夫妇带来了福音。与此同时,因这项技术而产生纠纷的案件也随之增多。但是,我国现有法律并未明确体外胚胎的法律属性,从而造成法官在判决过程中缺少合理的支撑。因此,明确体外胚胎的所有权、处置权和继承权是十分必要和迫切的。目前,理论学界对体外胚胎的法律属性主要分为主体说、客体说和中介说。中介说看似避免了主体说和客体说的不足,实际上并未对体外胚胎作出清晰具体的解释。体外胚胎是具有基因唯一性、应受到特殊尊重与保护的伦理物。为了社会资源分配公平,建议我国对体外胚胎的保存期限定为婚姻存续期间且女性生育年龄内。

体外胚胎在我国民法上的应然属性及其价值考量——基于国情和社会发展趋势的分析

体外胚胎的民法属性是我国司法实践中不容回避的待决难题。现有各种学说或者不符合我国国情,或者未能充分尊重体外胚胎的生理价值和社会意义,难以合理地解决问题。以现阶段我国的国情为出发点,围绕辅助生育技术利用人和体外胚胎间的关系这一关键问题展开分析,认为后者应属于民法意义上的权利客体,而权利人对于体外胚胎享有的权利的核心是一种准身份性的利益。为了有效地保护这种利益,应将这种权利界定为准身份权。出于保护胚胎创造者、胚胎可能发展成的人以及社会生育秩序的目的,需要明确行使和让渡该权利时的一系列特殊规则。

幼畜超数排卵及体外胚胎生产技术在青海高原地区的应用研究

以6~7周陶赛特羔羊为超排对象,高原型藏羊为受体,首次在青海省开展JIVET技术应用试验。结果：羔羊超排采集卵母细胞27.16枚/只,体外受精率91.38%,卵裂率47.41%,胚胎移植怀孕率16.66%,产下5只纯种陶塞特羔羊,表明试验取得成功,综合分析认为青海高寒牧区绵羊营养水平对JVET技术的应用具有重要的影响。

体外胚胎的处分问题研究

体外受精-胚胎移植技术产生的体外胚胎是"物",虽然具有发展成人的潜能,但其无法取得"人"一样的权利主体地位。体外胚胎不同于一般的物,法律应予以特殊保护。中国现有法律禁止胚胎买卖,对其他处分亦应予以适当限制。从尊重胚胎与人的生育权角度看,体外胚胎应允许被继承。离异夫妻对体外胚胎处分产生分歧时,应优先考虑不愿意生养孩子一方的利益,不得将体外胚胎孕育成人。夫妻一方死亡时,另一方得在法律许可范围内处分体外胚胎。体外胚胎无人继承时,应由负责保管的医疗机构处分该胚胎。

褪黑素对牛体外胚胎生产效果的影响

为了探讨褪黑素对牛体外胚胎生产效果的影响,对体外成熟液(TCM199),受精液(BO)及胚胎培养液(SOF)添加不同浓度(0、10^(-8)、10^(-9)、10^(-10)褪黑素,研究在体外胚胎生产全程添加褪黑素对体外受精效果的影响。分别从屠宰场采集卵巢获得卵母细胞,卵母细胞经体外成熟、体外受精、早期胚胎体外培养。试验结果表明:体外胚胎生产过程中填加10^(-9)褪黑素组的卵母细胞卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数显著优于其对照组(P<0.05);说明体外胚胎生产过程中全程填加抗氧化剂,可以达到抗细胞过氧化反应的目的,克服早期胚胎的发育阻滞,提高体外胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数,提高囊胚质量。

体外胚胎的基因遗传权保护问题探析——兼评“江苏无锡冷冻胚胎案”

体外胚胎作为现代医疗科学技术发展的产物,在改变人类生殖体系的同时,引发了一系列亟待解决的相关法律问题。通过对目前国内相关学者所提出的"主体说""客体说"和"中介说"等学说的批判性思考,揭示其在理论层面的局限性,从而得以否定以上三种学说的合理性。而后从伦理学、法理以及比较法等角度对该问题进行系统性的论述,揭示体外胚胎的法律地位,即人格利益属性。在该定性的基础之上,借助于有关学者提出的基因权理论,最终将体外胚胎界定为基因遗传权的客体。因此,有必要对江苏无锡冷冻胚胎案的裁判结果予以重新审视。同时,建议在立法层面建立起体外胚胎基因遗传权的法律保护体系,完善侵害基因遗传权的救济措施,以实现对体外胚胎基因遗传权的法律保护。

绒山羊母羔体外胚胎生产技术操作细则

文章详细介绍了辽宁绒山羊母羔体外胚胎生产技术的操作流程,包括实验室要求、母羔超排处理、公羊精液处理、卵母细胞采集、卵母细胞成熟培养、体外受精、早期胚胎体外发育培养、胚胎移植等,并附日程安排、SOF配方、记录表等,供相关科技人员参考。

论体外胚胎的法律地位及其物权保护——兼评“冷冻胚胎争夺案”

人工辅助生殖技术的发展引致体外胚胎法律问题出现,并对传统民法理论与制度提出了挑战。体外胚胎的法律地位是处理相关问题的基础,国内外学界有主体说、客体说、中间说等主张。体外胚胎应属民事法律关系的客体,但区别于一般客体,作为特殊物,法律应当给予其特殊的尊重和保护。对体外胚胎应区分来源给予不同的物权保护,但应严格禁止买卖并限制保存期;对剩余体外胚胎的处理,当事人与医疗机构有约定的依约定,无约定的,只能用于科学研究或者销毁。