软骨胶原蛋白肽的制备、特性及其成骨细胞增殖活性研究

为充分利用鲨鱼软骨资源,本研究以成骨细胞增殖率为指标,在优化促成骨细胞增殖胶原蛋白肽酶解工艺的基础上,分析酶解物的相对分子质量、氨基酸组成及稳定性等。结果表明,酸性蛋白酶为最优蛋白酶,且在酶添加量5 100 U·g^(-1)、料液比1∶50(g·mL^(-1))、酶解时间4.14 h和温度55℃条件下,得率为91.23%。所制酶解物促成骨细胞增殖率与水解度分别为141.23%与25.03%;鲨鱼软骨胶原蛋白肽具有一定的稳定性且对紫外光不敏感,适当加热可以提升其促成骨细胞增殖率,但温度过高会使增殖率显著下降;经胃肠模拟消化后,酶解物促成骨细胞增殖率显著下降;所制酶解物以疏水氨基酸为主,其蛋白肽分子量一般小于3 kDa,具有促进成骨细胞增殖、分化及矿化作用,以浓度1.0 mg·mL^(-1)时效果较佳。本研究可为鲨鱼资源精深加工和高值化利用提供一定理论依据。

基于成分群动态变化探索药材质量优劣判断方法初步研究

目的:探索评价药材质量优劣的新方法。方法:以怀牛膝药材为研究对象,采用HPLC法构建18批怀牛膝药材的化学成分群图谱;采用MTT法测定各批怀牛膝药材相应的成骨细胞增殖活性,由此构建活性数据库;利用偏最小二乘法(PLS)对药材指纹图谱与成骨细胞增殖活性的相关性进行分析;对分析得到的YZL值进行正态拟合,并界定判定药材质量优劣的YZL值区间;并以另外10批药材对该判定方法和YZL区间值进行验证。结果:从测定得到的18批怀牛膝药材的指纹图谱中提取得到16个共有峰;以PLS法建立了药材共有峰峰面积与活性间的回归模型,得到相应的标准化回归系数,由此判断出怀牛膝指纹图谱的16个共有峰中1、2、4、5、6、7、11、13、15、16号色谱峰与活性呈正系数相关,其余各峰与活性呈负系数相关;基于回归模型相应标准化回归系数的正负性,经多重综合分析,提炼出YZL值(正、负系数相关峰峰面积和之比值);通过对YZL值进行正态拟合并界定,得到当YZL值≥0.9639时,该怀牛膝药材为优品;当YZL值≤0.6112时,该怀牛膝药材为劣品;该判定方法得到了验证。结论:PLS法适用于怀牛膝指纹图谱与成骨细胞增殖活性的相关性分析;YZL值可用于判定和划分怀牛膝药材质量的优劣;当YZL值≥0.9639时怀牛膝药材为优品,当YZL值≤0.6112时怀牛膝药材为劣品;验证性判断结果支持本文所建立的药材质量优劣评价新方法。