促黄体激素释放激素及其受体的研究进展

对促黄体激素释放激素及其受体的结构、分布、功能以及研究现状进行了阐述,归纳了促黄体激素释放激素的主要功能。促黄体激素释放激素及其类似物LHRH激动剂和拮抗剂临床上主要用于闭经的治疗、不孕症的诱发排卵治疗、子宫内膜异位症及妇科肿瘤等治疗。促黄体激素释放激素的结构和分布特点对于进一步研究促黄体激素释放激素及其类似物抑制肿瘤、导向传递药物治疗癌症方面有重要的意义。

东北虎促卵泡激素和促黄体激素基因的克隆及其序列分析

本研究首次从东北虎 (Pantheratigrisaltaica)脑垂体提取总RNA ,利用RT PCR技术扩增出东北虎垂体促性腺激素α亚基、促卵泡激素 (FSH) β亚基和促黄体激素 (LH) β亚基的编码区序列 ,并进行克隆、测序和比较分析。结果表明 ,其α亚基、FSHβ亚基、LHβ亚基基因的开放阅读框分别为 36 3bp、 390bp和 4 2 9bp ,分别编码 12 0、 12 9和 14 2氨基酸的前体蛋白。与已发表的人、牛、绵羊、猪、大鼠、小鼠等物种相应序列比较 ,无论在核苷酸水平 ,还是在氨基酸水平都显示出较高的同源性 (6 4 7%～ 96 6 %) ,其中与猪的同源性最高(86 %～ 96 6 %)。东北虎的基因序列还具有其明显的特异性 ,首次发现LHβ亚基cDNA编码的前体蛋白在信号肽部分比其它物种相应序列多一个亮氨酸残基 (Leu)。

米非司酮对离体大鼠垂体细胞促黄体激素分泌的影响及其机制

本实验应用垂体细胞体外培养模型 ,观察了米非司酮 (MP)对GnRH、高浓度细胞外K+([K+]e)和蛋白激酶C激活剂PMA诱导的LH分泌的影响。结果证实MP可以剂量和时间依赖方式抑制GnRH诱导的LH分泌 ,并可拮抗P调节GnRH诱导的LH分泌效应。同时发现 10 -7mol/LMP短时间处理 4h能抑制 6 0mmol/LKCl和 10 -8mol/LPMA诱导的LH分泌 ,而 10 -7mol/LP短时间处理则起促进作用。当处理时间延长为 5 2h时 ,P对 6 0mmol/LKCl和 10 -8mol/LPMA诱导的LH分泌无明显作用 ,P也仅对 6 0mmol/LKCl刺激的LH分泌起抑制作用 ,但不影响 10 -8mol/LPMA诱导的LH分泌。当P和MP同时处理时 ,则MP可逆转P对高 [K+]e和PMA诱导的LH分泌的调节作用 ,表明MP影响GnRH诱导的LH分泌的机制可能与MP影响电压依赖性钙离子通道和PKC的活性有关。

半滑舌鳎促黄体激素基因克隆和表达分析及其血清浓度测定

利用RACE技术首次克隆了半滑舌鳎脑垂体中促黄体激素(LH)基因cDNA全长序列。该基因全长670 bp,开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸。与其他脊椎动物的LH成熟肽氨基酸序列同源性比较表明:半滑舌鳎LH与鲽形目和鲈形目同源性高58%～68%。另外,半滑舌鳎LH含有12个保守的半胱氨酸残基和1个N-糖基化位点(19～21 NQT)。实时荧光定量组织表达分析表明,LH mRNA在脑、垂体、卵巢等组织中表达,垂体中表达量最丰富,其他组织尤以脑、性腺表达量较高,推测半滑舌鳎LH可能具有广泛的垂体外生理功能;实时荧光定量PCR方法对繁殖周期雌性半滑舌鳎LH表达水平进行测定,结果表明,LH mRNA在Ⅱ～Ⅵ各繁殖周期的脑、垂体、卵巢3种组织都有表达,但表达水平有差异,在Ⅳ、V期表达量最丰富,说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。利用125I标记的放射免疫测定(RIA)技术检测繁殖周期半滑舌鳎血清LH浓度,结果表明LH在V期含量最丰富,也说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。

克罗米芬联合重组人促黄体激素在卵巢储备功能减退患者促排卵治疗中的应用效果

目的探讨克罗米芬联合重组人促黄体激素在卵巢储备功能减退患者促排卵治疗中的应用效果。方法将70例确诊为卵巢储备功能减退的患者随机分为观察组35例和对照组35例;观察组采用克罗米芬联合重组人促黄体激素治疗,对照组仅采用克罗米芬治疗,观察并比较两组患者的排卵率、妊娠率、子宫内膜血流及厚度。结果观察组的子宫内膜血流参数值PI与RI明显小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组的子宫内膜厚度大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组的排卵率和妊娠率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论克罗米芬结合重组人促黄体激素提高了卵巢储备功能减退患者的子宫内膜厚度,减少子宫内膜血流,使子宫内膜具有较好的容受性,从而提高促排卵效果,而且提高了妊娠率,值得在临床上进一步推广应用。

促黄体激素释放激素及其靶向毒素

促黄体激素释放激素受体可以作为某些恶性肿瘤细胞的靶标。促黄体激素释放激素(LHRH)的结合位点在人乳腺癌、卵巢和子宫内膜肿瘤以及前列腺癌细胞的中均有较高表述,而在人的正常组织中少有表达,因此成为一种有效的恶性肿瘤特异性受体。LHRH重组毒素能有效抑制接种LHRH受体阳性肿瘤的裸鼠肿瘤生长。本文对LHRH及其受体和靶向毒素的研究进展作了较全面的综述。

半滑舌鳎促黄体激素受体基因片段的克隆及组织表达分析

采用巢式RT-PCR法克隆了半滑舌鳎Cynoglossus semilaevis促黄体激素受体(Luteinizing Hormonene Recep-tor,LHR)基因部分序列,经过BLAST比对,认为该序列与庸鲽、牙鲆、黑鲷、尼罗罗非鱼、青鳉和红鳍东方鲀的LHR基因同源性分别为97%,94%,85%,83%,82%和80%。该基因片段长度为614 bp,编码204个氨基酸,含有典型的跨膜螺旋结构区域(TM helix),属于糖蛋白激素受体(GHR)家族。组织表达分析表明,LHR基因在半滑舌鳎的卵巢、精巢、肝脏、胃、肠、鳃、心、脾、肾、头肾和脑中均有表达,表达量有所不同,以脾和肾中表达量最丰富。

促黄体激素释放激素修饰的甲氨蝶呤体内释放研究

目的研究促黄体激素释放激素修饰的甲氨蝶呤(LHRH-MTX)在模型动物体内释放MTX情况。方法建立HPLC的分析方法,经尾静脉注射给药,测定荷瘤裸鼠血液和组织中的药物浓度;与MTX制剂比较,评价LHRH-MTX在体内释放MTX情况。结果建立的HPLC分析方法回收率高于85%,日间和日内精密度(RSD)均小于10%,符合生物样品分析要求;静脉注射给药后,经统计学分析,与MTX制剂相比,LHRH-MTX释放的MTX在血浆、肝脏、肾脏的浓度有明显下降(P<0.05),而在肿瘤组织有明显提高(P<0.05)。结论所建立的HPLC用于LHRH-MTX体内释放研究结果良好,LHRH-MTX释药后MTX在体内的组织分布有明显的改变,在肿瘤部位有明显的浓集。

大菱鲆促黄体激素受体基因的克隆及其生物信息学分析

通过兼并引物扩增及RACE技术,克隆大菱鲆促黄体激素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)基因,分析其相应生物信息学特征和组织表达。结果显示:LHR基因序列全长3 184 bp,编码685个氨基酸,同大西洋庸鲽同源性最高。氨基酸序列分析发现,该基因编码蛋白为疏水性蛋白,相对分子量76.54 ku,理论等电点7.22,存在信号肽序列和跨膜区;亚细胞定位主要在内质网和细胞膜;预测该蛋白含有33个磷酸化位点、5个糖基化位点、6个富含亮氨酸重复序列、7个跨膜保守结构域,二级结构以无规则卷曲为主,三级结构其结构域呈α螺旋状构象;蛋白功能预测表明,LHR主要在辅助、运载、翻译和代谢调节过程中发挥关键作用。组织表达分析表明,LHR基因除在卵巢大量表达外,在其他非性腺组织也有表达,尤其是在肝脏表达较高。上述结果为深入探讨LHR基因在大菱鲆性腺发育过程中的生物学功能奠定了遗传信息基础,也为研究其他海水养殖鱼类生殖调控提供重要参考。

黄颡鱼促黄体激素受体基因克隆及在雌鱼繁殖周期中的表达

通过简并引物扩增及SmartTM Race技术,首次克隆了黄颡鱼促黄体激素受体(LHR)基因cDNA全长序列。该基因全长2 524 bp,编码701aa,含有属于糖蛋白激素受体(GpHR)家族的典型跨膜螺旋结构区域(TM helix)。9个富含亮氨酸的重复性序列(LRRs);4个潜在的N-端糖基化位点:29NFTC,82NVSR,203NGSR,548NLTV;24个Ser,6个Thr和5个Tyr磷酸化位点。同时400S为潜在的PKC位点。通过RT-PCR分析组织表达,卵巢繁殖周期中卵巢和脑的表达水平并结合血浆中E2含量的变化,发现LHR在卵巢中大量表达,其次是脑、肾脏、心脏、肝脏和肠存在少量或微量的表达;在卵巢繁殖周期中,卵巢LHR表达从Ⅲ期-Ⅴ期处于较高水平,Ⅴ期达到最高峰,随后下降到最低值;而脑的表达高峰出现在Ⅳ期,与血浆中E2变化相一致。推测卵巢和脑中LHR基因参与卵黄的生成,调控卵母细胞的成熟和排卵。

重组人促黄体激素联合克罗米芬在卵巢储备功能减退中治疗效果及对排卵影响

目的：探讨重组人促黄体激素联合克罗米芬在卵巢储备功能减退中治疗效果及对排卵影响.方法：选取2014年2月~2015年3月我院诊治卵巢储备功能减退患者80例为研究对象,采用随机分组表将患者随机分为研究组和对照组,每组40例.对照组给予克罗米芬治疗,研究组在对照组治疗基础上给予重组人促黄体激素治疗,比较两组患者治疗后子宫内膜厚度、子宫内膜血流情况,并对患者随访1年,比较排卵、妊娠及卵巢过度刺激综合征发生情况.结果：研究组患者子宫内膜厚度高于对照组,RI、PI水平低于对照组,比较有统计学意义（P〈0.05）.研究组患者排卵、妊娠发生率高于对照组,比较有统计学意义（P〈0.05）;两组患者卵巢过度刺激综合征发生率比较无统计学意义（P〉0.05）.结论：重组人促黄体激素联合克罗米芬在卵巢储备功能减退中治疗可改善患者临床症状,提高临床疗效.

大鼠卵巢促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体cDNA的克隆和在昆虫细胞中的高效表达

促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)是一种与G-蛋白偶联的糖蛋白。本文报道了从大鼠卵巢cDNA库中筛选LH/hCG受体cDNA及其在昆虫细胞中的高效表达。LH/hCG受体cDNA全长2403bp,编码受体信号肽和成熟受体674个氨基酸。用多角体病毒表达载体pVL1393,LH/hCG受体cDNA在昆虫细胞中得到高效表达。在非还原和还原条件下的SDS-PAGE分析显示,用亲和层析分离纯化的受体表观分子量分别为120Kd和92Kd。经配基结合和Scatchard Plot分析表明,其与hCG反应的Kd为8.4×10^(-9)mol/L,与CHO细胞表达产物相似。

134例更年期妇女血清促卵泡激素、促黄体激素、雌二醇变化的相关性研究

目的 :探讨更年期妇女内分泌功能改变发生时间、程度与下丘脑 垂体 卵巢轴功能的相关性。方法 :13 4例更年期妇女按年龄分成 3组 ,第一组 69例 ,年龄 40～ 44岁 ;第二组 2 7例 ,年龄 45～ 5 0岁 ;第三组 3 8例 ,年龄 5 1～ 60岁。每位妇女均测定血清促卵泡激素 (FSH)、促黄体激素 (LH)、雌二醇 (E2 )的水平。结果 :FSH、LH、E2均下降者 2 3例 ;FSH、LH增高者 77例 ;E2下降者 2 8例。发生内分泌改变的比例在第一组、第三组之间有显著性差异。结论 :更年期功能障碍的发生与严重程度也许是受下丘脑、垂体功能亢进的神经内分泌影响多于、早于卵巢分泌雌激素下降造成的影响 。

大鼠卵巢促黄体激素受体膜外微区(1-341)在昆虫细胞中的表达及其性质的初步研究

促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)N端膜外微区341个氨基酸残基(简称R341)与激素有很高的亲和力。本文报道编码R341的cDNA在昆虫细胞中的表达及其产物性质的初步研究。SDS-PAGE银染和免疫印迹结果显示,表达产物呈两条带:分子量为38.5Kd的主带和分子量为40.0Kd的次带。配基结合免疫印迹和^(125)IhCG结合印迹分析表明,表达产物R341具有与配基专一性结合的生物活力。竞争性配基结合曲线和Scatchard分析结果显示,重组受体R341和配基hCG有较高的亲和力,与hCG反应的Kd为5.68×10^(-10)mol/L。

超声结合BP神经网络预测GnRH激发试验中促黄体激素水平

目的:探讨超声结合人工神经网络技术预测促性腺激素释放激素(GnRH)激发试验中血清促黄体激素(LH)基础值及峰值的可行性。方法:对71例性早熟女童行常规超声检查子宫、卵巢,以其中61例的子宫体积、卵巢体积以及双侧卵巢最大卵泡内径为输入变量,分别以LH基础值及峰值为输出变量,建立反向传播(BP)神经网络,并将另10例作为测试样本,分析此10例的预测值与实际测量值的差异。结果:利用BP神经网络对LH基础值及峰值的预测结果与实际检测值比较差异无统计学意义。结论:利用超声结合BP神经网络预测GnRH激发试验中LH水平是可行且有效的。

恒河猴促黄体激素生物测定法及应用研究

目的建立恒河猴促黄体激素(LH)生物测定法。方法利用LH体外生物测定法,测定恒河猴血清中LH含量。结果测定方法的灵敏度为0.05ng/管,批内和批间误差分别为(3.18±1.52)%和(7.56±3.41)%,证明该方法准确性高;恒河猴血清中LH含量反应曲线和hLH标准曲线平行良好,说明该方法可以用来检测恒河猴血清中的具有生物活性的LH变化,反映了动物正常的生理状态;回收实验表明,在该测定方法中加入10ng、20ng、40nghLH时的回收率分别为(99.12±4.56)%、(99.31±6.49)%、(101.02±7.58)%,说明测定结果的可靠性。结论本实验所建立的LH体外生物测定法灵敏度高,稳定性强。

促黄体激素释放激素激动剂治疗术后卵巢巧克力囊肿的复发

本文报道了用促黄体激素释放激素激动剂(LHRH—A)治疗保守性及半根治术后卵巢巧克力囊肿复发14例,其有效率为92.86％,治愈率为85.71％,复发率是33.3％,用药后FSH、LH、E_2均下降,副作用比丹那唑轻,该药为不愿再次手术的病人提供一个可取的新途径。

促黄体激素释放激素类似物治疗围经绝期子宫肌瘤9例分析

应用促黄体激素释放激素类似物（LHRH－A）治疗围经绝期子宫肌瘤9例。剂量200～500μg每日肌肉注射，时间12～16周．治疗前后E2均值分别为176．65pg／ml，48．9225pg／ml，有显著差异（P＜0．02）。FSH，LH治疗前后无明显变化（P＞0．05）。B起示子宫大小．治疗前后均值分别为66．67×65×56．67mm，56．57×62．71×49．14mm。骨密度治疗后无下降，血红蛋白治疗前后无变化，痛经消失7例，好转1例。月经过多症状明显好转，无闭经，停药后随访中2例继发闭经，无病例因反应而停药，无病例需手术治疗。本文提出，延长治疗时间，至少24周，维持E水平30pg／ml，能达到闭经进入经绝期，替代手术治疗。

超声结合人工神经网络技术预测血清促黄体激素基础值

目的:利用超声结合人工神经网络技术预测血清促黄体激素(luteinizing hormone,LH)基础值。方法:选用71例性早熟女童进行常规超声检查子宫、卵巢,以其中61个病例的子宫体积、卵巢体积以及双侧卵巢最大卵泡内径为输入变量,以LH基础值为输出变量,建立BP神经网络,并用另10个病例作为测试检验,将预测结果与实际值作统计分析。结果:BP网络预测的结果与实际值作线性回归,得到回归直线的斜率为1.0088,回归直线的相关系数为0.977。结论:性早熟女童超声检查结合BP神经网络技术可以预测LH基础值。