鸡胚卵巢表观修饰酶基因的动态表达研究

表观修饰调控诸多的生物学过程,包括卵巢发育和生殖细胞减数分裂过程。试验选取鸡胚孵化的5个时期(E12.5、E15.5、E17.5、E18.5和E20.5),每个时期6个左侧卵巢样品,用RT-q PCR检测DNA 5m C、RNA m6A和组蛋白H3赖氨酸(去)甲基化酶基因的m RNA表达。结果表明:(1)三类甲基化表观修饰酶基因的m RNA在鸡胚E12.5~E20.5期均表达;(2)DNA 5m C甲基化酶基因DNMT3B在E12.5期表达最高,E15.5~E20.5期显著下降,去甲基化酶基因TET2在E18.5期表达显著高于E12.5期;(3)RNA m6A甲基化酶METTL14和去甲基化酶FTO的表达从E12.5期到E20.5期逐渐升高,ALKBH5在E20.5期的表达显著高于E17.5期;(4)组蛋白H3赖氨酸去甲基化酶基因KDM1B的m RNA表达在E20.5期显著高于E12.5期,而KDM1A在E15.5期相较于E12.5期显著下降。研究结果表明鸡胚发育的E12.5~E20.5期左侧卵巢表达多个表观修饰酶基因,且DNMT3B、TET2、METTL14、FTO、ALKBH5、KDM1A和KDM1B呈显著的动态变化。

猕猴桃软化过程中细胞壁修饰酶活性与果胶理化特性

为探究低温贮藏过程中猕猴桃果实细胞壁修饰酶活力和细胞壁果胶多糖理化特性的变化规律,本实验以不同贮藏时期的‘亚特’猕猴桃果实为研究对象,测定果肉硬度和果实中多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)、果胶甲酯酶(pectin methylesterase,PME)、果胶裂解酶(pectate lyases,PL)以及β-半乳糖苷酶(β-D-galaetosidase,β-Gal)等细胞壁修饰酶的活力。同时,分离得到3种细胞壁果胶多糖组分(水溶性多糖(water soluble polysaccharide,WSP)、反式-1,2-环己烷二胺四乙酸(trans-1,2-cyclohexanediaminetetraacetic acid,CDTA)溶性多糖(CDTA-soluble polysaccharide,CSP)和Na2CO3溶性多糖(Na2CO3-soluble polysaccharide,NSP)),并对其理化性质进行研究。结果表明:猕猴桃果实的软化模式为“快速-缓慢”两段式。PG活力在贮藏10 d时出现最大值(670.76 U/mg);PL和PME活力在贮藏5 d内增长幅度最大,分别增加至3.41 U/mg和9.17 U/mg。贮藏期间β-Gal的活力持续上升,与果实硬度呈极显著负相关(r=-0.888)。WSP、CSP和NSP的果胶含量随着贮藏时间的延长显著增加。高效凝胶渗透色谱结果表明贮藏期间WSP的重均分子质量呈逐渐增大趋势;CSP的重均分子质量先减小后增加;NSP的重均分子质量逐渐减小。扫描电子显微镜下观察到WSP在贮藏过程中面积减小且层叠度增大,CSP在贮藏15 d后呈柔软薄纱状,NSP团簇状堆积逐渐分散,碎屑增多。本研究可为猕猴桃果实软化机制的阐明提供一定参考。

多药耐药铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的研究铜绿假单胞菌连续分离株的16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因的分布状况。方法以K-B法检测铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的耐药性;以PCR法检测20株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果20株铜绿假单胞菌检出1种16S rRNA甲基化酶基因(rmtB);检出5种氨基糖苷类修饰酶基因,分别为:aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ;1号株和3号株进行甲基化rmtB基因测序,将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的rmtB氨基酸序列比较,均存在氨基酸序列差别,因此均可确认为新亚型。结论医院铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗菌药物耐药主要与16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB及5种氨基糖苷类修饰基因有关,并发现两种铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB新亚型。

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解大肠埃希菌(ECO)新的氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法用聚合酶链反应(PCR)法对34株分离自患者的ECO进行aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果34株ECO中氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性8株(23.5%)、aac(3)-Ⅱ阳性27株(39.4%)、ant(3″)-Ⅰ阳性3株(8.8%),其余基因均阴性。结论氨基糖苷类高耐药性与氨基糖苷类修饰酶基因高检出率(85.3%)有关;在同一所医院的ECO中同时检出aac(6′)-Ⅰb和aac(6′)-Ⅰb-cr两种亚型,为国内外首次报道。

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学研究

目的 研究铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学。方法 用 PCR方法对 35 株铜绿假单胞菌的氨基糖苷类耐药相关基因、氨基糖苷类修饰酶基因 aac(3) Ⅰ、aac(3) Ⅱ、aac(3) Ⅲ、aac(3) Ⅳ、aac(6′) Ⅰ、aac(6′) Ⅱ、aph(3′) Ⅵ、ant(3″) Ⅰ和ant(2″) Ⅰ等9种基因进行了检测与分析。结果 35株中20株检出氨基糖苷类修饰酶基因(57 1%);9种基因由高到低的检出率分别为 aac(6′) Ⅱ(34 2%)、ant(2″) Ⅰ(28 6%)、aac(3) Ⅱ(17 1%)、aac(6′) Ⅰ(17 1%)、ant(3″) Ⅰ(14 3%) 、aac(3) Ⅰ(0)、aac(3) Ⅲ(0)、aac(3) Ⅳ(0)、aph(3′) Ⅵ(0)。结论 本研究表明,湖北襄樊地区铜绿假单胞菌耐氨基糖苷类药物,主要机制为产氨基糖苷类修饰酶(57 1%),本组铜绿假单胞菌中另有15株表型为氨基糖苷类药物不敏感但 9 种基因检测为阴性,可能存在其他修饰酶基因,或者存在16S rRNA基因突变。

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因型别研究

目的研究大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb各亚型的流行情况。方法对氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性的菌株进行DNA序列测定,测得序列与已在美国国立生物信息中心(NCBI)登录的aac(6′)-Ⅰb基因家族序列比对,确定型别。结果6株aac(6′)-Ⅰb阳性的大肠埃希菌,经DNA序列测定,其中4株为经典型,1株为aac(6′)-Ⅰb-Cr型,另外1株为aac(6′)-Ⅰb新亚型。结论大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb至少存在3种型别,以经典型为主,同时存在aac(6′)-Ⅰb-Cr型和aac(6′)-Ⅰb新亚型。

组蛋白甲基化修饰酶相关抑制剂在消化道肿瘤领域的研究进展

组蛋白修饰类型众多,组蛋白甲基化修饰及其调控组蛋白甲基化修饰酶的异常表达与多种肿瘤的发生密切相关。因此靶向组蛋白甲基化修饰酶,平衡组蛋白甲基化和去甲基化修饰被视为肿瘤治疗的又一新方法。目前一些组蛋白甲基化修饰酶的抑制剂已在消化道肿瘤的研究中取得进展,因此本文对组蛋白甲基化修饰酶及其抑制剂在消化道肿瘤的研究进展进行综述。

产ESBLs肺炎克雷伯菌中新的氨基糖苷类修饰酶基因型

目的:了解一株产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因存在情况。方法:采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ,aac(3)-Ⅱ,aac(6′)-Ⅱ,ant(3″)-Ⅰ,ant(2″)-Ⅰ,aac(6′)-Ⅰb,TEM,SHV,LEN,OKP,CTX-M-1,CTX-M-2,CTX-M-9,GES,PER,VEB,OXA-10,OXA-1,DHA,ACT-1,intI1基因,部分产物进行测序。结果:TEM、aac(6′)-Ⅰb、intI1阳性,其他阴性。aac(6′)-Ⅰb经测序并与已在美国国立生物信息中心[NCBI]登录的aac(6′)-Ⅰb基因家族比对,发现与先前登录的均不相同(包括2006年初美国学者发现的新氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb-Cr型)。结论:从该株产ESBLs肺炎克雷伯菌中发现的aac(6′)-Ⅰb氨基糖苷类修饰酶为新的基因型。以aac(6′)-Ⅰb-Suzhou型命名,已登录于美国NCBI(登录号:EF375621)。

南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型的调查

目的调查和研究南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型及其耐药特性。方法用K-B法测定97株鲍曼不动杆菌对庆大霉素、阿米卡星2种抗菌药物的耐药性,用PCR法检测氨基糖苷类药物修饰酶基因。结果同时耐庆大霉素、阿米卡星的鲍曼不动杆菌44株,庆大霉素耐药阿米卡星敏感的有4株,庆大霉素敏感阿米卡星耐药的有3株,从51株表型耐药菌中检出4种修饰酶基因,其中带有aac(3)Ⅰ-基因19株(37.3%);带有aac(3)-Ⅱ基因15株(29.4%);有aac(6′)-Ⅰ基因8株(15.7%);ant(3″)Ⅰ-基因为3株(5.8%);同时具有aac(3)Ⅰ-和aac(6′)Ⅰ-基因的5株(9.8%);有aac(3)-Ⅱ和aac(6′)Ⅰ-基因的1株(1.9%)。结论南京地区鲍曼不动杆菌所带基因以aac(3)-Ⅰ和aac(3)-Ⅱ为主,其与氨基糖苷类药物耐药有一定的关系。

20株多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)氨基糖苷类修饰酶基因存在情况。方法采用PCR对20株MDR-ABA进行了aac(6′)-Ⅰad、aac(6′)-Ⅰb、aac(3)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ等4种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果20株MDR-ABA中aac(3)-Ⅰ阳性12株(60%)、aac(6′)-Ⅰb阳性15株(75%)、ant(3″)-Ⅰ阳性18株(90%),aac(6′)-Ⅰad基因阴性;本组20株MDR-ABA中未发现AAC新亚型aac(6′)-Ⅰad基因。结论20株MDR-ABA中均检出氨基糖苷类修饰酶基因;基因型与氨基糖苷类耐药表型相符,可导致克隆传播医院感染,对鲍氏不动杆菌进行aac(6′)-Ⅰad基因研究为国内首次。

铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物修饰酶基因研究

目的调查铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特性及氨基糖苷类药物修饰酶基因表达。方法用Phoen ixTM-100系统鉴定细菌和药敏试验。用琼脂扩散法检测20株多重耐药铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星4种药物的敏感性。采用聚合酶链反应(PCR)扩增4种氨基糖苷类药物修饰酶基因,并使用DNA测序加以证实。结果190株铜绿假单胞菌对氯霉素、四环素、复方磺胺耐药率最高,均为98.9%;对亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为15.3%和6.8%。从20株菌中检出aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ3种修饰酶基因,阳性率分别为10%、60%和65%,未发现ant(3″)-Ⅰ基因。20株菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为35.0%、90.0%、70.0%、60.0%。结论本地区铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药与修饰酶基因的传播表达有关。

氨基苷类高水平耐药肠球菌的耐药性及修饰酶基因分布

目的明确临床分离的氨基苷类高水平耐药肠球菌(HLAR)耐药性及修饰酶基因类型。方法用琼脂筛选法筛选出HLAR、庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)及链霉素高水平耐药肠球菌(HLSR);采用K-B法测定粪肠球菌及屎肠球菌对12种抗菌药物的耐药性;PCR及序列分析法检测7种氨基苷类修饰酶基因。结果肠球菌中HLAR为73.6%。利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁对HLAR的抗菌作用最好,未检出耐药株。屎肠球菌中β内酰胺类抗生素耐药株以及喹诺酮类药物耐药株明显高于粪肠球菌。所有的屎肠球菌氨基苷类高耐株对氨苄西林、氨苄西林-舒巴坦及环丙沙星均耐药。aac(6')-Ie-aph(2")-Ia基因是HLGR的主要耐药基因,占HLGR的92.6%;3株HLGR存在与aph(2")-Id高同源性的基因。而6-'ant、3"-ant及str基因在HLSR中的检出率低。结论HLAR已成为医院感染的重要耐药菌。HLGR主要通过aac(6')-Ie-aph(2")-Ia基因编码的修饰酶造成对庆大霉素高度耐药。

铜绿假单胞菌在重症监护病房分离株氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解分离自重症监护病房(ICU)患者的铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法对21株铜绿假单胞菌(PAE),采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因。结果本组21株PAE菌中aac(3)-Ⅱ阳性4株(19.0%)、aac(6′)-Ⅰ阳性5株(23.8%)、aac(6′)-Ⅱ阳性2株(9.5%)、ant(3″)-Ⅰ阳性1株(4.8%)和ant(2″)-Ⅰ阳性4株(19.0%),aac(3)-Ⅰ为阴性,共有9株检出氨基糖苷类修饰酶基因(42.8%)。结论分离自ICU患者的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因存在情况。方法根据美国CLSI/NCCLS2004年版要求进行抗菌药物敏感性试验,应用PCR技术对AB菌进行氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因检测。结果AB菌对13种抗菌药物耐药严重。27株AB菌中氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-I阳性23株(85.2%)、aac(6′)-Ⅰ阳性18株(66.7%)、ant(3")-Ⅰ阳性22株(81.5%)。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为85.2%。I类整合酶基因(intI1)阳性23株(85.2%)。结论我院AB菌不仅具有多重耐药性,而且氨基糖苷类修饰酶基因、Ⅰ类整合酶基因携带率高。

肺炎克雷伯菌多重耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的探讨KPN多重耐药性及AMEs基因携带状况,为临床治疗及控制医院感染提供依据。方法采用K-B纸片法进行药敏试验,筛选多重耐药KPN,三维试验检测ESBLs和AmpC酶,再用PCR检测AMEs基因并序列分析。结果61株多重耐药KPN对IMP无耐药,氨基糖苷类抗菌药物耐药率为60.7-100.%,其他抗菌药物耐药率为44.3～100%;产ESBLs、AmpC酶、同时产ESBLs和AmpC酶检出率分别为31.1%、14.8%、45.9%,有8.2%均未检出;AMEs基因阳性检出率86.9%,其中aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ和ant(2")-Ⅰ阳性检出率分别为13.1%、60.7%、55.7%、11.5%、6.6%和26.2%。结论KPN多重耐药严重,临床可选择的药物有限,产ESBLs、AmpC酶和携带AMEs基因较高,临床应根据药敏试验结果,合理选用抗菌药物,以便减少耐药菌株传播流行。

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因及qacEΔ1基因检测研究

目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌(Pa)的耐药机制,为临床使用氨基糖苷类药物治疗Pa感染和消毒灭菌工作提供参考。方法采用琼脂稀释法从临床分离的Pa中筛选出35株多重耐药菌株,用PCR方法检测这些菌株中氨基糖苷类修饰酶编码基因及qacEΔ1基因存在状况。结果35株Pa中aac(3)Ⅱ、aa(6′)Ⅱ、ant(3″)Ⅰ和ant(2″)Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为48.6%、40.0%、54.3%、45.7%和60.0%,绝大多数菌株携带2种或2种以上的氨基糖苷类修饰酶基因,而qacEΔ1基因检出率也达到94.3%。结论铜绿假单胞菌产生氨基糖苷修饰酶与该菌的多重耐药有密切关系,临床治疗Pa感染应参考药敏试验结果,慎选氨基糖苷类药物;同时在消毒灭菌工作中,不宜继续使用季铵盐类、双胍类等作为常用消毒剂。

铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究

目的了解氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌16S r RNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的携带情况,探讨铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药机制。方法收集临床分离的氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌35株,采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及体外药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)检测arm-A、rmt-A、rmt-B、rmt-C、rmt-D 5种16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ6种氨基糖苷修饰酶基因。结果对氨基糖苷类药物耐药的铜绿假单胞菌同时对多种其他抗菌药物耐药,仅碳青霉烯类的亚胺培南耐药率较低,为5.7%。21株检出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因,占60.0%;30株检出氨基糖苷修饰酶基因,占85.7%,其中28株检出aac(3)-Ⅱ基因,占80.0%,18株检出ant(3″)-Ⅰ基因,占51.4%,其余8种基因未检出。结论在铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药的菌株中,检测出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ氨基糖苷修饰酶基因,铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。

多重耐药大肠埃希菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解多重耐药大肠埃希菌(ECO)氨基糖苷类药物耐药机制。方法采用PCR检测20株多重耐药ECO菌11种16S rRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因。结果1株检出16S rRNA甲基化酶基因(5.0%),并为新亚型;16株检出氨基糖苷类修饰酶基因(80.0%)。15号株rmtB基因测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库(GenBank)已登录的rmtB氨基酸不同,为新亚型。结论本组多重耐药ECO菌氨基糖苷类耐药机制与产16S rRNA甲基化酶和产氨基糖苷类修饰酶相关。多重耐药ECO菌存在新的氨基糖苷类药物耐药机制。

鲍氏不动杆菌耐消毒剂磺胺基因、Ⅰ类整合酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解鲍氏不动杆菌耐消毒剂磺胺基因(qacE△1-sulⅠ)、Ⅰ类整合酶基因(intI1)及氨基糖苷类修饰酶(aminoglycoside-modifyingenzymes,AMEs)基因存在情况。方法自临床分离20株鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析qacE△1-sulⅠ、intI1及9种AMEs基因。结果qacE△1-sulⅠ、intⅠ1、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅱ基因的阳性率分别为90.0%、20.0%、55.0%、15.0%、35.0%、60.0%和5.0%,而aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、ant(2″)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅵ基因均阴性。结论浙江省立同德医院临床分离的鲍氏不动杆菌多重耐药严重,耐消毒剂磺胺基因及AMEs基因携带率较高。

组蛋白修饰酶对基因转录的调控

基因在转录过程中,需招募多种组蛋白修饰酶来对组蛋白进行化学修饰,这些化学修饰包括:组蛋白的甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化和SUMO化等。大多数组蛋白修饰酶能与不同的转录因子形成复合物,并引起组蛋白和DNA之间相互作用的改变,从而调控基因的转录。本文总结了各种组蛋白修饰酶复合物的组成、结构及功能方面的研究进展。