气相色谱—串联质谱法测定露地芹菜中丁硫克百威及其代谢物残留

【目的】研究丁硫克百威在露地种植芹菜中的代谢残留情况,同时建立芹菜中丁硫克百威及其代谢物克百威和3-羟基克百威的检测方法,为丁硫克百威在芹菜上的用药登记工作提供参考依据。【方法】20%丁硫克百威乳油以有效成分180 g/ha的剂量(低剂量组)和有效成分1.5倍(高剂量组)分别喷雾大田芹菜,设施药1次、2次和3次3个处理,并于末次施药后1、3、5、7和14 d按五点法随机在各小区内采集芹菜样品1~2 kg。芹菜样品匀浆后用乙腈提取,离心后取上清液至注射器中,注射器装上针头式滤膜,加入分散固相吸附剂,使净化和过滤等步骤在注射器同步一次完成。在气相色谱—串联质谱仪上以定时选择反应监测模式检测,外标法定量。【结果】芹菜中的添加回收试验结果表明,丁硫克百威的添加回收率为83.8%~110.3%,相对标准偏差(RSD)为2.7%~10.2%,定量限(LOQ)为5.5μg/kg;克百威添加回收率为90.5%~119.0%,RSD为3.7%~9.6%,LOQ为4.8μg/kg;3-羟基克百威添加回收率为92.0%~103.5%,RSD为1.8%~5.3%,LOQ为8.0μg/kg。大田最终残留试验结果表明,低剂量组中,末次施药后第14 d,施药1次、2次和3次处理的克百威残留量分别为未检出、0.009和0.017 mg/kg;高剂量组中,在末次施药后第14 d,施药1次、2次和3次处理的克百威残留量分别为0.026、0.056和0.089 mg/kg。【结论】建立了芹菜中丁硫克百威及其代谢物的快速检测技术,整个检测分析过程可在30 min内完成,符合农药残留分析要求;以丁硫克百威有效成分180 g/ha的剂量喷雾1次,建议安全间隔期在5 d以上,喷雾2次以上则安全间隔期在14 d以上。

克百威、丁硫克百威和丙硫克百威登记现状及其潜在风险关注分析

本文介绍了克百威、丁硫克百威和丙硫克百威登记和管理现状,分析了蔬菜、水果、食用菌和茶叶中克百威残留监测及残留超标原因,比较了各国(地区组织)的克百威最大残留限量,阐述了美国和欧盟国外对水生生物和鸟类风险评估结论,提出了风险评估与管理方面的建议。

克百威丙硫克百威和丁硫克百威的残留与降解研究进展

本文综述了近几年国内外对克百威、丙硫克百威、丁硫克百威的降解残留的重要进展 ,阐述了它们的降解和残留与其施用量、土壤类型、温湿度、降雨量等有关 ,它们的降解方式主要有水解、光解、微生物分解3种方式 ,指出了当前用于检测其残留量一些常用方法。

高效液相色谱串联质谱法测定小麦和土壤中的丁硫克百威及其代谢物

建立高效液相色谱-四级杆串联质谱快速测定小麦植株、土壤和麦粒中的丁硫克百威、克百威以及土壤中3-羟基克百威的检测方法。样品经提取、分散固相萃取净化后采用同位素内标法进行多反应监测模式测定。结果表明,该方法目标物在三种基质中的定量限为5μg/kg,回收率在73.7%－98.6%之间,变异系数在1.3%－3.3%之间,满足残留检测方法的要求。

克百威纳米抗体的结构解析与体外进化研究

克百威曾是一种广泛用于农业虫害防治领域的氨基甲酸酯类农药,由于其对哺乳动物具有高毒性,对人畜安全及环境造成较大威胁,因此各国陆续出台了克百威禁限用政策,但其在农产品中被检出超标的问题仍时有报道,故对其加强监测十分必要。纳米抗体是一种新型的基因工程片段抗体,具有高稳定性、结构简单和高表达量等优势。本研究通过体外亲和力成熟技术,对实验室已有的克百威纳米抗体Nb5进行改造,进一步提升其灵敏度。首先,基于AlphaFold系统,预测纳米抗体三维结构并验证模型合理性;以分子对接结合丙氨酸扫描技术,研究克百威与纳米抗体的识别机制,并验证关键结合位点。结果表明:克百威分子进入了由CDR2、CDR3及FR3区组成的活性口袋腔,纳米抗体通过氢键和疏水作用力识别克百威,所涉及的关键氨基酸分别为Arg56、Trp58、Thr101、Val102、Ala103、Asp104和Cys105。基于噬菌体展示技术,构建了克百威纳米抗体的定点饱和突变库,并筛选到一株突变体H10,其IC_(50)值为17.6 ng/mL,其灵敏度比野生型Nb5提升了1倍,亲和力常数为1.54×10^(6)L/mol。该研究结果为开发针对小分子药物的纳米抗体体外亲和力成熟技术提供了一种有效的新思路。

UPLC-MS-MS法测定水产品中克百威及其代谢物

采用超高效液相色谱-串联质谱技术建立同时测定水产品中克百威及其代谢物(3-羟基克百威、3-酮基克百威和呋喃酚)含量的方法。样品经乙腈提取,正己烷脱脂,HLB固相萃取柱净化,色谱柱分离,电喷雾串联四极杆质谱进行检测,采用多反应监测分析,并对液质分离条件及参数和样品前处理条件进行优化。结果显示,克百威及其代谢物在0.08～100ng/mL范围内线性良好(0.998 3～0.999 7)。在0.25～2.5μg/kg时,平均加标回收率在87.9%～96.1%,RSD值在1.4%～9.5%。该方法测定克百威、3-羟基克百威、3-酮基克百威和呋喃酚的检出限均为0.25μg/kg。该方法快速、准确、灵敏,可用于水产品中克百威及其代谢物残留量的测定。

气相色谱-质谱法快速筛查食物中毒物质克百威

目的通过气相色谱-质谱法对急性克百威食物中毒事件进行快速检测。方法17份可疑样品经乙酸乙酯快速萃取,离心后取上清液,Rxi-5ms色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm)分离,应用全扫描模式(full scan,Scan)和谱库检索定性中毒物质,通过QuEChERS法前处理和选择离子扫描模式(selective ion monitoring,SIM),外标法定量。结果在凉粉残留物、1份洗胃液、1份血液及2份不明白色粉末样品中均检出氨基甲酸酯类农药克百威及其中间体呋喃酚,其他样品均未检出,凉粉残留物中克百威质量浓度为253.0μg/mL,呋喃酚质量浓度为546.6μg/mL。克百威及呋喃酚在0~5.0μg/mL范围内线性关系良好(r>0.999),检出限(limits of detection,LODs)分别为0.0014~0.0344μg/mL、0.0016~0.0217μg/mL,定量限(limits of quantitation,LOQs)分别为0.0048~0.1146μg/mL、0.0053~0.0722μg/mL,相对标准偏差(relative standard deviations,RSDs)分别为4.6%~6.6%、3.5%~7.6%。在0.25、0.50、1.00μg/mL3个浓度水平的平均加标回收率为81.4%~107.1%,RSDs为1.9%~7.6%。结论此方法操作简单、灵敏度高、稳定性好,为急性食物中毒事件提供了快速、高效的检测方法。

对比教学法在大型仪器实验教学中的应用——以番茄汁中克百威的检测为例

以番茄汁中克百威的检测为例,将对比教学法应用于高效液相色谱仪(HPLC)和液相色谱-质谱联用仪(HPLC-MS)的实验教学中。在理论教学部分,对比两种大型仪器的原理、构造、应用特点及其在克百威检测中的异同。在上机实操部分,由于番茄汁中的克百威含量低于HPLC法的检出限但高于HPLC-MS法的检出限,两种仪器得出截然不同的检测结果。对比教学法切实提高了实验教学效率,提升了学生的大型仪器综合运用能力,对高校应用型人才的高质量培养具有重要意义。

气相色谱-质谱法测定豇豆中丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威的残留

建立了豇豆中丁硫克百威、克百威及3-羟基克百威的气相色谱-质谱联用快速检测分析方法。样品经乙腈+丙酮(V乙腈∶V丙酮=7∶3)、丙酮+石油醚（V丙酮∶V石油醚=6∶4）振荡提取,通过弗罗里硅土和无水Na2SO4高速离心净化,气相色谱-质谱法检测。结果表明:该方法在0.055 mg/L添加范围内,丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威3种农药的色谱峰面积和保留时间都呈现良好的线性相关性,最低检测限分别为0.005、0.000 3、0.001 mg/kg。样品在0.05、0.50、2.00 mg/kg 3个添加水平下,丁硫克百威、克百威及3-羟基克百威的回收率分别在71.30%85.42%、80.15%104.35%、81.25%102.50%,相对标准偏差（RSD）分别在3.55%5.30%、5.10%6.03%、6.66%8.60%。该方法具有灵敏度高、操作简单、处理时间短、检测成本低的优点,适用于实验室大批量样品的检测。

基于离子液体原位泡腾萃取法在丹参及西洋参克百威残留分析中的应用

本研究建立了一种新颖的基于酸性离子液体的原位泡腾萃取技术的前处理方法。酸性离子液体1-丁基-3-甲基咪唑硫酸氢盐呈酸性,能与碳酸氢盐反应产生二氧化碳,起到泡腾萃取的效果,它还能与六氟磷酸铵发生离子交换作用而置换成疏水性离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐,使其与水相分离,通过离心获取萃取相,最后通过高效液相色谱仪测定萃取相中农药的含量。考察了酸性离子液体、碳酸氢钠和氯化钠用量对萃取效率的影响,最终所得最佳条件为200 mg酸性离子液体、0.4 g碳酸氢钠和1.0 g氯化钠。在最优条件下,克百威的线性范围为0.3~4.0μg/mL,日内和日间的相对偏差(RSD)为4.6%和10.2%,丹参和西洋参在4.0μg/mL加标水平下,加标回收率为94.7%(西洋参)和74.6%(丹参),将此方法可用于不同基质中药材和饮片中农药残留的处理。

丁硫克百威原药和制剂对蚯蚓的毒性及其降解产物克百威的动态变化

为了解蚯蚓急性毒性试验过程中丁硫克百威降解产物克百威的动态变化。采用固相萃取高效液相色谱柱后衍生荧光检测法检测土壤中克百威的动态变化,比较不同浓度的90%丁硫克百威原药和20%丁硫克百威乳油制剂在土壤主要代谢产物克百威中的动态变化及其对蚯蚓的毒性。结果表明:当90%丁硫克百威原药的浓度为42.74、85.47、170.94、341.88、512.82 mg/kg时,试验第7天,土壤中克百威的浓度分别为12.941、25.272、56.652、104.984、143.870 mg/kg;而当20%丁硫克百威制剂的浓度为42.74、85.47、170.94、341.88、512.82 mg/kg时,试验第7天,克百威的浓度分别18.445、41.793、67.709、119.515、144.538 mg/kg。第7天时丁硫克百威原药和制剂在土壤中对蚯蚓的LC50分别为170.514、113.757 mg/kg,实际测得的丁硫克百威对土壤中蚯蚓的毒性已演变成丁硫克百威及其降解产物的联合毒性。土壤中克百威的浓度,与添加丁硫克百威的浓度、时间呈正相关,20%丁硫克百威乳油制剂在土壤中的代谢能力及其对土壤中蚯蚓的毒性均高于原药。

液相色谱-质谱联用法测定韭菜中克百威残留量的不确定度评定

目的:采用液相色谱-质谱联用法测定韭菜中克百威残留量,并对测定过程的不确定度进行评估。方法:采用《食品安全国家标准 植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法》(GB 23200.121—2021)中的方法测定韭菜中克百威残留量,依据《化学分析中测量不确定度评估指南》(RB/T 030—2020)和《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012)对测量不确定度进行评定。结果:对检测过程中各不确定度分量进行计算与合成,韭菜中克百威残留量可表示为(0.020±0.002)mg·kg^(-1)。在本实验室条件下,标准溶液配制过程和标准曲线拟合对韭菜中克百威残留量测量不确定度的贡献较大,标准溶液定值准确性、测量重复性、提取溶液量取、样品称量以及回收率的贡献较小。结论:研究结果对实际操作中减少不确定度、了解测量结果的置信水平和离散程度具有重要的参考意义。

急性克百威中毒致锥体外系反应1例

克百威(carbofuran)又称呋喃丹,是一种广谱、高效且低残留的杂环甲基氨基甲酸酯类杀虫剂,在农业生产中被广泛应用^([1])。对于人类而言,中毒后会干扰内分泌系统,导致生殖系统紊乱、细胞毒性及基因异常,致死率在10%~20%之间^([2])。本文回顾一例急性大剂量克百威中毒致锥体外系反应的患者,旨在提高此类中毒并发症的诊治水平。

丁硫克百威在豇豆不同时期施用的降解代谢研究

为明确丁硫克百威在豇豆播种期、苗期、结荚期使用后的降解代谢,以及可能产生的膳食风险,分别以其在蔬菜上登记的最低剂量、最高剂量、最高剂量的1.5倍3种剂量施药,进行田间模拟残留试验。将采集的成熟豇豆通过乙腈提取、C18分散净化,经超高效液相色谱串联质谱方法检测,测定豇豆中丁硫克百威及其代谢物——克百威和3-羟基克百威的残留量。结果表明,丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威在豇豆中的定量限均为0.01 mg·kg^-1,在0.01~1 mg·kg^-1的添加水平下,丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威的平均回收率为72%~105%,相对标准偏差为1.4%~20.1%。丁硫克百威使用后的超标风险主要源于其代谢物——克百威和3-羟基克百威。播种期施药后的豇豆样品均无丁硫克百威及其代谢物检出;苗期以最高剂量的1.5倍施药后,第10天的样品中克百威(含3-羟基克百威)的残留值超出中国国家标准中规定的最大允许残留限量(MRL);结荚期2次或3次施药后7 d内克百威(含3-羟基克百威)的残留值超出MRL。结荚期施药时,丁硫克百威在2次施药和3次施药后的慢性膳食摄入风险和急性膳食摄入风险均较低,小于100%;但克百威(含3-羟基克百威)的急性膳食摄入风险较高,以最高剂量的1.5倍2次施药或3次施药后,克百威(含3-羟基克百威)的急性膳食摄入风险于药后7 d才降至100%以下。综上,播种期使用丁硫克百威不会导致豇豆中残留超标,可以安全使用;但苗期和结荚期使用丁硫克百威存在极高的风险,应禁止其在播种期以外的使用。

测定植物油中甲萘威和克百威农药残留的高效液相色谱法

采用高效液相色谱法测定植物油中甲萘威和克百威农药残留。样品通过乙腈提取,固相萃取(SPE)净化,采用Waters carbmate analysis(3.9mm×150mm,4μm)柱,水∶乙腈(体积比68∶32)为流动相,柱温30℃,流速1.0mL/min进行分离,2487紫外检测器进行检测,波长280nm,进样20μL。回收率为89.7%～98.9%;RSD为3.9%～4.8%;检测限为0.01μg/mL。

气相色谱串联质谱法测定蔬菜中甲拌磷和克百威及其代谢物的残留量

建立气相色谱– 三重四级杆串联质谱法（GC–MS/MS） 测定蔬菜中甲拌磷及其代谢产物甲拌磷砜、甲拌磷亚砜,克百威及其代谢产物3- 羟基克百威.蔬菜样品经乙腈提取、QuEChERS 法净化,GC–MS/MS 采用选择反应监测模式（SRM） 采集数据后进行分析.5 种化合物的含量在检测范围内与色谱峰面积均呈良好的线性,相关系数r2为0.998 0～0.999 6.在0.02,0.05 mg/kg 的添加水平下,平均回收率在73.6%～118.2% 范围内,测定结果的相对标准偏差小于8.5%（n=6）,方法定量限为5～10 μg/kg.该方法可用于蔬菜中甲拌磷和克百威及其代谢物的常规检测.

气相色谱-质谱法对大米中丙硫克百威的检测方法优化

本研究依据《出口食品中甲草胺、乙草胺、甲基吡恶磷等160种农药残留量的检测方法气相色谱-质谱法》(SN/T 2915—2011),对大米中丙硫克百威的测定方法进行了优化,对样品前处理的关键步骤进行了完善。经过优化后,样品前处理过程更为简便,同时降低了中间转移过程中的损耗,使得大米中丙硫克百威的检测更准确、更高效,相对标准偏差比原方法低,加标回收率在80.0%~98.5%。

高效液相色谱-质谱联用仪检测苹果中的丁硫克百威和克百威的残留量

本文研究了克百威,丁硫克百威在苹果上的残留量,建立了使用液质联用仪同时检测的方法。样品经甲醇(缓冲液)提取,二氯甲烷液分配净化,液相色谱-质谱/质谱联用仪检测。该方法操作简单、快速、灵敏度高。

液相色谱-串联质谱法同时检测蔬菜中克百威和3-羟基克百威残留

目的建立一种克百威及3-羟基克百威农药残留的液相色谱-串联质谱(liquid chromatographytandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法。方法样品经乙腈提取,氯化钠盐析除水后,过氨基固相萃取柱净化,甲醇和二氯甲烷混合溶液洗脱。采用0.1%甲酸(A)和0.1%甲酸-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,质谱(ESI+)采用多离子检测模式(MRM)对定量离子和定性离子进行监测。结果本方法在15 min内完成2种目标化合物的分离分析。克百威和3-羟基克百威在10、30和100μg/kg添加水平的回收率为72.0%~106.4%,相对标准偏差小于6.9%(n=6),方法定量限为10μg/kg。结论该方法快速、准确、灵敏,适合测定蔬菜中克百威及3-羟基克百威药物残留。

气相色谱-质谱法测定蔬菜中有机磷杀虫剂和克百威的残留量

利用气相色谱 质谱 (GC MS) ,电子轰击离子化 (EI)法同时测定及确证蔬菜中多种有机磷农药和克百威的残留量。对样品的前处理方法进行了选择实验。试样用乙腈提取 ,将提取液过滤后 ,加氯化钠使水相与乙腈分离 ,浓缩有机相 ,无需净化。用GC MS的选择离子监测 (SIM)方式测定其中的敌敌畏、甲胺磷、甲拌磷、氧乐果、甲基对硫磷、克百威共 6种杀虫剂的残留量并进行阳性确证。该方法的检出限量为 0 0 0 0 2mg/kg～ 0 0 1 6mg/kg,1 0种蔬菜 6种农药的标准添加 (0 0 1、0 0 2、0 1、0 2mg/kg)的回收率为 72 %～ 1 2 5 % ,测定的相对标准偏差为 6 7%～ 2 0 %。本方法可以满足这 6种杀虫剂在蔬菜中的最高残留量限量的检测要求。