甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖作为REV核酸疫苗免疫佐剂的研究

为了研究甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖作为禽网状内皮组织增生症病毒(REV)核酸疫苗免疫佐剂对雏鸡免疫功能的影响,试验利用REV特异性抗原基因gp90与真核表达载体pTT5构建重组质粒pTT5-gp90,提取蕨麻多糖并测定其多糖含量,利用傅里叶红外光谱对甘露糖化碳纳米管进行检测,然后采用CCK-8法测定鸡巨噬细胞(HD11)活性,确定重组质粒pTT5-gp90、蕨麻多糖及甘露糖化碳纳米管使用的质量浓度;将80只未感染REV的1日龄雌性三黄鸡分为对照组、重组质粒pTT5-gp90组、质粒与多糖PAP-gp90组、混合物PAP-gp90@M-M组,分别进行免疫接种、攻毒,免疫后第0,7,14,21天采集血液,检测白细胞介素-4(IL-4)与γ干扰素(IFN-γ)质量浓度、REV抗体效价;攻毒后第7,14,21天饲喂前称量体重并统计累计死亡率,解剖后取脾脏和肝脏,计算脏器指数。结果表明:重组质粒pTT5-gp90、蕨麻多糖、甘露糖化碳纳米管质量浓度分别为100,500,30μg/mL时,HD11细胞活性较高;免疫后第7,14,21,28天,与对照组比较,混合物PAP-gp90@M-M组血清IL-4与IFN-γ质量浓度及REV抗体效价明显上调;攻毒后第3,10天雏鸡体重升高,累计死亡率降低;肝脏指数低于重组质粒pTT5-gp90组,高于对照组,但均差异不显著(P>0.05);脾脏指数显著低于重组质粒pTT5-gp90组(P<0.05),高于对照组(P>0.05)。说明甘露糖化碳纳米管包裹蕨麻多糖可作为REV核酸疫苗的免疫佐剂,该佐剂可通过增强雏鸡免疫力、诱导免疫应答、降低死亡率来提高REV核酸疫苗的免疫效果。

羟丙基-β-环糊精递送皂苷免疫佐剂效果的初步研究

为了了解羟丙基-β-环糊精(hydroxypropyl-β-cyclodextrin,HP-β-CD)作为递送剂对皂苷类免疫佐剂Quil A的递送效果和佐剂活性的影响,试验将25只6~8周龄健康的雌性Balb/c小鼠随机分为5组,分别为HP-β-CD+Q组、免疫刺激复合物(immunostimulatory complexes,ISCOMs)组、Quil A组、卵清蛋白(OVA)组及PBS组,其中HP-β-CD+Q组、ISCOMs组、Quil A组、OVA组均通过后肢肌肉注射免疫OVA抗原,HP-β-CD+Q组、ISCOMs组、Quil A组分别免疫HP-β-CD+Quil A、ISCOMs、Quil A,免疫时间为第0,21,42天,并于第14,35,56天分别进行采血,分离血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IgG、IgG1和IgG2a抗体水平,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数,流式细胞术检测免疫后脾脏CD4^(+)、CD19^(+)淋巴细胞亚群的数量变化。结果表明:第三次免疫后,HP-β-CD+Q组血清中OVA特异性抗体IgG质量浓度极显著高于OVA组(P<0.01),Quil A组显著高于OVA组(P<0.05);HP-β-CD+Q组、ISCOMs组血清中OVA特异性抗体IgG1、IgG2a质量浓度极显著高于OVA组(P<0.001或P<0.01),且HP-β-CD+Q组血清中OVA特异性抗体IgG1质量浓度约是ISCOMs组及Quil A组的2倍,约是OVA组的10倍;HP-β-CD+Q组血清中OVA特异性IgG2a质量浓度约是ISCOMs组及Quil A组的1.3倍,约是OVA组的6.5倍。HP-β-CD+Q组和ISCOMs组脾脏淋巴细胞刺激指数显著高于OVA组(P<0.05)。HP-β-CD+Q组和ISCOMs组脾脏CD4^(+)淋巴细胞亚群数量极显著低于OVA组(P<0.01),Quil A组显著低于OVA组(P<0.05);ISCOMs组脾脏CD19^(+)淋巴细胞亚群数量显著低于OVA组(P<0.05)。说明HP-β-CD能够增强Quil A的佐剂活性,刺激机体产生高水平抗体,且有可能通过促进CD4^(+)向外周淋巴组织的迁移介导抗体反应加强。

DNA疫苗免疫佐剂的研究及应用

DNA疫苗是近年来出现的一种新型疫苗,能够诱导机体免疫系统产生体液免疫和细胞免疫,在预防和治疗人和动物的疾病中发挥重要的作用。随着DNA疫苗研究的深入和扩展,用于提高DNA疫苗免疫效果的免疫佐剂也逐渐开展起来。本文就新型细胞因子佐剂、趋化因子和协同刺激分子佐剂、补体分子佐剂和CpGDNA佐剂的研究作一综述。

中药免疫佐剂在禽用疫苗应用中的研究进展

疫苗是预防动物传染病的重要方式,为增强类毒素疫苗和亚单位疫苗的免疫效果,有效的方法之一是选择研制添加合适的免疫佐剂。免疫佐剂是一种非特异性的免疫增生剂,其本身并无抗原性。研究发现某些中药作用动物机体后有双向调节、低毒性的特点,提取某些中药添加配合疫苗能增强其免疫效力。本文主要描述当前常用的中药免疫佐剂,针对中药免疫佐剂作用机理、中药免疫佐剂种类,强调禽常用中药免疫佐剂类型、特点和中药免疫佐剂的过去、未来,并对其优缺点进行分析与综合性阐述,为今后更好的研究和合理的利用禽用疫苗佐剂提供相关理论基础,旨在为中药免疫佐剂在禽病疫苗中的应用提供参考。

BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用

目的研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用。方法以BCG-CpG-DNA与重组HBsAg混合免疫小鼠,以铝佐剂疫苗为对照,采用放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平,ELISA法分析抗体亚类,酶联免疫斑点试验(ELIS-POT)检测CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)功能。结果BCG-CpG-DNA能提高抗-HBs中和抗体水平,促进抗原特异性IgG2a的产生,诱导Th1型免疫应答,与铝佐剂协同作用能部分逆转Th2反应。同时能增强抗原特异性CD8+T淋巴细胞的杀伤作用,实验组与对照组比较差异有显著意义。结论BCG-CpG-DNA对HBsAg有较好的免疫佐剂作用,有可能成为一种新型的免疫佐剂。

淫羊藿多糖对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫佐剂作用

目的研究探讨淫羊藿多糖对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫佐剂活性。方法淫羊藿多糖G1和G4,生理盐水分别与流感病毒裂解疫苗配伍免疫小鼠,初次免疫后2周收集小鼠血清,ELISA法检测血清中抗体的滴度;MTT法测定脾淋巴细胞增殖反应;ELISA测定IFN-γ和IL-4的水平,流式细胞术测定脾淋巴细胞CD4+、CD8+、CD3+和CD19+亚群。结果初次免疫后,淫羊藿多糖G1和G4能显著提高免疫小鼠血清的抗体滴度;能明显增强脾T淋巴细胞的增殖反应,可以显著提高脾淋巴细胞CD4+、CD8+和CD3+的含量及CD3+/CD19+的比值,诱导分泌IFN-γ的水平升高。结论淫羊藿多糖可增强小鼠对H1N1的免疫应答,可以作为甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的一种新型免疫佐剂。

免疫佐剂研究进展及前景展望

本文从免疫佐剂的发现、作用机理、发展进行论述,综述了传统免疫佐剂、细胞因子佐剂、天然来源佐剂及新型免疫佐剂的类别与免疫机理,并就免疫佐剂的发展前景进行了展望。

几种免疫佐剂对产蛋鸡免疫增强作用的比较试验

将鸡腔上囊提取物、复方中药和左旋咪唑分别按一定比例加到鸡新城疫油乳剂灭活疫苗接种产蛋鸡群。结果显示 ,3个试验组鸡的外周血白细胞中淋巴细胞比例都较高 ,均能早期诱导鸡群产生高水平新城疫抗体 ,但加入腔上囊提取物接种的鸡免疫维持期更长。

鸡β-防御素-1对鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因DNA疫苗的免疫佐剂作用

本文旨在研究鸡β-防御素-1(AvBD1)对鸡IBDVVP2基因DNA疫苗的免疫佐剂作用。通过基因工程技术,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcDNA3.1(+)-VP2。14日龄岭南黄肉鸡随机分成5组,分别免疫PBS、空质粒载体pcDNA3.1(+)、重组质粒pcDNA3.1(+)-VP2、重组质粒pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcD-NA3.1(+)-VP2联合免疫、IBD弱毒苗。收集免疫后不同时期的外周血血清样本,用ELISA方法检测血清中IB-DV VP2特异性抗体水平,通过流式细胞仪检测CD3+、CD4+与CD8+T淋巴细胞的含量。结果表明,联合免疫组(即pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcDNA3.1(+)-VP2共同免疫)VP2特异性抗体水平显著高于其他组;单独免疫质粒pcDNA3.1(+)-VP2组VP2特异性抗体水平与免疫IBD弱毒苗组相当,显著高于PBS组与空质粒载体pcD-NA3.1(+)组。在二免后第7天,联合免疫组外周血中CD3+、CD4+与CD8+T淋巴细胞的含量也显著高于单独免疫质粒pcDNA3.1(+)-VP2组,其它时间无显著性差异。IBDV攻毒后的保护率也是联合免疫组高于单独免疫pcDNA3.1(+)-VP2组。这些结果表明,鸡AvBD1可以作为一种免疫佐剂用于增强IBDVVP2基因DNA疫苗的免疫力。

免疫佐剂CpG DNA的研究进展

CpGDNA存在广泛的免疫效应 ,其免疫效应有赖于DNA中的模体 ,同时具有种属特异性和细胞特异性。CpGDNA的作用机制目前还不很清楚 ,但此方面的研究导致了许多新的发现 。

猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗激发抗肿瘤细胞免疫

探讨以猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗对小鼠细胞免疫抗肿瘤的影响。以猪软骨多糖作为免疫佐剂,采用共同培养的方法制备小鼠肝癌H22细胞全细胞肝癌疫苗,免疫小鼠后,分别以脾淋巴细胞、巨噬细胞为对象检测肝癌疫苗对小鼠机体细胞免疫的影响。结果表明,以猪软骨多糖为免疫佐剂的全细胞肝癌疫苗能明显刺激脾淋巴细胞活化、增强巨噬细胞的吞噬能力。以猪软骨多糖为免疫佐剂的肝癌疫苗能增强机体的细胞免疫,为软骨多糖用于肿瘤的免疫治疗和免疫预防提供了试验依据,为进一步的临床免疫治疗肿瘤奠定了基础。

带免疫佐剂CEA基因疫苗的构建及其稳定同步表达的研究

背景与目的:基因疫苗是目前肿瘤免疫基因治疗研究的热点。目前癌胚抗原阳性肿瘤的治疗效果不佳,本研究拟利用质粒pVAX1构建带有免疫佐剂白细胞介素2同步表达的癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)基因疫苗,探讨一种新的肿瘤生物治疗方法。方法:利用RT-PCR从患者肿瘤组织中钓取CEA目的基因cDNA;运用分子克隆技术,通过内部核糖体进入位点(IRES),将CEAcDNA和hIL-2cDNA连接于质粒pVAX1中,采用化学发光免疫法和ELISA双抗体夹心法分别检测CEA抗原和hIL-2因子的表达;同时用蛋白质分析软件分析和预测目的抗原的特性。结果:测序结果证实本实验所构建的重组质粒插入DNA序列无错配,质粒上所接入的CEAcDNA与GenBank公布的M29540和M17303的序列99.8%同源,经蛋白质分析软件预测,其抗原性、跨膜结构片段、信号肽位点和二、三级结构特征与同源癌胚抗原基本一致。hIL-2cDNA与母本序列100%同源。检测结果说明该重组质粒在体外CHO细胞株中可同步表达CEA和hIL-2分子。结论:从肿瘤组织中成功地获取了CEAcDNA,所构建的pVCEA2重组质粒能在体外细胞中同步表达CEA和IL-2蛋白分子,这为进一步体内实验研究基因治疗CEA阳性肿瘤提供了新的可能途径。

还原型谷胱甘肽抗白血病免疫佐剂作用实验研究

本研究探讨还原型谷胱甘肽(GSH)逆转反应性氧代谢物(ROM)对NK细胞抗白血病效应的抑制作用。在K562细胞、NK细胞的混合培养体系中分别加入富含单核细胞的单个核细胞(Mo)和白细胞介素-2(IL-2),观察ROM产量和K562细胞抑制率,然后分别加入GSH或二氢氯化物组胺(组胺),观察ROM产量及K562细胞抑制率的变化。结果表明:加入IL-2后,ROM的产量从33.17±25.02U/L增至223.59±59.41U/L(P<0.01),K562细胞抑制率从65.56%升至85.89%(P<0.01);在加入E/Mo=10/1、10/5、10/103种浓度的Mo后,ROM产量分别为389.79±43.83U/L,456.74±42.77U/L,601.42±21.92U/L,K562细胞抑制率分别为82.36%,81.36%,48.09%,加入组胺或GSH后,E/Mo=10/2时,ROM产量从389.79±43.83U/L,分别减至50.21±22.4U/L和-3.58±9.49U/L(P<0.05),随着GSH或组胺浓度的增加ROM产量逐减少,K562细胞抑制率从82.53%分别升至94.64%和96·39(P<0·05),ROM产量与K562细胞抑制呈负相关(P<0.05);E/Mo=10/5或10/10时,高浓度的GSH或组胺可使ROM产量减少,但K562细胞抑制率提高不明显(P>0.05)。结论:当E/Mo=10/2时,GSH逆转ROM强于组胺,提高NK细胞对K562的抑制率与组胺相似,但毒副作用轻微,GSH可能成为更理想的抗白血病的免疫佐剂。

黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳的制备及免疫佐剂效应研究

【目的】筛选制备W/O型黄芪多糖(APS)、紫锥菊提取物(EM)纳米乳佐剂的最佳配方,并考察该纳米乳佐剂的免疫效应。【方法】根据伪三元相图中纳米乳区面积的大小并结合肉眼观察,筛选制备黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳佐剂的配方,观测制剂的形态、粒径分布、pH、黏度及稳定性;以卵清白蛋白(OVA)为模式抗原,用含不同质量黄芪多糖与紫锥菊提取物的纳米乳佐剂免疫小鼠后,测定并比较血清OVA诱导特异性抗体水平的变化。【结果】制备黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳的配方中,Tween 80、Span 80、石蜡油、乙醇、水的体积比为3∶1∶1.5∶0.5∶1;所得纳米乳为淡黄色透明液体,透射电镜下呈圆球形,平均粒径45.2nm,pH 6.71,黏度4.60s,理化性质较稳定。用黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳和抗原同时免疫小鼠后,未见任何不良反应,且用黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳免疫的各试验组小鼠,其血清OVA特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平均显著高于OVA抗原对照组(P<0.05),而各试验组的IgG、IgG1和IgG2a抗体水平无显著差异;只有APS 200μg+EM 200μg+OVA抗原组和APS400μg+EM 200μg+OVA抗原组的IgG、IgG1和IgG2a抗体水平显著高于铝胶(Alum)+OVA抗原组(P<0.05),且以APS 400μg+EM 200μg+OVA抗原组的3种抗体水平最高。【结论】黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳佐剂制备方法简单,稳定性好,能显著增强机体抗体的产生能力,同时可以增强Th1和Th2的免疫应答反应,具有开发佐剂的应用价值。

竹节参醇提物免疫佐剂作用的实验研究

目的采用高效液相色谱法(HPLC)筛选竹节参醇提物中最佳免疫佐剂活性部位,进而探讨此有效部位作为HBs Ag佐剂的作用及可能机制。方法通过HPLC初步分离和分析竹节参醇提物,MTT法检测不同浓度乙醇洗脱的竹节参皂苷中最佳佐剂活性部位,将此部位与HBs Ag共同注入到雌性Balb/c小鼠体内进行免疫,小鼠随机分为正常对照组,HBs Ag模型组和(HBs Ag+竹节参醇提物)低(300μg)、高剂量(600μg)组,末次免疫7 d后收集小鼠淋巴细胞并采集血清,CCK-8检测脾淋巴细胞增殖情况;间接ELISA法检测小鼠血清中抗体滴度;RT-PCR法检测脾淋巴细胞中相关细胞因子的表达;流式细胞仪检测细胞表面蛋白的表达。结果竹节参醇提物显著促进淋巴细胞的增殖,60%浓度的醇过大孔树脂所得竹节参皂苷对淋巴细胞的增殖最显著(P<0.01);显著增强小鼠血清中抗HBs Ag的Ig G、Ig G1和Ig G2b亚型抗体滴度;上调细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10的表达;增强TLR4受体的表达。结论竹节参醇提物中60%乙醇提取物具有较强的免疫佐剂作用,作为HBs Ag抗原佐剂是通过活化TLR4受体来发挥作用的。

新型免疫佐剂研究进展

随着免疫学研究的不断深入,研究开发高效、低毒、副反应小的免疫佐剂具有重要的理论和实际意义。本文对不同类型的新型免疫佐剂的研究现状进行了综述,以期为免疫佐剂的研制提供参考。

竹节参多糖的免疫佐剂活性研究

目的研究不同醇沉竹节参多糖的免疫佐剂活性,探讨其中佐剂活性最强的部分。方法通过对竹节参总多糖进行不同浓度醇沉,得到30%醇沉物、60%醇沉多糖和90%醇沉多糖,将各段多糖分别与卵白蛋白混合注入小鼠体内进行免疫,每周免疫1次,共3次。最后1次免疫后5 d处死小鼠取血,测定抗体效价。对3种醇沉物质进行红外光谱扫描,初步确定多糖的类型。结果各段多糖的抗体效价与对照组比较均显著增加,尤以60%醇沉多糖最为明显。红外图谱分析表明,竹节参多糖的骨架中含有吡喃糖环结构。结论竹节参多糖的免疫佐剂效果显著,其中60%醇沉多糖的佐剂效果最强。

人参皂甙Rb1的免疫佐剂作用

分别将人参皂甙 Rb1(人参主要成分之一 )以及氢氧化铝胶作为佐剂和金黄色葡萄球菌菌体抗原混合免疫豚鼠 ,观察免疫前后血清抗体滴度变化 ;并用 Rb1和奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌疫苗混合免疫奶牛 ,观察免疫前后血清抗体滴度变化 ,以及血液淋巴细胞在刀豆蛋白 A(Con A)、美洲商陆 (PWM)和金黄色葡萄球菌抗原刺激下的体外细胞增殖反应。结果表明 ,Rb1和抗原混合物免疫动物后 ,未见任何不良反应 ;Rb1组豚鼠血清抗体滴度比对照组和氢氧化铝胶佐剂组滴度增加快 ,幅度显著增高 ;Rb1组奶牛血清抗体滴度比对照组奶牛显著增加 ,Con A、PWM和金黄色葡萄球菌抗原诱导的血液淋巴细胞体外细胞增殖反应比对照组显著提高。因此 。

免疫佐剂治疗儿童呼吸道感染临床疗效的Meta分析

目的采用Meta分析方法评价免疫佐剂治疗儿童反复呼吸道感染的临床疗效和安全性。方法计算机检索EMBASE(1974年9月-2013年9月)、PUBMED(1966~2013年)、The Cochrane Register of Controlled Trials(2013年第1期)和VIP(1989年9月~2013年9月),万方数据库(1994年1月-2013年9月),CNKI(1979年1月-2013年9月),手工检索最近1年国内已发表的相关论文及会议资料。按照纳入与排除标准选择文献、提取资料和评价纳入研究的方法学质量后,采用Cochrane协作网提供的Rev Man 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入13个研究,1 088例患儿。Meta分析结果显示,免疫佐剂+常规治疗组能提高患儿的T淋巴细胞亚群CD3(WMD=7.97;95%CI:5.6,10.34;P=0.000)、CD4(WMD=5.44;95%CI:1.27,9.6;P=0.010)水平,提高免疫球蛋白Ig A(WMD=0.43;95%CI:0.08,0.77;P=0.010),Ig G(WMD=1.07;95%CI:0.25,1.89,P=0.000)水平;延缓RRI发作天数(WMD=-5.14;95%CI=6.72,3.56;P=0.040);对CD8(WMD=0.7;95%CI:0.19,1.59;P=0.130)及CD4/CD8(WMD=0.25;95%CI:0.04,0.45;P=0.130)及免疫球蛋白Ig M(WMD=0.04;95%CI:-0.05,0.12;P=0.370)和不良反应发生率(WMD=1.5;95%CI:0.52,4.28;P=0.450)试验组与对照组之间差异无统计学意义。结论基于现有临床证据,免疫佐剂联合常规治疗可有效治疗儿童反复呼吸道感染,安全性好。但由于纳入研究数量少,研究质量不统一,本结论尚需要更多大样本、高质量的RCT予以证实。