右美托咪定对老年腹腔镜结肠癌根治术患者免疫保护及血微循环转移影响的临床观察

目的探讨右美托咪定对老年腹腔镜结肠癌根治术患者免疫保护及血微循环转移的影响。方法选取2021年6月至2023年6月在上海市第七人民医院78例行腹腔镜结肠癌根治术患者为研究对象,随机分为2组,其中试验组(n=39)于麻醉诱导前采用右美托咪定复合喷他佐辛,对照组(n=39)采用等速率等量生理盐水以及喷他佐辛。比较两组围麻醉期指标,分别于麻醉诱导前(T_(0))、手术结束即刻(T_(1))、术后30 min(T_(2))、术后6 h(T_(3))比较患者血流动力学指标变化,于麻醉诱导前(T_(0))、术后6 h(T_(3))、24 h(T_(4))、48 h(T_(5))对患者免疫功能及血微循环转移进行评估,并比较两组术后不良反应发生率。结果试验组呛咳评分为(2.02±0.36)分、对照组呛咳评分为(2.61±0.49)分;试验组躁动评分为(1.66±0.21)分、对照组躁动评分为(2.07±0.35)分;差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者T_(0)时刻HR、SpO2及MAP比较差异无统计学意义P>0.05),T_(2)时刻实验组HR显著低于对照组(76.38±7.33 vs.95.64±9.32),差异具有统计学意义(P<0.05);T_(1)、T_(2)时刻试验组MAP显著低于对照组(73.84±7.94 vs.106.85±10.37,80.37±8.39 vs.102.84±9.38),差异具有统计学意义(P<0.05)。T_(3)~T_(5)时间点,两组CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)均低于T_(0),试验组各指标均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。T_(0)时刻,两组CK19、CK20阳性率比较无差异(P>0.05);T_(3)~T_(5),试验组CK19、CK20阳性率均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组、试验组不良反应发生率分别为15.4%和10.4%。结论右美托咪定可优化老年腹腔镜结肠癌根治术围麻醉期指标,有效减轻免疫抑制,降低血微循环转移风险,且安全性良好,值得临床进一步应用。

猪链球菌重组磷酸ABC转运体ATP酶的免疫保护效果评价

猪链球菌(S.suis)是一种重要的人畜共患病原菌,给养猪业造成重大的经济损失。为了评估猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶蛋白的免疫保护效果,本研究构建了猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶原核表达载体进行蛋白的重组表达,纯化并制备该重组蛋白的亚单位疫苗,加强免疫接种后两周,检测其血清抗体效价、免疫保护率、各脏器载菌量以及炎性因子表达情况。结果显示,该蛋白经大肠杆菌表达后主要以可溶形式存在。ELISA检测表明该蛋白可以诱发小鼠产生高水平IgG抗体,免疫组小鼠抗体水平显著高于对照组,该重组蛋白对小鼠感染2型猪链球菌(S.suis serotype 2,S.suis 2)的保护率达到60%,显著降低了小鼠大脑、心脏及肺脏的载菌量,免疫组小鼠细胞因子IL-1β、IFN-γ、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达显著上调。研究表明猪链球菌重组磷酸ABC转运体ATP酶蛋白具有较强的免疫原性,是猪链球菌病潜在的亚单位疫苗候选蛋白。

鸭瘟病毒gG基因缺失株的构建及其免疫保护效果研究

鸭瘟病毒(DEV)是引起鸭高致死率的重要病原。为探究gG基因对DEV疫苗株免疫保护效果的影响,本研究在本实验室已构建的DEV疫苗株细菌人工染色体感染性克隆pDEV-EF1的基础上,通过“Red E/T两步重组”技术,构建DEV gG基因缺失的感染性克隆pDEV-ΔgG,对其进行酶切、PCR及测序鉴定。将p DEV-EF1和pDEV-ΔgG分别转染CEF细胞,待两组细胞均出现荧光后,收获细胞培养物反复冻融3次后,连续传至20代,每隔5代采用PCR及测序鉴定,分析p DEV-ΔgG的遗传稳定性,并采用western blot进一步鉴定,结果显示,正确构建gG基因缺失株,且能在CEF上稳定传代,命名为rDEV-ΔgG。将rDEV-ΔgG和亲本病毒rDEV-EF1接种CEF,测定体外生长曲线和测定蚀斑形成能力。结果显示,rDEV-ΔgG和rDEV-EF1的病毒滴度在24 h~72 h呈上升趋势,均在72 h时达到高峰,且二者的病毒滴度无显著差异;rDEV-ΔgG感染CEF后形成的蚀斑较亲本病毒rDEV-EF1产生的蚀斑面积减小27.37%。将r DEV-ΔgG以不同剂量免疫30日龄麻鸭2周后,进行DEV攻毒试验,观察各组鸭的临床症状,统计各组麻鸭的存活率,攻毒后1 d到9 d采集各组鸭肛拭子,并在攻毒后2 d、4 d、6 d和8 d各组分别随机剖杀3只麻鸭,取其各脏器组织,经荧光定量PCR分别检测各组麻鸭各脏器病毒载量及排毒情况。攻毒试验结果显示,1.0×10^(5)TCID_(50)和1.0×10^(4)TCID_(50)rDEV-ΔgG免疫的麻鸭在强毒攻击下的保护率较相同剂量rDEV-EF1免疫的麻鸭均下降17%。各脏器病毒载量结果显示,在攻毒后2 d麻鸭胸腺的病毒载量最高,其次是脾脏,在攻毒后4 d,麻鸭食道、泄殖腔、胸腺病毒载量较高。泄殖腔排毒结果显示,攻毒后1 d~4 d泄殖腔排毒量持续升高,并攻毒后4 d各组麻鸭的排毒量达到峰值。本研究比较了gG基因缺失病毒rDEV-ΔgG和亲本病毒rDEV-EF1的生物学特性和免疫保护效果差异,为明确gG在DEV基因组中的功能提供研究基础。

肠艾美耳球虫重组微线蛋白2对家兔免疫保护效果评价

本研究旨在评价肠艾美耳球虫重组微线蛋白2(rEiMIC2)对兔的免疫保护效果,为肠艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研究提供参考。在肠艾美耳球虫转录组数据中筛选出EiMIC2基因,进行克隆、原核表达和蛋白纯化,并采用免疫印迹检测重组蛋白的免疫反应性。将35日龄无球虫新西兰幼兔32只随机分为4组(未免疫未攻虫组、未免疫攻虫组、pET-32a(+)载体组和rEiMIC2免疫组),每组8只,未免疫未攻虫组和未免疫攻虫组每只颈部皮下注射1 mL无菌PBS,pET-32a(+)载体组和rEiMIC2免疫组每只分别接种100μg pET-32a(+)载体蛋白、rEiMIC2,首免后2周进行二免。二免14 d后,除去未免疫未攻虫组,其余3组每只新西兰兔口服接种5×10^(4)个肠艾美耳球虫孢子化卵囊;攻虫14 d后安乐死所有新西兰兔。重组蛋白免疫兔后通过观察临床症状、肠道病变、测定兔的相对增重率、卵囊减少率、抗球虫指数(ACI)值和料肉比以及检测血清中特异性IgG、IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ综合评价rEiMIC2的免疫保护效果。结果显示,EiMIC2基因开放阅读框长度为1 605 bp,编码的蛋白分子质量约为57.68 ku。免疫印迹显示rEiMIC2能够被阳性血清所识别,表明其具有良好的免疫反应性。免疫保护试验显示:攻虫后各组幼兔陆续出现精神沉郁和腹泻的症状,未免疫攻虫组和rEiMIC2免疫组各有1只兔死亡;rEiMIC2免疫组相对增重率为73.97%,卵囊减少率为69.98%,ACI值为136.97,料肉比为3.98∶1,与未免疫攻虫组差异显著(P<0.05);rEiMIC2免疫组肠道病变与未免疫攻虫组相比较轻,血清中特异性IgG水平显著高于未免疫攻虫组(P<0.05)。综上,rEiMIC2免疫兔后,能有效减少卵囊排出和增重损失,减轻肠道损伤,具有一定的保护效果。

口服卵黄抗体对杂交鳢弹状病毒(HSHRV)感染的免疫保护效果

为了研究抗杂交鳢弹状病毒(hybrid snakehead rhabdovirus,HSHRV)卵黄抗体的制备方法并评价其免疫保护效果,将杂交鳢弹状病毒经白油乳化制备疫苗,免疫蛋鸡收集高免蛋,采用喷雾干燥方法制备成卵黄抗体粉,以细胞中和试验评估卵黄抗体中和病毒的效果。按照每kg鱼投喂卵黄抗体0.25 g、0.40 g、0.60 g的比例制备低、中、高3种添加剂量的饲料,持续投喂杂交鳢10 d,在口服免疫第4天时以104 TCID50/0.1mL的杂交鳢弹状病毒江门I株(HSHRV-JMI)病毒经腹腔注射对杂交鳢进行攻毒,并记录6 d内各组死亡情况。结果显示,四次免疫后卵黄抗体中和效价达到高峰,为1∶46.8,抗体维持时间为60d。高中低剂量组的存活率分别为64.4%、70.6%、78.5%;相对保护率分别为61.1%、67.9%、76.5%,三者均显著高于非特异性卵黄抗体对照组(P<0.001)。表明杂交鳢弹状病毒能有效刺激卵黄抗体产生,高效价卵黄抗体经口服免疫后可以有效抑制杂交鳢弹状病毒的侵染,显著提高杂交鳢存活率和相对保护率。

鸡滑液囊支原体灭活疫苗的制备及其免疫保护效果研究

为了研究鸡滑液囊支原体灭活疫苗在不同剂量下的免疫保护效果,该研究以40只20日龄健康海蓝褐雏鸡为研究对象,将鸡滑液囊支原体Q5-2菌株制成的灭活疫苗分3个剂量组对其进行免疫,共免疫3次。利用ELISA检测每组鸡的血清抗体效价,免疫结束后将全部蛋鸡经滴鼻、滴眼途径进行攻毒,检验疫苗的保护效力。结果表明:(1)与对照组相比,3个剂量组2次加强免疫后抗体效价迅速升高,其中低剂量组抗体效价持续上升,达到峰值时的抗体效价也最高为1∶158000,3个剂量组之间差异显著(P<0.05);(2)疫苗接种后对强毒攻击的保护率,低剂量组为100%,中、高剂量组为80%,随着攻毒后时间的延长疫苗接种组从咽拭子中分离出支原体的概率明显低于对照组。表明制备的鸡滑液囊支原体灭活疫苗能刺激机体产生良好的免疫应答,对于强毒攻击具有较好的抵抗作用,并对强毒感染后动物的排毒起到一定抑制作用,从而为该病疫苗的开发及防控方面的研究提供参考依据。

沙眼衣原体质粒编码蛋白3的致病性及免疫保护性研究

目的 探索沙眼衣原体(CT)质粒编码蛋白3(Pgp3)的致病性及免疫保护性。方法 CT L2构建株(GFP)、野生株(WT)和质粒缺失株(PF)分别感染Hela细胞,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)和间接免疫荧光法(IFA)检测Pgp3蛋白表达水平;L2 GFP、WT和PF菌株经阴道分别感染C3H小鼠,感染后不同时间点经IFA评估生殖道包涵体形成单位(IFU)数量;组氨酸标记的Pgp3(His-Pgp3)体外刺激人输卵管上皮细胞,24 h后经Hoechst 33 528染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;L2 WT体外感染L929和L929-Pgp3细胞,在感染后30、60及80 h固定细胞并计算IFU和细胞核数量。L2 GFP和WT菌株经阴道分别感染C3H小鼠,50 d后各组均以L2 WT菌株攻毒,攻毒后不同时间点评估生殖道IFU数量。结果 L2 GFP Pgp3蛋白表达水平高于L2 WT,L2 PF无Pgp3蛋白表达;小鼠感染后第3、7、10和14天,L2 GFP感染组IFU数量显著高于L2 WT和L2 PF感染组,且L2 GFP组感染周期最长;Pgp3体外干预组细胞凋亡率显著低于空白组,L2 WT体外感染L929和L929-Pgp3细胞60 h和80 h后,L929-Pgp3组IFU值显著高于L929组,且宿主细胞消亡数量显著低于L929组;动物实验显示L2 GFP组经L2 WT菌株攻毒后下生殖道IFU数量显著低于L2 WT组,且L2 GFP组感染周期显著短于L2 WT组。结论 Pgp3可抑制宿主细胞凋亡并促进CT在细胞间播散感染;内源性Pgp3有良好的免疫保护性。

柔嫩艾美耳球虫重组Profilin蛋白对鸡的免疫保护效果评价

【目的】通过对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)Profilin基因进行原核表达和纯化,探明重组Profilin蛋白对鸡的免疫保护效果。【方法】设计合成Profilin基因特异性引物,提取E.tenella孢子化卵囊总RNA,反转录成cDNA,用PCR扩增获得Profilin基因后连接至pET-32a(+)载体构建重组质粒pET-32a(+)-Profilin,在IPTG诱导下进行表达并纯化。用重组Profilin蛋白免疫雏鸡,随后经口服感染柔嫩艾美耳球虫卵囊,测定和统计雏鸡存活率、平均增重、血便计数、每克粪便卵囊数、卵囊产量、盲肠病变,计算抗球虫指数,观察盲肠组织病理学变化并测定血清中IL-2、IL-10、TNF-α、sIgA的水平以评估重组Profilin蛋白的免疫保护效果。【结果】成功表达了重组Profilin蛋白,大小为39.1 kDa。免疫保护试验表明:Profilin重组蛋白组鸡只存活率、鸡只血便数和OPG相对于感染不免疫攻虫组显著减少(P<0.05);50μg重组蛋白免疫组的体增重效果最好,达93%,卵囊产量最少,ACI效果最好;100μg重组蛋白免疫组的盲肠损伤最小,而免疫器官指数未见显著差异(P>0.05)。在攻虫后7 d,感染不免疫攻虫组血清中IL-2、TNF-α、IL-10以及sIgA水平相比于空白对照组均极显著升高(P<0.01),而重组蛋白免疫组血清中IL-2、TNF-α、IL-10以及sIgA水平极显著低于攻虫不免疫组(P<0.01)。【结论】柔嫩艾美耳球虫重组Profilin蛋白可减少感染雏鸡的增重损失和卵囊排出,引发雏鸡体内的细胞免疫和体液免疫,具有一定的免疫保护效果。

猪链球菌靶向DC重组蛋白DC3pep-SDZ对斑马鱼的免疫保护性分析

为了探究本课题组前期构建的由猪链球菌(SS)的分泌型DNA核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)和高亲和力锌摄取系统蛋白(ZnuA)3个毒力因子的优势细胞表位和树突状细胞靶向肽(DC3pep)串联而成的重组蛋白DC3pep-SDZ(SsnA-DLDH-ZnuA)对致病型SS攻击斑马鱼的免疫保护效果,本试验表达和纯化重组蛋白DC3pep-SDZ和SDZ,分别免疫AB系野生型斑马鱼,攻击致病型2、3和9型SS(SS2、SS3和SS9),计算存活率,采用苏木精-伊红(H.E.)染色法观察斑马鱼脑组织病理变化,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析SS3感染斑马鱼后脑组织炎性细胞因子表达量变化。结果显示,诱导表达的重组蛋白DC3pep-SDZ和SDZ分子质量分别为44和42 kDa,2个蛋白均以可溶的形式表达。SS2、SS3和SS9攻击斑马鱼后,重组蛋白DC3pep-SDZ组和重组蛋白SDZ组斑马鱼存活率分别为50.0%、65.0%和60.0%,45.0%、47.3%和45.0%,两组间差异不显著(P>0.05),但与PBS对照组相比差异均极其显著(P<0.001)。H.E.染色镜检结果显示,重组蛋白DC3pep-SDZ组的斑马鱼被3种分型SS攻击后脑组织均无明显病理变化。RT-qPCR结果显示,重组蛋白DC3pep-SDZ组促炎细胞因子:与PBS对照组相比较IL-6、TNF-α和IFN-γmRNA表达量分别极显著(P<0.01)、极其显著(P<0.001)和极显著(P<0.01)下调,与重组蛋白SDZ组相比较IL-6和TNF-αmRNA表达量分别极显著(P<0.01)和显著下调(P<0.05);重组蛋白DC3pep-SDZ组抗炎性细胞因子:与PBS对照组相比较IL-10和TGF-β1 mRNA表达量分别极显著(P<0.01)和极其显著(P<0.001)上调,与重组蛋白SDZ组相比较TGF-β1 mRNA表达量显著上调(P<0.05)。结果表明,重组蛋白DC3pep-SDZ较SDZ具有更好的免疫原性,能产生SS2、SS3和SS9交叉免疫保护作用,同时还能够有效缓解斑马鱼感染SS3后的脑部炎症。

鱼类迟缓爱德华氏菌肠溶口服疫苗的制备及免疫保护效应研究

本文采用海藻酸钠作为载体,采用乳化复沉淀方法包裹迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)全菌制备疫苗微球。制备工艺研究结果表明:3%(m/v)海藻酸钠溶液,4%(m/v)CaCl_(2)溶液,水油相比1∶2,乳化剂Span801%,搅拌速度1200 r/min为最佳制备工艺,微球包埋率达91.04%,微球平均粒径(16.51±11.87)μm。通过人工胃肠液对疫苗微球的耐受性进行分析,微球在体外人工模拟胃液和肠液中16h释放率分别为0.8%和98.1%。用表达有绿色荧光蛋白的大肠杆菌做示踪标记,口灌免疫半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gunther),疫苗能耐受胃的酸性环境影响,通过前消化道到达后肠。免疫保护效应研究表明,口腔灌注疫苗后,出现特异性和非特异性免疫应答,疫苗组在初免后第14天血清效价达到峰值1∶322;外周血白细胞吞噬率在初免后第14天达到峰值27.06%,吞噬指数在初免后第14天达到峰值1.65。初免后第28天用迟缓爱德华氏菌活菌攻毒,对照组死亡率58.82%,疫苗组死亡率13.33%,免疫保护率为77.33%。本研究优化了鱼类肠溶口服疫苗的制备工艺,疫苗免疫评价结果表明,该口服疫苗可以有效激活鱼体免疫反应,预防鱼类疾病发生。

人外周血IL-35表达水平与新型冠状病毒疫苗免疫保护效果相关性分析

目的 通过研究被接种者外周血中IL-35的表达水平与被接种者免疫保护的相关性,探讨影响新型冠状病毒疫苗免疫应答可能的原因。方法 选取180名于2021年2月至12月在我院接种门诊全程规范接种新型冠状病毒疫苗健康者,接种完3针后,于第6周采集静脉血。离心收集血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其中新型冠状病毒疫苗抗体水平以及接种前、接种完3针后第6周血清中IL-35的浓度。对接种前后血清中IL-35的浓度比较分析,同时用Pearson对血清中新型冠状病毒疫苗抗体水平与接种后血清中IL-35的浓度进行相关性分析。结果 180名受试者在接种疫苗后第6周血清抗体检测结果为6名阴性,其余174名受试者均为阳性。接种前血清IL-35浓度为(11.56±20.47) pg/mL,接种后第6周血清IL-35浓度为(133.46±54.97) pg/mL,接种后血清IL-35浓度明显高于接种前(P<0.01);被接种者第6周血清抗体含量与血清IL-35浓度进行相关性分析结果表明两者呈正相关(R2=0.883,P<0.01)。结论 外周血IL-35浓度与机体产生新型冠状病毒抗体水平成正相关。

莫然团队在Nature Communications上发表抗异体移植排斥的免疫保护水凝胶研究成果

近日,权威期刊Nature Communications在线发表了本刊编委莫然教授团队的最新研究成果:Immuno-protective vesicle-crosslinked hydrogel for allogenic transplantation。我校博士生王雨倩为论文的第一作者,莫然教授为通信作者,中国药科大学为论文的唯一通信单位。

H9亚型禽流感病毒分离鉴定及鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病三联灭活疫苗对其免疫保护效果研究

【目的】研究鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群,4型)(简称:新流腺)三联灭活疫苗(La Sota株+BX13株+DC株)对禽流感病毒(AIV)流行毒株的免疫保护效果,为新流腺三联灭活疫苗的研发提供数据支撑。【方法】本研究对2019-2022年分别对从河北石家庄、北京密云、河北衡水、广西南宁发病鸡群中采集的病料进行AIV分离鉴定;利用MegAlign软件分析BX13株和2019-2022年分离株之间的相似性及亲缘关系;采用新流腺三联灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫后21 d测定H9亚型AIV HI抗体,同时用同源BX13株和本试验中AIV分离株进行攻毒试验,检测新流腺三联灭活疫苗对H9亚型AIV流行毒株的保护效果。【结果】2019-2022年从河北、北京和广西发病鸡群中分离获得4株AIV,均为H9亚型AIV,分别命名为SJZ19、MY20、HS21和NN22株;BX13株与2019-2022年4个分离株的相似性较高,在95.3%~96.3%之间;BX13株和4个分离株均属于DK-HK-Y280-97所在亚群的分支;新流腺三联灭活疫苗免疫后,各免疫组鸡H9亚型AIV HI抗体效价明显上升,达到9.2~9.9 log2,而对照组鸡抗体为阴性;用同源BX13株攻毒后,对照组鸡100%(5/5)阳性,免疫组鸡100%(10/10)阴性,保护率为100%;用4株H9亚型AIV分离株攻毒后,对照组鸡100%(5/5)阳性,免疫组鸡90%(9/10)~100%(10/10)阴性,保护率为90%~100%。【结论】以BX13株制备出的新流腺三联灭活疫苗对目前的流行毒株具有较好的免疫保护效果。

多杀性巴氏杆菌重组Dot蛋白对小鼠免疫保护效果研究

为评估猪多杀性巴氏杆菌(Pm)毒力蛋白Dot诱导小鼠产生的免疫保护效果,本研究根据GenBank登录的A型Pm CS株dot基因序列设计特异性引物,以CS株基因组DNA为模板经PCR扩增dot基因片段,PCR产物测序后利用生物信息学软件进行序列分析。结果显示,dot基因长729 bp,编码含242 aa的膜蛋白;该蛋白的N端有一个24 aa组成的信号肽,具有重复Sel 1结构功能域,属于四肽重复超家族;抗原表位分析显示,Pm Dot蛋白含有6个抗原表位;序列同源性分析显示,不同血清型Pm Dot蛋白氨基酸序列的同源性达99%以上。将dot基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中构建重组表达质粒pET-dot,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,采用His纯化柱纯化后,经SDS-PAGE检测并采用western blot鉴定。结果显示,重组Dot蛋白(rDot)正确表达,且纯化效果较好,具有较强的反应原性。取40只4周龄BALB/c小鼠随机均分为5组进行免疫保护实验,3个实验组分别于0、2周、4周对小鼠通过背部皮下多点注射弗氏不完全佐剂(IFA)+10μg rDot(低剂量组)、IFA+30μg rDot(中剂量组)、IFA+50μg rDot(高剂量组)。两个对照组分别注射等量生理盐水和IFA。共免疫3次,每次间隔2周,小鼠于免疫前和攻毒前,均经尾静脉采血并分离血清,采用ELISA检测血清中IgG抗体水平。第3次免疫后2周,通过腹腔注射10×LD_(50)的A型Pm CS株攻击小鼠,观察攻毒后小鼠的临床症状及死亡情况。结果显示,生理盐水和IFA组小鼠抗体水平无显著差异;实验组小鼠二免后2周和三免后2周IgG抗体水平均极显著高于两个对照组(P<0.01)。攻毒后3 d,对照组小鼠全部死亡,低剂量、中剂量、高剂量组小鼠存活率分别为12.5%(1/8)、50%(4/8)、62.5%(5/8)。攻毒后5 d存活小鼠逐渐恢复并正常采食。本研究表明,rDot具有很好的免疫原性,可诱导小鼠产生部分免疫保护力。该研究为Pm Dot亚单位疫苗的研究积累了基础资料。

可诱导快速免疫保护兽用疫苗的种类及其诱导机体免疫反应的机制

疫苗免疫是预防传染病的重要策略。合理使用疫苗可以诱导宿主产生特异性免疫保护^([1]),优良的疫苗应当具有快速产生免疫保护和持久保护的特点。可诱导快速免疫保护的兽用疫苗能够在免疫早期激活畜禽的免疫系统,为畜禽提供快速的免疫保护,可用于畜禽的紧急免疫。本文列举了几种可诱导动物机体快速免疫保护的兽用疫苗,并阐述它们诱导快速免疫保护的关键免疫学机制,为研发可诱导快速免疫保护的疫苗提供新的思路和理论指导。

猪多杀性巴氏杆菌4个重组蛋白的小鼠免疫保护效力比较

为筛选多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据GenBank中登录的Pm基因序列,设计相应引物,经PCR扩增Pm torA、prX、gpmA和thiB基因片段,分别克隆于原核表达载体pET28a中,构建各重组表达质粒,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达,采用His6标签蛋白纯化试剂盒纯化获得4个重组蛋白rTorA、rPrX、rPGAM和rThiB,同时利用透析膜制备rTorA的粗提蛋白(rTorA-C)。SDS-PAGE检测结果显示,分别在91 ku、25 ku、32 ku及41 ku处出现目的条带,表明4个重组蛋白均正确表达,其中rTorA主要以包涵体形式表达,少量表达在上清中;rPrX、rPGAM和rThiB主要以可溶性形式表达;各重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的7.44%~61.46%,各重组蛋白纯化后的纯度为76%~98.15%,浓度为0.15 mg/mL~4.56 mg/mL。Western blot检测结果显示,分别在上述4个位置处出现特异性条带。将4个纯化蛋白和rTorA-C分别与MontanideTM ISA 201 VG佐剂混合制成亚单位疫苗,免疫小鼠后分别于首免前、首免后14 d、二免后14 d(首免后28 d)采血,分离血清,通过间接ELISA方法检测各组小鼠抗体水平;二免后15 d采用4倍半数致死剂量(LD50)A型Pm强毒A5株菌液进行腹腔注射攻毒,观察并记录小鼠死亡及发病情况至21 d。ELISA检测结果显示,各重组蛋白免疫组小鼠的IgG抗体水平均随免疫次数的增加而升高,与PBS对照组相比差异均极显著(P<0.01)。攻毒试验结果显示,PBS对照组小鼠攻毒后24 h内开始发病,10 d内全部死亡(10/10);发病小鼠主要症状为精神萎靡、食欲减退或废绝,被毛凌乱,对外界刺激无明显反应等;对死亡小鼠剖检,各组织器官主要表现为出血为特征的败血症的剖检变化。各重组蛋白免疫组小鼠中,也出现了不同程度的发病或死亡。rTorA、rTorA-C、rPGAM、rThiB和rPrX免疫组小鼠的免疫保护率分别为60%、40%、100%、20%和0。本研究首次在相同条件下对Pm 4个重要重组抗原蛋白的免疫保护效力进行了对比分析,筛选出的rPGAM和rTorA具有作为亚单位疫苗靶抗原的潜力,为Pm亚单位疫苗候选保护性抗原蛋白的筛选奠定基础。

青藏高原地区牦牛的牛病毒性腹泻流行病学调查及疫苗免疫保护期研究

牛病毒性腹泻(BVD)是一种以发热、腹泻、消化道黏膜糜烂、呼吸道感染、产奶量下降、怀孕动物流产和死胎为特征的急性、接触性传染病。本研究首先采用阻断ELISA和双抗体夹心ELISA方法对中国青藏高原牦牛主产区的牦牛血清样品进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体与BVDV抗原检测,随后对牦牛接种BVDV商品疫苗进行免疫效果和免疫保护期的评估。研究表明,BVD在青藏高原地区牦牛群中广泛流行,牦牛血清BVDV抗体总体阳性率为59.82%(271/453),血清BVDV抗原总体阳性率为4.42%(20/453),持续感染(PI)牛占比约1.55%(7/453)。牦牛接种疫苗后产生了特异性中和抗体并在(55.3±26.1)d抗体效价达到高峰,在110 d内牦牛体内血清BVDV特异性抗体均能检测到,在(231.0±23.4)d后血清BVDV抗体为阴性。该研究通过流行病学调查掌握了牦牛群中BVDV的感染情况,证实了牦牛群中持续感染(PI)牛的存在,丰富了青藏高原地区牦牛BVD流行病学资料,为牦牛BVD综合防控措施的制订提供参考。

日本血吸虫p53融合蛋白的表达及免疫保护效果评价

为评估日本血吸虫p53(Sjp53)蛋白的免疫保护效果,利用PCR扩增Sjp53基因,构建重组表达质粒pColdⅠ-Sjp53,并在大肠杆菌(E. coli)中诱导表达,用Western blot检测其免疫原性。将融合表达蛋白免疫小鼠评估其免疫保护效果,ELISA检测其特异性抗体水平。结果扩增到Sjp53基因2883 bp的编码区,构建的重组表达质粒pColdⅠ-Sjp53可在大肠杆菌中诱导表达并纯化得到约111 kDa的融合蛋白r Sjp53。应用r Sjp53结合ISA206佐剂免疫BALB/c鼠,可诱导高水平的特异IgG抗体。免疫血清可识别r Sjp53和日本血吸虫成虫抗原的相应条带,本研究表明r Sjp53具有良好的抗原性。r Sjp53在小鼠日本血吸虫病免疫保护试验中诱导了显著的肝脏减卵率,为35.34%。本研究结果为进一步研究日本血吸虫p53基因的功能提供了理论基础。

旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诱导的肠道免疫保护作用研究

目的 研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原(Trichinella spiralis muscle larvae excretory-secretory, Ts-Es)诱导小鼠肠道保护性免疫能力以及免疫调节作用。方法 54只BALB/c小鼠随机分为3组,空白对照组、旋毛虫感染组(Ts)、旋毛虫Ts-Es抗原免疫组(Ts-Es)。空白组小鼠腹腔注射PBS;抗原免疫组小鼠腹腔注射0.1 mL的Ts-Es抗原与等量弗氏完全佐剂;旋毛虫感染组腹腔注射PBS和弗氏完全佐剂,每隔7 d注射1次,共3次,末次注射后7 d旋毛虫感染组和Ts-Es抗原免疫组用400条/mL旋毛虫感染性幼虫灌胃攻击感染。解剖取材,检查肠道成虫及肌肉幼虫减虫率,用HE染色法观察肠道病理变化,RT-qPCR法检测小肠中目的基因mRNA表达水平。结果 与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组成虫和肌幼虫减虫率分别为49%(t=8.109,P<0.05)和67%(t=8.090,P<0.05);与空白对照组相比旋毛虫感染组小肠T-bet(t=5.25,P<0.05)、GATA3(t=2.50,P<0.05)、RORγ-t(t=4.71,P<0.05)、IFN-γ(t=3.17,P<0.05)、IL-4(t=2.60,P<0.05)、IL-5(t=3.05,P<0.05)、IL-17A(t=4.88,P<0.05) mRNA表达量升高,Foxp3表达量没有统计学差异(t=1.55,P>0.05);与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组T-bet(t=4.23,P<0.05)、RORγ-t(t=4.30,P<0.05)、IFN-γ(t=3.02,P<0.05)、IL-17A(t=3.17,P<0.05) mRNA表达量下降;GATA3(t=3.96,P<0.05)、Foxp3(t=2.76,P<0.05)、IL-4(t=5.16,P<0.05)、IL-5(t=3.69,P<0.05)、IL-10(t=2.61,P<0.05) mRNA表达量升高;与空白对照组相比Ts-Es抗原免疫组GATA3(t=6.4,P<0.05)、Foxp3(t=4.32,P<0.05)、IL-10(t=2.6,P<0.05)、IL-4(t=7.26,P<0.05)、IL-5(t=6.3,P<0.05) mRNA表达量升高均有统计学差异;RORγ-t(t=0.41,P>0.05)、T-bet(t=1.02,P>0.05)、IFN-γ(t=0.09,P>0.05)、IL-17A(t=1.80,P>0.05) mRNA表达量无统计学差异;肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转,肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转。结论 Ts-Es抗原免疫小鼠后可诱发转录因子GATA3,Foxp3相关的混合型免疫应答,并抑制旋毛虫感染引起的T-bet、RORγ-t所介导的炎症型免疫反应,抑制炎型细胞因子的释放,诱导宿主产生抗旋毛虫感染的免疫保护效果。

斯氏艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白对兔的免疫保护效果评价

旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外,其余各组实验兔经口感染1×10^(4)个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,攻虫后观察各组临床表现,每周定时采血、称重,感染21 d后剖检观察肝组织病理变化,并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现,Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录,且转录水平存在差异,在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状,而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示,免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低,虫体数量较少。综上,斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。