大米免疫活性肽在小鼠体内的作用机制

目的:证明前期筛选出的肽GBP1(NSVFRALPVDVVANAYR)在小鼠体内的免疫调节活性。方法:通过动物试验探讨GBP1肽的免疫调节作用机制;利用RNA-Seq技术对GBP1肽处理前后的小鼠脾脏组织进行转录组测序分析,阐释GBP1肽免疫调节作用的分子机制。结果:GBP1肽处理组小鼠脾细胞增殖数趋于正常值水平,肝脏器系数显著降低,血清中IgG含量稳定;终质量分数为25 mg/kg的GBP1肽能够在一定程度上抑制小鼠血清中IL-2、IFN-γ以及TNF-α的分泌;通过转录组分析,从脾脏组织中获得780个差异基因,该基因在机体内涉及与免疫相关的p53信号通路、铁死亡、补体和凝血级联等通路密切相关。结论:GBP1肽可以影响细胞因子的表达,介导信号转导通路,行使免疫调节功能。

酶解糖化滇黄精多糖的结构表征及其免疫活性

该论文研究了酶解糖化下的滇黄精多糖结构和免疫活性,以探究酶解糖化下的黄精多糖结构特征及免疫活性的影响。结果表明,酶解糖化黄精多糖(SPKP)的多糖和还原糖含量分别为94.05%、4.1%。多糖结构分析表明,SPKP的红外光谱在1016~1147和931 cm-1处有吡喃糖特征吸收峰;单糖组成及摩尔比为阿拉伯糖:半乳糖:葡萄糖:甘露糖:果糖=0.032:0.117:0.419:0.048:0.383,重均分子量(Mw)为3820 u。甲基化结果表明SPKP主要的糖苷键连接方式为(→4-Glcp-1→),占比47.1%,分支度为34.1%结合碘碘化钾和刚果红实验结果可以推测SPKP是一种含有复杂分支的三股螺旋多糖。RAW264.7细胞实验结果表明,酶解糖化黄精多糖在比较广的浓度范围内无毒性,均能促进细胞增殖,且有较高的细胞吞噬能力和NO水平,因此可以推测SPKP具有较好的免疫活性,且与其多糖结构有一定的关系。该研究可以为多糖与免疫活性的构效关系以及黄精新炮制方法的开发提供一定参考。

不同渥堆工艺对浏阳豆豉多酚抗氧化及免疫活性的影响

目的探究不同渥堆工艺对浏阳豆豉多酚抗氧化及免疫活性的影响,确定最佳工艺条件。方法测定不同渥堆盐度(0、3%、5%)、水分(35%、42%、50%)浏阳豆豉多酚的组成、抗氧化能力及免疫活性差异。并利用超高效液相色谱-串联质谱法进一步分析活性最佳工艺豆豉的多酚组分。结果渥堆期间多酚含量变化明显,且随着渥堆水分的增加,豆豉的多酚及黄酮含量越高。体外抗氧化实验结果显示高水分、低盐度渥堆有助于提升豆豉对2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐阳离子自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除能力,其中以50%水分无盐渥堆豆豉的抗氧化活性最强。细胞实验表明,各样品组均呈剂量依赖性抑制经脂多糖刺激的RAW264.7细胞释放NO,免疫活性最佳为42%水分、5%盐度渥堆的豆豉样品。42%水分下无盐渥堆豆豉与5%盐渥堆豆豉的酚类差异代谢物共筛选出多酚及其衍生物(6)、黄酮类(13)以及异黄酮类(6)25种,相关性分析发现其中雌马酚、槲皮素与浏阳豆豉的抗氧化活性呈显著正相关,而木犀草素、山奈酚、川陈皮素等与其免疫活性呈显著正相关。结论50%水分无盐渥堆豆豉多酚表现出较强的抗氧化活性,42%水分、5%盐度渥堆豆豉多酚的免疫活性最佳。本研究为浏阳豆豉的进一步高值化利用提供理论依据。

褐藻胶的酶法降解及其产物的体外免疫活性

本研究以褐藻胶为底物,探究其在褐藻胶酶法降解过程中的分子质量变化以及酶法降解制备褐藻胶低聚糖的工艺参数,并在此基础上,评价了不同分子质量褐藻胶酶解产物的体外免疫活性。结果表明,褐藻胶经褐藻胶裂解酶降解后分子质量显著下降,通过乙醇分级分离可获得3种不同分子质量的降解产物,其重均分子质量分别为13.4、5.73kDa和3.85kDa。单因素试验优化获得酶法制备褐藻胶低聚糖的最适工艺参数为pH7.0、褐藻胶裂解酶用量15U/g(底物质量计)、酶解时间24h,此时,褐藻胶低聚糖得率为28.05%。利用小鼠巨噬细胞模型对褐藻胶及其3种分子质量降解产物的体外免疫活性进行评价,发现褐藻胶及其酶解产物均具有一定的免疫增强活性,且重均分子质量为5.73kDa的酶解组分免疫增强活性最好,优于褐藻胶低聚糖。同时,通过添加巨噬细胞受体蛋白Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的阻断剂(TAK-242),验证了褐藻胶酶解产物通过诱导巨噬细胞TLR4的分泌,引起级联反应,增加NO、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素6的分泌,从而调节巨噬细胞免疫活性。研究结果可为褐藻胶高值化利用提供理论依据。

不同预处理对荷叶离褶伞水提残渣多糖理化性质及免疫活性的影响

以常规粉碎为对照,分别采用挤压膨化和蒸汽爆破对荷叶离褶伞(Lyophyllum decastes)子实体沸水提取剩余残渣进行预处理后提取多糖,并进行理化性质和免疫活性分析。结果表明:挤压膨化处理所得粗多糖(LCJ)得率和多糖含量分别为7.17%和60.73%,是常规粉碎组(LCW)的1.13和1.08倍;蒸汽爆破处理后提取的粗多糖(LCQ)得率和多糖含量可达15.42%和88.66%,分别是LCW的2.44倍和1.58倍。红外光谱分析3种方式提取所得残渣的粗多糖均具有多糖的特征吸收峰;LCW和LCJ中多糖组分的分子质量分布特征相似,均主要含有4个峰,LCQ多糖组分的分子质量分布变化较大,主要含有3个峰且低分子质量组分(P3)占比增加。三种粗多糖均由葡萄糖、岩藻糖、半乳糖和甘露糖组成,其中以葡萄糖为主,单糖的相对摩尔百分比有差异,LCQ中葡萄糖占比最高(76.22%)。三种处理所得残渣粗多糖均具有较好的增强免疫活性,10μg·mL^(-1)LCQ活性优于LCW和LCJ。

金丝小枣全枣、枣皮、枣肉黄酮提取物的抗氧化活性和免疫活性

以金丝小枣为研究对象,分别测定金丝小枣全枣、枣皮、枣肉的黄酮提取物对DPPH·、ABTS+·、·OH清除能力和总还原力,并利用刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)分别诱导小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖反应,探究金丝小枣的全枣、枣皮、枣肉的黄酮提取物的免疫活性。试验结果表明:金丝小枣全枣、枣皮、枣肉黄酮抗氧化活性和免疫活性存在差异,枣皮黄酮的抗氧化活性和免疫活性最强,枣肉黄酮提取物的抗氧化活性和免疫活性最弱,但全枣、枣皮、枣肉黄酮提取物对DPPH·和·OH的清除活性高于VC,且全枣、枣皮、枣肉黄酮提取物对小鼠脾脏T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖均具有促进作用。

基于Stacking模型比较分析不同食用菌糖蛋白复合物的体外免疫活性

为针对性利用食用菌糖蛋白复合物,本研究以6种食用菌:红菇、牛肝菌、香菌、虎掌菌、松茸和冷菌为材料,经水提醇沉法获得粗提物,采用体外免疫活性技术进行研究。测定了粗提物中糖蛋白复合物对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率、中性红吞噬能力、NO分泌水平及4种细胞因子的影响。基于上述指标,结合随机森林、极端梯度提升、支持向量机及堆叠模型等机器学习方法,综合评价糖蛋白复合物的免疫活性。结果表明,复合物加强了巨噬细胞中性红吞噬能力,提高了分泌NO和多种细胞因子的水平。机器学习将免疫活性进行分级,证明水解提高了复合物的免疫活性等级。本研究为进一步探究食用菌的营养和保健功能提供了基础,挖掘了机器学习在综合评价免疫活性中的潜在应用。

超声波辅助黄鳍金枪鱼免疫活性肽酶解工艺优化

本文以黄鳍金枪鱼肉为原料,通过超声波辅助酶解黄鳍金枪鱼肉制备免疫活性肽。以小鼠巨噬细胞相对增殖率为指标,筛选出最适蛋白酶为胰蛋白酶,并在单因素实验基础上,通过响应面优化试验确定了黄鳍金枪鱼肉的酶解条件。结果表明,酶解时间5 h、酶解温度37.6℃、超声波时间为11 min,在此条件下,小鼠巨噬细胞的相对增殖率最佳,为43.04%±2.03%,与线性回归模型的预测值相近。对最佳酶解条件下的黄鳍金枪鱼免疫活性肽进行氨基酸组成与分子量分析,其必需氨基酸为41.42%±1.24%,疏水氨基酸含量为26.49%±0.79%,分子量集中分布在4.7~6.5 kDa。研究结果为黄鳍金枪鱼的高值化利用提供了理论指导与技术支持。

滁菊多糖结构特性及其免疫活性研究

目的分离纯化滁菊多糖(Chuzhou chrysanthemum polysaccharides,CCPS),对其进行结构解析,并研究其免疫活性。方法以滁菊为原料,热水浸提,乙醇沉淀得到CCPS;通过快流速二乙氨基乙基-琼脂糖凝胶(diethylaminoethyl-sepharose fast flow,DEAE-FF)和葡聚糖凝胶G-100(Sephadex G-100)层析柱分离纯化CCPS,得到中性多糖CCPS-1-1。用高效液相色谱法、紫外和红外光谱法、刚果红实验等进行CCPS-1-1结构解析,建立小鼠单核巨噬细胞(mouse mononuclear macrophages cells,RAW264.7)的免疫模型探究其免疫刺激活性。结果CCPS-1-1主要由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成,具有三股螺旋结构。体外免疫活性实验表明,CCPS-1-1可以促进RAW264.7细胞的增殖和吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮(nitric oxide,NO)的分泌及细胞因子包括肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的释放。结论分离纯化得到的滁菊CCPS-1-1具有促进免疫活性的作用,在调节机体免疫力方面具有一定的应用价值。

发酵乳杆菌GBJ荚膜多糖结构、抗氧化及免疫活性研究

采用酶法提取发酵乳杆菌GBJ荚膜多糖(Capsular polysaccharides,CPS),并对其初级结构、体外抗氧化及免疫活性进行研究。结果表明:Lactobacillus fermentumGBJ CPS的产量为124.37 mg·L^(-1),其中性糖含量为92.54%,蛋白质含量为3.06%,硫酸基含量为1.04%,且不含糖醛酸;单糖组成分析显示CPS主要由摩尔比为3.64:1.00的半乳糖和葡萄糖组成;红外分析结果表明CPS具有多糖的特征吸收峰。此外,CPS在体外表现出较高的DPPH、ABTS+和羟基自由基清除能力。同时,合适浓度的CPS还可显著提高RAW264.7细胞的中性红吞噬能力和细胞因子(IL-1β、IL-6和IL-10)分泌水平(P<0.05),表明其具有良好的免疫调节作用。研究可以为乳酸菌CPS未来的开发和应用提供理论依据。

白玉菇多糖理化性质及免疫活性研究

文章采用常温水提和热水浸提法从白玉菇子实体中提取常温水提多糖(WHN)和沸水浸提多糖(WHB),通过DEAE-Cellulose离子交换层析柱进行分离纯化获得6种分级组分WHN_(1)、WHN_(2)、WHN_(3)、WHB_(1)、WHB_(2)、WHB_(3)。理化性质结果表明:WHN和WHB的总糖质量分数为67.72%和80.54%,分级组分总糖质量分数为93.48%~98.77%,含有少量蛋白质和糖醛酸;多糖组分的单糖摩尔分数各不相同,WHN、WHN_(1)、WHN_(2)、WHN_(3)是以半乳糖和葡萄糖为主的杂多糖,WHB、WHB_(1)、WHB_(2)、WHB_(3)组分中葡萄糖占比均最大,WHB_(3)为葡聚糖。采用药理学模型考察多糖对鼠巨噬细胞增殖活性、吞噬活性以及NO释放量的影响,结果表明,多糖WHN_(1)和WHB_(3)在体外细胞实验中表现出较好的免疫调节活性。研究结果为白玉菇多糖在药物和功能性食品中的应用提供理论基础。

铁皮石斛花多糖的结构组成及免疫活性研究

从铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura&Migo)花中分离纯化多糖组分,初步分析其结构特征并从细胞水平研究其免疫调节作用,为铁皮石斛花多糖的工业化生产与应用提供理论依据和方法参考。本文以铁皮石斛干花为原料,采用水提醇沉得到粗多糖,通过DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-100凝胶柱层析技术分离纯化得到铁皮石斛花多糖,采用高效凝胶渗透色谱法、PMP柱前衍生化法、傅里叶红外光谱、紫外吸收光谱等方法对铁皮石斛花多糖进行结构组成鉴定,并测定其免疫调节活性。结果表明,经过分离提纯得到的铁皮石斛花多糖,得率为0.578%,通过与单糖对照品进行比较,其主要由甘露糖、葡萄糖、微量半乳糖、木糖、阿拉伯糖组成(74.388∶22.676∶2.171∶0.173∶0.592),平均分子量为2216 Da。在50~200μg/mL范围内,铁皮石斛花多糖可显著增强巨噬细胞吞噬活性,有效刺激细胞释放NO,促进活性氧的产生。研究表明,铁皮石斛花多糖含量丰富,且具有较强的免疫调节活性,其发挥免疫作用可能是通过TLR4/NF-κB信号通路起作用。

黄芪多糖作为疫苗佐剂的免疫活性研究进展

接种疫苗是预防和控制传染病传播的最有效策略,但单一抗原成分的疫苗引出的免疫反应无法给机体提供有效的免疫保护,因此需要在疫苗中添加佐剂以提升人体免疫效果^([1])。佐剂是增强和调节疫苗抗原免疫反应的免疫刺激物,与抗原共同注射机体后,可延长机体对抗原的免疫时间,增强单核吞噬细胞系统的吞噬呈递作用以及刺激淋巴细胞的增殖分化,以提高疫苗的有效性^([2])。铝佐剂是最早被发现的佐剂,自1932年首次应用于人体以来,在传染病的预防中发挥了重大作用,研究表明氢氧化铝一般只诱导Th2型免疫反应,近年来也有研究称铝佐剂可诱导Th1型免疫反应但是受接种途径的影响^([3])。

白芨多糖对免疫活性影响的研究进展

白芨是我国一种常用的传统中药材,其作用包括收敛止血、消肿生肌等。白芨多糖(Bletilla Striata Polysaccharide,BSP)作为中药白芨的有效成分之一,近年来国内外学者对白芨多糖进行了体内外的研究,发现白芨多糖具有显著的免疫调节活性。文章围绕白芨多糖对免疫活性的影响,通过文献回顾法,研究了白芨多糖的结构、生物学活性、对信号传导通路的影响、对免疫细胞的影响等方面的进展,为白芨多糖对机体免疫功能的临床价值提供理论依据。

包埋青蛤免疫活性肽脂质体的制备及性质表征

为进一步提高青蛤免疫活性肽(Cyclina sinensis immunoceactive peptides,SCSP)的免疫调节功能,寻求更好的多肽递送方法,采用脂质体技术包埋SCSP,优化其制备工艺,并探究其理化性质和生物活性。比较了乙醇注入法、薄膜水合法、逆相蒸发法对包埋SCSP脂质体(SCS P-LIP)的平均粒径和包封率的影响;以平均粒径、包封率为评价指标,蛋黄卵磷脂质量、胆固醇与蛋黄卵磷脂质量比、SCSP与蛋黄卵磷脂质量比为变量,优化SCS P-LIP的制备工艺;考察了SCS P-LIP在4℃和25℃条件下贮藏7 d的稳定性;探究了SCS P-LIP对RAW 264.7细胞的免疫调节和细胞摄取效果。研究结果表明,薄膜水合法较适合SCS P-LIP的制备,优化制备条件为蛋黄卵磷脂质量40 mg、胆固醇与蛋黄卵磷脂质量比1∶4、SCSP与蛋黄卵磷脂质量比1∶4、探头超声12 min,在此条件下,SCS P-LIP的平均粒径为(107.500±2.301)nm,多分散指数为0.175±0.023,Zeta电位为(-29.800±0.577)mV,包封率为69.95%±1.24%。SCS P-LIP体系澄清透明,无特殊气味;透射电镜结果显示,SCS P-LIP呈球状,分布均匀;红外光谱结果显示,SCSP被包裹在脂质体极性部位;贮藏稳定性结果表明,SCS P-LIP更适合于4℃条件下避光保存;细胞实验结果表明,SCS P-LIP具有促RAW 264.7细胞增殖分化作用,对巨噬细胞吞噬功能的提升比SCSP更强,且具有较好的细胞摄取效果。研究结果表明,SCS P-LIP的制备工艺简单、性质稳定,有望为进一步开发具有免疫调节活性的多肽类功能食品提供技术参考。

树莓多糖组分RPP-5的结构特征与免疫活性研究

利用DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-200对树莓粗多糖进行分离纯化得到组分RPP-5,探究RPP-5的结构特征和免疫调节活性。采用高效凝胶渗透色谱、傅里叶红外光谱和气相色谱-质谱联用技术对RPP-5的结构进行表征。利用RAW264.7细胞研究RPP-5的免疫活性,通过CCK-8法、微板法、酶联免疫吸附测定和实时荧光定量PCR分别测定RPP-5对RAW264.7细胞的细胞活力、NO含量、炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量以及炎症因子mRNA表达水平的影响。结果表明,RPP-5主要由物质的量比为44.5∶21.7∶5.9∶8.8∶5∶4.1的阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖和木糖组成,其重均分子质量、数均分子质量和峰位分子质量分别为7598 Da、6183 Da和7492 Da,共存在12种单糖连接方式,糖链中→4)-Gal p-(1→、→4)-Xyl p-(1→、Ara f-(1→和→4,6)-Glc p-(1→的含量较高,分别为26.27%、16.50%、11.38%和10.41%。RPP-5可显著升高RAW264.7细胞的细胞活力,提高细胞内NO、IL-6、IL-1β和TNF-α的含量,促进IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA表达。综上,RPP-5是一种多支链的酸性杂多糖,具有较强的免疫增强活性,可作为功能性食品中的免疫调节剂,为树莓多糖的结构表征和免疫活性研究提供理论支持。

血满草酸性多糖的化学修饰及其免疫活性研究

目的 探讨化学修饰对血满草酸性多糖免疫活性的影响。方法 以血满草酸性多糖SPS-1为原料,采用氯磺酸-吡啶法、氢氧化钠-氯乙酸法和乙酸-亚硒酸钠法分别制备了SPS-1硫酸化、羧甲基化和硒化衍生物,通过测定硫酸化、羧甲基化的取代度和硒含量以及红外光谱对衍生物进行验证,采用HPGPC分析其均一性和分子量,采用MTT法测定SPS-1及其衍生物对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞增殖的影响,采用Griess法和ELISA技术测定细胞释放NO和细胞因子的水平。结果 SSPS-1和CSPS-1的取代度分别为0.624 4和0.489 8,SeSPS-1的硒含量为1.702 1μg/mg,红外光谱表明3种修饰方法均可用于SPS-1的化学修饰,HPGPC结果显示化学修饰导致多糖分子量降低,但分布仍较均一。SPS-1及其衍生物均可显著促进RAW264.7细胞的增殖及分泌NO、IL-1β、IL-6和TNF-α(P<0.05,P<0.01)。结论 本研究为深入开展多糖结构与功能的关系分析奠定了基础。

牛蒡低聚果糖的羧甲基化修饰及对RAW264.7细胞免疫活性提升

采用水媒法对牛蒡低聚果糖(BFO)进行了羧甲基化修饰,制备了不同羧甲基化取代度(DS)的修饰产物(CM-BFO),通过单因素和响应面实验考察了反应条件对DS的影响,以及各因素的交互作用。采用GC、FTIR、^(1)HNMR、^(13)CNMR对BFO及CM-BFO的结构进行了表征,以RAW264.7细胞为模型测试了不同DS的CM-BFO体外细胞实验的免疫活性。结果表明,0.5 g BFO用30 mL质量分数为20%的Na OH水溶液碱化处理1h,以30 mL质量分数为2.5%的氯乙酸水溶液为羧甲基化试剂,在反应温度65℃、反应时间3.3 h的最佳条件下,BFO的DS最高,为1.06。BFO和CM-BFO均能提升RAW264.7细胞的免疫活性,3种DS为0.82、0.93和0.96的CM-BFO免疫活性较BFO明显提升,而低DS(0.73)和高DS(1.06)的CM-BFO则影响较小。CM-BFO的免疫活性在一定范围内随其DS的升高呈先增强后减弱的趋势。

人参多糖分散片制备工艺及其免疫活性研究

旨在确定人参多糖分散片的处方、制备工艺并检测免疫活性。采用单因素实验法对崩解剂、填充剂和润滑剂进行考察,以性状、崩解时限、硬度为考察指标,优化人参多糖分散片的处方;通过对小鼠脏器指数、迟发性变态反应、吞噬指数和自然杀伤细胞活性的测定考察人参多糖分散片的免疫活性。结果表明,人参多糖分散片的优选处方为31.25%人参粗多糖作主药,38.67%微晶纤维素与19.08%α-乳糖作复合填充剂,10%交联聚乙烯吡咯烷酮作崩解剂,1%硬脂酸镁作润滑剂,50%乙醇作润湿剂。免疫活性试验结果表明,人参多糖分散片可以显著提高小鼠的脏器指数、足跖肿胀程度、吞噬指数和自然杀伤细胞活性,具有良好的免疫增强活性。其中2.50 g/(kg·bw)人参多糖分散片的免疫活性最强,可作为潜在的保健食品或营养补充剂。

枕纹锦蛇消化道5-羟色胺免疫活性内分泌细胞的分布与形态学观察

采用ABC免疫组织化学法 ,应用 5 -羟色胺 ( 5 HT)特异性抗血清 ,对枕纹锦蛇 (Elaphedione)消化道内含有的 5 HT内分泌细胞进行了免疫组织化学的定位研究和形态学观察。结果显示 ,5 HT细胞在消化道各部位的分布密度呈倒“V”形 ,以十二指肠最高 ,胃贲门部最低。其形态多样 ,上段 (食管、胃 )多为圆形和椭圆形 ,主要分布于上皮基部和腺泡上皮之间 ;中段 (十二指肠、空肠、回肠 )以细长锥体形、梭形、圆形为主 ,主要分布于上皮基部和上皮细胞之间 ;下段 (直肠 )为圆形 ,分布于上皮基部。锥体形细胞常有一个长突起伸入到固有膜或肠腔 ,行使内或外分泌功能 ;梭形细胞有两个细长突起 ,一个指向固有膜 ,另一个指向肠腔 ,表明这种细胞可能具有内、外分泌的双重功能。