兔圆小囊产溶菌酶细胞的免疫电镜组织化学观察

采用免疫组织化学和免疫电镜细胞化学的方法 ,对兔圆小囊组织中产溶菌酶细胞进行了观察。免疫组织化学观察发现 ,产溶菌酶阳性细胞在兔圆小囊的粘膜上皮、圆顶上皮以及淋巴组织的滤泡生发中心、圆顶区和帽区均有分布 ,且受到多杀性巴氏杆菌感染后 ,阳性细胞增多 ,阳性反应增强。免疫电镜结果显示 ,在兔圆小囊的淋巴组织DNES细胞的颗粒中发现溶菌酶免疫组织化学阳性反应物。这一重要发现为神经 内分泌 免疫网络学说提供了新的证据。

阿尔采默病患者皮肤α-微管蛋白的免疫细胞化学与胶体金免疫电镜观察

目的观察阿尔采默病(AD)患者皮肤基底细胞α微管蛋白的变化。方法取患者背部皮肤,用免疫细胞化学和胶体金免疫电镜技术观察,并进行定量分析。结果免疫细胞化学染色显示,对照组皮肤免疫阳性染色主要位于表皮层基底细胞的胞质内,棘细胞层和颗粒层可见少量的阳性细胞;AD组基底细胞内着色深,棘细胞层和颗粒层亦有表达,但数量少。胶体金标记结果显示,对照组基底细胞可见较丰富的微管,标记的胶体金散在于胞质。AD组微管较对照组减少;标记的金颗粒数量较对照组明显增多。定量结果显示,AD组α微管蛋白免疫细胞化学染色的AOD值(1. 165±0. 079)、VIOD值(186. 000±15. 853)均较对照组(0. 814±0. 152, 96. 020±14. 755)明显增高(P<0. 01);α微管蛋白胶体金标记颗粒数目AD组(20. 74±3. 99)亦较对照组(15. 50±3. 41)增多明显(P<0. 01)。结论AD患者皮肤基底细胞内微管数量的减少,结构破坏,对皮肤组织的观察可能间接反映神经组织的改变。

用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒

本研究应用柠檬酸三钠还原法制备了20nm的胶体金颗粒标记NDV抗体,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒。证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点。

针刺和静力牵张对大负荷运动后骨骼肌收缩结构变化影响的免疫电镜研究

用免疫电镜的方法观察大负荷运动后骨骼肌收缩结构变化时M蛋白、α-辅肌动蛋白和肌球蛋白的定位,以探索超过习惯负荷后收缩结构延迟性变化的性质,以及针刺和静力牵张对促进其恢复的机理,结果发现:在多组力竭性工作后,收缩结构发生变化的同时,伴有该结构的免疫标记密度下降以及有关收缩蛋白的免疫标记向其结构以外区域扩散,这一结果提示:超过习惯负荷后收缩结构变化或解体是由于延迟性的收缩蛋白的降解优势所致。由于这种变化是一过性的,经过休息和调整训练负荷即可能恢复,并未形成稳定的改变,因而其性质仍可认为是生理性的或是生理向病理性变化的过渡状态。针刺和静力牵张能通过加强收缩蛋白的合成代谢而有效地促进收缩结构的恢复并出现疼痛的消除,其作用的机理尚待进一步的研究。

大鼠腰髓背角星形胶质细胞对外伤性疼痛刺激的反应及其与神经元关系的免疫电镜研究

本研究采用抗缝隙连接蛋白 43 ( Cx43 )和抗缝隙连接蛋白 3 2 ( Cx3 2 )免疫电镜双标记方法 ,观察了一侧胫、腓骨骨折后大鼠腰髓背角星形胶质细胞与神经元的超微结构改变。结果发现 ,在脊髓背角星形胶质细胞与神经元之间的结合区域存在着如下的超微结构 :( 1)轴突终末直接与星形胶质细胞突起 ( Cx43阳性 )形成一种突触样结构 ;( 2 )由神经元突触前膜、突触后膜及星形胶质细胞突起形成的“三方突触结构”;( 3 )星形胶质细胞与星形胶质细胞之间的缝隙连接 ;( 4 )新发现的由一侧的神经元( Cx3 2阳性 )和另一侧的星形胶质细胞突起 ( Cx43阳性 )组成的一种超微结构 ,骨折后此结构数目显著增高 ,可能是缝隙连接的同源结构 ,暂称为异源性缝隙连接。结果提示 :异源性缝隙连接结构可被疼痛刺激激活 。

肾活检标本包埋后免疫电镜技术

目的 :探讨肾活检标本树脂包埋及低温包埋的免疫电镜技术。方法 :选择 9例膜性肾病和 7例IgA肾病的肾活检标本 ,分别进行IgG及IgA的免疫电镜标记 ,观察不同的固定方法及环氧树脂、低温包埋剂包埋后的免疫标记结果。结果 :低温包埋剂LRWhiteresin和LowicrylK4M包埋后的标本 ,IgG和IgA的标记密度均较高 ,两种包埋剂的标记效果相同 ;但LRWhiteresin对超微结构的保存优于LowicrylK4M。常规固定方法、Epon812包埋的标本 ,IgG及IgA均不能标出 ;混合固定液 (多聚甲醛加戊二醛 )固定、Epon812包埋的标本 ,IgG及IgA均可标出 ,但与低温包埋剂相比 ,标记密度较低。结论 :低温包埋剂LRWhiteresin和LowicrylK4M对免疫标记效果好 ,但较昂贵 ,难应用于临床。树脂包埋剂虽然免疫标记效果略差 ,但可作为一种诊断免疫电镜方法。

肾轻链沉积病和轻链型淀粉样变的电镜及免疫电镜研究

目的 :探讨电镜及免疫电镜方法在肾轻链沉积病 (lightchaindepositiondisease,LCDD)和轻链型淀粉样变(amyloid ,AL)诊断中的作用。方法 :对我院 1 994年 1月至 2 0 0 2年 2月间的肾活检病例进行电镜观察 ,对疑为LCDD及早期AL的病例进行轻链 (κ、λ)的免疫电镜标记。结果 :6例符合LCDD的诊断 ,36例符合AL的诊断。LCDD电镜下可见肾小管基底膜外侧、肾小球基底膜内侧、鲍曼囊外侧及小血管壁的点状、颗粒状电子致密物质沉积 ,其中 2例早期病例表现颗粒状物质节段性分布 ;免疫电镜标记 ,颗粒状物质被单种轻链标记 ,其中κ轻链 4例 ,λ轻链 2例。AL电镜下可见肾小球系膜区、毛细血管壁及小动脉壁的纤维物质分布 ,其中 1 5例早期病例表现系膜区或 /及毛细血管壁的纤维结构呈节段性分布 ;1 5例早期AL的免疫电镜标记结果 ,纤维结构被单种轻链标记 ,其中κ轻链 4例 ,λ轻链 1 1例。结论 :肾脏LCDD及早期AL的诊断需依赖于电镜检查 。

大鼠海马内谷氨酸神经元与GABA神经元之间突触联系的免疫电镜双标研究

为了探讨神经递质在癫痫发病机理中的作用，用包埋前免疫电镜双标法研究了正常大鼠海马ＣＡ_１，区谷氨酸（Ｇｌｕ）神经元与ＧＡＢＡ神经元之间的突触联系。先用ＤＡＢ为呈色剂显示ＧＡＢＡ免疫反应，然后以钼酸铵－ＴＭＢ法显示Ｇｌｕ免疫反应，再进行免疫电镜包埋。观察发现：在海马ＣＡ_１区锥体细胞层有许多Ｇｌｕ免疫反应阳性神经元；在锥体细胞层、多形层和辐状层可见一些ＧＡＢＡ免疫反应阳性神经元，胞体为锥体或多角形。在多形层还可见ＧＡＢＡ阳性树突与Ｇｌｕ阳性轴突形成对称性树－轴突触，在辐状层可见ＧＡＢＡ阳性轴突与Ｇｌｕ阳性树突形成对称性轴－树突触。此外，在多形层和辐状层内尚可见到Ｇｌｕ阳性轴突与Ｇｌｕ阳性树突之间形成对称性轴－树型自调节突触，ＧＡＢＡ阳性轴突之间形成对称性和非对称性轴－轴型自调节突触。上述结果首次证实在海马ＣＡ_１区兴奋性Ｇｌｕ神经元与抑制性ＧＡＢＡ神经元之间存在着复杂的突触联系，从而为不同神经递质参与癫痫发病机理提供了超微结构依据。

针刺和静力牵张对大负荷运动后骨骼肌M线变化影响的免疫电镜研究

用胶体金标记技术定位运动后及运动后经针刺或静力牵张处理的人骨骼肌M蛋白,以探讨超过习惯负荷后骨骼肌收缩结构变化以及针刺和静力牵张对促进其恢复的机制。我们发现:大负荷斜蹲后未经针刺的对照腿股外肌M线的M蛋白标记密度低于针刺腿(P<0.05),而对照腿M线两侧及M线两侧以外的M蛋白标记密度高于针刺腿(P<0.05)。对照实验证明运动腿M线以外增加的标记物为物异性标记。静力牵张组在M线及M线两侧的标记结果与针刺组一致。仅在M线两侧以外区域牵张腿与运动对照腿之间标记密度的差异没有统计学意义。我们还观察到运动后对照腿变化M线体密度达42—48％,而针刺或牵张腿为6—9％。上述结果表明大负荷运动加强了负荷后骨骼肌M蛋白的解聚或降解,从而导致M线结构改变;针刺和静力牵张可显著促进M蛋白的合成或抑制其降解,而使M线结构恢复或稳定。本文还探讨了M线变化与肌粗丝结构变化的关系。

用胶体金免疫电镜技术研究水分胁迫对蚕豆根中ABA分布与含量的影响

用胶体金免疫电镜技术对蚕豆 ( Vicia faba L.)根中 ABA的定位结果表明 ,在原分生组织金颗粒主要分布在细胞核。在基本分生组织或伸长区前部皮层细胞的质膜附近有较多的金颗粒标记 ,维管柱特别是维管组织的质外体中发现有大量金颗粒标记。伸长区中部及根毛区细胞也有较多的金颗粒标记。水分胁迫可导致初生分生组织或伸长区前部细胞金颗粒标记密度大增 ,伸长区中部及根毛区细胞的金颗粒密度也明显增加。对根中 ABA在超微结构水平上的分布及其与运输的关系进行了讨论 ,为 ABA有可能作为由根向地上部分传递的逆境信息提供了进一步的证据。

人滋养层细胞内丙型肝炎病毒样颗粒的免疫电镜形态学研究

目的:应用免疫电镜技术观察体外培养的人胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒(HCV)情况。方法:采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞,以HCVRNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染实验,胶体金免疫电镜检测滋养层细胞内的HCV病毒颗粒,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)定性检测滋养层细胞内HCVRNA。结果:体外培养的人胎盘滋养层细胞内可观察到胶体金颗粒吸附的病毒样颗粒,形态及直径符合HCV特点。RT-PCR定性检测结果阳性,进一步证实所观察到的病毒样颗粒为HCV。结论:HCV可感染体外培养的人胎盘滋养层细胞。

用胶体金免疫电镜技术检测新城疫病毒

应用柠檬酸三钠还原法制备了 2 0nm的胶体金颗粒标记NDV抗体 ,并且用直接电镜、免疫电镜和胶体金免疫电镜技术比较观察了新城疫病毒。证明胶体金免疫电镜技术作为检测NDV的检测方法具有简单、快速、准确和无污染等优点。

大鼠神经垂体肽类物质的免疫电镜研究

本文用免疫电镜方法研究了大鼠神经垂体内肽类物质——VP、SP、ENK 和 SRIF 的超微结构定位和肽能神经的分布。结果表明:VP、SP、ENK 和 SRIF 免疫反应物质定位干神经末梢的大颗粒囊泡(直径110～150 nm)内、微泡表面及线粒体外膜。含 VP、SP、ENK 和 SRIF 的神经纤维分布于毛细血管周围、垂体细胞附近。VP 和 ENK 免疫反应阳性的神经末梢可与免疫反应阴性的神经末梢形成轴-轴突触结构。SRIF 免疫反应阳性的神经末梢之间也可形成轴-轴突触结构。ENK 和 SP 免疫反应阳性末梢还与垂体细胞形成突触样结构。本研究首次发现了大鼠神经垂体的垂体细胞为 VP 免疫反应阳性。本文的科学意义在于:1.在超微结构水平证实了在大鼠神经垂体内存在着 VP、SP、ENK 和SRIF 等多种肽能神经末梢;2.VP 阳性垂体细胞及垂体细胞的肽能神经支配意味着这些结构参与调节神经激素释放的可能;3.为神经末梢释放神经激素的调节提供了新的形态学依据。

药流绒毛中波形蛋白的免疫荧光和免疫电镜研究

目的 :观察米非司酮对人孕早期绒毛组织中波形蛋白 (Vimentin)表达的影响。方法 :应用间接免疫荧光和胶体金标记免疫电镜技术 ,检测正常早孕人流电吸组和米非司酮组绒毛组织中波形蛋白的表达。结果 :对照组绒毛中轴间质细胞、血管内皮细胞波形蛋白阳性表达 ,药流组荧光着色细胞则明显减少 ,表达强度显著降低 ;对照组绒毛间质细胞波形蛋白中间丝沿细胞的长轴呈良好的丝状排列 ,整齐、致密 ,胶体金颗粒成簇或散在分布于细胞核与细胞质之间除细胞器以外的细胞质所有部位 ,胞核呈阴性 ;药流组间质细胞中间丝明显辣少 ,出现断裂、排列紊乱 ,金颗粒分布明显稀疏。结论 :米非司酮显著降低绒毛中波形蛋白表达水平并影响绒毛间质细胞的细胞骨架成分。

突触体素免疫电镜染色法

突触密度是大脑结构和功能的重要参数,传统的方法借助电子显微镜通过测量突触末端的小平面来评价突触密度,其优点是能够直观得观测到突触,但是这种技术不仅费时,需要特殊的组织处理和设备,而且易受人工现象的干扰.

光敏细胞质不育小麦花药发育过程中ABA免疫电镜定位

运用胶体金免疫电镜定位方法研究了不同光周期条件下光敏细胞质不育小麦花药发育过程中 ABA的分布 .短日照条件下 ,花粉母细胞细胞质基质及小液泡内有金颗粒分布 ;单核至二核花粉时期花粉内金颗粒逐渐增多 ,二核至成熟花粉时期花粉内金颗粒逐渐减少 ,不同发育时期的花粉内金颗粒的分布位置有变化 .绒毡层或降解中的绒毡层细胞内有较多金颗粒分布 .长日照条件下花粉败育 ,不同发育时期的花粉内金颗粒分布数量均比同时期的可育花粉内明显增多 .单核期以前败育的花粉 ,解体的花粉细胞质及细胞核内有较多金颗粒分布 ;后期败育的花粉 ,花粉母细胞至二核花粉时期花粉 (母细胞 )内金颗粒有不断增加的趋势 ,二核期以后 ,花粉逐渐液泡化 ,解体的花粉细胞质及逐渐增大的中央液泡内有大量的金颗粒分布 .绒毡层细胞内金颗粒有逐渐减少的趋势 .文中对 ABA在雄蕊、花粉发育过程中的作用、由光周期诱导的 ABA含量增加在雄性不育中的作用进行了讨论 .

肝细胞与肝癌细胞内β-葡萄糖醛酸酶免疫电镜比较研究

β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，简称β－Ｇ）在正常人体组织匀浆和体液中含量很低，在人体细胞中β－Ｇ超微结构定位尚未见报道。采用低温包埋，胶体金标记、免疫电镜技术，进行了人体肝细胞和肝癌细胞内β－Ｇ的定位。实验结果表明，β－Ｇ定位于内质网，同时观察到肝癌细胞中标记β－Ｇ的金颗粒数目明显多于肝细胞中金颗粒数目。这一结果可能对肝癌的期发现。

针刺和静力牵张对大负荷运动后人骨骼肌Z带变化影响的免疫电镜研究

我们用兔抗人α-actinin(α-辅肌动蛋白)抗血清和羊抗兔IgG-胶体金复合物作为标记物,在由Lowicryl K4M包埋的组织超薄切片上定位Z带蛋白α-actinin。在大负荷斜蹲后48小时从6名男性受试者(年龄为22—22岁)的两侧腿股外肌中取得活检样品,并在运动后不同时刻及活检取样前对随机确定的每一受试者的一条腿进行针刺或静力牵张,另一侧腿作对照。结果发现,针刺或静力牵张腿Z带特异性标记密度比其对照腿高。此外,针刺或静力牵张还能使Z带发生超微结果的变化率分别减少36％和22％,并使显著变化的比例减少,轻度变化的比例增加。以上观察结果揭示了针刺或静力牵张能抑制由于α-actinin的解聚或降解引起的Z带超微结构变化过程,或者通过加速α-actinin的聚合或合成而促进Z带超微结构的恢复。

低温包埋显示甲状腺肿瘤相关基因蛋白产物的免疫电镜研究

目的 :运用Lowicry1K4M低温包埋及免疫电镜法对甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变中甲状腺球蛋白 (Tg)、癌基因蛋白 (Ret)、黏糖蛋白 1(Muc 1)和Galectin 3(Gal 3)基因蛋白产物的表达进行检测。 方法 :对 18例患者手术切除的甲状腺标本进行低温包埋和免疫电镜研究。 结果 :良、恶性甲状腺滤泡上皮细胞的细胞质中胶质小滴、粗面内质网、高尔基复合体及近滤泡的吞饮泡、滤泡腔中有Tg胶体金颗粒 ;本组 9例良性病变 (甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿 )标本Ret、Muc 1和Gal 3三种标记均阴性 ,乳头状癌和滤泡性癌标本的Ret标记可见癌细胞的细胞质中核膜外粗面内质网的核糖体上、粗面内质网腔内及细胞质小泡中有金颗粒的积聚 ,而线粒体、胶质小滴、细胞核、滤泡腔中为阴性 ;Muc 1金颗粒见于粗面内质网、细胞质小泡和细胞膜下 ,细胞核、线粒体、胶质小滴、滤泡腔为阴性 ;Gal 3金颗粒分布较广 ,细胞核常染色质区多见 ,核膜下、粗面内质网、细胞质小泡以及胶质小滴的外周质膜下亦有分布 ,滤泡腔为阴性。 结论 :Ret、Muc 1和Gal