胶体金免疫层析试纸条在生物毒素检测领域的研究进展

胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原(抗体)与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗体制备、试纸条组装步骤。胶体金免疫层析试纸条可以用于快速检测食品中的毒素残留、环境中的有害物质以及临床诊断中的相关指标。该技术具有无创、快速、灵敏和准确的特点,在临床应急检测和大规模筛查中能快速获得结果。文章总结了胶体金免疫层析试纸条技术及其在生物毒素检测中的研究进展,并分析了当前胶体金免疫层析试纸条技术的优缺点,展望了该技术在生物毒素检测领域的未来发展方向。

胶体金免疫层析定性检测试剂的质量控制与评价

目的:探讨胶体金免疫层析定性检测试剂质量控制技术关键要求,为生产企业、检验机构质量控制及评价提供参考,有效地促进该类体外诊断试剂质量水平的提高。方法:结合胶体金免疫层析定性检测试剂质量标准要求及分类管理,对该类试剂质量的关键性能要素进行剖析,提出相应建议,提高试剂质量。结果与结论:质量控制与评价是贯穿产品全流程的核心要素,膜条宽度、液体移行速度、阴性符合率、阳性符合率、检出限、重复性是胶体金免疫层析定性检测试剂质量控制及评价的关键性能指标,对于试剂的质量至关重要。相关生产研发企业要合理设计性能要求,完善质量管理体系;检验机构要根据产品性能要点做好质量评价;监管部门要根据行业需要和监管需要,加快标准制修订工作,加强上市后监管;从生产、检验及监管各环节对这些关键性能指标进行控制,提高试剂的质量标准,从而满足临床和监管的需求。

有机磷农药胶体金免疫层析竞争法快速检测方法的建立

目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记;优化试纸条工作参数,并进行性能测试。结果抗血清效价在1∶32~1∶64之间,蛋白含量约为2 mg/mL。纯化后的多克隆抗体在相对分子质量(M r)25000和55000处出现目的条带,纯度较好;试纸条反应时间在5~10 min,样本检测限为200 ng/mL,特异性及准确性良好,试纸条有效期为6个月。结论建立了简便快速检测多种有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法,适合大量样本的现场初筛。

基于胶体金免疫层析试剂卡的水果中三唑磷残留检测方法优化

通过研究样品用量、提取剂用量及稀释方法、分层方式及时间、孵育时间、反应时间等条件,优化检测水果中三唑磷残留的胶体金免疫层析试剂卡方法,并在13种水果基质中进行验证。结果表明,在保证原有检出限(15μg/kg)不变的情况下,简化了操作步骤,省去了离心机的使用,缩短了单个样品的检测时长,并在13种水果中验证有较好的实用性。优化后的三唑磷胶体金免疫层析试剂卡检测方法更加简便、快捷,可应用于水果中三唑磷的基层现场快速检测。

大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

本文采用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金溶液标记大肠杆菌O157:H7抗体(6C1E5),然后将其包被于金标垫上,再将大肠杆菌O157:H7抗体(10G1A2)和兔抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素膜作为检测线和质控线,研制出的大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸检测灵敏度达104 CFU/mL,并与鼠寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌等8种菌株无交叉反应,显示出较强的特异性。

检验人精浆特异蛋白P_(30)免疫胶体金试剂条的研制

目的制备用于检验人精浆特异蛋白P30—主要是来自法医学案件的免疫胶体金层析试剂条。方法选取针对不同抗原决定簇的抗P30单克隆抗体细胞株,并制备其小鼠腹水,分离纯化单克隆抗体。制备胶体金并以纯化抗体包被,制成免疫胶体金,以免疫胶体金浸泡玻璃纤维。选取适宜的硝酸纤维素膜并于其上不同位置以未金标的另一株P30单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被。搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性。结果所制成的试剂条灵敏度至少可达4ng/ml;对6人份混合的人精液物质在稀释20万倍后仍出阳性结果,且无非特异性反应。结论检验人精浆特异蛋白P30的免疫胶体金试剂条可对嫌疑人精物质做出排查,有利于法医物证检验。

水样中左旋18-甲基炔诺酮的胶体金免疫层析试剂条的研制

研制了一种检测水样中左旋18-甲基炔诺酮(LNG)含量的胶体金免疫层析试剂条。基于包被抗原和检测物对金标抗体的竞争反应,通过可目测的胶体金标记物而得到直观的检测结果。试剂条对LNG的检测,灵敏度为10 ng.m l-1,在10m in内显示结果;与己烯雌酚、雌三醇、17(-雌二醇、17β-雌二醇、雌酮、甲泼尼龙、泼尼松龙和克伦特罗无交叉反应;加标水样分别用试剂条和ELISA检测,结果一致;在8周内检测效果无明显改变。所制备的试剂条具有灵敏、快速、特异、稳定性好的特点,适合现场快速检测。

胶体金免疫层析试纸定量检测猪肉中沙丁胺醇的研究

通过便携式免疫层析读条仪,建立猪肉中沙丁胺醇的胶体金免疫层析试纸定量检测方法.沙丁胺醇试纸的定量检测限为5 ng/mL,定量检测范围为5~250 ng/mL,试纸与两种β_(2)-受体激动剂无交叉,添加回收试验的平均回收率为105.76%,对三个不同超市的猪肉样品进行了检测.该法方法灵敏度高、特异性好、精密度和准确性高,而且方便快捷.

A群猪轮状病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

为建立一种快速、简便的猪轮状病毒检测方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗猪轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上喷加纯化的抗猪轮状病毒VP6蛋白多克隆抗体和羊抗鼠IgG,制成检测猪轮状病毒抗原的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,所制备的试纸条用于检测猪轮状病毒感染的MA104细胞培养物,在检测线处出现红色反应带,未感染病毒的细胞培养物在检测线处未出现反应条带,上述培养物在质控线处均出现红色反应条带;进一步试验表明,试纸条检出病毒培养液(TCID50是10-6.25/0.1 mL)的最低限为1∶32稀释;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异;该试纸条不与相关的腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒发生反应,所制备的试纸条具有一定的敏感性和特异性,重复性良好。

非洲猪瘟病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

为了建立一种快速、准确检测非洲猪瘟病毒（ASFV）的胶体金免疫层析方法,试验以原核表达的ASFV PET-30A-P72蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备血清,以ASFV单克隆抗体杂交瘤细胞株2D3接种至Balb/c小鼠腹腔内制备腹水,采用间接ELISA法分别测定其效价。经protein G抗体纯化柱纯化后获得ASFV的单克隆抗体和多克隆抗体,并分别测定其浓度。选择出最适p H值及最适蛋白用量后,制备胶体金标记的ASFV单克隆抗体。以硝酸纤维素（NC）膜上分别包被的ASFV多克隆抗体和SPA作为检测线和质控线,制备用于检测ASFV的胶体金免疫试纸条。以两种原核表达的ASFV P72蛋白作为抗原对该检测试纸条的特异性、敏感性及稳定性进行验证。结果表明：制备的ASFV多克隆抗体和单克隆抗体的效价较高,分别为1∶51 200和1∶160 000,经纯化后其浓度分别为1.2 mg/m L和1.0 mg/m L;制备胶体金标记的ASFV单克隆抗体所需的最适p H值为8.5,最适标记蛋白用量是48μL;该试纸条可在5~10 min内准确检测出两种抗原,对两种抗原的最低识别量分别为15 ng和21 ng,经测试该试纸条的特异性、敏感性、稳定性表现良好。

疟疾胶体金免疫层析试条在间日疟流行区的诊断评价

目的在现场评价疟疾胶体金免疫层析试条(简称试条)的诊断性能。方法2008年9～10月采集安徽省间日疟流行区蒙城县5个乡镇医院门诊部所有就诊的发热病人血样,用双盲法比较镜检法和试条测试的结果。结果共采集发热病人血样292份,镜检法检出疟原虫阳性181份,均为间日疟;试条检出疟原虫阳性163份,亦均为间日疟。两法检测结果一致的血样占92.8%(271/292),其中均为阳性的163份,均为阴性的108份。两法检测结果不一致的21份血样中,镜检阳性的、试条检测阴性的有18份,镜检阴性的、试条检测阳性的有3份。原虫密度在>1000个/μl、100～1000个/μl和<100个/μl时,试条检测阳性率分别为93.5%(115/123)、86.0%(43/50)和62.5%(5/8)。结论该快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条在疟疾流行区对间日疟有一定的诊断价值。

胶体金免疫层析试纸条快速检测水和玉米中阿特拉津的残留

本文以胶体金作为抗体标记物,建立了一种检测阿特拉津残留的免疫层析试纸条快速检测方法。该方法的检出限为2ng/mL,10 min内可以得到检测结果。本文以自来水和玉米作为样品进行了添加回收实验,水样不需要任何前处理直接检测,水样的检出限为2 ng/mL;玉米样品经简单前处理后检测,玉米样品的检出限为40 ng/g,且该方法的检测结果与间接竞争ELISA方法的结果一致。该方法具有成本低、操作简单、灵敏度高、检测快速,结果易于判定等优点,适用于大量样品的现场筛选。

马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒的兔多克隆抗体。用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好病毒检测线和羊抗兔抗体质控线,制成免疫层析检测试纸条。马铃薯X病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释10000倍(重量/体积)马铃薯Y病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释1000倍。10min内即可出检测结果。两种试纸条相互测试,未出现交叉反应。用健康和缓冲液对照测试,两种试纸条结果都为阴性。田间采集的马铃薯叶片用试纸条检测的结果和酶联结果相吻合。在密封、干燥、低温的条件下保存,有利于维持试纸条的稳定性。

莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术建立了一种快速检测莱克多巴胺的方法。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,莱克多巴胺偶联OVA抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明,该快速检测试纸条的灵敏度为5 ng/mL,检测时间为5 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。

基于侧流免疫层析技术制备胶体金试纸条检测莲子中黄曲霉毒素B_1的研究

目的基于侧流免疫层析技术制备一种适用于快速检测莲子中黄曲霉毒素B1(AFB1)的试纸条。方法利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,金颗粒标记单克隆抗体制成金标偶联物作为结合垫,特异性抗原(AFB1-BSA)和羊抗鼠Ig G二抗分别作为检测线和控制线。结果经组装测试,试纸条的灵敏度为2.5ng·m L-1,检测时间在10 min以内。在检测的23份莲子样品中,6份样品有AFB1,阳性样品经UFLC-MS/MS确证,试纸条假阳性和假阴性率为0。结论所制备的试纸条检测快速、操作简便、结果准确,适合大批量莲子中AFB1的现场检测。

大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

为建立快速检测鼠感染大肠杆菌O157∶H7后的抗体,本研究采用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157∶H7抗原和抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果表明,该试纸条仅与O157∶H7阳性鼠血清发生特异性反应,用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157∶H7免疫鼠血清,抗体效价分别为1×106和1×105,两者的敏感度相当。该试纸条操作简便,10min可出结果,适用于调查与追溯鼠O157∶H7感染状况时的现场检测。

莱克多巴胺胶体金免疫层析法快速检测试纸条的研制

为研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,快速检测猪尿中莱克多巴胺（ractopamine,RAC药物残留）,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上制备胶金垫,RAC-BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装并切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明该快速检测试纸条的检测限为5 ng/mL,可在8~10 min内完成测试,肉眼即可判断,无需其他检测设备。该试纸条灵敏度、特异性、稳定性和重复性均达到临床使用要求,适用于现场快速检测和筛选工作。

沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条的研制与应用

本试验目的为提供一种食品中国家强制检验的沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条,并对购自超市和农贸市场的肉蛋进行检测。该试纸条由吸收垫、样品垫、偶联垫和硝酸纤维素膜等组成,包被对照线和检测线,以及喷涂于偶联垫上的金标沙门氏菌多抗组装建立。结果表明该试纸条对沙门氏菌的最低检测量为1.07×107 cfu/mL,检测时间仅需5~10min。该试纸条特异性强,重复性好,可在4℃或室温存放9个月,检测结果稳定。

胶体金免疫层析试纸条法与血凝抑制试验、琼脂扩散法检测禽流感病毒抗体的比较

用本实验室建立的胶体金免疫层析试纸条法检测了鸡血清中的禽流感病毒抗体,并与传统的血凝抑制试验、琼脂扩散法检测结果进行了比较。结果表明,胶体金免疫层析试纸条具有特异性强、灵敏度高、方法简便、快速等优点,适合于鸡禽流感病毒抗体的现场快速检测。

鸡毒支原体胶体金免疫层析试纸条的研制和初步应用

为研制一种用于快速检测鸡毒支原体(MG)的胶体金免疫层析试纸条,采用直径20nm的胶体金颗粒标记纯化的MG多克隆抗体,硝酸纤维素膜检测线和质检线分别喷加纯化的MG多克隆抗体和兔抗鸡IgG抗体,制作胶体金试纸条。试纸条检测MG阳性显示两条红色反应条带;阴性为一条红色反应带。本试纸条可检测到1∶1 280倍稀释的MG抗原,即颜色变化单位为8×104 CCU/mL,具有高度的灵敏性。用试纸条检测衣原体、滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡大肠埃希菌和鸡白痢沙门菌等均呈阴性,表明该试纸条具有较好的特异性。对试纸条检测呈MG阳性的38只病鸡进行MG培养验证,所得结果一致;同时对MG培养检测的另外95份病鸡样品进行试纸条测试比对,符合率为96.84%,证明该试纸条具有很高的准确性。该胶体金免疫层析试纸条检测MG操作简单,灵敏度、准确度、特异性等均符合要求,可以用于养殖场批量MG的检测。