血清HIV抗体筛查阳性与免疫蛋白印迹试验确认的对比观察

探究血清HIV抗体筛查阳性与免疫蛋白印迹试验确认的效果。方法 选择2023年5月到2024年3月我院初步筛查HIV抗体阳性结果的65例患者进行研究,对所有艾滋病患者血清结果进行复检,以免疫蛋白印迹试验确认复检阳性患者的检查结果。结果;本组65例疑似患者,结果 为阳性56例,阴性9例。初筛 化学发光法52(92.86%)、免疫印迹法56例(100.00%),方法 的检测结果差异不显著(P>0.05)。免疫蛋白印迹试验确认HIV-1型抗体阳性56例中,gp160、gp120、gp41、p66、p51、p24条带的出现率分别是100.00%、96.43%.91.07%、94.64%、87.50%、92.86%,以上条带的出现率均高于80%,而p31的出现率为75.00%,p39为60.71%,p55为51.79%,p17最低,为39.29%。结论 血清HIV抗体筛查可能存在假阳性结果,需要以免疫蛋白印迹试验进行确认。

血清HIV抗体筛查阳性与免疫蛋白印迹试验确认结果分析

目的分析血清HIV抗体筛查阳性结果与免疫蛋白印迹试验的结果,探讨确证结果与抗体筛查阳性结果间的关系。方法选取2017年8月至2019年12月本中心HIV抗体初步筛查阳性的246例患者作为研究对象,对所有患者的血清结果进行HIV抗体筛查阳性复检,应用免疫蛋白印迹试验检测复检阳性患者血清行确证试验。结果初筛阳性246例标本中,经免疫蛋白印迹试验确认,有212例HIV抗体阳性,阴性21例,不确定13例。经免疫蛋白印迹法确认后,复检结果1≤S/CO<6、6≤S/CO<10、S/CO≥10与免疫蛋白印迹确认阳性符合率分别为63.41%、83.54%、95.24%。免疫蛋白印迹试验确认的212例HIV-1型抗体阳性中,gp160、gp120、gp41、p66、p51、P24条带的出现率均>92%,且gp160、gp120的出现率为100%。结论血清HIV抗体筛查存在假阳性结果,需进一步行确证试验,同时应保证血液质量,避免出现假阳性结果;随着S/CO值的升高,与确证试验的阳性符合率升高,可为艾滋病的预防控制工作提供及时、准确的科学参考,但免疫蛋白印迹试验也存在不确定结果。

酶联免疫吸附法与蛋白质免疫印迹法检测抗核小体抗体在SLE诊断中的价值对比

目的比较蛋白质免疫印迹法(WB)、酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗核小体抗体(AnuA)在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的价值。方法306例自身免疫疾病患者,根据明确的临床诊断结果将患者分为SLE组(SLE患者,144例)和非SLE组(非SLE患者,162例);选取同期非自身免疫疾病患者100例作为对照组。所有研究对象均采用ELISA及WB检测AnuA。分别统计两种检测方法的AnuA检测结果。比较两种检测方法对AnuA的诊断价值,包括准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,并进行统计学检验,分析两种检测方法的一致性。结果SLE组:ELISA检测AnuA阳性120例、阴性24例,WB检测AnuA阳性109例、阴性35例;非SLE组:ELISA检测AnuA阳性76例、阴性86例,WB检测AnuA阳性71例、阴性91例;对照组:ELISA检测AnuA阳性17例、阴性83例,WB检测AnuA阳性11例、阴性89例;两种检测方法在SLE组、非SLE组和对照组的AnuA检测阳性率比较无统计学意义(P>0.05);但两种检测方法的SLE组患者AnuA阳性率明显高于非SLE组和对照组,且非SLE组患者AnuA阳性率明显高于对照组(P<0.05)。ELISA检测AnuA的敏感度87.4%(180/206)高于WB检测的80.1%(165/206)(P<0.05);两种检测方法的特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度比较无统计学意义(P>0.05)。两种检测方法检测结果的总符合率为90.1%,判断具有较好的一致性(K值=0.516)。结论ELISA及WB检测AnuA在SLE中均具有较高的诊断效能,临床可在AnuA初步检测中运用WB,如有必要可在复检中运用ELISA,有效提高检测阳性率,为临床诊断SLE提供参考。

传统蛋白免疫印迹技术常见异常结果及影响因素探究

蛋白免疫印迹技术(western blotting,WB)是检测蛋白质经济、有效的方法,已广泛应用于分子相关的领域,但其影响因素多、操作复杂,常出现异常结果。本研究使用传统蛋白免疫印迹技术法检测(Sprague-Damley,SD)大鼠肝脏、脾脏组织某些蛋白质的表达,分析探讨常见异常结果及处理方法,为实验室和其他实验者提供参考。

乌鲁木齐某医院HIV抗体筛查阳性标本免疫蛋白印迹试验结果分析

目的分析人免疫缺陷病毒(HIV)抗体筛查阳性标本确认试验的临床意义。方法对2013年5月至2016年6月乌鲁木齐某一HIV监测哨点使用酶联免疫吸附试验(ELISA)初筛阳性的标本进行免疫蛋白印迹试验(Western Blotting,WB)确认。结果初筛HIV抗体阳性的435份标本中,经WB法进行确认试验,HIV抗体阳性为347份(81.6%),HIV抗体阴性为31份(7.3%),HIV抗体不确定为57份(13.4%),且阳性的带型gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24出现的百分率都在90%以上,其中gp160、gp120、p24为100%,p55出现次数最少,仅为62.8%。在347例HIV确定感染者中,阳性率最高的为包膜蛋白(envelope protein,env)条带,平均达到99.6%;其次是多聚酶蛋白(polymerase protein,pol)条带,平均为94.5%;阳性率最低的是核心蛋白(gag)条带,平均为82.3%。在不确定的57份标本中,阳性率最高的为gag条带,平均为58.8%,其中p24条带出现频率最高,为80.7%(46/57);其次是pol条带,平均为28.1%;阳性率最低的是env条带,平均为12.3%。结论 HIV抗体初筛试验容易出现假阳性,只有进行确认试验才能得出准确结果,并且需进一步加强实验室质量管理,避免引起初筛试验假阳性的因素,为AIDS的预防控制工作提供及时准确的科学参考。

血清HIV抗体筛查阳性与免疫蛋白印迹试验结果对比分析

目的对比分析血清HIV抗体筛查试验阳性与免疫印迹试验(WB)结果之间的关系,为艾滋病诊断和提高检测技术水平提供依据。方法按照《全国艾滋病检测技术规范》(2009年版)[1]要求,对HIV抗体初筛阳性血清进行复检,复检阳性的血清采用免疫印迹试验进行确证。结果对2010-2011年共270份初筛阳性血清进行复检,复检后249份HIV抗体阳性血清经WB法确证,217份为HIV-1型抗体阳性(87.15%),15份为不确定(6.02%),17份阴性(6.83%)。复检结果 1≤S/CO<6、6≤S/CO<10和S/CO≥10与WB确证试验阳性符合率分别为51.28%、86.25%和98.46%。确证为HIV-1型抗体阳性的血清,gp 160、gp 120、gp 41、p 66、p 51、p 24出现频率都在93%以上。结论筛查试验存在假阳性结果,HIV抗体结果的报告必需以确证结果为准。随着S/CO值的增高,与确证试验的阳性符合率也升高,但WB确证试验存在不确定结果,也有一定的缺陷。

蛋白免疫印迹法在G蛋白检测中的应用

目的：建立一项用蛋白免疫印迹法测定鸟苷酸结合蛋白（Ｇ蛋白）含量的技术。方法：取冷冻组织块２００ｍｇ置于４℃预冷的匀浆缓冲液中匀浆、离心后，ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，电转移法转移至硝酸纤维素膜上，经５％脱脂奶粉封闭后，依序与抗Ｇ蛋白抗体和辣根过氧化物酶标记的ＩｇＧ反应，化学发光法检测。结果：所得的Ｇ蛋白目标带清晰、明显，重复性好。不同种属大鼠主动脉、心房、心室、脑组织中Ｇｏα和Ｇｉα均为单一带，Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４大鼠Ｇｓα主动脉为４条带，Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ和ＷＫＹ／ＳＨＲ大鼠主动脉Ｇｓα为３条带，心房和心室Ｇｓα为３条带，Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４和Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑组织中Ｇｓα只有两条带。Ｗｉｓｔａｒ大鼠肺组织浆和膜中Ｇｑα、Ｇｉα均为单一带，Ｇｓα两条带；肺组织膜中Ｇｏα为单一带，肺组织浆中未能检出Ｇｏα。结论：用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术可较好地检测Ｇ蛋白含量和带型分布。不同种属动物及组织Ｇ蛋白亚型的含量和带型分布是不完全相同的。

蛋白质免疫印迹技术检测肺癌组织上皮钙粘蛋白的表达

目的探讨上皮钙粘蛋白(E-cad)与肺癌及其病理类型之间的相关性。方法应用蛋白质免疫印迹技术(W estern b lot)检测30例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中E-cad的表达,并对部分表达阴性的标本用免疫组化方法进行验证。结果癌组织、癌旁组织、远癌组织E-cad的阳性率分别为36.7%、70.0%、96.7%。癌组织E-cad阳性率明显低于癌旁组织(P<0.017),也明显低于远癌组织(P<0.017);癌旁组织E-cad阳性率明显低于远癌组织(P<0.017)。在30例肺癌患者鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织中E-cad阳性率分别为33.3%、40.0%、33.3%;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌旁组织中的阳性率分别66.7%、73.3%、66.7%;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的远癌组织中的阳性率分别为91.7%、100.0%、100.0%。癌、癌旁和远癌组织中E-cad的表达与肺癌组织学类型无关(P>0.05)。结论E-cad蛋白表达减少或缺失与肺癌有相关性,与肺癌的组织类型无相关性。

蛋白质免疫印迹技术在本科实验教学中的应用

蛋白质免疫印迹技术是生命科学研究领域的常用技术手段,尝试将其改造成适于本科教学实践的实验内容,即在基础性分子生物学实验的基础上开设"免疫印迹法检测目的基因在原核细胞中的表达"这一综合性实验。根据学生的理论和操作水平以及本科实验教学特点,对实验内容和实验方法进行了优化,并采取研讨式分组教学模式,使学生能够深入、全面、系统地理解和掌握蛋白质免疫印迹技术,提高了实验教学质量,并有助于培养学生的科学思维、科学素养以及综合实践能力。

斑点热群立克次体内蒙W-88蛛89102抗原的蛋白免疫印迹分析

蛋白免疫印迹试验表明从内蒙通辽病人旺某血标本分离的斑点热群立克次体W-88株与西伯利亚立克次体(232株及246株)的蛋白图谱完全相同,具有2个分子量为130KD及181KD的主要抗原性多肽及1个反应较弱的分子量为110KD的抗原性多肽,此与其它斑点热群立克次体不同。说明W-88株为西伯利亚立克次体。斑点热群立克次体中西伯利亚立克次体、立氏立克次体、康氏立克次体及派氏立克次体相互间抗原有较强的交叉反应。小蛛立克次体、澳大利亚立克次体与上述立克次体仅有微弱的交叉反应。说明斑点热群立克次体主要抗原分子有相同的决定簇。

大鼠脑组织中P-糖蛋白的免疫印迹检测方法

目的:确定蛋白免疫印迹检测大鼠脑组织中P-糖蛋白的最佳实验条件。方法:将成年雄性Wistar大鼠随机分为正常组和模型组。模型组分八个时间点,采用反复夹闭颈总动脉辅以硝普钠降压的方法制备脑缺血再灌注模型。正常组直接断头取脑分别进行组织匀浆和提取微血管,而模型组断头取脑均提取微血管,利用蛋白免疫印迹检测大鼠脑内P-糖蛋白的表达水平。结果:最佳实验条件是:提取微血管,用裂解液C冰上裂解30min,然后40000g离心30min留上清,蛋白定量后在5*上样缓冲液中25℃处理30min。而模型组各时间点P-糖蛋白的表达量随时间的延长逐渐增多。结论:利用提取脑微血管的方法在上述实验条件下进行P-糖蛋白的检测方便、可行,明显优于脑组织匀浆;并且在脑缺血再灌注这种病理状态下脑组织内P-糖蛋白的表达呈现一定的时序特征。

蛋白免疫印迹杂交法研究葛根素对成骨细胞TGF-β1及Smad2/3蛋白表达的影响

目的:观察采用蛋白免疫印迹杂交(Western Bloting)法探讨葛根素通过TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3对于促进成骨细胞增殖分化机制的研究。方法:原代培养新生小鼠成骨细胞,分别用空白对照组(含10%DMEM)及3种不同浓度分别为1μg/mL,0.1μg/mL,0.01μg/mL的葛根素干预液处理成骨细胞。采用MTT实验法检测葛根素对成骨细胞生长的影响,Western Bloting法检测葛根素对成骨细胞TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3表达的影响。结果:不同浓度的葛根素有促进成骨细胞生长的作用,并可以提高TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3的表达,呈浓度依赖性,分别与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:葛根素可以通过TGF-β1及Smad 2/3信号转导途径促进成骨细胞增殖与分化。

蛋白免疫印迹法检测胃癌组织Cyr61和HIF-1α蛋白的表达及其临床意义

目的侵袭转移是恶性肿瘤最重要的生物学行为之一,也是导致死亡率增加的主要原因,而肿瘤细胞发生转移的机制一直是研究的热点。研究旨在检测富含半胱氨酸61(Cyr61)蛋白和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白在胃癌组织中的表达水平,探讨两者与胃癌侵袭转移的关系。方法将标本分成3组,分别为49例胃癌组、49例配对的癌旁组(距癌2 cm)和49例配对的正常组(距癌5 cm以上),用免疫组织化学和蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测Cyr61和HIF-1α的蛋白表达水平,并分析两者与胃癌的临床病理特征的关系。结果免疫组织化学检测显示Cyr61在胃癌细胞的胞浆中表达,HIF-1α在胃癌细胞的胞浆/胞核中表达。进一步用Western blot检测结果显示,胃癌中Cyr61蛋白的表达水平(0.2767±0.02200)高于癌旁组织(0.2145±0.02209)和正常组织(0.1055±0.02082),癌旁组织高于正常组织(均P<0.01);胃癌中HIF-1α蛋白的表达水平(0.2663±0.02682)高于癌旁组织(0.2120±0.04087)和正常组织(0.1008±0.03867)(均P<0.01),癌旁组织高于正常组织(P<0.01)。Cyr61和HIF-1α蛋白表达的增强与肿瘤的分化程度、淋巴转移及TNM分期相关(均P<0.05)。SPERMAN等级相关分析证明了Cyr61蛋白和HIF-1α蛋白的表达呈明显正相关(r=0.411,P<0.05)。结论 Cyr61蛋白和HIF-1α蛋白在胃癌组织中呈高表达,可能与胃癌的侵袭转移有关。联合检测Cyr61蛋白和HIF-1α蛋白对指导胃癌临床及判断预后有重要价值。

高灵敏的蛋白质免疫印迹新方法用于β-淀粉样蛋白检测

目的:对抗体进行改进,降低传统蛋白质免疫印迹方法的检出限。方法:在传统蛋白质免疫印迹方法的基础上,将一抗和二抗分别与纳米金和氧化石墨烯结合,以提高其对痕量样本的检测灵敏度,降低检测限。结果:优化后的方法对β-淀粉样蛋白的检测限从原来的432 pg/mL降低至16 pg/mL,为原来的1/27。结论:改进后的蛋白质免疫印迹新方法性能稳定,重复性好,可用于生物样本中痕量被检测物的测定。

蛋白免疫印迹法(WB)试验结果与HIV感染关系的分析

目的通过对蛋白免疫印迹法(WB)试验结果的观察,确定个体是否感染HIV以及HIV感染的状况。方法对60份抗-HIV初筛阳性血清使用蛋白免疫印迹法(WB)进行确认实验。结果在被检测样品中,HIV-1型确认试验阳性54例,占90%;HIV-1型确认试验阳性,且提示HIV-2阳性感染1例,占1.6%;HIV-1型确认试验弱阳性(不确定)3例,占5%;HIV-1型确认试验阳性2例,占3.3%。结论蛋白免疫印迹法(WB)试验确定个体有无HIV感染以及HIV感染情况提供依据。

765份HIV-1抗体阳性吸毒者标本蛋白免疫印迹带型分析

目的:分析HIV-1抗体阳性吸毒者的WB带型,了解我省吸毒人群WB带型的分布特征。方法:对本实验室2001至2003年的HIV-1抗体阳性吸毒者的WB带型进行统计分析。结果:765份HIV-1抗体阳性吸毒者的WB带型中,gp160、gp120、p24、p66、p51带型的出现率都在96%以上,gp41、p31带型的出现率分别为93.86%和91.37%;WB全带型出现率为57.12%(437/765);性别与WB带型的出现率差异无统计学意义;不同年龄组与出现p24带型差异有统计学意义(Х2=19.5,P<0.01)。结论:抗env和gag基因编码蛋白的抗体gp160、gp120、gp41、p24阳性率高,是确证HIV-1感染的必备条件;我省的HIV亚型、传播途径和WB带型之间的关系有待进一步的研究。

蛋白免疫印迹法试验结果与HIV感染关系的探讨

目的通过对蛋白免疫印迹法(WB)试验结果的观察,确定个体是否感染HIV以及HIV感染状况。方法对50份抗-HIV初筛阳性血清使用WB法进行确认实验。结果在被检测样品中,HIV-1型确认试验阳性45例,占90%;HIV-1型确认试验阳性,且提示HIV-2阳性感染1例,占2%;HIV-1型确认试验弱阳性(不确定)2例,占4%;HIV-1型确认试验阴性2例,占4%。结论WB法试验为确定个体有无HIV感染以及HIV感染状况提供依据。

大鼠肝组织中P-糖蛋白的免疫印迹检测方法

目的探讨Western Blot检测P-糖蛋白表达的实验优化条件。方法随机选择6只雄性SD大鼠,给予荭草花提取物0.4g/(kg·d)灌胃,连续灌胃6d。采用钙盐沉淀法提取6只大鼠肝微粒体,利用BCA法进行蛋白定量后,制备蛋白上样样品。比较不同样品处理方法、转膜方法的检测效果。结果与高温变性相比,样品经室温变性上样可检测到目的条带。湿法电转法较半干法电转法转膜效果好,且湿转条件选择120V,2h较为好。结论样品室温变性处理、120V,2h的湿转转膜条件,是检测P-糖蛋白较优的Western Blot方法。并且在经荭草花提取物给药后的6只SD大鼠肝组织内P-糖蛋白的表达呈现一定的差异。

芜湖地区无偿献血者HIV感染状况及蛋白质免疫印迹分析

目的了解本地区无偿献血者HIV-1抗体检测及蛋白印迹试验的确证情况,探讨进一步控制血液质量安全的策略及方法。方法无偿献血者献血后使用酶联免疫和病毒核酸检测方法进行初步筛查,对筛查阳性标本送市疾控进一步做抗-HIV蛋白质免疫印迹(WB)试验。回溯性调查近10年本地区无偿献血者HIV抗体确证结果,分析阳性标本的WB条带特点,并分析无偿献血者中HIV感染者的人口学特征。结果 2011年1月~2021年5月,本次调查无偿献血者血液标本共354 864份,其中HIV确证阳性42份(含41份抗-HIV-1确证阳性,1份单HIV RNA反应性),HIV总感染率为11.8/10万(42/354 864)。不同性别、婚姻状态和职业差异均有统计学意义。男性占97.6%(41/42),女性占2.4%(1/42)。未婚献血者感染率(17.3/10万)显著多于已婚(8.0/10万),职员/职工组的感染率(37.5/10万)显著高于学生组(11.4/10万)和其他组(7.7/10万)。阳性者的WB条带中,gp160检出率为100%(41/41),gp41和p24条带的检出率均为97.6%(40/41),p55检出率最低,为46.3%(19/41),p51、p66的检出一致性最高(kappa=1.000,P<0.05)。筛查出有4例单HIV RNA反应性献血者,经病毒载量(VL)检测有1例>5 000 cps/mL,为HIV窗口期感染。结论芜湖地区无偿献血人群的HIV感染者中男性显著多于女性,通过WB条带分析发现感染者大多处于早期感染阶段,核酸检测对HIV窗口期感染者的检出和确证有重要作用,是血液安全的有力保障。