兔病毒性出血症并发巴氏杆菌病防治

兔病毒性出血症又称兔瘟,其发病率和死亡率极高,是一种急性、败血性和高度接触性疾病,病兔以喉头、气管、肺出血,肝、脾、胃瘀血、肿大及有点状出血为特点。兔巴氏杆菌病亦称兔出血性败血症,病兔临床上有中耳炎、鼻炎、肺炎、生殖器官炎症以及全身性败血症等不同表现。兔瘟并发巴氏杆菌病会在兔群中急速传播,引发大量死亡。

兔病毒性出血症研究概况及前景

兔病毒性出血症(RHD)是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病,对易感兔致病率可达90%,病死率高达100%。本文对兔病毒性出血症病毒的形态及理化特性、体外培养、分子生物学、病毒的检测和疫苗等方面做了系统深入综述,并提出了存在的问题及展望。

兔病毒性出血症诊断方法研究概况

兔病毒性出血症(RHD)是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病,对易感兔致病率可达90%,致死率可达100%。本文对兔病毒性出血症的病原学、流行特点、检测方法等进行了综述,以期为其诊断和防治提供参考。

兔病毒性出血症患兔血液T淋巴细胞和淋巴器官病理学变化

本文报道人工感染兔出血症病毒的家兔,于体温升高1℃时迫杀例和发病濒死期病例的剖检,对其脾脏、淋巴结等淋巴组织进行了病理学的连续动态观察和比较分析,探讨血液T淋巴细胞的消长变化,为研究RVHD的病理变化提供新材料。

TaqMan MGB探针实时检测兔病毒性出血症病毒

应用荧光定量PCR技术,根据兔病毒性出血症病毒的保守基因VP60设计了1对引物和1段Taqman MGB探针,建立了用于检测兔病毒性出血症病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。试验中能够检出的RHDV VP60基因质粒拷贝数达103数量级,能够检测到RHDV病毒核酸最低量可以达到5 pg,未检出其他病原的RNA。试验结果表明,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量RT-PCR方法的特异性、敏感性、重复性均达到试验设计要求,能快速检测临床样品中的兔病毒性出血症病毒,适合于兔各脏器及肌肉组织中兔病毒性出血症病毒的快速诊断和检测。

兔病毒性出血症病毒基因组3′端非编码区的分子克隆及生物信息学分析

采用3′RACE方法对兔病毒性出血症病毒(RHDV)JX／CHA／97株基因组3′端全序列进行了扩增、克隆和测序,并利用ONAstar和DNAman软件分析了RHDV JX／CHA／97株与各参比毒株3′NCR的序列同源性,用RNA structure软件对3′NCR的二级结构进行了预测和分析。结果表明,所扩增的目的基因片段长1500 bp,包括部分VP60基因序列、ORF2基因、3′端非编码区(3′Non Coding Region,3′NCR)和poly(A)尾巴,其中 3′NCR位于ORF2终止密码子TAG之后,长59 bp,poly(A)至少含有27个A;3′NCR序列具有较高的同源性 (93．5％-100％);3′NCR二级结构可以形成2个潜在的茎-环结构(SL1和SL2),其中SL2具有一定的保守性,其形状和形成位置与poly(A)尾巴的长度关系不大,但是SL1的结构和形成位置与poly(A)尾巴的存在与否密切相关,提示poly(A)尾巴与3′NCR高级结构的稳定性以及基因组复制有一定关系。

兔病毒性出血症基因工程疫苗的研究进展

兔病毒性出血症俗称兔瘟，它是由兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV）引起的一种急性、烈性、高度接触性、致死性传染病。1984年中国首次报道了该病。RHDV曾是兔的一种毁灭性传染病，因给养兔业带来巨大的经济损失而备受养兔业的关注。1989年，世界动物卫生组织（OIE）将该病正式列为B类传染病，我国将其列为二类传染病。

免疫日龄对兔病毒性出血症抗体水平和保护率的影响

通过攻毒试验比较了新西兰家兔免疫前后0、1、2、3和4 log25种抗体水平对病毒性出血症(RHD)的保护效果,同时测定了30、35、40、45、50、55和60日龄非免疫兔的母源抗体效价和用RHD组织灭活苗免疫后8周内血清抗体效价的动态变化。结果表明,抗体效价高于3 log2时可产生100%的保护,2 log2的保护率仅为50%;母源抗体与日龄呈负相关,在30日龄时最高,可以产生有效的保护,在40日龄后已无保护作用;免疫日龄与抗体峰值和有效保护时间呈正相关,30日龄免疫,抗体效价不但不升,反而显著下降,无保护作用;35日龄免疫,抗体峰值较低,有效保护时间仅为2周;大于40日龄免疫,抗体峰值较高,有效保护时间延长。因此建议35日龄首免、2周后二免为最佳免疫程序。

兔病毒性出血症母源抗体动态与抗病毒感染的关系和对策

兔病毒性出血症疫苗免疫母兔所产６、１５、３０、４５、６０、日龄共１２６只兔的母源抗体随日龄增长而下降，至３０～４５日龄，４８～８５％的兔为阴性，其平均值为２３。强毒攻击耐过母兔所产的未吃初乳、已吃初乳、１５、３０，４５、６０、９０及１１４日龄以上兔１８６只的母源抗体也随日龄增长而消失，但消失时间长，其平均值至11４ｄ后才降至２３。已吃初乳仔兔抗体平均值比未吃初乳高，未吃初乳兔的抗体与母兔基本持平，证明仔兔母源抗体是通过胎盘和初乳两个途经获得。ＨＩ抗体效价０～２￣２、２￣３、２￣４、２￣５不同水准兔经强毒攻击后的死亡率依次为１００％、９２％、８９．４％，２８．５％。２６以上则未见死亡。而３０、４５日龄时其抗体价０～２￣４各占７４．２％和９０％。免疫前抗体阴性兔子免疫后第７天才出现抗体，第２２天达高峰；而免疫前抗体存在的兔，疫苗注射后抗体价有短暂的下降，但至第７天又回升至免疫前水平，第１５天达高峰。故疫苗首免３０～４５日龄为宜，２～２．５个月进行第２次免疫，而首免应适当加大剂量。

兔病毒性出血症、巴氏杆菌病二联苗的研究

兔病毒性出血症(RHD)和巴氏杆菌病是家兔二种主要传染病。采用新的液体培养工艺,使巴氏杆菌含菌量高达200～260亿/ml。用RHD病毒和巴氏杆菌联合研制而成的二联苗每只免1ml免疫,对RHD保护率达100％(32/32),第5天即产生强保护力,免疫期达6个月;对巴氏杆菌平均保护率为90.6％(29/32),第10天能产生较强的免疫力,免疫后第3、6个月保护率各为83.3％(10/12)和75％(9/12)。经80万余头份试用,效果良好,安全可靠。

兔病毒性出血症弥漫性血管内凝血动态研究

对兔出血症的凝血象和组织病理学变化进行了动态研究。结果表明：兔出血症伴有弥漫性血管内凝血（ＤＩＣ）病理过程，并呈动态发展规律。凝血象检测发现：感染后６ｈ凝血酶原时间（ＰＴ）、白陶土部分凝血活酶时间（ＫＰＴＴ）缩短或正常，为高凝期，该期短，很快进入低凝期。感染后１８ｈＰＴ、ＫＰＴＴ显著延长，死前更明显。血小板数（ＰＣ）呈渐进性降低，纤维蛋白（原）降解产物（ＦＤＰ）在感染后６ｈ显著增加（Ｐ＜０．０１），感染后１８ｈ达高峰值。组织病理学观察表明：肺的病变严重而且有规律，感染后１２ｈ肺的微血栓检出率最高，同时在心、肝、肾、脑等器官也见微血栓。感染后２４ｈ或死兔的肺出血严重，血栓少见，表现为纤溶亢进的特征性变化。此外，患出血症的兔血管壁早期损伤明显，先于高凝期，可能是ＤＩＣ的启动因素之一。

西藏兔病毒性出血症的研究——病原鉴定及疫苗免疫效力试验

1994年 6～ 7月 ,西藏林芝地区家兔大批急性死亡 ,经过流行病学调查 ,临诊症状观察 ,病理剖检等结果与兔病毒性出血症特征相符。进一步作病毒学检查表明 ,病变组织超薄切片经电子显微镜观察发现有大量直径约 30nm的球状裸露的病毒粒子 ;自然病死兔肝组织匀浆上清能凝集人O型红细胞 ,而且血凝性能被兔出血症病毒阳性抗血清所抑制 ,致病性试验结果表明 ,该病毒对兔有很强的致病性 ;用西藏自然病死兔肝组织匀浆试制的灭活疫苗免疫家兔后 ,分别用西藏自然病死兔肝组织匀浆和江苏兔出血症病毒攻毒 ,均 1 0 0 %保护 ,而未接种灭活疫苗的对照兔 1 0 0 %死亡。上述结果表明 ,西藏林芝地区八一新村家兔急性死亡是由兔病毒性出血症病毒所致死。自制的西藏兔病毒性出血症灭活疫苗经安全、免疫效力等试验 ,推广应用效果好。

兔病毒性出血症病毒西藏分离株毒力的测定

对一株兔病毒性出血症病毒(RHDV)西藏株进行血凝性、特异性、致病性及毒力鉴定。结果表明:此株RHDV血凝价高达10240以上;RHDV抗血清可特异性抑制该株病毒对人“O”型红细胞的凝集;RHDV的最小致死量为10-5/mL。说明此分离株是一株具有高致病力的RHDV强毒株。

兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病(A)型三联灭活疫苗研制

对 5批兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病三联灭活疫苗进行了动物试验 ,结果表明该疫苗安全有效。近期效检对兔病毒性出血症的保护率为 1 0 0 % ,对兔多杀性巴氏杆菌病保护率为 92 % ,对产气荚膜梭菌病 (A)型保护率为 88%。在免疫期试验中 ,免疫 6个月后 ,对兔病毒性出血症保护率为 1 0 0 % ,对多杀性巴氏杆菌病的保护率为 79% ,对产气荚膜梭菌病 (A)型的保护率为 88%。在保存期试验中 ,4～ 8℃保存 1年仍有效。

兔病毒性出血症病毒中国株(JX/CHA/97)全基因组分子克隆及序列分析

本研究首次完成了兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)中国分离株JX/CHA/97全基因组序列的测定与分析。研究结果表明,JX/CHA/97株的全基因组由7437个核苷酸组成,其基因组构成为：5′端有一个长度仅为9nt的非编码区,随后有2个阅读框架(ORFs),分别编码一个聚合蛋白和一个结构蛋白。在基因组的3′端也有一个非编码区,长度为59nt。另外,采用RACE方法获得了RHDV的poly (A)尾序,证明该结构至少含有27个A。根据RHDV衣壳蛋白的基因序列,将JX/CHA/97株与来自世界各地的22株RHDV分离株的基因组序列进行了比较与分析,并绘制了系统发生树。结果表明,RHDV各分离株之间存在较高的序列同源性,可以将它们至少分为6个拓朴群,提示RHDV有朝不同方向发生进化的趋势。

兔病毒性出血症NB毒株的分离鉴定

兔病毒性出血症（RHD）俗称“兔瘟”，对之使用组织灭活疫苗，效果良好。2011年，四川省南部县某兔场曾免疫了兔瘟巴氏杆菌二联苗，后来兔场又发生了疑似RHD，为找出发病原因，我们首先对病毒进行了分离鉴定，研究RHDV是否发生了变异，以便今后能更好地防控RHD。

兔病毒性出血症组织病理学动态观察

兔病毒性出血症组织病理学动态观察赵立红（张家口农业专科学校；河北宣化０７５１３１）范立中，徐福南（南京农业大学兽医系）乔健（北京农业大学动物医学院）兔病毒性出血症组织病理学观察已有报道，但缺乏发病全过程的动态研究。本试验采取人工接种的方式，从攻毒后２...