胎盘间充质干细胞外泌体对大鼠全脑缺血再灌注保护作用及机制的研究

目的明确胎盘间充质干细胞来源外泌体对大鼠全脑缺血再灌注的保护作用效应并探索可能的机制。方法在胎盘间充质干细胞中分离获得外泌体。采用改良Pulsinelli四血管闭塞法在Wistar大鼠中建立全脑缺血再灌注模型。将大鼠随机分为3组,分别为假手术组、模型组及外泌体治疗组,于给药治疗后,在24、48和72 h时间点测量脑组织含水量和Evans blue染色量,并采用Western-blotting确定脑组织中Caveolin-1和ZO-1的水平。结果本研究成功分离胎盘间充质干细胞,并分离获得了其来源的外泌体,该外泌体能够被磷钨酸染色,尺度分布为50~200 nm,且表达CD63c不表达GM-130a。在48和72 h时,治疗组脑组织水含量相较于模型组有显著下降,且治疗组与假手术组相比在72 h无显著差异。EB染色的结果与水含量的结果相似,但是在72 h仍高于假手术组。Western-blotting和免疫组化显示外泌体能够升高Caveolin-1和ZO-1的水平。结论胎盘来源外泌体能够通过调节Caveolin-1和ZO-1的水平改善全脑缺血再灌注的严重程度,可能是在老年患者中治疗缺血再灌注一种潜在方案。

普拉克索联合左旋多巴对全脑缺血再灌注损伤大鼠认知能力及线粒体功能的影响

目的探讨多巴胺受体激动剂普拉克索与左旋多巴联用对全脑缺血再灌注损伤大鼠情绪和认知功能,以及线粒体膜电位的影响。方法80只雄性Sprague-Dawley大鼠分为假手术组(n=20)、模型组(n=20)、普拉克索组(n=20)和联合组(n=20)。后3组采用Pulsinelli四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。普拉克索组每天予普拉克索0.5 mg/kg腹腔注射,联合组每天予普拉克索0.5 mg/kg和左旋多巴50 mg/kg腹腔注射,共14 d。造模后3 d、7 d和14 d每组取5只行旷场试验,造模后7 d和14 d每组取5只行Y迷宫试验,造模后3 d、7 d和14 d每组取5只检测线粒体膜电位,造模后14 d每组取5只行尼氏染色。结果与模型组相比,7 d和14 d时,普拉克索组和联合组旷场试验穿格次数增加(P<0.05),总轨迹长度增加(P<0.05),平均速度增加(P<0.05),7 d时普拉克索组中心区停留时间延长(P<0.05);7 d和14 d时,普拉克索组和联合组Y迷宫试验自发交替分增加(P<0.05);7 d和14 d时普拉克索组和联合组线粒体膜电位增加(P<0.05),14 d时普拉克索组线粒体膜电位低于联合组(P<0.05);14 d时普拉克索组和联合组海马CA1区存活神经元数量增加(P<0.05)。结论单用普拉克索即可改善全脑缺血再灌注损伤大鼠的情绪和认知功能,联用左旋多巴后有助于线粒体膜电位恢复。

酸敏感离子通道1a对全脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡的影响及其可能机制

目的探讨酸敏感离子通道1a(ASIC1a)对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡的影响及其相关机制。方法将180只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ASIC1a抑制剂组[狼蛛毒素1(PcTx1)组],每组60只。对模型组、PcTx1组大鼠采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注损伤模型,并于再灌注后30 min分别从侧脑室注射无菌无酶PBS和PcTx1;在假手术组中仅分离并暴露大鼠的双侧椎动脉及颈总动脉,不凝断椎动脉及夹闭双侧颈总动脉,再灌注后30 min从侧脑室注射无菌无酶PBS。在再灌注后2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,检测各组大鼠海马细胞凋亡率,观察海马CA1区神经元形态学变化,分析海马CA1及CA3区的凋亡指数、磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的表达水平。结果(1)在再灌注后各时间点,假手术组、PcTx1组、模型组海马细胞凋亡率依次升高(P<0.05)。(2)HE染色结果显示,在再灌注后各时间点,模型组海马CA1区锥体细胞结构被破坏,排列紊乱松散,胞核皱缩,可见凋亡小体,而PcTx1组海马CA1区锥体细胞形态较模型组改善。(3)在再灌注后各时间点,假手术组、PcTx1组、模型组CA1和CA3区的凋亡指数依次升高(P<0.05)。(4)在再灌注后2 h、6 h、12 h、24 h,假手术组、模型组、PcTx1组大鼠海马CA1区的磷酸化ERK1/2表达水平依次升高;在再灌注后48 h,PcTx1组大鼠海马CA1区的磷酸化ERK1/2表达水平亦高于其他两组(P<0.05)。再灌注后2 h、6 h,假手术组、模型组、PcTx1组大鼠海马CA3区的磷酸化ERK1/2表达水平依次升高;在再灌注后12 h,模型组、PcTx1组的磷酸化ERK1/2表达水平高于假手术组(P<0.05)。结论ASIC1a可能参与全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡的发生,其特异性阻滞剂PcTx1可减轻神经元细胞凋亡,作用机制可能与促进ERK1/2磷酸化有关。

红景天苷对麻醉犬脑循环及大鼠全脑缺血再灌注的影响

目的:研究红景天苷对麻醉犬脑循环及大鼠全脑缺血再灌注的影响。方法:以电磁流量计测定麻醉犬颈内动脉和椎动脉的血流量,用多导生理记录仪记录血压、心率(HR)的变化;采用Pulsinelli四动脉结扎法略加改良制作大鼠全脑缺血再灌注模型,记录脑电图(EEG)和翻正反射恢复时间以及脑组织匀浆伊文思蓝(EB)含量。结果:静脉滴注红景天苷(8,4,2mg/kg)能明显增加麻醉犬的脑血流量(CBF)和降低脑血管阻力(CVR)对平均动脉压(MAP)和HR无明显影响;静脉注射红景天苷(24,12,6mg/kg)能明显缩短全脑缺血再灌注大鼠EEG和翻正反射恢复时间,降低脑匀浆EB含量。结论:红景天苷可通过增加CBF和降低CVR改善脑血液循环,并且对全脑缺血再灌注有明显的保护作用。

全脑缺血再灌注对大鼠氧自由基和内皮素的影响

目的:观察全脑缺血再灌注对大鼠氧自由基和内皮素的影响。方法:50只健康雄性SD大鼠,体质量150～300g,抽签法随机分为5组,假手术组、缺血再灌30min组、缺血再灌1h组、缺血再灌6h组、缺血再灌12h组。采用4-VD法建立全脑缺血再灌注模型,用邻苯三酚自氧化和TPA比色法测定大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛含量;用放射免疫法测定血浆内皮素的含量。结果:与假手术组相比,缺血再灌注各组脑内SOD活性明显降低(P<0.05),丙二醛含量显著增高(P<0.05),再灌流1,6h组的丙二醛明显增高且有随时间延长不断升高趋势,SOD明显降低且有继续降低趋势。脑缺血再灌注后不同时间段内血浆内皮素含量均有所增加,且也有随时间延长而升高的趋势。结论:全脑缺血再灌注能增加大鼠体内氧自由基和内皮素含量,在12h内随时间的延长而增加。

养血清脑颗粒对蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后的神经保护作用

目的探讨养血清脑颗粒对蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后的神经保护作用。方法用两血管阻塞法(2-VO)结扎30 min再灌注损伤模型,将蒙古沙鼠随机分为假手术组、模型组和手术前90min灌胃法给药预防组。用Nissl染色法观察蒙古沙鼠海马CA1区细胞的变化;用免疫组织化学方法观察海马CA1区表达谷氨酸盐合成酶(GlSyn)和Caspase-3阳性细胞数量的变化;TUNEL法检测细胞凋亡。结果蒙古沙鼠全脑缺血再灌注1d及2d预防给药组Nissl染色结果显示,海马CA1区存活细胞数量比模型组明显增多(分别为P<0.01,P<0.05);再灌注5d预防给药组海马CA1区存活细胞数量与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。再灌注1d及2d预防给药组海马CA1区表达谷氨酸盐合成酶(G1 Syn)的阳性细胞量较模型组明显减少(分别为P<0.01,P<0.05);再灌注5d预防给药组海马CA1区免疫阳性细胞数量与模型组相比无显著性差异(P>0.05);Caspase-3的表达在再灌注1d时预防给药组免疫阳性细胞数量与模型组比较有显著性升高(P<0.05),但是再灌注2d及5d时预防给药组免疫阳性细胞数较模型组无显著降低(P>0.05)。TUNEL结果显示预防给药组凋亡细胞相应减少。结论养血清脑颗粒能通过谷氨酸盐合成酶选择性抑制兴奋性氨基酸谷氨酸的神经毒性作用,减少神经细胞的凋亡,从而发挥神经保护作用。

大鼠全脑缺血再灌注后HAX-1蛋白与皮质神经元凋亡的关系

目的探讨大鼠全脑缺血再灌注后皮质组织中HAX-1蛋白(HS1-associated protein X-1,HAX-1)与皮质神经元凋亡的关系。方法建立大鼠四血管法全脑缺血模型,将实验动物分为5组(n=5):正常组,缺血6、24、48、72h组。采用HE染色,观察大鼠皮层组织病理变化;采用免疫组化、TUNEL法检测大鼠全脑缺血再灌注后HAX-1蛋白的表达以及皮质神经元凋亡蛋白Caspase-3的表达情况。结果HAX-1蛋白在缺血后6h表达最高(37.60±3.45),24、48、72h降低[分别为(11.40±1.14)、(10.40±1.52)、(9.80±1.30)],且低于正常水平(P<0.01);Caspase-3蛋白随着缺血时间的延长逐渐增高[6、24、48、72h分别为(72.80±5.49)、(106.20±6.91)、(129.00±19.74)、(166.20±15.32)](P<0.01),并伴随神经元凋亡的数目逐渐增加[(92.00±9.06)、(133.80±10.64)、(157.00±10.83)、(187.80±14.96)]。结论全脑缺血再灌注后皮质神经元中HAX-1蛋白在短期缺血中表达升高,可能参与神经元的抗凋亡,随着缺血时间延长,其表达水平降低,与神经元的凋亡增强相关。

丹参对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区AP-1 DNA结合活性的影响

目的 探讨丹参对活化蛋白 1(AP 1)在缺血性脑损伤中的影响及其神经保护作用的机制。方法 采用颈动脉负压分流法制备大鼠全脑缺血再灌注模型 ,用EMSA法和组织化学法观察海马CA1区AP 1的DNA结合活性以及神经元形态改变。结果 (1)缺血再灌 3h ,丹参能不同程度的增加AP 1的结合活性 ,其中R6 0组较NS组明显增强 (P <0 0 5 ) ,R3 0组也有增强 ,活性由假手术组的 2 8倍增加为 3 0倍 ,但较NS组无显著性差异。同时RSM能不同程度的减轻再灌 72h和 7d的神经元损伤 ,CA1区存活细胞数目较NS组明显增加 (P <0 0 5 )。结论 丹参能明显提高缺血后海马CA1区AP 1的DNA结合活力 ,丹参的神经保护作用可能与其调节AP 1的DNA结合活力有关。

养血清脑颗粒对蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的治疗作用

目的探讨蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后养血清脑颗粒(Yangxueqingnaokeli,YXQNKL)的治疗作用。方法采用蒙古沙鼠两侧颈总动脉结扎法,缺血30min再灌注5d模型(分为假手术组、缺血再灌注组、养血清脑颗粒治疗组)。用Nissl染色法观察海马CA1区神经元的形态和数量,用免疫组织化学方法观察海马CA1区神经元神经钙离子感应蛋白1(NCS-1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和谷氨酸盐合成酶(Glusyn)的表达情况。结果与缺血再灌注组比较,缺血再灌注+0.4g/kg养血清脑颗粒治疗组和缺血再灌注+0.8g/kg养血清脑颗粒治疗组Nissl染色显示海马CA1区神经元数量明显增加(P<0.05);免疫组织化学法显示海马CA1区神经元细胞NCS-1、caspase-3和Glusyn的阳性细胞数明显减少(P<0.05)。结论全脑缺血再灌注后,给予养血清脑颗粒能显著增加海马CA1区神经元数量,这与其减少海马CA1区神经元NCS-1、caspase-3和Glusyn的表达有密切的联系。

白芍总苷对全脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的观察白芍总苷对全脑缺血再灌注损伤的保护作用并初探其机制。方法采用四血管夹闭20 min的方法制备大鼠全脑缺血再灌注模型,白芍总苷(50、100、200 mg/kg)术前30 min灌胃给药。再灌注6 h后,记录各组大鼠翻正反射恢复时间和脑电恢复时间,检测脑组织含水量,HE染色法观察大脑海马CA1区神经元形态结构变化,TUNEL法观察海马CA1区神经元凋亡状况;测定海马组织中炎症细胞因子含量,抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量。结果中、高剂量白芍总苷能够显著降低全脑缺血再灌注大鼠翻正反射和脑电恢复时间并降低脑组织含水量(P<0.05或P<0.01),明显改善海马CA1区神经元病理性改变和凋亡状况,显著降低凋亡指数(P<0.01),显著降低炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)含量(P<0.05或P<0.01),显著改善抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性并降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。结论白芍总苷对全脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,可能与其保护海马CA1区神经元、抑制氧化应激和炎症反应有关。

不同剂量右美托咪定对大鼠全脑缺血再灌注损伤脑保护作用的研究

目的观察不同剂量右美托咪定对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响,探讨其神经保护作用及可能机制。方法将健康雄性SD大鼠40只随机分为假手术组(S组),全脑缺血再灌注对照组(C组),低、中、高剂量右美托咪定组(D1组、D2组、D3组),每组8只。采用四血管阻塞法制备全脑缺血再灌注模型。缺血即刻S组和C组静脉输注生理盐水2 m L/h;D1组、D2组、D3组分别静脉输注右美托咪定0.05,0.5,5μg/(kg·min),各组均持续输注2 h。于缺血再灌注后24 h用平衡木法和引体实验测定各组大鼠运动功能,干湿质量法测定各组大鼠脑组织含水量,ELISA法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。结果与S组比较,C组和D1组、D2组、D3组大鼠运动功能均显著下降(P均<0.05),脑水含量显著增加(P均<0.05),血清TNF-α、IL-1β水平显著升高(P均<0.05)。与C组比较,D1组、D2组、D3组血清TNF-α、IL-1β水平均明显下降(P均<0.05);D1组对IL-1β的抑制作用强于D2组和D3组(P均<0.05),D2组和D3组比较差异无统计学意义;D1组、D2组、D3组对TNF-α的抑制作用差异无统计学意义。结论 0.05μg/(kg·min)右美托咪定对大鼠全脑缺血再灌注损伤有脑保护作用,可显著改善大鼠运动功能,其机制可能与抑制炎性因子有关。5μg/(kg·min)右美托咪定未显示出显著的脑保护效应。

丹参酮ⅡA纳米制剂对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察丹参酮ⅡA纳米制剂对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用三动脉夹闭法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,以丹参酮ⅡA纳米制剂灌胃给药,观察丹参酮ⅡA纳米制剂对脑组织的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力和脑组织Na+-K+-ATPase活性水平的影响。做脑组织病理切片检查和透射电镜观察。结果:丹参酮ⅡA纳米制剂(25 mg/kg)能使脑组织MDA含量下降(P<0.01),SOD活性明显升高(P<0.05),Na+-K+-ATP活性显著上升(P<0.01),病理切片和透射电镜观察显示丹参酮ⅡA纳米制剂能在不同的水平上抑制细胞和线粒体的损伤。结论:丹参酮ⅡA纳米制剂对全脑缺血再灌注损伤具有很好的保护作用。

赤芍总苷对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察赤芍总苷(TPG)对全脑缺血再灌注的保护作用。方法采用结扎双侧颈总动脉12min再灌注24h建立沙土鼠全脑缺血再灌注模型,观察于造模24h后TPG对沙土鼠脑组织含水量、SOD与MDA及病理组织学的影响。结果同模型组比较,TPG200、400mg/kg·b.w.组脑组织含水量明显低于模型组;模型组脑组织SOD活性明显降低,MDA含量明显提高,各给药组与模型对照组比较SOD明显升高,MDA含量显著下降;病理检查表明给药组的病理损伤较模型组轻。结论赤芍总苷对全脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用。

电针对全脑缺血再灌注损伤高龄大鼠大脑皮质P53蛋白表达的影响

目的 :观察电针对全脑缺血再灌注损伤后高龄大鼠大脑皮质P5 3蛋白表达的影响。方法 :采用改良的Pulsinelli 4 血管阻断 ( 4 VO)方法制备SD高龄大鼠全脑缺血再灌注损伤模型 ,将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血再灌注 +电针组。假手术组动物仅烧灼双侧翼小孔内椎动脉 ,但不夹闭双侧颈总动脉 ,电针组在缺血再灌注后立即予电针治疗 ,以后每天 1次。在缺血再灌注 3天 ( 72hr)后将大鼠处死 ,进行免疫组织化学染色。结果 :缺血再灌注组大鼠大脑皮质P5 3蛋白免疫阳性细胞数明显高于假手术组 (P <0 <0 5 )。缺血再灌注 +电针组大鼠大脑皮质P5 3蛋白免疫阳性细胞数明显低于缺血再灌注组 (P <0 <0 5 )。结论 :电针可明显减少全脑缺血再灌注损伤后高龄大鼠大脑皮质P5 3蛋白的表达 。

右美托咪啶减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤

研究证明低选择性α2-肾上腺素能受体激动剂可乐定具有脑保护作用,新型高选择性α2-肾上腺素能受体激动剂右美托咪啶（dexmedetomidine,DEX）是否具有剂量依赖性的脑保护作用,本实验对此进行研究,并初步探讨其可能机制。1材料与方法1.1方法：雄性清洁级SD大鼠,体质量180～320 g,

全脑缺血再灌注后脑线粒体功能变化及山莨菪碱的保护作用

目的 探讨全脑缺血再灌注后脑线粒体功能变化及山莨菪碱的保护作用。方法 采用家兔全脑缺血再灌注损伤模型 ,缺血 2 0min、再灌注 2h观察脑线粒体呼吸功能、呼吸链氧化酶活性、线粒体内Ca2 +和MDA含量的变化。结果 脑缺血再灌注后 ,脑线粒体呼吸控制率、磷氧比、氧化磷酸化效率及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶、琥珀酸氧化酶、细胞色素C氧化酶活性明显降低 (P <0 0 1) ,而线粒体Ca2 +、MDA含量明显升高 (P <0 0 1) ;再灌注早期给予山莨菪碱治疗后 ,上述线粒体损伤性改变明显减轻。结论 山莨菪碱对脑缺血再灌注后线粒体损伤具有一定的保护作用 ,其机制可能与Ca2 +拮抗。

山楂叶与三七叶有效部位组合物对兔全脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察山楂叶与三七叶有效部位(SS)组合物对兔全脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用六动脉结扎加股动脉放血法制备家兔全脑缺血再灌注损伤模型,缺血30 min,再灌注2 h。40只家兔随机分为假手术组、模型组、血塞通21. 0 mg/kg组、SS组合物高、低剂量组(6. 370、3. 185 mg/kg)。于再灌2 h后使用南京建成生物工程研究所测定试剂盒检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、谷氨酸含量及血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,并进行病理学检查。结果 SS组合物高、低剂量组均能明显增加脑组织SOD活性(P<0. 01; P<0. 05),降低脑组织中MDA含量(P<0. 01)及脑组织中谷氨酸含量(P<0. 01; P<0. 05),同时还可明显增加血清GSH-PX活力(P<0. 05),病理检查结果显示,SS组合物能减少家兔全脑缺血再灌注损伤的脑组织范围,并能保护神经细胞。结论 SS组合物对兔脑缺血再灌注损伤有一定的保护及改善作用,其机制可能与其抗氧化和抑制兴奋性氨基酸释放或拮抗兴奋氨基酸毒性有关。

激光多普勒血流仪优化大鼠全脑缺血再灌注模型

目的使用激光多普勒血流仪(LDF)优化大鼠全脑缺血再灌注模型。方法采用夹闭双侧颈总动脉合并低血压的方法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。激光多普勒血流仪监测大鼠手术过程中的脑血流变化。水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力。HE染色观察大鼠脑组织病理学改变。黄嘌呤氧化酶法,TBA法分别测定大鼠皮层海马中SOD活性改变,MDA含量变化。结果 LDF监测组大鼠全部存活,而无LDF监测组大鼠术后有3只死亡。手术组大鼠在缺血过程中脑血流降低70%,夹闭完成后,血流恢复至缺血前的80%。与假手术组大鼠比较,缺血再灌注大鼠寻台潜伏期、寻台路径显著增加,大脑皮层海马神经元出现严重核固缩、细胞丢失、神经元数目减少,细胞层次紊乱,SOD活性降低,MDA含量显著增加。结论 LDF监测能降低全脑缺血再灌注大鼠死亡率,提高造模成功率;此模型可用于脑缺血再灌注损伤的基础实验研究。

全脑缺血再灌注后大鼠神经元中bcl-2和bax的表达

目的 研究全脑缺血再灌注后大鼠脑神经细胞中bcl 2和bax的表达。方法 选择SpragueDaw ley大鼠 2 8只 ,雌雄各半 ,随机分为 5组 :对照组即假手术组 4只 ,复苏后 3、6、12、2 4h组各 6只。采用窒息合并冰氯化钾停跳液制备大鼠心跳骤停 心肺复苏模型 ,停跳 5min后开始心肺复苏 ,采用免疫组织细胞化学法观察复苏后神经细胞中bcl 2和bax的表达情况。结果 复苏后bcl 2在海马区的表达不断上升 ,但明显弱于bax的表达 ,bcl 2 /bax比例失衡。结论 bcl 2