鸡生长激素基因内含子4新等位基因的序列分析

试验以粤黄鸡矮脚黄系等不同肉鸡、蛋鸡品种 (系 )作为试验材料 ,对新发现的生长激素基因内含子 4等位基因的PCR产物作纯化后测序 ,研究多态性产生的机理及碱基变异情况。结果发现cGH内含子 4长约 1170bp ,内含子 4的A、B、C、D等位基因长分别为 1170bp、116 4bp、116 8bp和 116 6bp ,它们之间存在不同程度的碱基差异 ,而第 5 80碱基的突变 (A→G)和第 6 88碱基的突变 (A→G)分别产生了MspⅠ酶切位点 ,是多态性形成的根本原因。“PCR产物双带”的形成是由于cGH基因内含子 4其中一条链上第 42 0～ 470位碱基全部缺失。不同等位基因间存在碱基缺失、插入和替换 ,测序结果与酶切后电泳结果相吻合。

松辽黑猪METTL23基因内含子4多态性及其与繁殖性状的关联分析

为寻找松辽黑猪METTL23基因第4内含子的多态性,探寻其与松辽黑猪繁殖性状的关联性,本实验选择178头经产松辽黑猪母猪,采用直接测序法检测METTL23基因第4内含子的单核苷酸多态性(SNP)位点,使用SPSS 19.0软件分析METTL23基因内含子4的SNP与松辽黑猪繁殖性状的关联性。结果显示,松辽黑猪METTL23基因内含子4存在G/A突变;共检测到GG、GA和AA 3种基因型,G、A 2种等位基因,优势等位基因型为AA,优势等位基因为A;METTL23基因突变位点遗传杂合度(He)相对较低,在松辽黑猪群体中变异较小;χ^(2)适合性检验表明,该SNP在松辽黑猪群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态,为低度多态(PIC<0.25);关联分析结果表明,GG基因型个体3周龄重、断奶重显著高于AA基因型,其他性状3个基因型间差异不显著。综上所述,METTL23基因第4内含子存在突变位点G/A,该位点与松辽黑猪3周龄重和断奶重显著相关,但该突变位点能否作为松辽黑猪繁殖性状的遗传标记,需要进行更大规模的群体验证。

静原鸡ELOVL2基因内含子4多态性分析

为了明确静原鸡ELOVL2基因的遗传特性,试验采用PCR-SSCP技术对静原鸡ELOVL2基因内含子4遗传多样性进行检测。结果表明：在ELOVL2基因内含子4扩增片段上共检测到4种基因型、3种等位基因、2个SNPs位点。其中A和B为优势等位基因（0.47）,基因型AB为优势基因型（0.42）;静原鸡ELOVL2基因内含子4遗传纯合度与杂合度基本相同,且偏离了Hardy-Weinberg平衡（P〈0.01）。说明静原鸡ELOVL2基因内含子4序列突变程度较高且呈中度多态,杂合子或纯合子无明显优势。

延黄牛ALDH1A1基因内含子4多态性及其与肉用性状的相关性分析

试验旨在研究乙醛脱氢酶1A1(acetaldehyde dehydrogenase 1A1,ALDH1A1)基因内含子4多态性及其对延黄牛肉用性状的影响。选取99头18月龄延黄牛母牛,采用PCR扩增产物Sanger直接测序法测定99头延黄牛ALDH1A1基因内含子4的单核苷酸多态性(SNP),运用SPSS 19.0软件分析ALDH1A1基因内含子4SNP与延黄牛肉用性状(体高、体斜长、十字部高、胸围、腹围、管围、体重、背膘厚、眼肌面积和肌内脂肪)的关联性。结果显示,延黄牛ALDH1A1基因内含子4存在C/T突变位点,该位点的突变引起了编码氨基酸(谷氨酰胺,Q)的改变;共发现3种基因型:TT、TC和CC,2种等位基因:T和C,其中TC为优势等位基因型,C为优势等位基因。卡方适合性检验结果发现,该SNP在延黄牛群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。群体遗传参数分析发现,该突变位点的杂合度(He)相对较低,表明其在延黄牛群体中的变异较小,该位点属于中度多态(0.25<PIC<0.5),说明该遗传标记能够提供遗传信息。关联分析结果表明,延黄牛体尺和肉质性状指标在不同基因型间差异均不显著(P>0.05)。结果表明,ALDH1A1基因内含子4在延黄牛中存在突变,能否作为延黄牛肉用性状的遗传标记有待于扩大样本数量进一步研究。

内皮细胞固有型一氧化氮合酶基因内含子4插入/缺失多态性与糖尿病肾病的关系

目的 对天津地区汉族人内皮细胞固有型一氧化氮合酶(ecNOS)基因内含子4的插入/缺失多态性(ecNOS4b/a)与2型糖尿病肾病(DN)的关联性进行研究。方法 应用PCR-小卫星DNA多态性分析技术对ecNOS4b/a基因型分布进行检测。包括正常对照组70例,2型糖尿病无DN组48例,2型糖尿病有DN无慢性肾功能不全(CRF)组35例,2型糖尿病DN有CRF组45例和非DN导致的CRF组58例。结果 (1)发现1例罕见基因型(女性DN无CRF患者),为447 bp+420 bp杂合子。(2)2型糖尿病无DN组a等位基因频率高于正常对照组,差异无显著性意义(x2=1.672,P=0.196)。(3)2型糖尿病伴DN组a等位基因频率低于2型糖尿病无DN组,差异无显著性意义(x2=1.082,P=0.298)。(4)DN无CRF组与DN伴CRF组等位基因频率相近(校正x2=0.002,P=0.967)。(5)DN伴CRF组a等位基因频率低于其它原因导致的CRF组,差异有显著性意义(x2=4.360,P=06037)。结论 a等位基因可能不是天津汉族人DN的危险因素;天津地区汉族健康人群a等位基因频率低于日本人;ecNOS在DN导致的CRF中的作用可能与非DN CRF不同。

内蒙古地区蒙汉族早产儿支气管肺发育不良与SP-B内含子4基因多态性的相关性研究

目的探讨肺表面活性蛋白B(surfactant proteins-B,SP-B)内含子4基因多态性与早产儿支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的相关性。方法选取2016年1月至2019年1月内蒙古医科大学附属医院新生儿科诊断为BPD的早产儿为病例组,同期同民族非BPD早产儿为对照组,进行前瞻性研究,采用聚合酶链反应扩增基因分析技术分析SP-B内含子4基因型及等位基因分布情况。结果共纳入BPD患儿74例,其中蒙古族30例,汉族44例;对照组134例,其中蒙古族56例,汉族78例。不论蒙古族或汉族患儿,SP-B内含子4基因均可检出野生型和变异型(包括插入型及缺失型)2种基因型。蒙古族BPD患儿变异型基因型频率及等位基因频率与对照组相比[36.7%(11/30)比19.6%(11/56),21.7%(13/60)比12.5%(14/112)]差异无统计学意义(P>0.05);汉族BPD患儿变异型基因型频率及等位基因频率均高于对照组[31.8%(14/44)比12.8%(10/78),20.5%(18/88)比7.1%(11/156)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论SP-B内含子4基因变异可能与内蒙古地区汉族BPD患儿遗传易感性相关。

贵州黑山羊POU1F1基因第4内含子的多态性分析

为贵州黑山羊垂体特异性转录因子(Pituitary Specific Transcriptiona Factorl,POU1/Pit-1)与胴体性状相关的分子标记辅助选择提供参考,运用PCR及测序技术对贵州黑山羊POU1F1基因第4内含子进行了多态性检测。结果表明:贵州黑山羊第4内含子存在2个突变位点,即第222位点发生C→T的突变(C222T),产生CC和Cc 2种基因型;第685位点发生G→A的突变(G685A),产生DD和Dd 2种基因型。CC、DD基因型频率均为0.967,C、c基因频率分别为0.983和0.017,D、d基因频率分别为0.983和0.017。等位基因C、D是相应突变位点的优势等位基因,CC、DD基因型是相应突变位点的优势基因型。贵州黑山羊POU1F1基因第4内含子的突变位点达到Hardy-Weinberg平衡。

2型糖尿病患者内皮源型一氧化氮合酶基因第4内含子多态性与高甘油三酯水平的关系

目的 探讨内皮源型一氧化氮合酶 (ecNOS)基因第 4内含子的 2 7重复核苷酸序列多态标记在中国昆明地区汉族人群中的分布及其与 2型糖尿病的相关性。 方法 选择 2 12例无亲缘关系的中国云南昆明地区汉族人 ,其中 2型糖尿病的患者 132例 ,无糖尿病家族史的健康对照者 80例。应用聚合酶链反应 (PCR)技术检测ecNOS基因第 4内含子的 2 7重复核苷酸序列多态标记。 结果 在中国昆明地区汉族人群中含有 4a( 4重复系列 )等位基因的频率为 0 0 83。在 2型糖尿病患者及正常对照者中含有 4a等位基因的频率分别为 0 0 87及 0 0 75 (P >0 .0 5 )。与ecNOS4b纯合子 ( 5重复系列 )的人群相比 ,带有ecNOS4a等位基因的人群的血清甘油三酯水平显著增高 [2 .2 6 0 ( 1.80 5～ 3 6 4 0 )vs 1.6 5 6 ( 1.6 0 5～2 16 3)mmol/L ,P =0 0 2 ]。

SPRY4-IT1在子痫前期患者胎盘中的表达及对滋养层细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨SPRY4内含子转录本1(SPRY4-IT1)在子痫前期(PE)患者胎盘中的表达及对滋养层细胞增殖、侵袭的影响。方法选取2017年6月至2019年6月在宜宾市第二人民医院产科行剖宫产术的34例PE患者(PE组)和32例正常妊娠孕妇(对照组)作为研究对象。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测胎盘中SPRY4-IT1表达水平。将HTR8/SVneo细胞分为空白对照组(不转染)、无义转染组(转染空载体)和上调组(转染SPRY4-IT1过表达载体);检测各组HTR8/SVneo细胞增殖、周期分布、细胞凋亡、侵袭情况及细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达情况。结果PE组胎盘组织中SPRY4-IT1表达水平较对照组显著下调(P<0.05);上调组HTR8/SVneo细胞OD值,S期、G_(2)/M期HTR8/SVneo细胞比例、穿膜细胞数,MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均较无义转染组、空白对照组显著升高(P<0.05),HTR8/SVneo细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期HTR8/SVneo细胞比例均较无义转染组、空白对照组显著降低(P<0.05)。结论SPRY4-IT1在PE患者胎盘组织中呈低表达,SPRY4-IT1可能通过上调MMP-2、MMP-9表达,调控细胞周期,参与促进HTR8/SVneo细胞增殖、侵袭及抑制其凋亡过程。

2型糖尿病患者eNOS基因第4内含子的多态性与糖尿病视网膜病相关性

采用PCR技术探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因第4内含子多态性与2型糖尿病视网膜病变的相关性。发现2型糖尿病非增殖型视网膜病变eNOS4b/b基因型频率及eNOS4b等位基因频率显著增高(OR2. 7)。eNOS基因第4内含子的多态性可能影响糖尿病视网膜病的发生。

内皮型一氧化氮合酶基因第4内含子VNTR多态性与妊高征的相关性研究

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)基因第 4 内含子27bp可变数目的短片段重复序列(variable number tandem repeats ,VNTR)的多态性现象与妊高征的相关性。 方法 应用PCR检测妊高征患者和健康孕妇的eNOS基因第4 内含子多态性,并采用硝酸还原酶法检测孕妇血浆 NO3-/NO2- 浓度水平,根据基因型和基因频率分组进行比较。 结果 eNOS基因VNTR 4a 等位基因频率在妊高征组明显高于对照组(16. 00%和 7. 50%,χ2 =4.63,P<0.05,比值比(OR)=2.35,95%可信度区间(CI):4.74~23.22);4a/4b+4a/4a基因型频率在妊高征组和对照组分别为 28. 00%和 13. 75% (χ2 = 5.08, P< 0.05, OR= 2. 69, 95%CI: 6. 12 ~35.44),差异有显著性;各组中的4a/4b+4a/4a基因型患者血浆中NO3-/NO2-浓度分别明显低于各4b/4b基因型患者(P<0.05)。 结论 eNOS基因第 4 内含子 VNTR与妊高征发生密切相关,并可能通过影响NO的产生在其发病机制中起到作用。

脑梗塞患者糖皮质激素受体基因第4内含子G1666T的相关性研究

目的 探讨糖皮质激素受体 (gluocorticoid receptor,GR)基因第 4内含子 G16 6 6 T处多态性与脑梗塞 (cerebral infarction,CI)和原发性高血压 (essential hypertension,EH)的相关关系。方法 应用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (polymerase chain reaction- restriction fragment length polymor-phism,PCR- RFL P)方法 ,分析了 16 3名中国人 GR基因第 4内含子变异的多态性分布情况。结果从整体不分性别来看 ,GR基因第 4内含子的变异在 EH合并 CI组、CI组与对照组之间 ,其基因型频率、等位基因的频率差异无显著性。而在女性 ,EH合并 CI组等位基因 G的频率 (0 .6 4 )与对照组 (0 .4 6 )比较明显增高 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;CI组等位基因 G的频率 (0 .6 9)亦明显高于对照组 (0 .4 6 ) ,差异有显著性(P<0 .0 5 )。结论 对女性来说 ,等位基因 G可能是脑梗塞的易感基因标志。

中国汉族人Rh血型系统D阴性表型的分子机理研究

金鸡辞旧,瑞犬迎新,值此佳年盛世,山东省血液中心与《山东医药》携手合作,共同推出“输血研究“栏目。本栏目旨在贯彻党和国家的卫生工作方针政策,坚持临床与基础结合,理论与实践结合,普及与提高结合,充分展示血液领域取得的新成果、新技术、新理论、新经验,反映国内外最新的输血研究动态,为各级各类医疗卫生机构和输血工作者,提供一个促进学术交流和信息传播的平台。我们热切希望和广大作者、读者一道精诚合作、并肩耕耘,为全面提高我省输血医学科研水平,促进输血事业发展做出贡献。

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性研究

目的:探讨内皮型一氧化氮合酶基因(eNOS)第4内含子27bp可变数目的短片段重复序列(variablenumbertandemrepeats,VNTR)的多态性现象与妊娠期高血压疾病(hypertensivedisordercomplicatingpregnancy)的相关性研究,并探讨该位点的多态性在发病机制中的作用。方法:应用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺电泳,银染技术检测患者和健康孕妇的eNOS基因第4内含子多态性。采用RT-PCR技术检测对照组、病例组胎盘中eNOSmRNA的含量,对两组中不同基因型胎盘eNOSmRNA表达水平分别进行半定量比较。结果:eNOS基因VNTR4a等位基因频率在正常孕妇组为7.50%,明显低于病例组的16.00%(χ2=4.63,P=0.031,OR值为2.35,95%可信限为4.74～23.2),4a/4b+4a/4a基因型频率在两组分别为28.00%和13.75%(χ2=5.08,P=0.024,OR=2.69,95%可信限为6.12～35.4)差异具有统计学意义。病例组eNOSmRNA的表达明显低于正常组,病例组中4b4b基因型组的eNOSmRNA水平明显高于4a/4b+4a/4a基因型组(76.81±1.41vs62.79±0.95,t=11.63P=0.012)。结论:eNOS基因第4内含子VNTR与妊娠期高血压疾病具有相关性,这可能与该位点的突变可能引起eNOSmRNA转录减少有关。

内皮细胞固有型一氧化氮合酶4b/a多态性与终末期慢性肾衰竭的关联性研究

目的 对天津地区汉族人内皮细胞固有型一氧化氮合酶基因内含子 4的插入 /缺失多态性 (ecNOS 4b/a)与终末期慢性肾衰竭 (ESCRF)的关联性进行研究。方法 应用PCR 小卫星DNA多态性分析技术 ,对 6 7例ESCRF患者 (观察组 )和 70例健康人 (对照组 )的ecNOS 4b/a基因型分布进行检测。结果 (1)观察组和对照组的三种基因型bb、ba和aa频率分别为 79 1%、19 4 %、1 5 %、91 4 %、8 6 %和 0 %。 (2 )两组等位基因分布差异有显著性 (χ2 =4 6 17,P <0 0 5 )。观察组比对照组a/ (a +b)OR值 (95 %可信区间 )为 2 6 4 (1 0 9,6 4 3) (Z =2 14 ,P <0 0 5 )。 (3)有a基因的ESCRF患者平均年龄 (47 4 3± 11 6 3)岁 ,无a基因的ESCRF患者平均年龄 (5 8 0 8± 13 6 8)岁 ,二者比较差异有显著性 (t=2 6 6 4 ,P <0 0 1)。 (4)天津汉族正常人群a基因频率 (4 3% )低于日本人 (10 1% ) (χ2 =4 898,P =0 0 2 7)。结论 天津地区汉族健康人群a等位基因频率低于日本人和澳洲白种人 ;ecNOS4b/a多态性与天津地区汉族人ESCRF有关联性 ,a基因与ESCRF危险性增加呈正相关。

CD4^＋T细胞及其相关前炎症细胞因子基因多态性与胃癌发生的关系

目的探讨CD4^＋T细胞及其前炎症细胞因子基因多态性与胃癌发生的关系。方法①采用PCR—RFLP法检测170例胃癌患者及110例健康对照者肿瘤坏死因子（TNF）．B＋252、白细胞介素（IL）-10启动子-1082和IL-4内含子3基因多态性。②流式细胞术检测63例胃癌患者和31例健康对照者T细胞亚群和共刺激分子CD28。结果①非贵门胃癌组TNF—β＋252^＊A等位基因频率和IL-10启动子-1082A等位基因频率高于健康对照组（P〈0．05或0．01）。IL-4内含子3基因多态性与非贲门癌患者无明显相关（P〉0.05）。贲门癌组IL-4内含子3RP2基因频率明显高于健康对照组,RP1基因频率低于健康对照组（均P〈0．01）。②胃癌组外周血总T细胞、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞均较健康对照组显著减少（P〈0．001或0．05）；CD28表达率胃癌组较健康对照组显著增高（P〈0.001）。术后1周总T细胞和CD4^＋T细胞明显上升（P〈0．05）。CD28表达率明显下降（P〈0．05）。结论CD4^＋T细胞亚群异常与胃癌发生关系密切。TNF—β＋252^＊A等位基因和IL-10启动子-1082A等位基因可能是胃癌发生的易感基因，IL-4内含子3-RP2等位基因与贲门癌的发生有一定相关。

浙江地区汉族人群caspase-3基因三个位点的单倍型研究

目的分析汉族人群caspase-3基因的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphisms,SNPs)位点及其构成的单倍型,为研究caspase-3基因对凋亡调节机制的个体差异提供线索。方法用变性高效液相色谱技术和DNA测序技术检测caspase-3基因的调控区、第2～7外显子及部分侧翼序列的多态性位点;分析位点间的连锁不平衡关系,估算它们构成的单倍型。结果共检出3个SNP位点(C829A、A17532C、C20541T),分别位于caspase-3基因的5′端调控区、第4内含子和3′调控区;3个位点间存在强连锁不平衡,其中位点A17532C与C20541T呈完全连锁不平衡;54.3%的C-829/A-17532/C-20541是汉族人群的主要单倍型。结论浙江地区汉族人群caspase-3基因上的3个SNP位点间存在强连锁不平衡,它们构成的主要单倍型不同于北美人群。