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重组蛋白的体外再折叠 被引量:4
1
作者 龙建银 王会信 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期103-108,共6页
重组蛋白的再折叠是基因工程下游处理中非常重要的环节。本文在分析了蛋白体外折叠的机制后,指出了重组蛋白再折叠的一般策略,并综述了近年来的主要新方法,包括:分子伴侣介导的再折叠,去污剂协助的再折叠,反向微团中的蛋白再折叠。
关键词 重组蛋白 再折叠 复性
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影响重组凝乳酶原再折叠的主要原因研究 被引量:2
2
作者 唐兵 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 1997年第6期767-770,共4页
对蛋白质二硫键异构酶与GSH/GSSG促进重组凝乳酶原复性进行了比较.GSH/GSSG促进重组凝乳酶原复性的效率低于蛋白质二硫键异构酶,但最终效果相似.GSH/GSSG与蛋白质二硫键异构酶促进重组凝乳酶原复性的反应没... 对蛋白质二硫键异构酶与GSH/GSSG促进重组凝乳酶原复性进行了比较.GSH/GSSG促进重组凝乳酶原复性的效率低于蛋白质二硫键异构酶,但最终效果相似.GSH/GSSG与蛋白质二硫键异构酶促进重组凝乳酶原复性的反应没有叠加效应.在低蛋白浓度条件下进行复性时,二硫键的错误配对是影响重组凝乳酶原再折叠的主要原因. 展开更多
关键词 重组凝乳酶原 再折叠 二硫键 凝乳酶原
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结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的高效自发再折叠和再组装 被引量:5
3
作者 毛启龙 冯修光 昌增益 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期87-90,共4页
来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3以九聚体的形式存在 .用三种不同的强变性条件 (10 0℃加热15min ,12mol/L脲或 8mol/L盐酸胍处理 4h)将Hsp16 3变性 ,然后通过冷却或透析使之复性 ,并利用孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳和圆二色... 来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3以九聚体的形式存在 .用三种不同的强变性条件 (10 0℃加热15min ,12mol/L脲或 8mol/L盐酸胍处理 4h)将Hsp16 3变性 ,然后通过冷却或透析使之复性 ,并利用孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳和圆二色性光谱比较了变性 复性前后Hsp16 3的各个层次高级结构 .结果显示 ,变性的Hsp16 3几乎可以完全恢复至天然构象 ,这表明小分子热休克蛋白Hsp16 3具有很强的自发折叠和组装能力 . 展开更多
关键词 热休克蛋白 变性 复性 再折叠 组装 结核杆菌 HSP16.3 小分子
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人肌和兔肌肌酸激酶在低pH条件下再折叠的研究 被引量:3
4
作者 李锦平 侯立向 周海梦 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第1期35-41,共7页
利用蛋白质内源荧光和远紫外CD光谱研究了在低pH条件下人肌肌酸激酶和兔肌肌酸激酶的构象状态。结果表明,在低离子强度下,随着酸的加入人肌和兔肌肌酸激酶去折叠,至pH2.0附近几乎都达到充分去折叠。它们的色氨酸荧光发射峰... 利用蛋白质内源荧光和远紫外CD光谱研究了在低pH条件下人肌肌酸激酶和兔肌肌酸激酶的构象状态。结果表明,在低离子强度下,随着酸的加入人肌和兔肌肌酸激酶去折叠,至pH2.0附近几乎都达到充分去折叠。它们的色氨酸荧光发射峰位红移至350nm,这表明了内埋的色氨酸残基已经完全暴露到极性溶剂之中,它们的远紫外CD光谱表明二级结构也遭破坏,但是仍保留有相当部分的二级结构。而且在高离子强度低pH条件下由Goto等人首先发现的中间体构象状态(融球结构状态)在我们的实验中也被观察到了。它具有与天然酶类似的二级结构。色氨酸荧光发射光谱表明与天然酶类似,它的最大发射峰位也为335nm表明了蛋白质已经完全折叠,然而其荧光强度远低于天然酶,表明这种结构状态具有较大运动性而导致荧光的动态淬灭。上述结果支持了Goto等人的发现,说明了融球中间体结构可能是蛋白质折叠过程需经历的一个中间态。 展开更多
关键词 肌酸激酶 酸变性 结构 蛋白 折叠 再折叠 PH值
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纤维素内切酶Ⅲ再折叠过程中存在中间体(英文)
5
作者 李丹 蒋彦 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期441-447,共7页
本文研究了尿素变性的纤维素内切酶Ⅲ的再折叠.通过更灵敏的方法—相图法,本研究发现在2 mol/L~4 mol/L尿素间,纤维素内切酶Ⅲ的再折叠过程中存在至少一个中间体,聚沉曲线也进一步验证了此中间体的存在.该中间体的存在个数可进一步通... 本文研究了尿素变性的纤维素内切酶Ⅲ的再折叠.通过更灵敏的方法—相图法,本研究发现在2 mol/L~4 mol/L尿素间,纤维素内切酶Ⅲ的再折叠过程中存在至少一个中间体,聚沉曲线也进一步验证了此中间体的存在.该中间体的存在个数可进一步通过蛋白动力学曲线得以确定. 展开更多
关键词 纤维素内切酶 相图 再折叠 中间体
原文传递
胍变性的OPTA标记的肌酸激酶的再折叠研究
6
作者 汤震宇 周海梦 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1995年第11期1036-1039,共4页
变性的完整蛋白质分子在体外再折叠的研究虽然不能完全模拟体内新生肽链的折叠,然而它可以对蛋白质的折叠提供一些有用的信息.因此近年来对于变性蛋白质再折叠的研究引起了人们广泛的重视.过去我们曾经研究了经脲或盐酸胍变性的肌酸激... 变性的完整蛋白质分子在体外再折叠的研究虽然不能完全模拟体内新生肽链的折叠,然而它可以对蛋白质的折叠提供一些有用的信息.因此近年来对于变性蛋白质再折叠的研究引起了人们广泛的重视.过去我们曾经研究了经脲或盐酸胍变性的肌酸激酶的再折叠与复活,发现在适当的条件下,变性的肌酸激酶可以再折叠至接近天然构象状态,酶活力亦可恢复至接近初始酶活力.比较再折叠与复活的动力学过程,发现酶分子再折叠和复活不是同步进行,在再折叠基本完成之后,酶的复活尚有一个很长的慢过程.我们曾用OPTA专一性的标记酶的活性部位,形成一个荧光基团,以此为探针探测在低浓度脲溶液中失活时活性部位的构象变化.在本文中,我们用这个荧光探针,探测了在胍变性肌酸激酶再折叠过程中,酶的活性部位的构象变化过程,并与整个分子的再折叠和酶的复活过程进行了比较研究. 展开更多
关键词 肌酸激酶 化学修饰 荧光探针 再折叠 OPTA 折叠
原文传递
金属离子对人肌肌酸激酶折叠的影响作用
7
作者 宋博 李森 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期709-713,共5页
研究了不同浓度的铜、铁、锌离子对稀释复性的肌酸激酶酶活性、复性体系浊度的影响以及EDTA螯合金属离子对肌酸激酶再折叠过程的影响,发现在实验设定的浓度范围内,随着金属离子浓度的增加,复性的肌酸激酶酶活性降低,复性体系的浊度增大.... 研究了不同浓度的铜、铁、锌离子对稀释复性的肌酸激酶酶活性、复性体系浊度的影响以及EDTA螯合金属离子对肌酸激酶再折叠过程的影响,发现在实验设定的浓度范围内,随着金属离子浓度的增加,复性的肌酸激酶酶活性降低,复性体系的浊度增大.EDTA作为金属离子螯合剂能够在一定程度上恢复受到铜离子和锌离子影响的肌酸激酶活性,但无法恢复受到铁离子影响的肌酸激酶活性. 展开更多
关键词 金属离子 肌酸激酶 再折叠
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猪胰岛素前体氨基酸位点突变对其结构和折叠的影响
8
作者 赵杰 许根俊 冯佑民 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2007年第4期475-478,共4页
蛋白质的氨基酸序列决定了它的高级结构和生物功能。用蛋白质工程技术得到了猪胰岛素前体(PIP)的突变体[B10D]PIP,并得到HPLC纯的蛋白质样品。通过对该突变体的研究发现:它的结构稳定性、二硫键稳定性、体外再折叠速率和效率都与野生型... 蛋白质的氨基酸序列决定了它的高级结构和生物功能。用蛋白质工程技术得到了猪胰岛素前体(PIP)的突变体[B10D]PIP,并得到HPLC纯的蛋白质样品。通过对该突变体的研究发现:它的结构稳定性、二硫键稳定性、体外再折叠速率和效率都与野生型PIP有所不同。 展开更多
关键词 胰岛素 猪胰岛素前体 稳定性 再折叠
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折叠式单双人多用自行车
9
《技术与市场》 2012年第9期175-175,共1页
折叠式单双人自行车可根据需要在双人自行车和单人自行车之间进行快速转换和使用,一个人出行时用单人自行车模式,两个人出行时用双人自行车模式,还可从单人自行车状态把整车进行再折叠,加上全新设计的链轮防护套,可轻松实现驱动系... 折叠式单双人自行车可根据需要在双人自行车和单人自行车之间进行快速转换和使用,一个人出行时用单人自行车模式,两个人出行时用双人自行车模式,还可从单人自行车状态把整车进行再折叠,加上全新设计的链轮防护套,可轻松实现驱动系统的单双人模式转换。还可根据需要加装轮毂式传动,使其具备电动助力的功能。 展开更多
关键词 自行车 折叠 快速转换 模式转换 驱动系统 电动助力 再折叠 车模
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输卵管结扎术后78例再通原因分析
10
作者 张金保 宗海芸 刘亚玲 《中外医疗》 2008年第25期54-,共1页
目的了解输卵管结扎后再通原因,提出预防措施。方法对78例输卵管结扎后,有流产、引产、生育史者施行2次手术,分析再通原因。结果输卵管有扎痕未切断16例,占20.51%,输卵管有扎痕且切断,但形成输卵管瘘42例,占53.85%,误扎左侧输卵管系膜9... 目的了解输卵管结扎后再通原因,提出预防措施。方法对78例输卵管结扎后,有流产、引产、生育史者施行2次手术,分析再通原因。结果输卵管有扎痕未切断16例,占20.51%,输卵管有扎痕且切断,但形成输卵管瘘42例,占53.85%,误扎左侧输卵管系膜9例,占11.54%;结扎方法为贯穿缝扎法、银夹法、潘氏改良法和伞端切除等方法导致输卵管再通者占84.62%。结论选择输卵管结扎部位,手术方法不当和漏扎、误扎等技术性错误是导致再通的主要原因。临床应推行抽芯包埋法,减少贯穿缝扎法和伞端切除等方法的使用,同时加强技术培训,规范手术常规,提高技术人员的专业水平。 展开更多
关键词 输卵管 结扎术 折叠
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Tyr61的芳香族侧链对稳定瘦素的结构至关重要(英文) 被引量:2
11
作者 李晶 张冬娟 +3 位作者 张园 黄蔚 唐建国 杨吉春 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期235-241,共7页
为了研究第61位Tyr(Tyr61)在瘦素(leptin)结构与功能中的作用,构建了2个瘦素突变体Y61F与Y61Q并对其进行了功能分析.Y61F突变体瘦素显示出与野生型瘦素相同的天然凝胶电泳迁移率及相似的折叠效率,而Y61Q突变体瘦素则显示出明显慢的电泳... 为了研究第61位Tyr(Tyr61)在瘦素(leptin)结构与功能中的作用,构建了2个瘦素突变体Y61F与Y61Q并对其进行了功能分析.Y61F突变体瘦素显示出与野生型瘦素相同的天然凝胶电泳迁移率及相似的折叠效率,而Y61Q突变体瘦素则显示出明显慢的电泳迁移率且较野生型瘦素更难于折叠.受体结合及免疫活性测定显示,Y61F突变体保留了野生型瘦素的大部分生物学活性,而Y61Q突变体仅保留了野生型瘦素16%的受体结合活性及30%的免疫活性.圆二色性分析及二级结构估算表明,Y61F突变体具有与野生型瘦素几乎一样的二级结构组成,而Y61Q突变体的结构则较野生型瘦素更为松散.本研究表明,Tyr61的芳香族侧链被包埋于分子内部的疏水区域中对稳定瘦素结构及其发挥生理功能至关重要,而Tyr61上的羟基在这一过程中并不起重要作用. 展开更多
关键词 瘦素 再折叠 圆二色性 二级结构
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Cys146-Cys146分子间二硫键在人瘦素二聚化过程中起主导作用(英文) 被引量:1
12
作者 李晶 朱森 +3 位作者 张园 迟毓婧 唐建国 杨吉春 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期333-338,共6页
在前期研究中,已发现人瘦素(leptin)在体外再折叠过程中会形成稳定的二聚体,但其二聚化机制尚不清楚.本研究旨在分析瘦素二聚体的结构特性,并重点研究体外再折叠过程中瘦素二聚化的机制.相较与瘦素单体,瘦素二聚体保留了约75%免疫活性及... 在前期研究中,已发现人瘦素(leptin)在体外再折叠过程中会形成稳定的二聚体,但其二聚化机制尚不清楚.本研究旨在分析瘦素二聚体的结构特性,并重点研究体外再折叠过程中瘦素二聚化的机制.相较与瘦素单体,瘦素二聚体保留了约75%免疫活性及15%受体结合活性,同时显示出明显慢的天然电泳迁移率.圆二色性分析显示,二聚体基本保留了单体α螺旋索结构特征.还原性及非还原性凝胶电泳分析和自由巯基测定结果表明,瘦素二聚体是由一对分子间二硫键连接2个单体而成的.为了确定瘦素二聚化过程中起主导作用的分子间二硫键,利用PCR定点突变技术构建了C96S和C146S两个突变体瘦素.通过分析C96S及C146S突变体瘦素的体外再折叠特性及过程,并与野生型瘦素相比较,揭示C96S瘦素的二聚体显示出与野生型瘦素二聚体相似的特性,而C146S瘦素不能形成结构稳定的二聚体.以上研究结果表明,Cys146-Cys146分子间二硫键在人瘦素二聚化过程中起主导作用. 展开更多
关键词 瘦素 二聚体 二硫键 再折叠
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液固层析辅助蛋白质从变性态恢复到活性态 被引量:1
13
作者 陈净 刘永东 +1 位作者 李京京 苏志国 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1802-1809,共8页
层析是化工中分离纯化一些价格昂贵的精细化工产品的常用手段,而液固层析因其温和、快捷、高效等优点已经成为蛋白质纯化过程中必不可少的工具.近年来层析技术的一个拓展是用于辅助蛋白质从变性态恢复到活性态,即所谓的复性,取得了令人... 层析是化工中分离纯化一些价格昂贵的精细化工产品的常用手段,而液固层析因其温和、快捷、高效等优点已经成为蛋白质纯化过程中必不可少的工具.近年来层析技术的一个拓展是用于辅助蛋白质从变性态恢复到活性态,即所谓的复性,取得了令人瞩目的进展.液固层析辅助蛋白质复性可在高蛋白浓度下操作,适用于大规模生产,同时还能使目标蛋白得到部分纯化.对近年来发展的利用液固层析辅助蛋白质复性的方法做了归纳,包括凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水相互作用层析、亲和层析和固定化的折叠催化剂及人工分子伴侣辅助蛋白质复性的方法,并对各自的优缺点和适用范围进行了比较分析. 展开更多
关键词 蛋白质 液固层析 再折叠 复性
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Hsp70蛋白自身磷酸化对其分子伴侣功能的影响 被引量:1
14
作者 吕元明 陶蕾 张利能 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期553-558,共6页
近年对分子伴侣蛋白Hsp70作用机制的研究发现,其ATP功能区域X光晶体结构有一个新的钙离子结合区域,这个新的功能区域与Hsp70分子的ADP结合、ATP水解及合成有关.有报道认为,Hsp70蛋白的NDP激酶样作用,通过形成酸不稳定性自身磷酸化中间... 近年对分子伴侣蛋白Hsp70作用机制的研究发现,其ATP功能区域X光晶体结构有一个新的钙离子结合区域,这个新的功能区域与Hsp70分子的ADP结合、ATP水解及合成有关.有报道认为,Hsp70蛋白的NDP激酶样作用,通过形成酸不稳定性自身磷酸化中间体催化γ-磷酸基团在ATP和ADP间传递,组氨酸H89与这个新的区域有密切关系,有可能与Hsp70蛋白形成自身磷酸化中间体有关.本研究运用基因定位诱导突变技术,将89位组氨酸以丝氨酸替代(H89S),通过比较Hsp70野生型及突变型蛋白的自身磷酸化过程的改变,及其对Hsp70蛋白体外荧光素酶活性影响的不同,初步探讨Hsp70作用机制.结果发现,突变的H89S蛋白自身磷酸化过程及体外变性荧光素酶重折叠受到抑制.野生型蛋白未受到影响,野生型Hsp70可以形成酸不稳定的自身磷酸化中间体,产生CDP依赖性解磷酸反应,而H89S突变型蛋白不能形成这种反应.89位组氨酸点突变能显著降低ATP酶交换反应及体外变性荧光素酶重折叠水平,但它的自身磷酸化可能并非唯一必需的介导位点或只是一个选择性的功能侧链. 展开更多
关键词 HSP70 自身磷酸化 ATP合成及分解 荧光素酶再折叠
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对一例粘贴纸盒制作工艺的介绍 被引量:1
15
作者 刘超 《印刷世界》 2012年第6期24-25,共2页
随着超市的蓬勃发展,采用高档粘贴纸盒包装的商品也迅速多了起来。粘贴纸盒(又称固定纸盒)是用贴面材料将基材纸板粘合裱贴而成的一类纸盒。该类纸盒的最主要特点是成型后不能再折叠成平板状态,而只能以固定盒型仓储和运输。
关键词 纸盒包装 制作工艺 粘贴 贴面材料 再折叠 纸板 盒型
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晨起做好六件事
16
作者 李明诚 《农业开发与装备》 1996年第5期52-52,共1页
开窗 冬天关闭门窗睡一夜,室内空气中弥漫着二氧化碳和其它难闻气味。起床后应立即打开窗户,驱除有害气体,补充新鲜空气。 掀被 经过一夜睡眠,被窝内充满了人体散发的气味和水蒸气。起床后把被子掀开,让杂味和水蒸气散失掉。
关键词 室内空气 水蒸气 体内水分 氧化镤 有害气体 锻炼项目 再折叠 兴趣爱好 人体 身体不适
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大班“庆三·八,爱妈妈”主题活动
17
作者 金娥 《早期教育(幼教·教育教学)》 1996年第2期36-36,共1页
目的与要求 1.知道三月八日是妈妈的节日,小朋友应该向妈妈表示祝贺。 2.懂得妈妈工作很辛苦,还很关心爱护我们,小朋友也要爱妈妈、尊重妈妈,帮助妈妈做些力所能及的事。 3.进一步培养幼儿的动手制作和语言表达能力。 活动准备 1.歌颂... 目的与要求 1.知道三月八日是妈妈的节日,小朋友应该向妈妈表示祝贺。 2.懂得妈妈工作很辛苦,还很关心爱护我们,小朋友也要爱妈妈、尊重妈妈,帮助妈妈做些力所能及的事。 3.进一步培养幼儿的动手制作和语言表达能力。 活动准备 1.歌颂妈妈的录音带。 2.每位幼儿事先做一朵小红花,画一张《我是妈妈的小帮手》主题画,要求亲手做, 展开更多
关键词 幼儿园 小朋友 主持人 语言表达能力 目的与要求 好妈妈 主题活动 节日 录音带 再折叠
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结核分枝杆菌P16蛋白的研究进展
18
作者 杨军兰 郝晓柯 于文彬 《国外医学(微生物学分册)》 2005年第2期26-28,共3页
P16蛋白是结核分枝杆菌主要的膜蛋白,对该菌的生存力和稳定性起重要的调节作用.P16蛋白主要以9个亚基的寡聚体形式存在,有抗蛋白酶的水解作用;在氨基酸序列有一α-crystallin结构,该结构与P16蛋白的分子伴侣活性密切相关;P16蛋白具有高... P16蛋白是结核分枝杆菌主要的膜蛋白,对该菌的生存力和稳定性起重要的调节作用.P16蛋白主要以9个亚基的寡聚体形式存在,有抗蛋白酶的水解作用;在氨基酸序列有一α-crystallin结构,该结构与P16蛋白的分子伴侣活性密切相关;P16蛋白具有高效、自发的再折叠,再组装能力,具有极强的抗热性.P16蛋白具有较强的免疫原性,可作为预防结核的亚单位疫苗及血清学诊断试剂. 展开更多
关键词 P16蛋白 结核分枝杆菌 血清学诊断试剂 氨基酸序列 亚单位疫苗 调节作用 水解作用 抗蛋白酶 伴侣活性 免疫原性 膜蛋白 稳定性 生存力 再折叠 组装 结构
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Lysozyme refolding at high concentration by dilution and size—exclusion chromatography 被引量:7
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作者 高永贵 关怡新 +1 位作者 姚善泾 CHOMan-gi 《Journal of Zhejiang University Science》 EI CSCD 2003年第2期136-141,共6页
This study of renaturation by dilution and size exclusion chromatogra phy (SEC) addition of urea to improve yield as well as the initial and final pro tein concentrations showed that although urea decreased the rate o... This study of renaturation by dilution and size exclusion chromatogra phy (SEC) addition of urea to improve yield as well as the initial and final pro tein concentrations showed that although urea decreased the rate of lysozyme ref o lding, it could suppress protein aggregation to sustain the pathway of correct r efolding at high protein concentration; and that there existed an optimum urea c oncentration in renaturation buffer. Under the above conditions, lysozyme was su ccessfully refolded from initial concentration of up to 40 mg/mL by dilution and 100 mg/mL by SEC, with the yield of the former being more than 40% and that of the latter being 34.8%. Especially, under the condition of 30 min interval time, i.e. τ>2(t_R2 -t_R1 ), the efficiency was increased by 25% and the renaturation buffe r could be recycled for SEC refolding in continuous operation of downstream proc ess. 展开更多
关键词 Lysozyme refolding Downstream process DILUTION Size exclusion chromatography UREA
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Bursting the unfolded protein response accelerates axonal regeneration
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作者 Maritza Onate 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2016年第6期892-893,共2页
Peripheral neuropathies refer to a group of conditions in which the peripheral nervous system(PNS)is damaged.These pathological state are are associated with weakness,pain,and loss of motor and sensory control.More th... Peripheral neuropathies refer to a group of conditions in which the peripheral nervous system(PNS)is damaged.These pathological state are are associated with weakness,pain,and loss of motor and sensory control.More than 100 types of peripheral neuropathies have been identified,with distinct symptoms and prognosis classified according to the type of damage to the nerves.Injury to peripheral nerves results in disabling loss of sensory and motor func- 展开更多
关键词 axonal regeneration sensory nerves prognosis weakness classified myelin glial neuronal
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