针刺对脑缺血大鼠海马区凋亡细胞及Caspase-9蛋白表达的影响

目的观察针刺对脑缺血损伤大鼠大脑海马区凋亡细胞及Caspase-9蛋白表达的影响,探讨针刺对脑缺血损伤的神经保护机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、脑缺血模型组、脑缺血治疗组,每组10只,采用化学刺激诱导血栓性闭塞大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型。针刺"百会"、"水沟",每日1次,治疗7 d。应用苏木素-伊红染色(HE)及免疫组化方法观察针刺前后大鼠缺血区凋亡细胞及海马区Caspase-9蛋白表达的变化。结果大鼠局灶性脑缺血后Caspase-9表达增加,针刺对脑缺血损伤大鼠Caspase-9的过度表达有明显抑制作用。HE染色显示,缺血灶内大量神经元变性坏死,出现脑水肿表现,针刺治疗后变性坏死细胞明显减少。结论针刺可减轻Caspase-9的过度表达,改善脑缺血状态,从而减轻脑损害程度,这可能是针刺减轻脑缺血损伤的机制之一。

肿瘤细胞冻融裂解物上清对凋亡细胞负载的树突状细胞生物学特性的作用研究

目的 :探讨Balb/c小鼠骨髓瘤SP2 / 0细胞冻融裂解物上清对SP2 / 0凋亡细胞负载的骨髓来源的树突状细胞 (DC)的成熟、生物学特性及功能的影响。方法 :采用小鼠重组粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM -CSF)和白介素 4(IL - 4)诱导骨髓来源的DC ,10 0Gyγ射线辐照诱导SP2 / 0细胞凋亡 ,与未成熟DC共育 16- 2 0h ;SP2 / 0细胞冻融裂解物上清和脂多糖 (LPS)分别作用于DC 48h。采用免疫荧光标记和流式细胞术分析DC表型 ;[3H] TdR掺入试验和 [51Cr]释放试验测定DC刺激T细胞增殖和细胞杀伤效应。采用腹股沟皮下DC主动免疫治疗SP2 / 0荷瘤小鼠 ,每间隔 14d治疗 1次 ,共 3个疗程 ,观察肿瘤生长情况及小鼠生存期。结果 :(1)经SP2 / 0冻融裂解物上清和脂多糖 (LPS)诱导凋亡肿瘤细胞负载的DC高表达共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC -Ⅱ分子 ,但抗原摄取能力均下降 ;(2 )SP2 / 0冻融裂解物上清组和LPS组DC体外刺激T细胞增殖和激活CTL能力均高于对照组 (P <0 0 5 ) ;(3 )经SP2 / 0冻融裂解物上清组主动免疫治疗小鼠存活期长于其它各组 (P <0 0 5 )。结论 :小鼠SP2 / 0细胞冻融裂解物上清可诱导凋亡细胞负载的树突状细胞成熟 ,能够刺激T细胞增殖和激发肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL) 。

电镜下几种凋亡细胞的形态特征

目的观察不同种类、不同原因引起的凋亡细胞的基本形态及差异。方法用透射电镜观察原位组织和培养细胞在生理条件下和外界因素作用下产生的凋亡细胞,其中有卵巢颗粒膜细胞、烷化剂作用的光感受细胞、培养的人膀胱癌T24细胞株和肝癌细胞株。结果凋亡细胞的基本形态变化有:胞体变小、胞质浓缩、核染色质凝聚,而核膜、质膜及细胞器保存完好。各种凋亡细胞间的形态差异主要表现为核染色质凝聚的形态不同:有的凝聚染色质边移于核膜下,或呈新月形;有的核染色质凝聚成块状,散布于核内;有的呈致密凝聚,占据整个核区。结论电镜下观察到凋亡细胞的核染色质凝聚除边移外还有其他形态,正常组织中的暗细胞和坏死组织中的凝固性坏死细胞应与凋亡细胞相区别。

子宫内膜异位症模型大鼠异位组织中巨噬细胞和凋亡细胞数的变化及活血化瘀中药的影响

目的 :探讨巨噬细胞与子宫内膜异位症 (EMT)的关系及活血化瘀中药对其的影响。方法 :制作大鼠EMT动物模型 ,模型鼠连续用药 3w后观察在位、异位组织中巨噬细胞和凋亡细胞数的变化以及异位子宫内膜上皮及腺上皮细胞的凋亡指数。结果 :模型对照组内膜巨噬细胞数比正常大鼠增多 ,异位比在位组织中增多非常显著。中药治疗前后巨噬细胞数无显著变化。模型对照组细胞凋亡指数 ,基质细胞凋亡数非常显著小于用药组。结论 :活血化瘀中药能促进异位组织消退 ,促进异位内膜细胞凋亡。

猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1和TNF-α SYBR GreenⅠ real-time PCR检测方法的建立

分别针对猪凋亡细胞因子Fas、FasL、TNFR1、TNF-α基因以及看家基因β-actin的序列设计了1对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测Fas、FasL、TNFR1、TNF-α及β-actin的SYBR GreenⅠreal-ti me PCR方法。该方法线性关系好(r2≥0.995),敏感性高,初始模板的检出下限除TNFR1为1×102copies/μL外,其他均为1×101copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3%。应用所建立的方法对猪生殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中Fas、FasL、TNFR1和TNF-αmRNA的表达水平进行了检测。结果表明,建立的real-ti me PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好。

老年人牙周炎牙龈组织中凋亡细胞免疫组织化学研究

目的 :观察老年人牙周炎牙龈组织中凋亡细胞分布特点。方法 :采用特异性凋亡细胞免疫组织化学染色法 (TUNEL染色 ) ,对 15例老年人牙周炎患者 ,10例慢性成人牙周炎患者 ,10例青少年牙周炎患者和 11例健康老年人牙龈组织中阳性凋亡细胞的分布及计数进行比较研究。结果 :老年人牙周炎组阳性凋亡细胞总例数明显高于健康老年人组和慢性成人牙周炎组 (P <0 .0 5 ) ;慢性成人牙周炎组和青少年牙周炎组阳性凋亡细胞总例数也明显高于健康老年人组 (P <0 .0 5 ) ;老年人牙周炎组阳性凋亡细胞计数明显高于慢性成人牙周炎组、青少年牙周炎组和健康老年人组 (P <0 .0 5 )。结论 :感染性炎症因素和衰老因素均能促进老年人牙周炎时牙龈组织细胞凋亡 ,这两个因素的双重协同作用造成了老年人牙周炎患者局部牙龈组织对刺激做出过强的细胞凋亡反应。

凋亡细胞的超微结构变化

细胞凋亡可用多种方法进行检测,但对其形态学特征的透射电镜观察是确定细胞凋亡的最可靠的方法。动植物细胞凋亡的形态学特征基本相似,细胞凋亡过程中突出的超微结构变化为细胞核染色质凝集成团块状或染色质边集,细胞质显著空泡化,凋亡细胞发生碎裂,形成凋亡小体,同时伴有细胞器的改变。

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型共感染对外周血单个核细胞凋亡细胞因子mRNA表达的影响

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductine and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)单感染和共感染6周龄健康仔猪,采用real-ti me PCR技术对外周血单个核细胞(PBMC)中的病毒载量以及Fas、FasL、TNFR1和TNF-α等凋亡细胞因子mRNA表达水平进行检测,采用流式细胞术对PBMC的凋亡比率进行检测。结果显示,PRRSV/PCV2共感染组PBMC中PRRSV和PCV2载量、PB-MC凋亡比率均显著高于PRRSV感染组或PCV2感染组。所有病毒感染组的Fas、FasL、TNFR1和TNF-α的mRNA表达水平均显著上调,并且PRRSV/PCV2共感染组的表达水平均显著高于单感染组。结果表明,Fas/FasL、TNFR1/TNF-α表达水平的显著上调可能在PRRSV和PCV2协同诱导凋亡机制中扮演重要角色。

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析

采用流式细胞术与特异荧光探针JC 1相结合,在单细胞水平对X射线和化疗药物处理后的食管癌EC6细胞线粒体膜电位的变化进行了分析,凋亡细胞的线粒体膜电位下降,红色荧光减弱,随着剂量的增加,凋亡细胞的比例增大。

脑出血大鼠血肿周围脑组织白细胞和凋亡细胞变化及其与脑组织含水量的关系

目的探讨脑出血大鼠血肿周围脑组织白细胞和凋亡细胞变化及其与脑组织含水量的关系。方法 48只大鼠采用自体不凝血注入法制备脑出血模型,随机分为8组:假手术组、脑出血6 h组、脑出血12h组、脑出血24 h组、脑出血48 h组、脑出血72 h组、脑出血1周组和脑出血2周组。分别在相应时间点断头取脑,进行脑组织含水量测定和HE染色、TUNEL染色,计数各组大鼠血肿周围脑组织白细胞数及凋亡细胞数。结果脑出血后6 h^1周内大鼠脑组织含水量均明显高于假手术组,其中脑出血72 h时大鼠脑组织含水量最高(均P<0.05)。假手术组及脑出血6 h组、脑出血2周组均无白细胞表达;脑出血后12 h^1周内大鼠血肿周围脑组织均可见散在的白细胞浸润,其中脑出血48 h时白细胞数最多(均P<0.05)。各时间点脑出血大鼠凋亡细胞数均明显高于假手术组,其中脑出血72 h时凋亡细胞数最高(均P<0.05)。脑出血后血肿周围脑组织白细胞数和凋亡细胞数分别与脑组织含水量呈正相关(r=0.615,P<0.05;r=0.578,P<0.01)。结论脑出血大鼠血肿周围脑组织白细胞和凋亡细胞增加可能与脑水肿的形成有关。

PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响

NO作为细胞间信息传递的重要调节因子,在肿瘤的发生、发展以及转移过程中被广泛研究。一氧化氮合酶是合成NO的关键酶,诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)通常在应激、荷瘤等病理状态下被激活,产生大量NO。NO具有细胞毒性,与机体免疫反应及细胞凋亡有关,在许多致癌和抑癌机制中扮演着重要角色。实验探讨了光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)处理产生的小鼠乳腺癌凋亡细胞对巨噬细胞产生NO的影响,从而确定活化的巨噬细胞在肿瘤生长中的作用。

供体凋亡细胞输注对大鼠胰岛移植物功能的影响

目的研究供体凋亡细胞预输注对大鼠胰岛移植后胰岛移植物功能的影响。方法应用STZ制备SD大鼠糖尿病模型,以直线加速器照射诱导供体Wistar大鼠脾细胞凋亡。经阴茎背静脉输注供体凋亡脾细胞,7d后于糖尿病SD大鼠双侧肾包囊进行同种异体胰岛移植,通过测定血糖变化、血清胰岛素水平以及胰岛移植物存活时间来观察胰岛移植物的功能状态。结果预输注供体凋亡脾细胞能显著延长同种异体胰岛移植物存活时间(中位生存时间达31d),并较长时间地维持受体鼠血清胰岛素处于较高水平。结论供体凋亡细胞预输注能够显著延长同种异体胰岛移植物的存活时间,能够较长时间维持胰岛移植物的正常功能状态。

磷脂酰丝氨酸在凋亡细胞被吞噬细胞清除中的作用

目的:探讨磷脂酰丝氨酸(PS)在凋亡细胞被吞噬细胞清除中的作用。方法:用脂质体整合的方法或用N-乙酢马来酰胺(NEM)预处理红细胞然后整合磷脂,制备含不同凋亡信号的红细胞模型,测定巨噬细胞对整合不同磷脂信号红细胞的结合率与吞噬率。结果:单独整合PS或用NEM处理造成PS外翻,可显著提高巨噬细胞对红细胞的结合率,但对吞噬率没有影响。同时整合PS和氧化PS或用NEM处理造成PS外翻后再整合氧化PS,不仅可以显著性提高巨噬细胞对红细胞的结合率,而且可显著性提高吞噬率。结论:PS外翻参与了巨噬细胞对凋亡细胞的结合,而氧化PS促进了巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬,二者的协同作用参与巨噬细胞对凋亡细胞的清除。

氧化型低密度脂蛋白调控MerTK受体表达抑制巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬

目的研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对巨噬细胞吞噬清除凋亡细胞的作用及其机制。方法 RAW264.7小鼠巨噬细胞随机分为对照组(无血清的DMEM培养液)、10μg/mL ox-LDL组(10μg/mL ox-LDL无血清DMEM培养液)和20μg/mLox-LDL组(20μg/mL ox-LDL无血清DMEM培养液),采用紫外光照射诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞发生凋亡,流式细胞分析法检测RAW264.7小鼠巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬指数,Western blotting和Real-Time PCR技术分别检测促吞噬受体MerTK蛋白和mRNA表达的变化。结果①孵育24 h后,10μg/mL ox-LDL组和20μg/mL ox-LDL组吞噬指数分别较对照组下降(4.7±2.8)%和(12.6±2.2)%,20μg/mL ox-LDL组显著小于对照组和10μg/mL ox-LDL组(P<0.05﹚。②孵育24 h后,10μg/mLox-LDL组和20μg/mL ox-LDL组MerTK蛋白表达灰度值分别较对照组下降(20.0±16.5)%和(47.0±15.4)%,20μg/mLox-LDL组显著小于对照组(P<0.05)。③孵育12 h后,10μg/mL ox-LDL组和20μg/mL ox-LDL组MerTK mRNA相对表达量分别较对照组减少(33.0±17.5)%和(60.0±10.0)%,10μg/mL ox-LDL组和20μg/mL ox-LDL组均显著小于对照组(P均<0.05)。结论 ox-LDL可抑制巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬功能,其机制与抑制促吞噬受体MerTK的表达有关,这也可能是ox-LDL致动脉粥样硬化斑块不稳定和进展的机制之一。

磷脂酰丝氨酸外翻和磷脂氧化在凋亡细胞被吞噬细胞清除过程中的协作效应

为探讨磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻和磷脂氧化在凋亡细胞被吞噬细胞清除中的作用,用脂质体整合的方法将不同的磷脂整合到红细胞上或用N-乙酰马来酰胺(N-ethylmaleimide,NEM)预处理红细胞然后整合磷脂,制备含不同凋亡信号的红细胞模型,测定巨噬细胞对整合不同磷脂信号红细胞的结合率和吞噬率。结果表明,单独整合PS或用NEM处理造成PS外翻,可显著性提高巨噬细胞对红细胞的结合率,但对吞噬率没有影响;同时整合PS和氧化磷脂(氧化PS或氧化磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)),或用NEM处理造成PS外翻后再整合氧化PS或氧化PC,不仅可显著提高巨噬细胞对红细胞的结合率,而且可显著性提高吞噬率。这些结果提示PS外翻可能参与了巨噬细胞对凋亡细胞的结合,而磷脂氧化可能启动了巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬,二者协作才可能完成巨噬细胞对凋亡细胞的清除。

对早期凋亡细胞的吞噬抑制T淋巴细胞活化的实验研究

目的研究早期凋亡细胞及吞噬早期凋亡细胞的巨噬细胞对T淋巴细胞活化的影响。方法体外以紫外线照射,诱导出早期凋亡的Jurkat细胞;建立早期凋亡细胞的吞噬模型;ELISA法分析早期凋亡细胞对LPS刺激下巨噬细胞分泌细胞因子的影响及在早期凋亡细胞和吞噬了早期凋亡细胞的巨噬细胞干预下,ConA刺激T淋巴细胞活化后CD69、CD25、CD71表达的变化。结果巨噬细胞吞噬了早期凋亡细胞后,抑制性细胞因子(TGFβ1)的分泌明显上调,并且在一定程度上抑制了ConA刺激下的T淋巴细胞活化;具体表现为CD69、CD25、CD71等T淋巴细胞活化标志的表达受到明显抑制。当加入TGFβ1中和抗体后,这种抑制作用消失。结论巨噬细胞吞噬了早期凋亡细胞后抑制ConA刺激下的T淋巴细胞CD69、CD25、CD71的表达,这种抑制作用依赖于的TGFβ1分泌增强。

脾脏吞噬细胞清除凋亡细胞的免疫学调控机制研究进展

正常组织新陈代谢中会产生大量的凋亡细胞,它们作为机体自身抗原的主要来源在诱导免疫耐受中发挥重要的作用。脾脏边缘区的巨噬细胞(如边缘区巨噬细胞和边缘区嗜金属巨噬细胞等)和脾脏中的树突状细胞通过"find-me"信号"eatme"信号快速识别并清除体内不断产生的凋亡细胞,以致于在体内很难检测到凋亡细胞。同时,凋亡细胞的清除可诱导机体对自身抗原的免疫耐受。并且已有研究指出,清除凋亡细胞诱导免疫耐受这一理论已被用于预防自身免疫病和诱导肿瘤免疫。本文主要综述了机体清除凋亡细胞的分子机制及临床意义。

吞噬凋亡细胞的机制

被吞噬细胞吞噬是多数凋亡细胞的命运 .凋亡细胞表面膜磷脂酰丝氨酸的暴露、膜碳水化合物的改变及表面糖蛋白的重新分布和聚集导致被吞噬细胞识别与摄取 .吞噬细胞的多种受体参与吞噬过程 ,有些受体参与栓系凋亡细胞 ,有些激发巨吞饮的摄取机制 .吞噬的摄取过程因吞噬细胞和凋亡细胞的类型差异而不同 .至少有 7种线虫吞噬基因及其哺乳动物同源物组成两条部分重叠而又平行的摄取信息传导通路 .吞噬基因的突变可以改变凋亡细胞的进程 .