基于炎症大鼠代谢组学的马钱子炮制减毒存效机制研究

运用动物模型、血浆药物化学及代谢组学方法,探讨马钱子炮制前后干预炎症大鼠作用机制。按不同剂量灌胃小鼠,以死亡率初步考察炮制前后毒性;建立大鼠蛋清性足跖肿胀模型,通过肿胀率和炎性因子水平评价炮制前后抗炎效果;采用高分辨质谱结合多元统计学,鉴定入血后的移行成分及相应的代谢产物;比较分析各实验组代谢轮廓及差异生物标志物,并构建其代谢通路。结果显示,高剂量下马钱子砂烫品的毒性要明显低于生品。生品和砂烫品均能显著降低大鼠足肿胀率和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的水平,炮制前后在抗炎效果上差异无统计学意义(P>0.05)。通过血浆药物分析,鉴定出了12个移行成分,以及相应60个代谢产物,S-plot鉴定出10个差异性化合物。代谢组学实验共发现10个内源性代谢物含量发生显著变化(P<0.05),生物标志物主要涉及苯丙氨酸代谢、甘油磷脂代谢、谷氨酸及谷氨酰胺循环、精氨酸和脯氨酸代谢等途径。通过本研究确证马钱子生品和砂烫品均有较好抗炎治疗作用,高温炮制可以降低马钱子毒性;入血后有效成分应多为生物碱,经过I相反应就容易被体内清除;马钱子炮制抗炎、镇痛、减毒机制主要与氨基酸和脂质代谢相关。该实验结果进一步阐明了起效物质基础及体内作用机制,为后续炮制工艺改进和新药研发等提供科学支撑。

基于弱键化学探究姜黄素-槟榔碱分子互作的“减毒存效”

目的基于中医临床常用配伍药对,观察姜黄素与槟榔碱分子间相互作用以及聚集体的形成,探究中药配伍过程中的“减毒存效”机制,为临床安全使用槟榔的复方制剂提供参考。方法应用UV-vis、IR、1H-NMR、PXRD、ITC与电导滴定技术,解析聚集体的形成过程并对其结构表征。通过小鼠急性毒性实验、HepG2细胞模型,观察聚集体形成前后的毒效作用变化。结果槟榔碱与姜黄素能够在水溶液中,通过弱键作用力以1:1比例聚集形成聚集体。该聚集体能够显著缓和大剂量氢溴酸槟榔碱的刺激作用,同时能够保持姜黄素原有的抗HepG2增殖的活性。结论本实验从中医药配伍理论和中医临床用药经验实践出发,为中药配伍“减毒存效”研究提供了新的思路。

基于谱效关系的钩吻炮制减毒存效的实验研究

目的:研究砂炒钩吻的减毒存效的工艺及镇痛药效。方法:采用烘烤箱高温加热法,以镇痛药效、急性毒性为评价指标,在单因素试验基础上,选择炮制时间、炮制温度为自变量,采用星点设计-响应面法优选钩吻炮制工艺的研究。结果:钩吻在190~230℃温度下,经过10~60 min的炮制后,毒性明显降低,且保留一定的镇痛效应。对炮制品的外观、毒性和镇痛药效综合考虑,在炮制温度200~220℃,炮制时间在10~20 min内进行最佳工艺优选,得到钩吻的最佳炮制工艺:炮制温度210℃,炮制时间15 min。在此条件下进行验证性实验,结果与实验预测值较为接近,说明采用响应面法得到的工艺参数可靠,具有一定的实用价值。结论:砂炒钩吻炮制后毒性明显降低,同时又保留良好的镇痛药效,取得了良好的预期结果。

UPLC-TQD-MS法探讨关木通配伍干姜减毒存效机制

目的超高效液相色谱-三重四级杆质谱串联(UPLC-TQD-MS)法探讨关木通配伍干姜减毒存效机制。方法关木通配伍干姜的分析采用ACQUITYUPLC BEHC8色谱柱(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm);流动相1 mmol/L乙酸铵(含0. 1%乙酸)-甲醇;体积流量0. 2 m L/min;柱温30℃;采用电喷雾离子源正离子模式(ESI+)和多反映监测模式(NRM)进行质谱分析。结果马兜铃酸A在0. 809~51. 750μg (r=0. 999 5)的范围内线性关系良好,平均加样回收率为98. 18%,RSD为1. 4%。关木通-干姜(1∶2)配伍使用时关木通中马兜铃酸A显著降低,降低率达到87. 79%,对大鼠的利尿作用没有变化,对大鼠急性肾功能损伤程度明显低于关木通生品组。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于关木通配伍干姜的质量控制。

铁棒锤炮制方法及“减毒存效”炮制原理研究进展

通过查阅和整理近年来的相关文献,主要从铁棒锤的炮制方法、炮制对其化学成分及药理作用的影响及“减毒存效”的炮制原理等3个方面对铁棒锤的炮制研究进展进行概述。发现铁棒锤较常用、规范的炮制方法为水煮法、蒸制法及砂炒法,为规范铁棒锤的炮制工艺、阐明铁棒锤“减毒存效”的炮制原理、铁棒锤的深入研究开发及临床安全用药提供参考。

川乌减毒-存效的研究进展

川乌临床应用历史悠久,但有较大毒性,其双酯型生物碱类成分决定其功效,也决定其毒副作用,药用剂量与中毒剂量接近。时有因炮制加工不当而发生中毒事故,此外,川乌也因产地与加工、制剂方式(配方颗粒)、气味(仿生技术)之间的不同而存在毒-效差异。为深入川乌的临床应用研究提供支持,总结影响川乌减毒-存效因素的研究动态。

甘草汁蒸制高乌头后“减毒存效”部位化学成分UPLC-Q-TOF-MS分析

目的:分析高乌头炮制前后三氯甲烷部位化学成分并揭示炮制后化学成分的转化机制。方法:通过系统溶剂法制备高乌头炮制前后三氯甲烷部分,采用UPLC-Q-TOF-MS技术对比研究高乌头炮制前后三氯甲烷部位化学成分变化规律;采用模拟炮制技术,发现高乌甲素及冉乌头碱炮制前后发生质变与量变特征成分的转化机制,从而揭示甘草汁蒸制高乌头后“减毒存效”的炮制原理。结果:高乌头炮制后化学成分组成及比例发生明显变化,其中有7个成分消失,新增30个成分。从生品三氯甲烷部分中检测到30个化合物,共鉴定出9个;从制品三氯甲烷部分中检测到53个化合物,其中有30个为新增成分,共鉴定出13个。对比炮制前后化学成分,发现炮制后消失的成分为8-O-acetylexcelsine,推测此成分可能为毒性成分;炮制后新增成分有高乌宁乙、L49/50、L6、L19、邻氨基苯甲醛,可能为药效物质基础。结论:高乌头炮制后发生质变与量变特征成分的转化途径有多种,这些转化途径可能为甘草汁蒸制高乌头的解毒途径。

基于“扶阳补虚”理论探讨炮附子、干姜配伍关木通的减毒存效机制

目的:研究炮附子、干姜配伍关木通对马兜铃酸A含量的影响,对大鼠利尿作用、急性肾功能损伤的影响,以及对体外肾细胞毒性的影响。方法:根据中医药理论,选取不同比例炮附子、干姜配伍关木通,通过HPLC比较配伍前后关木通中马兜铃酸A的含量变化,流动相乙腈-0.4%冰乙酸水溶液(42∶58),检测波长318 nm;通过大鼠水负荷动物模型比较配伍前后关木通的利尿作用变化;通过大鼠急性肾损伤试验比较配伍前后大鼠急性肾功能损伤的变化;通过倒置显微镜观察细胞形态,利用CCK-8检测细胞活力,比较配伍前后关木通对人肾小管上皮细胞毒性的变化。结果:炮附子-干姜-关木通(3∶2∶1)配伍使用时关木通中马兜铃酸A显著降低,降低率达19.18%,而对大鼠的利尿作用没有影响,对大鼠急性肾功能损伤明显低于关木通生品,细胞活力优于关木通生品。结论:炮附子、干姜配伍关木通可以达到一定的减毒存效作用,对解决含马兜铃酸A的中药饮片现有临床应用问题具有一定的指导意义。

不同炮制方法对关木通减毒存效作用的比较

目的:比较各种炮制方法对关木通减毒存效作用,选择最佳的关木通炮制方法。方法:以关木通生品及各炮制品中马兜铃酸A、齐墩果酸及常春藤皂苷元含量为指标,比较了5种炮制方法(醋炙、蜜炙、姜炙、碱制、盐炙)减毒存效效果。结果:生品、醋炙品、蜜炙品、姜炙品、碱制品、盐炙品中马兜铃酸A含量分别为0.27%,0.13%,0.15%,0.20%,0.14%,0.18%;齐墩果酸含量分别为0.21%,0.15%,0.20%,0.13%,0.01%,0.01%;常春藤皂苷元含量分别为0.11%,0.08%,0.09%,0.07%,0.01%,0.01%。结论:关木通最佳减毒存效炮制方法为蜜炙法。

千金子制霜前后提取物对正常及癌性腹水模型小鼠泻下逐水效应与毒性研究

目的:筛选千金子泻下逐水药效部位,探究其制霜前后泻下逐水效应及结肠、肾脏毒性的变化。方法:采用H22癌性腹水模型小鼠,以腹水量、粪便含水量、尿量等生物效应指标筛选千金子药效部位;采用H22癌性腹水模型小鼠,灌胃千金子生品、霜品石油醚部位,结合生物效应指标、脏器指数、肾脏功能指标、氧化应激指标、炎症因子含量及水通道蛋白表达考察千金子的泻下逐水效应;采用正常小鼠,以脏器指数、肾脏功能指标、氧化应激指标、炎症因子含量考察千金子制霜前后的毒性差异。结果:千金子制霜前后石油醚部位能够提高癌性腹水模型小鼠粪便含水量、尿量,降低小鼠腹水量(P<0.05,P<0.01),非石油醚部位无显著作用。药效实验结果显示,与模型组比较,各给药组小鼠组织损伤显著减轻,在灌胃石油醚部位后小鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量降低,总超氧化物歧化酶(SOD)含量升高,丙二醛(MDA)含量下降,结肠、肾脏组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量显著降低,且能抑制结肠、肾脏组织中水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白3(AQP3)蛋白表达水平。毒性结果显示,与对照组比较,各正常给药组小鼠给药后可见不同程度的结肠、肾脏组织损伤,TNF-α、IL-1β分泌增加,肾功能指标呈上升趋势,SOD含量显著降低,MDA含量显著升高,制霜后该损伤降低。结论:石油醚部位是千金子制霜前后泻下逐水的药效部位,千金子制霜后毒性显著降低的同时,其泻下逐水功效得以保留,表现为减毒存效。

基于太阳蓄血“方证相关”的钩吻减毒存效的实验研究

目的实验验证中医不同方证对钩吻减毒存效的研究。方法应用太阳蓄血证、瘀血证、气虚证等五个方药分别开展动物实验验证太阳蓄血汤方对钩吻的减毒作用,并通过小鼠醋酸扭体实验、热板镇痛实验、福尔马林致痛实验研究钩吻减毒后的存效作用。结果钩吻配伍抵当汤、桃核承气汤后,小鼠死亡率均显著下降,钩吻合抵当汤混合液组降至6.67%,钩吻合桃核承气汤混合液组降至20%,且有死亡现象者死亡时间亦明显延长,与钩吻组比有显著性差异(P<0.05)。而丹参饮、血府逐瘀汤、四君子汤无减毒作用。通过镇痛实验发现抵当汤、桃核承气汤与钩吻合用后均能起到镇痛作用,且总体上效果优于阳性对照组和钩吻组。结论太阳蓄血"方证相关"理论指导的抵当汤、桃核承气汤对钩吻能起到减毒存效作用。

钩吻的毒性及炮制减毒研究进展

目的综述目前钩吻毒性及其炮制减毒的研究进展。方法通过查阅国内外文献,对钩吻的毒性成分及其减毒存效的炮制方法进行了综述。结果钩吻的毒性研究主要以成分结构研究及药理实验为主,在减毒方面主要从炮制、配伍、新型制剂技术几个方面开展研究,并取得一定的成效。结论目前钩吻的减毒研究仍处于比较基础的阶段,需要进一步深入研究,使钩吻减毒存效技术广泛应用在钩吻开发及临床使用中,更好地造福人类健康。

基于毒效评价和代谢组学的铁棒锤抗类风湿关节炎的作用机制研究

研究藏族药铁棒锤及其炮制品对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的影响,探讨其炮制减毒存效作用及机制。应用牛Ⅱ型胶原诱导类风湿关节炎(typeⅡcollagen-induced arthritis, CIA)大鼠模型;给药后记录大鼠体质量,计算心脏指数、免疫器官指数和关节炎指数;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清中肌酸激酶(creatine kinase, CK)、心肌特异性肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)等多种因子水平;苏木素-伊红染色观察心脏组织及踝关节组织病理学形态变化;免疫组化法检测心肌连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在大鼠心脏的表达;超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC-Triple-TOF-MS)检测大鼠血清内源性代谢物水平,筛选潜在生物标志物并分析相关代谢通路。结果表明,铁棒锤生品能使大鼠心脏组织局部心肌纤维变性坏死,心脏指数显著增高,心肌组织Cx43表达平均阳性面积明显降低,血清中CK、cTnT等含量明显增高;大鼠免疫器官指数、血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)等炎症因子含量减低、受损滑膜及关节面改善,效毒共存;糌粑制铁棒锤未见明显心脏毒性反应,同时显著降低大鼠关节炎指数、免疫器官指数及血清中IL-6等多种炎症因子含量,改善受损滑膜及关节面,减毒存效作用确切。血清代谢组学研究共筛选出19个铁棒锤生品及糌粑制铁棒锤抗RA的潜在生物标志物,主要涉及甘油磷脂代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢及类固醇激素合成等。综上,藏族药铁棒锤具有防治RA的作用,生品有一定心脏毒性,糌粑制后减毒存效作用确切,其治疗RA的机制与抗炎,调节甘油磷脂代谢、氨基酸代谢有关。

闹羊花不同炮制品的“减毒-存效”比较研究

目的研究古籍记载的闹羊花不同炮制品的毒性和药效的相关性,确定"减毒-存效"的最佳炮制方法。方法采用分光测色仪、高效液相色谱电雾式检测器法(HPLC-CAD)、小鼠急性毒性实验、二甲苯致小鼠耳肿胀实验分别对闹羊花生品及不同炮制品的性状(颜色)、指标性成分含量、毒性、药效进行评价。结果相较于生品,闹羊花经炮制后饮片颜色由灰黄色变为棕褐色,指标性成分闹羊花毒素II、III、V含量大幅度降低,3种毒性成分总量的顺序为生品(0.340%)>清蒸(0.181%)>酒蒸(0.178%)>醋蒸(0.154%)。小鼠急性毒性实验表明,闹羊花不同炮制品半数致死量(median lethal dose,LD50)的大小顺序为醋蒸(3.538 g/kg)>酒蒸(3.467 g/kg)>清蒸(2.725 g/kg)>生品(2.172 g/kg),表明炮制达到了"减毒"的目的。抗炎药效实验表明,闹羊花炮制前后均能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀,抑制率大小顺序为生品高剂量组(73.25%)>生品中剂量组(58.39%)>酒蒸高剂量组(49.63%)>醋蒸高剂量组(42.48%)>清蒸高剂量组(40.56%),相较于对照组均有显著性差异(P<0.05、0.01),达到了"存效"的目的。结论闹羊花的多种炮制方法均有"减毒存效"作用,"减毒"以醋制为优,"存效"以酒制为优,为临床用药提供了依据,同时建立了毒性中药"外观性状-化学成分-毒性-药效"多元评价模式,为闹羊花炮制工艺、质量标准、减毒存效机制等研究奠定了理论基础。

不同胆汁炮制方法对天南星解毒存效作用的实验研究

目的:考察以猪胆汁、牛胆汁作为辅料炮制天南星是否具有减毒增(存)效作用。方法:以小鼠的急性毒性试验考察不同胆汁炮制方法对天南星的减毒作用,以小鼠自主活动、睡眠时间及戊四氮引起的惊厥试验考察不同胆汁炮制方法对天南星的增(存)效作用。结果:小鼠急性毒性试验中,与对照组比较天南星组小鼠的体重、食量有显著性降低,猪胆星(猪胆汁炮制)组和牛胆星(牛胆汁炮制)组小鼠的体重、食量没有显著性影响(除牛胆星组雌性小鼠I^8 d体重较对照组增长略缓外),牛胆星组和猪胆星组动物的体重与天南星组相比有显著性著异;天南星、猪胆星、牛胆星均能够明显减少小鼠自主活动次数、延长小鼠睡眠时间、降低戊四氮引起的惊厥率,炮制前后无显著性差异。结论:以猪胆汁、牛胆汁作为辅料炮制天南星能够起到减毒存效的作用。

半夏醇制减毒新方法研究(Ⅰ)——新方法及新工艺研究探讨

目的:探索半夏醇制减毒新方法和最佳工艺参数。方法:以乙醇润制半夏减毒,采用正交试验设计考察乙醇量、润制时间、乙醇浓度、润制温度4个影响因素,以总游离有机酸含量为化学指标,以大鼠腹腔渗出液中PGE2含量为毒理指标,综合评分,以家兔眼结膜刺激性试验得分作为减毒的直观验证,优选半夏醇制减毒的最佳工艺,并以药效验证考察醇制工艺的合理性。结果:半夏最佳醇制工艺为生半夏在60℃,用0.5倍量的75%乙醇润制4 d,干燥后即得。半夏醇制后保留了半夏的镇咳、祛痰、抗炎作用。结论:该方法简单、可行,可作为半夏减毒存效新方法的研究方向。

中药新药毒性与抗癌效应研究

开发有效、低毒的抗癌中药的有效途径为:1采取药效与毒性相结合的研究方法,比较研究原药材、毒性成分(组分)和去毒药材的抗癌效果,建立科学的存效脱毒(减毒)方法。2建立符合中医理论的"抗癌中药癌症毒理实验动物模型"来评价抗癌中药的毒性。3以中医药理论为基础、以疗效为中心,确定抗癌新药的"效-毒"关系、建立与中医理论相适应的动物模型及多种靶点筛选模型,开展抗癌中药新药的疗效及机制研究。

基于毒性成分转化的甘遂醋炙工艺优选

优选基于代表性毒性二萜成分转化的醋甘遂最佳炮制工艺,为醋甘遂的标准化生产提供参考。以甘遂中毒性较大的代表性二萜成分3-O-(2′E,4′Z-癸二烯酰基)-20-O-乙酰基巨大戟二萜醇(3-O-EZ)和大戟萜酯C(KPC)及其醋炙转化产物巨大戟二萜醇(ingenol)和20-去氧巨大戟二萜醇(20-deoxyingenol)为研究对象,分别采用人正常结肠黏膜上皮细胞(NCM460)和人结肠癌细胞(HT-29)进行肠毒性和泻水药效评价,并建立毒性成分转化的HPLC评价方法,探究甘遂醋炙转化规律。基于该转化规律,以转化产物ingenol和20-deoxyingenol总含量为目标,以炮制温度、炮制时间和醋用量为关键工艺参数,运用Box-Behnken响应面法优选醋甘遂的最佳炮制工艺并进行验证。结果显示甘遂醋炙后,毒性较大的双酯型3-O-EZ和KPC经酯键断裂先转化为单酯型3-O-(2′E,4′Z-癸二烯酰基)巨大戟二萜醇(3-EZ)和5-O-苯甲酰基-20-去氧巨大戟二萜醇(5-OBen),最终转化为几乎无毒性的ingenol和20-deoxyingenol,同时,其泻水药效得以保留。所建立的毒性成分转化含量测定方法中6个成分在相应的浓度范围内与峰面积的线性关系良好(R2≥0.9998),平均加样回收率为98.20%~102.3%(RSD≤2.4%)。甘遂醋炙后,其代表性二萜类及中间产物成分含量明显减少,相比生甘遂降低了14.78%~24.67%;转化产物总量明显增加,相比生甘遂升高了14.37%~71.37%。工艺优选结果显示炮制温度对产物总量的影响最显著,炮制时间次之。最佳炮制工艺为炮制温度为210℃,炮制时间为15 min,醋用量为30%。验证实验结果与预测值的相对误差为1.68%,表明该工艺合理稳定,具有良好的重复性。基于毒性成分转化优选的甘遂醋炙工艺有利于在保证饮片减毒存效基础上提高醋甘遂生产的稳定性,为同类有毒中药的工艺优选提供借鉴。

马兜铃配伍生地黄对其止咳平喘作用的影响

为了探究将马兜铃与生地黄配伍降低马兜铃的毒性是否会影响其止咳平喘作用及能否达到减毒存效的作用,试验将豚鼠随机分为5组,分别为空白对照组(灌胃生理盐水)、卵清蛋白(OVA)模型组(灌胃生理盐水)、OVA+马兜铃组(灌胃马兜铃水煎剂,按体重15 g/kg)、OVA+配伍组(灌胃马兜铃与生地黄按体积比4∶1配伍的水煎剂,马兜铃生药含量同OVA+马兜铃组)、OVA+生地黄组(灌胃生地黄水煎剂,生地黄生药含量同OVA+配伍组),除空白对照组外,其他各组均于试验开始的第1天腹腔注射10%OVA溶液使受试豚鼠致敏,建立咳喘模型后,在第16~21天按组灌胃给药,每天1次。观察各组豚鼠咳喘情况;检测血液和肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数、嗜酸性粒细胞数,BALF中免疫球蛋白E(IgE)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)质量浓度及血清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-5(IL-5)质量浓度;观察豚鼠肺脏和肾脏组织病理学变化。结果表明:通过OVA致敏成功构建豚鼠咳喘模型;在灌胃给药6 d后,各组豚鼠肾脏组织结构未见异常改变。与空白对照组相比,OVA致敏各组豚鼠的引喘潜伏期均显著缩短(P<0.05),咳嗽次数、激发行为学评分均显著增加(P<0.05),BALF中白细胞数、嗜酸性粒细胞百分比及IgE、TNF-α质量浓度均显著增加(P<0.05),血清中IL-4及IL-5质量浓度均显著增加(P<0.05),IFN-γ质量浓度显著降低(P<0.05)。OVA模型组豚鼠肺脏组织基本结构消失,存在大量水肿、充血、炎性细胞浸润等现象,而OVA+马兜铃组和OVA+配伍组豚鼠肺脏组织病理损伤情况较OVA模型组明显减轻。与OVA模型组相比,OVA+马兜铃组和OVA+配伍组的引喘潜伏期和血清中IFN-γ质量浓度均显著提高(P<0.05),咳嗽次数、激发行为学评分,外周血中白细胞数、嗜酸性粒细胞数,BALF中白细胞数、嗜酸性粒细胞百分比及IgE、TNF-α质量浓度,血清中IL-4、IL-5质量浓度均显著降低(P<0.05)。说明生地黄配伍仍保留马兜铃止咳、平喘、消炎等药理作用。

短刺小克银汉霉对马钱子生物碱盐转化工艺的研究

目的为提高短刺小克银汉霉对马钱子中马钱子碱与士的宁的转化率,构建高效的短刺小克银汉霉微生物转化体系。方法根据菌种的生长代谢规律,采用单因素实验法,以马钱子碱硫酸盐和士的宁硝酸盐作为底物,以对底物的转化率作为指标,对可能的影响因素进行了考察。结果获得了优化的转化工艺,即接种量为4%、发酵时间为2.5 d、底物质量浓度为20 mg/L、转化时间为3 d、培养温度为28℃、培养基初始pH值为6.5、摇床转速为150 r/min。在此工艺条件下,2种底物的平均转化率分别达到了77.75%与77.10%。结论短刺小克银汉霉对2种底物的平均转化率分别提高了约17%与22%,此微生物转化体系能够满足马钱子减毒存效研究的需要。