IgG型意外抗体鉴定用试剂盒(固相凝集法)的研发

目的研发IgG型意外抗体鉴定用试剂盒(固相凝集法)。方法琥珀酰亚胺溶液包被微孔板后,将谱细胞悬液加入微孔板中制得红细胞单层,随后用1×PBS(pH7.40)裂解红细胞单层形成细胞膜单层;将低温干燥保护液加至细胞膜单层表面,4℃干燥后制成试剂盒反应板;定期用制备的试剂盒测试低效价IgG抗-E和抗-Fy a,以评估试剂盒稳定性;对72例意外抗体阳性血浆标本和152例正常血浆标本采用研发的试剂盒和微柱凝胶卡进行抗体鉴定试验,计算灵敏度和特异度指标,采用卡方检验分析,以评估试剂盒的检测性能。结果琥珀酰亚胺包被的微板能够较好的固定裂解后的红细胞膜;低温干燥保护液对膜单层能够形成较好的保护作用;在各个观察点内,低效价的IgG抗-E和抗-Fy a均能被准确检出;与微柱凝胶卡相比,72例意外抗体阳性的标本,固相法试剂盒正确检出70例,同时纠正1例凝胶卡漏检的抗-JK a;152例意外抗体阴性标本,2种试剂分别正确检出149例和152例。两者的灵敏度为97.22%(70/72)vs 98.61%(71/72),特异度为98.02%(149/152)vs 100%(152/152),配对卡方检验结果表明,2种试剂盒的检测结果差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论采用固相凝集法研发的试剂盒,适用于IgG型意外抗体的鉴定。

固相凝集法和酶联免疫吸附试验检测血小板输注无效患者血小板自身抗体的对比研究

目的探讨固相凝集法(solid-phase agglutination,SPA)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)(PAKAUTO试剂盒)检测血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)患者血小板自身抗体的特点和一致性。方法选取2021年7月至2023年9月北京市红十字血液中心血小板抗体筛查结果为阳性且无法判定为血小板特异性抗体的PTR患者20例,采用SPA和ELISA(PAKAUTO试剂盒)分别进行血小板自身抗体检测;采用荧光PCR熔解曲线法进行人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)基因型分型检测。结果20例患者中,男7例,女13例,年龄7~83岁,平均(50.5±20.0)岁。SPA检测血小板自身抗体阳性率为100%,均为结合型;ELISA(PAKAUTO试剂盒)检测阳性率为95%(19/20),其中结合型16例、游离型14例,两种方法检测血小板自身抗体阳性率的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。抗GPⅠb/Ⅸ抗体是最多的结合型自身抗体(80.0%),抗GPⅠa/Ⅱa抗体是最多的游离型自身抗体(70.0%)。结合HPA基因型分型检测结果,患者产生的抗体中均包含针对HPA-5a的自身抗体。结论SPA和ELISA(PAKAUTO试剂盒)检测PTR患者血小板自身抗体一致性较高,ELISA(PAKAUTO试剂盒)能区分出不同的抗体特异性及分布情况;SPA简便易行,在早期诊断方面更能体现其应用价值。

被动凝集法和化学发光法诊断儿童肺炎支原体感染的应用价值

目的探讨被动凝集法和化学发光法诊断儿童肺炎支原体(MP)感染的价值。方法选取本院2021年4—12月收治的53呼吸道感染患儿作为研究对象,抽取患儿空腹静脉血3mL,采用被动凝集法、化学发光法进行检测,以免疫荧光法检测结果为金标准,分析动凝集法、化学发光法对儿童肺炎支原体感染的检出率以及对儿童肺炎支原体感染的诊断效能。结果以免疫荧光法为金标准,检测53例呼吸道感染患儿,其结果显示MP感染43例,检出率为43/53(81.13%),非MP感染为10例,检出率为10/53(18.87%);其中化学发光法与病原学判断标准一致性好(Kappa=0.870),被动凝集法与病原学判断标准一致性尚可(Kappa=-0.537);化学发光法检测肺炎MP感染的特异度(40.00%)、敏感度(69.77%)、阳性预测值(83.33%)、阴性预测值(23.53%)及诊断准确率(64.15%)均高于被动凝集法检测,两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论被动凝集法、化学发光法均可对儿童肺炎支原体感染进行检查,化学发光法检测可提高对儿童MP感染早期的检测诊断率。

化学发光法与被动凝集法对诊断肺炎支原体感染的比较分析

对比化学发光法测肺炎支原抗体IgM、IgG与被动凝集法测肺炎支原体总抗体对肺炎支原体感染诊断效果。方法 选取2023年9月-2023年12月本院209例疑似肺炎支原体感染患者,所有患者采取化学发光法与被动凝集法检测,分析上述两种检测方法的准确度、灵敏度、特异度。结果 化学发光法联合检测肺炎支原体抗体IgM、IgG诊断准确度、灵敏度较、特异度比被动凝集法高(P<0.05)。结论 化学发光法在肺炎支原体感染诊断中的应用效果较被动凝集法优,该方法不仅具有较高的诊断准确度及特异度,同时可为疾病诊断提供参考,值得采纳。

胶体金法和被动凝集法在肺炎支原体检测中的比较

目的:比较胶体金法和被动凝集法检测肺炎支原体(MP)感染的符合率,探讨两种方法在快速诊断MP感染中的临床价值。方法:选取MP感染就诊者200例,其中儿童组100例,成年组100例,采用胶体金法和被动凝集法检测两组血清中MP-IgM抗体。结果:在儿童组中被动凝集法MP-IgM抗体阳性检出率略高于胶体金法,但差异无统计学意义(P>0.05),而在成年组中被动凝集法阳性检出率则显著高于胶体金法,差异有统计学意义(P<0.05);在儿童组中当MP-IgM抗体滴度1∶160,≥1∶320时,胶体金法阳性结果与被动凝集法的符合率分别为95.40%,95.30%;在成年组中当MP-IgM抗体滴度1∶80,1∶160,≥1∶320时,胶体金法阳性结果与被动凝集法的符合率分别为0,61.90%,63.80%。结论:在小儿MP检测中,对于高滴度MP-IgM抗体,胶体金法阳性符合率可达到临床诊断需求。临床医师可根据患者年龄、发病进程选择合适的方法,以实现简便、快速、准确的诊断肺炎支原体感染。

固相凝集法血小板抗体检测试剂的研制

目的研制固相凝集法检测血小板抗体试剂,用于临床血小板抗体的筛查和血小板输注前交叉配型。方法建立抗人血小板单克隆抗体细胞株并生产抗体,经亲和层析纯化后制备反应板,配备指示红细胞及抗人IgG,经优化组合研制出固相凝集法检测血小板抗体试剂,并与同类的MASPAT试剂进行比较。结果经766例临床样本检测,结果表明:该试剂与MASPAT试剂盒阳性一致性为97.35%,阴性一致性为99.69%,总一致性为99.35%。试剂重复性和稳定性均较满意。结论所研制试剂与MASPAT试剂盒质量相当,且操作简便快速、结果可靠直观,可满足临床血小板输血过程中快速检测和配型的要求。

应用微量凝集法检测家兔大肠杆菌抗体水平的试验

本试验应用兔源致病性大肠杆菌 E1、E2、E7株的培养物经 12 1℃高温处理 2 h,制成含 0 .5 %石炭酸生理盐水的大肠杆菌“O”抗原悬液 ,抗原凝集效果呈现出最佳的检测工作浓度为 12亿细菌 / m l,应用该方法检测免疫过兔大肠杆菌疫苗的家兔血清抗体峰值达 1∶ 12 8,而从非免疫兔和免疫过兔瘟、多杀性巴氏杆菌病。

固相凝集法血小板抗体检测与早期流产相关性探讨

目的研究探讨通过固相凝集法检测血小板抗体对判断早期流产的临床意义,并分析血小板抗体检测结果与早期流产的相关性。方法选取江西省赣州市人民医院产科2015年9月-2016年6月就诊的有早期流产史的50例女性作为研究对象,采用固相凝集法对其血小板抗体进行检测,并计算检测阳性率。同时,选取同期在产科接受产前检查的正常孕妇1092例作为对照,行相同检测,比较2组受检女性的血小板抗体检测阳性率。结果有早期流产史的观察组女性血小板抗体阳性检出率（22.0%）显著高于无早期流产史的正常孕妇（3.1%）（P〈0.05）;有早期流产史的女性中,流产次数〉2次的女性血小板抗体筛查阳性率（40.0%）显著高于流产次数≤2次的女性（17.5%）（P〈0.05）;血小板抗体检测阳性的女性早期流产的发生率（24.4%）显著高于检测阴性的女性（3.6%）（P〈0.05）,且血小板抗体筛查结果与早期流产之间存在显著相关性（r=0.782,P〈0.05）,其相对风险RR=6.96。结论通过固相凝集法对孕妇的血小板抗体进行筛查,有利于早期流产发生风险的预测,也有利于流产病因的分析及新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜的预防。

固相凝集法在产前血小板抗体检测中的临床意义

目的研究孕妇血小板血型抗体与习惯性流产的发病关系,并探讨胎母同种异体免疫血小板减少症(FMAIT)的预防措施。方法采用红细胞固相凝集法,对580例正常孕妇和45例有早期流产史患者进行血小板抗体的筛查。结果 580例正常孕妇,检出血小板抗体阳性16例(2.76%);45例有早期流产史的患者,检出血小板抗体阳性8例(17.78%),血小板抗体与早期流产有显著相关性(P<0.05)。结论采用固相凝集法进行产前血小板抗体筛查可为早期流产发生的风险提供诊断和治疗依据。

盐水法接合柱凝集法在ABO疑难血型检测中的应用

目的解决柱凝集法检测ABO血型抗原减弱或抗体减低所产生的正反定型不一致。方法将疑难血型患者2%红细胞50μl与50μl抗-A、抗-B标准血清反应,或者将患者的血清(血浆)50μl与ABO试剂细胞A1、B各50μl反应,然后把反应液接合到Liss/Coombs(Anti-IgG+C3d)卡上进行测定;同时利用此法进行抗-A、抗-B标准血清最大稀释度的检测。结果盐水法接合柱凝集法检测17例抗原弱化或抗体减低的疑难血型,全部出现明显阳性反应并符合血型鉴定结果,以此法检测抗-A、抗-B标准血清最大稀释度达到1∶4096。结论盐水法接合柱凝集法测定抗原弱化或抗体减低的ABO血型是一种高效、灵敏、简单易行的方法。

酶联免疫吸附法、甲苯胺红不加热血清试验、明胶颗粒凝集法检测梅毒血清抗体比较

目的比较酶联免疫吸附法(TP-ELISA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、明胶颗粒凝集法(TP-PA)三种梅毒血清学检测方法的效果,选择适合临床诊断和治疗的梅毒血清学筛查流程。方法对我院2010年9月～2011年5月期间临床住院及门诊14 307例血清标本同时进行TP-ELISA法和TRUST初筛,对TP-ELISA与TRUST结果不符的标本及TP-ELISA法(S/CO值)在0.70～0.99的标本进一步做TP-PA检测。结果 (1)对14 307例标本筛查出203例TP-ELISA阳性。203例TP-ELISA中115例TRUST阳性,88例TRUST阴性。TP-ELISA阳性检出率为1.42%(203/14307),TRUST的阳性检出率为0.80%(115/14307);TP-ELISA阳性TRUST阴性的标本88例,TRUST的漏检率为43.35%(88/203);对这88例血清标本进一步做TP-PA,其中1例阴性,TP-ELISA的假阳性率为0.49%(1/203)。(2)TP-ELISA法初筛S/CO值在0.70～0.99的标本23例,其TRUST均为阴性;TP-PA阳性2例,阴性21例。结论 (1)TP-PA和ELISA检测方法结果基本一致,检出率均优于TRUST。(2)对于TP-ELISA法初筛S/CO值在0.70～0.99之间同时TRUST为阴性的血清标本,建议做TP-PA确认实验,以排除假阴性。

实时PCR和颗粒凝集法检测儿童呼吸道肺炎支原体感染

目的分析呼吸道感染儿童中肺炎支原体的感染情况,比较肺炎支原体核酸(MP-DNA)和抗体(MP-Ab)检测结果。方法收集2011年深圳市宝安区妇幼保健院儿科门诊及住院呼吸道感染患者2 781例,利用实时荧光PCR和颗粒凝集法分别检测MP-DNA和MP-Ab。利用McNemar's和Kappa检验比较两种方法检测结果;利用χ2检验比较不同季节和年龄段儿童肺炎支原体感染率。结果①MP-Ab阳性率(19.17%)明显高于MP-DNA(5.57%)(χ2=257.0,P<0.001),两法间的一致性较差(kappa=0.115;95%CI,0.076～0.154);②MP-Ab滴度为<1∶40、1∶40、1∶80、1∶160及≥1∶320组中MP-DNA的阳性率分别为4.2%、6.2%、9.2%、10.0%及22.2%,差异有统计学差异(χ2=99.48,P<0.001);③儿童MP冬季的感染率(31.01%)明显高于其它三季(P<0.001)。④不同年龄段患儿MP感染率存在差异(χ2=378.209,P<0.001),≥6岁年龄段最高(59.66%)。结论①MP-Ab检测MP感染的阳性率高于MP-DNA,MP-DNA的阳性率随抗体滴度的增高而增加;②儿童肺炎支原体感染有季节性及年龄段差异。

抗人球蛋白试验的微柱凝集法与传统试管法在自身免疫性溶血性贫血检测中的对比研究

目的探讨微柱凝集法(Microtube column agglutination technology,MCAT)抗人球蛋白试验(antiglobulin test,AGT)在自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolytic anemia,AIHA)诊断中的临床意义。方法收集146例临床疑为AIHA患者的外周血标本,采用微柱凝集法和传统试管法(conventional tube technique,CTT)进行抗人球蛋白试验,并对2种方法AGT试验检测AIHA结果进行比较分析。结果 46例临床最终诊断AIHA病例中,MCAT法检出DAT阳性44例(95.7%),IAT阳性12例(26.1%);CTT法检出DAT阳性22例(47.8%),IAT阳性2例(4.3%);在MCAT法检出的44例患者中,IgG+C3d阳性23例(52.3%),单纯IgG阳性8例(18.2%),单纯C3d阳性13例(29.5%)。在CTT法检出的22例患者中,IgG+C3d阳性12例(54.5%),单纯IgG阳性3例(13.6%),单纯C3d阳性7例(31.8%)。MCAT法阳性检出率明显高于CTT法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论微柱凝集法抗人球蛋白试验较传统试管法操作更简单,更敏感,更容易标准化,结果判读客观。

被动凝集法和ELISA法检测肺炎支原体抗体及其IgM、IgG分型研究

目的研究成人呼吸道感染患者中肺炎支原体(MP)抗体效价检测和MP-IgM、MP-IgG抗体分型检测结果的一致性及其在MP诊断中的价值。方法分别采用被动颗粒凝集法(PPA)、ELISA法检测527例成人呼吸道感染者的MP抗体效价、MP-IgG和MP-IgM,对所测结果进行对比研究。结果经配对χ2检验发现,PPA法与ELISA法所测得的MP-IgM结果之间差异有统计学意义(P=0.000),且结果缺乏一致性(Kappa=0.256)。而PPA法与ELISA法所测得的MP-IgG结果之间差异无统计学意义(P=1.000),且具有良好的一致性(Kappa=0.702)。如果将MP-IgM和(或)MP-IgG阳性的患者均认为ELISA法检测阳性,与PPA法所报告的MP抗体结果之间差异无统计学意义(P=0.073),两种报告方式之间具有更好的一致性(Kappa=0.746)。结论在成人患者中,诊断MP感染不能仅依靠检测MP-IgM,而应动态检测MP-IgG或MP抗体效价,并结合患者病史、发病时间、用药情况等因素综合分析。

乳胶颗粒凝集法检测梅毒特异性抗体的性能评估

目的对乳胶颗粒凝集法梅毒螺旋体特异性抗体检测试剂（Mediace TPLA）进行性能评估。方法参考美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP系列文件,评估Mediace TPLA的分析性能。用Mediace TPLA检测111例梅毒确诊患者和78例排除梅毒感染者的血清,并与化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）进行比较。结果Mediace TPLA检测结果在8.0、28.6及166.0 T.U.这3个水平的总变异系数（CV）分别为8.77%、3.94%和6.57%;检测线性范围为0-250 T.U.;总回收率为95.31%;一定程度的溶血（血红蛋白〈4.8 g/L）、脂血（甘油三酯〈8 mmol/L）、黄疸（胆红素〈20μmol/L）及类风湿因子（〈450 IU/mL）对检测结果无明显影响;排除梅毒感染的30例抗核抗体（ANA）阳性患者、10例肝炎患者及10例妊娠期妇女血清检测结果为阴性。以CMIA结果为相对标准,Mediace TPLA Cut-off值取10 T.U.时,其检测灵敏度为99%、特异性为100%。结论 Mediace TPLA具有抗干扰能力强、重复性好、准确性好、线性范围宽及特异度高等特点,可在全自动生化分析仪中使用。

凝聚胺法与微柱凝集法检测孕妇IgG血型抗体效价应用比较

目的 比较凝聚胺法与微柱凝集法检测孕妇IgG血型抗体效价的效果.方法 选择2012年1月～2013年1月杭州市第一人民医院就诊的ABO血型不合的O型孕妇380例为研究对象,分别采用凝聚胺法与微柱凝集法检测IgG抗A（B）效价,比较两种检测方法的效率;分析ABO血型不合孕妇IgG抗A（B）效价与妊娠次数及年龄的关系.结果 ①在380例ABO血型不合孕妇中,＞1次妊娠孕妇检出IgG抗A（B）效价≥1∶64者所占比例[77.5％（110/142）]多于1次妊娠者[39.5％ （94/238）],差异有高度统计学意义（P＜0.01）;年龄31～40岁孕妇IgG抗A（B）效价≥1∶64者[61.4％（156/254）]多于21～30岁孕妇[38.1％（48/126）],差异有高度统计学意义（P＜0.01）.②380例血型不合孕妇中,微柱凝集法检测IgG抗A（B）效价≥1∶64者共352例,IgG抗A（B）效价＜1∶64者28例,凝聚胺法检测IgG抗A（B）效价≥1∶64者共302例,＜1∶64者78例,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 微柱凝集法有操作简便、结果准确、敏感性高、易标准化等诸多优点,更具临床应用价值.

胶乳凝集法和免疫比浊法检测D-二聚体结果比较

目的通过手工胶乳凝集法和全自动免疫比浊法对血浆D-二聚体进行测定,探讨全自动免疫比浊法测定血浆D-二聚体是否具有优越性。方法用手工胶乳凝集法和全自动免疫比浊法对130例住院患者进行血浆D-二聚体检测。结果经配对四格表χ2检验,胶乳凝集法和免疫比浊法测定D-二聚体结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫比浊法较胶乳凝集法灵敏度更高,特异性更强。

固相凝集法血小板配合实验在免疫性血小板输注无效中的应用

目的探讨固相凝集法血小板配合实验在解决免疫性因素引起的血小板输注无效中的作用。方法对18例血小板输注无效且血小板抗体筛选阳性的患者,采用固相凝集法进行多次血小板配合实验,找到配型相合的供者血小板输给患者,比较血小板配合实验前后的平均血小板输注间隔期和平均每次血小板的输入量。结果血小板配合实验前的血小板平均输注间隔期为5d,平均每次输注量为1.8个治疗量;配合实验后的血小板平均输注间隔期为8d,平均每次输注量为1.0个治疗量,配合实验前后两者的差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论固相凝集法血小板配合实验可提高血小板输注的效率,解决免疫性血小板输注无效的问题。

反向乳胶凝集法快速检测肉毒A、B型毒素

采用物理吸附法，将Ａ、Ｂ型肉毒抗体致敏于聚苯乙烯乳胶，检测内毒毒素。通过不同实验条件的反复比较实验证明：制备的乳胶，可检出Ａ型肉毒类毒素３．１～３．９ｎｇ／ｍｌ，Ｂ型肉毒类毒素７．８ｎｇ／ｍｌ。反应快速，几分钟之内肉眼观察显示凝集，３０～６０ｍｉｎ判断结果。特异性好，与炭疽保护性抗原、绿脓杆菌外毒素Ａ和葡萄球菌肠毒素（Ａ－Ｄ）反应阴性，Ａ、Ｂ型肉毒类毒素间基本不出现交叉反应。食物标本不需要特珠处理，食物成份对检出没有干扰。Ａ、Ｂ型肉毒抗体致敏乳胶置４～８℃存放１年，检出灵敏度和特异性未见降低。