抗营养因子大豆凝集素夹心ELISA检测方法的建立

为建立灵敏、特异的大豆凝集素(soybean agglutinin,SBA)酶联免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法。试验以SBA鼠源单克隆抗体为捕获抗体,SBA兔源多克隆抗血清为检测抗体,羊抗兔酶标抗体为二抗,通过对抗体的工作浓度及反应时间优化,建立SBA的双抗体夹心ELISA检测方法,并用建立的方法检测大豆、大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕中SBA含量。结果表明:建立SBA双抗夹心ELISA检测方法的检测范围为39.06~1250 ng/mL,检出限为3.00 ng/mL,样品添加回收率为77.96%~116.15%,变异系数为6.11%~18.34%,与大豆中胰蛋白酶抑制因子BBI、KTI,大豆球蛋白glycinin及大豆伴球蛋白-conglycinin等其他抗营养因子均无交叉反应。大豆中SBA含量显著高于大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);大豆粕中SBA含量显著高于膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);膨化大豆粕显著高于酶解大豆粕中SBA含量(P<0.05)。综上,本研究建立了灵敏度高、特异性好的SBA双抗夹心ELISA检测方法,该方法可用于饲料中大豆凝集素的监控检测。

血清半乳糖凝集素13、缺氧诱导因子1a水平与过敏性鼻炎病儿视觉模拟评分法评分的相关性

目的探究血清半乳糖凝集素13(Gal-13)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)水平与过敏性鼻炎视觉模拟评分法(VAS)评分的相关性。方法选取2022年1月至2023年7月在安徽省儿童医院治疗的过敏性鼻炎病儿69例,根据VAS评分分为轻度组(n=37)及中重度组(n=32),并选取非过敏性鼻炎病儿54例作为非过敏性鼻炎组,以同期体检的49例健康志愿者为对照组,采用酶联免疫吸附法检测血清Gal-13、HIF-1α水平,并收集病儿临床资料进行比较。采用Pearson法分析过敏性鼻炎病儿血清Gal-13、HIF-1α水平与VAS评分的相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC曲线)检测血清Gal-13、HIF-1α水平对过敏性鼻炎病情程度的诊断价值。结果与对照组相比,非过敏性鼻炎组及过敏性鼻炎组的血清Gal-13[(39.52±4.96)ng/L、(49.62±6.29)ng/L比(31.55±4.31)ng/L]、HIF-1α水平[(0.45±0.08)μg/L、(1.06±0.15)μg/L比(0.25±0.06)μg/L]显著增加(P<0.05),与非过敏性鼻炎组相比,过敏性鼻炎组的血清Gal-13、HIF-1α水平也显著增加(P<0.05);中重度组血清Gal-13、HIF-1α水平显著大于轻度组(P<0.05);两组病儿的年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05),两组病儿的病程、免疫球蛋白(Ig)E、白细胞介素(IL)-4、IL-9、干扰素γ(IFN-γ)以及VAS评分差异有统计学意义(P<0.05);血清Gal-13、HIF-1α水平与VAS评分均呈正相关(r=0.70,P<0.05;r=0.68,P<0.05);绘制ROC曲线,血清Gal-13、HIF-1α及联合AUC分别为0.84、0.84、0.94,联合诊断显著优于Gal-13(Z=2.06,P=0.049)、HIF-1α(Z=2.50,P=0.012)单独诊断。结论过敏性鼻炎病儿血清Gal-13,HIF-1α水平与VAS评分均呈正相关,且血清Gal-13、HIF-1α对于过敏性鼻炎的临床诊断以及病情严重程度判定具有一定参考价值。

半乳糖凝集素3和半乳糖凝集素3结合蛋白在子痫前期中的表达和意义

目的:探讨子痫前期患者外周血及胎盘组织中半乳糖凝集素3 (galectin-3, Gal-3)、半乳糖凝集素3结合蛋白(galectin-3 binding proteins, Gal-3BP)的表达及意义。方法:选取青岛大学附属医院收治的子痫前期患者30例为实验组,同期入院体检正常的孕妇30例为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清Gal-3、Gal-3BP的浓度,经免疫组织化学法检测胎盘组织Gal-3、Gal-3BP的表达。采用Pearson双变量关联性分析法分析Gal-3、Gal-3BP与患者临床特征的相关性。结果:实验组外周血Gal-3、Gal-3BP水平均高于对照组(P < 0.05);实验组胎盘组织Gal-3、Gal-3BP的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)。实验组外周血Gal-3、Gal-3BP浓度分别与平均动脉压、24小时尿蛋白呈正相关(P < 0.05)。结论:Gal-3和Gal-3BP可能与子痫前期的发病有关,或可成为预测子痫前期的生物标记物。

血清干扰素γ诱导蛋白10和甘露糖结合凝集素在再生障碍性贫血和骨髓增生异常综合征患者中的含量及临床意义

目的探讨血清干扰素γ诱导蛋白10(IP10)和甘露糖结合凝集素(MBL)在再生障碍性贫血(AA)和骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的含量及临床意义。方法选取2019年1月至2021年6月在昆山市第三人民医院初诊的26例AA患者(AA组)和42例MDS患者(MDS组)作为观察组,另选取30名健康体检者作为对照组。检测并比较两组血清IP10和MBL水平,分析两组血清IP10与MBL的相关性,比较两组不同淋巴细胞亚群比例及CD4^(+)、CD8^(+)淋巴细胞比值。结果AA组和MDS组血清IP-10水平均高于对照组,血清MBL水平均低于对照组,且AA组血清IP-10水平高于MDS组,AA组血清MBL水平低于MDS组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson线性相关分析结果显示,两组血清IP-10与MBL均呈负相关性(r<0,P<0.05)。AA组外周血总CD3^(+)T淋巴细胞比例高于MDS组,差异有统计学意义(P<0.05);两组外周血CD3-CD16+/CD56+NK淋巴细胞比例和CD19+B淋巴细胞比例比较差异无统计学意义。AA组CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例高于MDS组,而CD4^(+)/CD8^(+)比值低于MDS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过检测患者血清IP-10和MBL水平,以及分析外周血T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比值,有助于为AA及MDS的发病机制、早期鉴别诊断等方面提供更有价值的信息。

半乳糖凝集素3及血小板与淋巴细胞比值与75岁以上急性心肌梗死患者术后心室重构的关系

目的探讨外周血半乳糖凝集素3(Gal-3)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)水平变化及其与75岁以上急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后发生心室重构的关系。方法选择2021年3月至2023年9月在南阳市第一人民医院择期行PCI术的75岁以上老年AMI患者86例,根据PCI术后是否发生心室重构将患者分为心室重构组39例和非心室重构组47例。于PCI术前、术后3d、术后5d检测Gal-3、PLR水平,比较2组外周血Gal-3、PLR水平,用多因素logistic回归分析外周血Gal-3、PLR水平与老年AMI患者PCI术后发生心室重构的关系,用ROC曲线分析外周血Gal-3、PLR水平对老年AMI患者PCI术后发生心室重构的预测价值。结果2组患者术后3d、术后5d外周血Gal-3、PLR水平均较术前降低,且术后5d外周血Gal-3、PLR水平低于术后3d(P<0.05);心室重构组术前、术后3d、术后5d的外周血Gal-3、PLR水平均高于非心室重构组(P<0.05,P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,术前Gal-3(OR=1.986,95%CI:1.017~2.875,P=0.007)、术前PLR(OR=1.774,95%CI:1.132~2.428,P=0.014)均是AMI患者PCI术后发生心室重构的危险因素。ROC曲线显示,术前外周血Gal-3和PLR联合预测AMI患者PCI术后发生心室重构的曲线下面积为0.882(95%CI:0.824~0.941),优于二者单独检测(P<0.05)。结论AMI患者PCI术后外周血Gal-3、PLR水平较术前降低,术前外周血Gal-3、PLR均是PCI术后发生心室重构的危险因素,联合检测对AMI患者PCI术后发生心室重构有较高预测价值。

唾液酸结合Ig样凝集素15在不同亚型子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨唾液酸结合Ig样凝集素15(Siglec-15)在不同亚型子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法收集2018年1月至2021年12月期间在郑州大学第一附属医院接受手术治疗的124例子宫内膜癌患者的临床病理资料和石蜡标本(包括84例子宫内膜样腺癌和40例子宫内膜浆液性癌)。使用免疫组织化学法检测子宫内膜癌组织中Siglec-15蛋白的表达情况,分析Siglec-15与各临床病理特征之间的关系。结果Siglec-15在正常子宫内膜中均为阴性(n=10)或弱阳性表达(n=2),阳性表达率为0.0%(0/12),在不典型增生、子宫内膜样腺癌、子宫内膜浆液性癌组织中表达呈逐渐升高趋势,其阳性表达率分别为16.7%(2/12)、28.6%(24/84)、32.5%(13/40)。子宫内膜样腺癌中Siglec-15表达与肌层浸润、绝经与否有关(χ^(2)=4.978;P=0.026;χ^(2)=6.764,P=0.009)。子宫内膜浆液性癌中发生转移淋巴结灶中Siglec-15表达较原发灶有升高趋势。结论子宫内膜癌中Siglec-15表达升高,与肌层浸润、淋巴结转移等危险因素相关,靶向Siglec-15可能是治疗子宫内膜癌的新策略。

凝集素研究进展

凝集素包括微生物凝集素、植物凝集素、动物凝集素,它们在医药和农业科学领域中均有重要应用价值。不同来源凝集素的特点、分布及作用机理各不相同。凝集素的作用涉及细胞识别、微生物毒力决定子、植物抗虫、根瘤菌识别因子等诸多方面。

唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨免疫检查点唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15(Siglec-15)在食管鳞癌中的表达及意义。方法免疫组化检测食管鳞癌组织、癌旁正常食管组织中Siglec-15表达情况,并比较分析其与食管鳞癌患者临床病理特征的关系。结果Siglec-15在食管鳞癌组织中表达阳性率为60.0%(48/80),高于癌旁正常食管组织中的23.75%(19/80)(χ^(2)=21.595,P<0.001)。食管鳞癌组织中Siglec-15蛋白表达与患者肿瘤直径、T分期、TNM分期、N分期及分化程度有关(χ^(2)=7.500,P=0.006;χ^(2)=10.342,P=0.001;χ^(2)=22.547,P=0.016;χ^(2)=20.508,P<0.001;χ^(2)=12.586,P=0.002)。结论Siglec-15在食管鳞癌组织中高表达,与患者的疾病进展显著相关。

新型胶原样凝集素的研究进展

胶原样凝集素作为脊椎动物C-型凝集素超家族内的成员,以含有胶原样结构域及糖识别结构域为其显著特征。胶原样凝集素除了"经典"成员甘露聚糖结合凝集素(MBL)、表面活性蛋白A(SP-A)和SP-D外,还发现肝胶原样凝集素1(CL-L1)、肾胶原样凝集素1(CL-K1)和胎盘胶原样凝集素1(CL-P1)。在机体固有免疫系统中,这些"新"型胶原样凝集素除了同"经典"胶原样凝集素一样发挥着十分重要的作用外,它们还具有其独特的生理功能。本文综述了这些新发现的胶原样凝集素的分子结构、组织分布以及生物学功能等方面的研究进展。

血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1、胶质纤维酸性蛋白检测在新生儿缺血缺氧性脑病病情严重程度中的诊断价值

目的:探讨血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)病情严重程度的关系。方法:选择80例HIE患儿作为观察组,另选择90例健康新生儿作为对照组,收集所有患儿一般资料,并检测两组患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平,分析HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP与病情严重程度的相关性及预后不良的影响因素。结果:对照组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平低于观察组(均P<0.05)。重度组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平高于中度组、轻度组和对照组(均P<0.05)。Pearson相关分析显示,疾病严重程度与HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平呈正相关(均P<0.001)。随访预后良好患儿59例,预后不良21例,经多因素Logistic回归分析显示,产程异常、病情重度、S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP为影响HIE患儿预后的危险因素(均P<0.05)。结论:HIE患儿病情严重程度和预后与血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平有关,监测其水平变化有利于临床早期完善干预方案改善预后。

植物凝集素在农业病虫害防治和生物医药学应用中的研究进展

凝集素是一种可识别特异碳水化合物的蛋白质,其抗各类病毒的功能及应用前景十分广阔,越来越受到重视。本文综述了植物凝集素在农业病虫害防治和生物医药学应用中的研究进展,涵盖其来源、分类以及在农业和医疗等领域的具体功能与应用。在农业病虫害防治方面,植物凝集素在抵抗害虫、病原真菌、细菌和病毒等方面发挥作用,并在植物促生长方面具有实际应用。在生物医药学方面,玉竹凝集素(POL)、槲寄生凝集素(ML)和伴刀豆凝集素A(Con A)在抗肿瘤活性研究取得新进展,在肿瘤早期诊断与治疗中具有潜在应用价值。为提升育种质量,实现稳产、增产和提质,以及促进抗肿瘤活性生物医药学研究提供参考。

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血细胞凝集素抗肿瘤的作用机制及临床应用

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血细胞凝集素(PA-MSHA)在抗肿瘤领域的应用不断增加。PA-MSHA可以通过抑制表皮生长因子受体(EGFR)通路促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和迁移、分化以及改变耐药和细胞上皮-间充质转化(EMT)状态,同时PA-MSHA也通过Toll样受体(TLR)增强巨噬细胞和T细胞对肿瘤细胞的免疫杀伤和抑制。该文梳理并综述关于PA-MSHA抗肿瘤的机制及临床应用,认为PA-MSHA通过作用于细胞甘露糖基的调节过程改变了EGFR和TLR蛋白的糖基化。PA-MSHA可能作用的细胞膜蛋白包括更多的高甘露糖基信号通路受体,阐明PA-MSHA和甘露糖基之间的深层次关系对PA-MSHA的机制研究及临床应用意义重大。

甘露糖结合凝集素补体途径与糖尿病肾病的相关性的研究进展

糖尿病肾病是糖尿病最严重的微血管并发症,是终末期肾病的重要病因之一。甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)是糖尿病肾病发生发展重要的生物标志物,H型纤维胶原凝集素(H-ficolin)也与糖尿病肾病的发展有关,而MBL相关丝氨酸蛋白酶与糖尿病肾病的关系有待进一步研究。

中国恒河猴DNGR-1分子C型凝集素样结构域在大肠杆菌系统表达

目的获得恒河猴C型凝集素结构域家族9的A成员(Clec9A)基因编码区序列;体外表达CLEC9A的C型凝集素样结构域(CTLD)。方法利用Clec9A基因特异引物,反转录PCR扩增中国恒河猴Clec9A基因编码区,亚克隆至pGEM-T载体,获得pGEM-T-DNGR质粒并进行测序。构建CLEC9A分子的CTLD区原核表达质粒pET-32a-CTLD,转化BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,并用SDS-PAGE和Western blot法对目的蛋白进行鉴定。结果 PCR扩增得到726 bp的Clec9A编码区全长,测序和序列比对发现恒河猴CLEC9A编码区的核苷酸序列与人和小鼠的同源性分别为95.0%和73.1%,推测的氨基酸同源性分别为91.7%和57.3%。体外表达获得相对分子质量(Mr)约32 000的CTLD融合蛋白,Western blot方法鉴定发现其与人DNGR-1分子具有相似的抗原性。结论中国恒河猴Clec9A基因与人的高度相似并能编码与人CTLD抗原性相似的蛋白。

补肾化瘀方对PCOS患者血清半乳糖凝集素-3、IL-6及CRP水平的影响

目的 探讨补肾化瘀方治疗肾虚血瘀型多囊卵巢综合征(PCOS)患者的临床疗效及可能的作用机制。方法 将2020年9月至2021年9月期间,首次就诊于浙江省中西医结合医院生殖医学科门诊的60例肾虚血瘀型PCOS患者按照随机数字表法分为对照组和治疗组,各30例。对照组给予二甲双胍治疗,治疗组给予补肾化瘀方治疗,两组均治疗3个月经周期。观察治疗前后中医证候积分、性激素、糖脂代谢相关指标及半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、白介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)水平的变化情况。结果 治疗前,两组患者性激素、糖代谢相关指标、脂代谢相关指标、炎症因子水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,治疗组PCOS患者排卵率较对照组高(76.83%比49.43%,P<0.01)。与治疗前相比,两组患者中医证候积分[(4.18±2.58)分比(12.50±2.17)分,(6.07±2.94)分比(11.97±2.44)分,P<0.01]、空腹血糖[(5.05±0.45)mmol/L比(5.27±0.70)mmol/L,(4.92±0.56)mmol/L比(5.44±0.37)mmol/L,P<0.05]、空腹胰岛素[(9.66±4.54)mU/L比(13.48±4.73)mU/L,(8.44±2.81)mU/L比(12.20±5.19)mU/L,P<0.05]及胰岛素抵抗指数[(2.18±1.05)比(3.17±1.24),(1.89±0.76)比(2.99±1.42),P<0.05]降低。与对照组比较,治疗组中医证候积分降低[(4.18±2.58)分比(6.07±2.94)分,P<0.05],黄体生成素[(10.12±1.72)mIU/mL比(12.54±2.56)mIU/mL,P<0.05]、黄体生成素/卵泡刺激素[(1.65±0.32)比(1.95±0.40),P<0.05]、睾酮[(0.47±0.12)ng/mL比(0.57±0.16)ng/mL,P<0.05]水平降低,三酰甘油[(1.31±0.62)mmol/L比(1.66±0.56)mmol/L,P<0.05]、总胆固醇[(3.91±0.98)mmol/L比(4.40±0.70)mmol/L,P<0.05]、低密度脂蛋白[(2.60±0.61)mmol/L比(3.05±0.79)mmol/L,P<0.05]水平降低,高密度脂蛋白水平升高[(1.41±0.17)mmol/L比(1.31±0.17)mmol/L,P<0.05]。与对照组比较,治疗组Galectin-3 [(8.71±1.67)ng/mL比(9.91±2.23)ng/mL,P<0.05]、IL-6 [(30.24±3.85)pg/mL比(32.62±4.97)pg/mL,P<0.05]、CRP[(2.80±0.91)mg/L比(3.32±0.64)mg/L,P<0.05]水平降低。结论 补肾化瘀方可有效缓解肾虚血瘀型PCOS临床症状,降低血清炎症指标Galectin-3、IL-6及CRP水平,改善糖脂代谢紊乱,调节性激素水平,促进排卵。

大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能,实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象,研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示,LcClec4e cDNA全长1546 bp,开放阅读框(ORF)771 bp,编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区,无信号肽,C端含有一个糖识别结构域(CRD),其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明,LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示,LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布,且在肝脏中表达量最高;LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达,且在巨噬细胞中表达量最高;经灭活溶藻弧菌刺激后,LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段(recombinant LcClec4e-extracellular domain,rLcClec4e-ex)具有Ca^(2+)依赖性的凝集活性,可凝集小鼠、家兔的红细胞,以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用,说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。上述结果提示,LcClec4e可能作为一种模式识别受体,通过结合病原菌表面的糖类病原体相关分子模式来识别病原,参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。

植物凝集素在作物转基因中的利用现状

简述了几种代表性植物凝集素在作物转基因中的研究利用现状,提出了进一步研究的方向。

天花粉凝集素提取工艺优化及其抗补体活性研究

目的优化天花粉凝集素提取工艺,并考察其抗补体活性。方法在单因素试验基础上,以提取溶剂、液料比、提取时间、pH为影响因素,凝集活力为评价指标,响应面法优化提取工艺。通过细胞溶血实验测定抗补体活性。结果最佳条件为液料比21∶1,提取时间24 h,pH 7,提取溶剂PBS缓冲液,凝集活力为(6.16±0.14)×10^(3)HU/mg。天花粉凝集素溶血的CH_(50)值为(10.87±0.1)mg/mL。结论该方法简便、稳定、可行,可用于提取具有较强抗补体活性的天花粉凝集素。

豆类凝集素研究进展

豆类凝集素是凝集素家族中的重要成员,主要存在于各种豆科植物的种子中。豆类凝集素是一类蛋白质或糖蛋白,能够识别并结合特定的碳水化合物,对微生物具有抑制作用。此外,豆类凝集素作为一种抗营养物质,会对动物的消化道产生影响,且对动物的免疫系统产生不利影响。文章对豆类凝集素的起源和分布、纯化原理和方式、对微生物和动物的影响进行了综述,并在此基础上对豆类凝集素的应用进行了展望,以期为凝集素的深入研究和应用以及豆类饲料资源的合理利用和加工方式改进提供参考。