血清壳多糖酶3样蛋白1和几丁质酶1在脓毒症新生儿中的表达变化及其临床价值研究

目的:探讨血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)和几丁质酶1(CHIT1)在脓毒症新生儿中的表达变化及临床价值。方法:选取新生儿脓毒症95例为脓毒症组,根据病情严重程度分为严重脓毒症组(65例)和脓毒症休克组(30例)。选取健康新生儿65例为对照组。检测血清CHI3L1和CHIT1水平以及白细胞计数、中性粒细胞计数、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)。分析血清CHI3L1、CHIT1水平与白细胞和中性粒细胞计数、TNF-α、IL-4、PCT、CRP的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CHI3L1、CHIT1水平对脓毒症患儿预后的预测价值。结果:脓毒症组血清CHI3L1、CHIT1水平高于对照组(均P<0.05)。脓毒症休克组患儿血清CHI3L1和CHIT1水平、中性粒细胞计数、TNF-α、IL-4、PCT、CRP高于严重脓毒症组(均P<0.05)。脓毒症患儿血清CHI3L1、CHIT1水平与中性粒细胞计数、TNF-α、IL-4、PCT及CRP呈正相关(均P<0.05)。95例脓毒症患儿中病死15例,存活80例,病死组血清CHI3L1、CHIT1水平高于存活组(均P<0.05)。血清CHI3L1、CHIT1水平对脓毒症患儿预后均有一定的预测价值,且两者联合预测价值更高(均P<0.05)。结论:脓毒症新生儿血清CHI3L1和CHIT1水平升高,与病情严重程度及不良预后有关,两者联合对脓毒症新生儿的预后具有较高的预测价值。

不同类型糖尿病视网膜病变患者血清和肽素和几丁质酶1水平的变化及影响因素

目的探讨不同类型糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者血清和肽素和几丁质酶1(Chitotriosidase,CHIT1)水平的变化,并分析其影响因素。方法选取2型糖尿病患者197例作为研究对象,将患者分为:无糖尿病视网膜病变(non-diabetic retinopathy,NDR)组、非增生型糖尿病视网膜病变(non-proliferative diabetic retinopathy,NPDR)组、增生型糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)组;另选取同期在我院进行体检的健康体检者60人作为正常对照(normal control,NC)组。收集所有受试者的一般资料,抽取受试者晨起空腹静脉血5 mL,检测总胆固醇、甘油三酯、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、血肌酐及空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、糖化血红蛋白(hemoglobin Alc,HbA1c)、空腹胰岛素(fasting plasma insulin,FINS)水平,用稳态模型评估法计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IR),计算肾小球滤过率。采用ELISA法测定血清和肽素和CHIT1含量。结果NDR组、NPDR组、PDR组患者血清的和肽素、CHIT1含量均高于NC组,且随着DR病情进展逐渐升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与NC组相比,NDR组、NPDR组、PDR组患者的FPG、HbA1c、HOMA-IR水平均依次升高,PDR组最高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);各组受试者的总胆固醇、甘油三酯、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、血肌酐、肾小球滤过率、FINS水平组间比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Pearson相关性分析结果显示:血清和肽素含量与年龄、DM病程、SBP、FPG、HbA1c、HOMA-IR、CHIT1含量均呈正相关(r分别为0.11、0.75、0.52、0.83、0.88、0.58、0.96,均为P<0.05);血清CHIT1含量与年龄、DM病程、SBP、DBP、FPG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、和肽素含量呈正相关(r分别为0.12、0.77、0.48、0.12、0.84、0.88、0.14、0.61、0.96,均为P<0.05)。多元线性逐步回归分析结果显示:HbA1c、SBP、FPG是血清和肽素含量的独立影响因素,HbA1c、FPG、DM病程、HOMA-IR是血清CHIT1含量的独立影响因素。结论DR患者的和肽素和CHIT1水平显著升高,且与DR的程度相关,二者可能共同参与了DR的发生发展。

几丁质酶1和热休克蛋白72对2型糖尿病肾病的早期诊断价值

目的探讨几丁质酶1和热休克蛋白72对2型糖尿病肾病的早期诊断价值。方法选取河南中医药大学第一附属医院2型糖尿病患者180例,根据24 h尿白蛋白排泄率(UAER)分为糖尿病无肾病组55例、早期糖尿病肾病组61例及临床糖尿病肾病组64例。另选取同期于该院体检的健康志愿者50例为健康对照组。比较各组受试者的血清几丁质酶1、热休克蛋白72及肾功能相关指标,并作指标间的相关性分析,并采用受试者操作特征(ROC)曲线分析几丁质酶1、热休克蛋白72对2型糖尿病肾病的早期诊断价值。结果糖尿病无肾病组、早期糖尿病肾病组、临床糖尿病肾病组血清几丁质酶1、热休克蛋白72、尿酸(UA)及糖化血红蛋白(HbA1c)水平均高于健康对照组(P<0.05),且糖尿病无肾病组、早期糖尿病肾病组、临床糖尿病肾病组的上述指标水平均呈逐渐上升趋势。几丁质酶1、热休克蛋白72与UA、HbA1c呈正相关(P<0.05)。几丁质酶1与热休克蛋白诊断2型糖尿病肾病的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.762和0.815,敏感性和特异性均>0.7。结论2型糖尿病肾病血清几丁质酶1与热休克蛋白72水平升高,且与肾功能指标存在相关性,两者有助于2型糖尿病肾病的早期诊断。

血清几丁质酶1、鸢尾素表达与不同类型糖尿病视网膜病变患者微血管损伤的相关性

目的研究血清几丁质酶1(CHIT1)、鸢尾素(Irisin)的表达与不同类型糖尿病视网膜病变(DR)患者微血管损伤的相关性。方法选取我院2018年6月至2020年6月收治的106例糖尿病患者,根据不同疾病类型分为A组(增生型DR)、B组(非增生型DR)、C组(无视网膜病变)。检测各组患者血清CHIT1、Irisin水平以及外周血循环内皮细胞(CEC)、内皮祖细胞(EPC)、循环祖细胞(CPC)比例并进行比较,采用Pearson相关性分析DR患者血清CHIT1、Irisin的水平与CEC、EPC、CPC比例的相关性。Logistic回归分析影响增生型DR发生的危险因素。结果A组、B组、C组患者血清CHIT1、Irisin水平以及外周血CEC、EPC、CPC比例差异均有统计学意义(均为P<0.001),其中A组患者血清CHIT1水平、CEC比例均明显高于B组、C组,而血清Irisin水平、EPC和CPC比例明显均低于B组、C组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,DR患者血清CHIT1水平与CEC比例均呈正相关,与EPC和CPC比例均呈负相关,而DR患者血清Irisin水平与CEC比例均呈负相关,与EPC和CPC比例均呈正相关(均为P<0.001)。增生型DR患者的糖尿病病程、血清CHIT1水平、尿微量白蛋白均明显高于其他患者,增生型DR患者的血清Irisin水平均明显低于其他患者,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Logistic回归分析显示,糖尿病病程、CHIT1水平、Irisin水平、尿微量白蛋白均是糖尿病患者发生增生型DR的影响因素(均为P<0.05)。结论DR患者血清CHIT1、Irisin异常表达,且与微血管损伤密切关联,是DR进展至增生型DR的影响因素。

血清几丁质酶-3样蛋白1与血液透析患者预后关系的研究

目的探讨血清几丁质酶-3样蛋白1(chitinase 3-like protein 1,CHI3L1)与血液透析患者全因死亡和心脑血管疾病死亡之间的关系。方法本研究为前瞻性队列研究,病例来自2014年9月北京大学第三医院肾内科维持性血液透析患者。测定基线血CHI3L1水平,并根据中位数将患者分为高CHI3L1组和低CHI3L1组,随访9年。用Kaplan-Meier生存分析高CHI3L1组和低CHI3L1组患者生存率的差异,用限制性立方样条(restricted cubic spline,RCS)曲线描述CHI3L1与全因死亡率的剂量反应关系,用多因素COX比例风险模型分析患者全因死亡或心脑血管疾病死亡的独立危险因素。结果共纳入109例患者,随访时间为80.0(38.2,113.2)个月。Kaplan-Meier生存分析显示高CHI3L1组患者全因死亡率高于低CHI3L1组(χ^(2)=4.720,P=0.030),2组患者心脑血管疾病死亡率无明显差异(χ^(2)=1.954,P=0.162)。当CHI3L1≥199.8 ng/ml时,全因死亡率随着CHI3L1水平的增加有明显增加(HR=1.747,95%CI:1.035~2.947,P=0.037)。COX回归分析结果显示:年龄增加(HR=1.029,95%CI:1.001~1.056,P=0.040)、长透析龄(HR=2.251,95%CI:1.310~3.868,P=0.003)、收缩压高(HR=1.022,95%CI:1.008~1.036,P=0.002)、血肌酐低(HR=0.135,95%CI:0.064~0.283,P<0.001)均为血液透析患者全因死亡的独立危险因素,多种因素校正后高CHI3L1仍然是患者全因死亡的独立危险因素(HR=1.963,95%CI:1.010~3.813,P=0.047)。结论高CHI3L1组患者全因死亡率高于低CHI3L1组患者,血CHI3L1可能是血液透析患者全因死亡的独立预测指标。

血清几丁质三糖苷酶、几丁质酶3样蛋白1与2型糖尿病周围神经病变的相关性分析

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清几丁质三糖苷酶(CHIT1)、几丁质酶3样蛋白1(YKL-40)与糖尿病周围神经病变(DPN)的相关性。方法选取2018年6月~2021年6月在我院接受治疗的160例T2DM患者作为T2DM组,根据是否合并DPN将其再分为DPN组(76例)和非DPN组(84例),另选取我院体检中心与T2DM组年龄和性别匹配的160名健康受试者作为对照组。采集所有受试者入院当天或次日上午的空腹血样,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中CHIT1和YKL-40的表达水平。比较DPN组和非DPN组患者一般临床资料、实验室检查指标及各组受试者CHIT1和YKL-40的表达水平。采用多因素logistic回归分析评估DPN发生的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析评估CHIT1和YKL-40水平对于T2DM患者发生DPN的诊断价值。结果DPN组患者TC水平显著高于非DPN组(P<0.05),两组患者年龄、性别、BMI、T2DM病程、LDL-C、HDL-C、TG及FPG水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。T2DM组和DPN组血清CHIT1和YKL-40的表达水平分别显著高于对照组和非DPN组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示T2DM病程、血清CHIT1和YKL-40表达水平升高均为DPN发生的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清CHIT1和YKL-40二者联合预测T2DM患者发生DPN的曲线下面积(AUC)均大于单一指标(P<0.05)。结论血清CHITI和YKL-40水平升高与T2DM发生和DPN进展有关,二者联合检测对T2DM患者DPN的诊断具有较高价值。

血清几丁质酶-3类蛋白-1、CC趋化因子受体2水平与急性缺血性脑卒中患者病情严重程度的关系及对预后的评估价值

目的探讨血清几丁质酶-3类蛋白-1(CHI3L1)、CC趋化因子受体2(CCR2)水平与急性缺血性脑卒中(AIS)病情严重程度的关系及对预后的评估价值。方法选取2021年6月至2022年12月于邯郸市第一医院就诊的AIS患者129例作为AIS组,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估病情严重程度,将患者分为轻度组63例、中度组39例和重度组27例,随访3个月后依据改良Rankin量表(mRS)分为预后良好组97例和预后不良组32例。另选取同期97例体检者作为对照组。检测并比较AIS组与对照组、不同严重程度和不同预后AIS患者血清CHI3L1、CCR2水平。利用二元Logistic回归法分析AIS患者预后的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线评估CHI3L1、CCR2水平对AIS患者预后的预测价值。结果AIS组血清CHI3L1、CCR2水平高于对照组(t=38.958、21.382,P<0.05);轻度组、中度组和重度组血清CHI3L1、CCR2水平差异有统计学意义(F=31.538、34.760,P<0.05);预后良好组患者血清中的CHI3L1、CCR2水平低于预后不良组(t=6.226、8.694,P<0.05);Logistic回归结果显示,CHI3L1、CCR2水平均是AIS患者预后不良的危险因素(OR=1.493、2.593,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清CHI3L1、CCR2及两者联合预测AIS患者预后的曲线下面积分别为0.869、0.882、0.965,敏感度为70.10%、86.60%、87.63%,特异度为93.75%、90.62%、96.87%,两者联合预测优于血清CHI3L1、CCR2单独预测(Z=2.990、2.931,P<0.05)。结论AIS患者病情越严重血清CHI3L1、CCR2水平越高,两者均可预测AIS患者预后不良,两者联合预测效能更佳。

急性肾盂肾炎患者中段尿病原菌检测及与血清几丁质酶3样蛋白1、降钙素原表达的相关性

目的探讨急性肾盂肾炎患者中段尿病原菌检测及与血清几丁质酶3样蛋白1(YKL-40)、降钙素原(PCT)表达的相关性。方法选择2018年10月至2022年10月焦作市人民医院收治的64例急性肾盂肾炎患者,将其作为急性肾盂肾炎组,另选择同期于本院进行健康体检的70例健康体检者,将其作为健康对照组。将急性肾盂肾炎组中的所有患者按照发病次数分为初次发作组(44例)和多次发作组(20例)。将健康对照组研究对象与急性肾盂肾炎患者各项血清指标进行对比,将初次发作组和多次发作组患者各项血清指标进行对比,将初次发作型和多次发作型患者中段尿病原菌分布情况进行对比,对比革兰阴性菌组和革兰阳性组急性肾盂肾炎患者各项血清指标,采用Pearson软件分析不同病原菌感染急性肾盂肾炎患者血清YKL-40、PCT与胱抑素C(CysC)指标的相关性。结果相较于健康对照组,急性肾盂肾炎组患者血清YKL-40、PCT、CysC水平更高(均P<0.05);64例急性肾盂肾炎组患者中有40例病原菌培养阳性,其中初次发作组22例,多次发作组18例;共培养出43株病原菌,其中初次发作组22株,多次发作组21株,两组患者均以革兰阴性菌为主;相较于革兰阴性菌组,革兰阳性菌组患者血清YKL-40、PCT、CysC水平更低(均P<0.05);不同感染类型患者血清YKL-40、PCT水平与CysC呈正相关(均P<0.05)。结论急性肾盂肾炎患者血清PCT、YKL-40水平异常升高,且相较于革兰阳性菌组患者,感染革兰阴性菌患者上述指标水平较高,不同感染类型患者血清YKL-40与PCT水平呈正相关,临床可结合血清YKL-40与PCT水平及感染情况对患者采取合适的治疗措施。

日本沼虾几丁质酶1C（MnCht1C）基因的克隆及表达分析

本研究从日本沼虾精巢均一化cDNA文库中筛选到一条MnCht1C表达序列片段（expressed sequence tags,EST）,该序列具有完整的基因编码区,编码区长度为1 473 bp,编码490个氨基酸。MnCht1C编码的蛋白质具有完整的几丁质酶结构,N端的前23个氨基酸为信号肽,第24-406位氨基酸序列为几丁质酶催化结构域（catalytic domain）,第407-433位氨基酸序列为Ser/Thr富含区（S/T-rich linker）,其作用在于连接催化结构域与几丁质结合结构域。qPCR分析MnCht1C在日本沼虾各组织和各发育阶段表达情况,研究发现其主要在肝胰腺、肠、眼柄、表皮、精巢5种组织中表达;幼体发育时期不表达,而直至变态时期才开始表达。MnCht1C在日本沼虾整个蜕壳周期的表达呈波动性,蜕壳中期表达水平最高,随着蜕壳这一生理过程的完成,其表达水平也相应地下降直至蜕壳间期无表达水平检出,随着新一轮蜕壳的进行,其表达水平又开始逐渐升高。本研究结果为研究几丁质酶基因在日本沼虾和其他甲壳动物蜕壳及生殖发育中的作用提供参考。

血清前列腺素内过氧化物合酶2、几丁质酶3样蛋白1水平与精神分裂症患者认知功能的关系

目的:探究血清前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin endoperoxide synthase 2,PTGS2)、几丁质酶3样蛋白1(chitinase 3-like protein 1,CHI3L1)水平与精神分裂症患者认知功能的关系。方法:选取130例精神分裂症患者设为研究组,同期来院体检的96名健康体检者作为对照组。采用精神分裂症认知功能成套测验(MATRICS consensus cognitive battery,MCCB)评分评估研究对象的认知功能。检测两组研究对象血清PTGS2、CHI3L1水平。Pearson法分析精神分裂症患者血清中PTGS2与CHI3L1水平与MCCB评分的相关性。结果:与对照组相比,研究组精神分裂症患者血清PTGS2、CHI3L1水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05),精神分裂症患者连线测验、语言记忆、言语流畅、符号编码、迷宫测验、视觉记忆的MCCB分值均降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。血清PTGS2、CHI3L1水平与连线测验、语言记忆、言语流畅、符号编码、迷宫测验、视觉记忆的MCCB分值均呈负相关(P均<0.05)。结论:血清PTGS2、CHI3L1水平均与精神分裂症患者的认知功能呈负相关,是评估精神分裂症患者认知功能的潜在标志物。

几丁质酶-3样蛋白-1:一种血清炎症标志物

几丁质酶-3样蛋白-1(chitinase-3 like protein-1,CHI3L1)是一种与炎症反应相关的蛋白质,研究发现其参与多种炎症性疾病、肿瘤和神经退行性疾病的病理生理过程,在这些疾病的诊断和治疗中具有一定的研究价值和前景。本文回顾CHI3L1与多种疾病发生和发展的关系。

糖尿病肾脏疾病患者血清脑啡肽酶及几丁质酶1水平变化及影响因素分析

目的分析DKD患者血清脑啡肽酶(NEP)及几丁质酶1(CHIT1)水平变化及影响因素。方法选取2017年5月至2019年3月于保定市第一中心医院内分泌科就诊的T2DM患者167例,按照不同UACR水平分为正常白蛋白尿组(UACR<30 mg/g)54例、微量白蛋白尿组(30≤UACR<300 mg/g)62例和大量白蛋白尿组(UACR≥300 mg/g)51例,另选取同期健康体检人群50名为正常对照(NC)组。ELISA法测定血清NEP、CHIT1水平,Spearman相关分析血清NEP、CHIT1水平与各指标间的相关性,多元逐步回归分析血清NEP、CHIT1的影响因素。结果各组血清NEP、CHIT1水平随UACR升高依次升高[(102.39±7.51)vs(111.14±13.97)vs(118.11±16.62)vs(126.82±19.31)U/L,(0.79±0.21)vs(1.28±0.18)vs(1.71±0.31)vs(2.30±0.29)ng/ml,P<0.05]。Spearman相关分析显示,血清NEP水平与年龄、SBP、BMI、血肌酐(Scr)、BUN、FPG、HbA1c、UAlb、UAER、UACR、24 hUAlb、CHIT1呈正相关(P<0.01),与AST、血清白蛋白(ALB)呈负相关(P<0.05);血清CHIT1水平与SBP、BMI、TG、Scr、BUN、eGFR、FPG、HbA1c、UAlb、UAER、UACR、24 hUAlb、NEP呈正相关(P<0.01),与AST、ALB呈负相关(P<0.05或P<0.01)。多元逐步回归分析结果显示,BUN、UAlb、CHIT1是血清NEP的影响因素;Scr、ALB、eGFR、UACR、NEP是血清CHIT1的影响因素。结论DKD患者血清NEP、CHIT1水平均升高,与严重程度相关,提示NEP、CHIT1参与DKD的发生发展。

中华稻蝗几丁质脱乙酰基酶1基因的分子特性及功能

【目的】通过研究中华稻蝗Oxya chinensis几丁质脱乙酰基酶1(chitin deacetylase 1,CDA1)基因的分子特性和生物学功能,为新型农药靶标筛选提供理论基础。【方法】在中华稻蝗转录组数据库搜索获得几丁质脱乙酰基酶基因片段,用生物信息学方法对其进行同源比对分析并作聚类关系图;利用c DNA末端快速扩增(rapidamplification of c DNA ends,RACE)获得该基因c DNA全长序列;通过Real-time quantitative PCR(q PCR)方法检测Oc CDA1在5龄若虫不同组织部位和不同发育时期的表达情况,并采用RNAi技术研究Oc CDA1在飞蝗生长发育中的功能。【结果】获得中华稻蝗几丁质脱乙酰基酶1基因全长c DNA,命名为Oc CDA1(Gen Bank登录号:KP271171)。Oc CDA1在前肠、体壁、后肠和脂肪体组织中高表达,在5龄第1天表达量显著高于以后几天。RNAi结果显示,注射该基因的dsRNA后,Oc CDA1基因的表达量降低了93.3%。Oc CDA1基因沉默后虫体出现进食减少、发育迟缓现象,总死亡率达到95.2%,其中38.1%的试虫在蜕皮前死亡,57.1%出现因蜕皮困难而死亡的表型。【结论】Oc CDA1在中华稻蝗的发育中起着重要作用,该基因沉默引起虫体进食减少和蜕皮异常从而导致死亡。

类几丁质酶3蛋白1在申克孢子丝菌刺激巨噬细胞的表达和作用研究

目的探讨巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1在申克孢子丝菌刺激后的表达和作用研究。方法通过测定巨噬细胞与申克孢子丝菌共孵育时杀菌率,使用实时荧光定量PCR检测不同时间点巨噬细胞的类几丁质酶3蛋白1mRNA表达水平,同时体外实验检测类几丁质酶3蛋白1对申克孢子丝菌的抑菌作用,同时采用空白对照和白念珠菌阳性对照比较两者的差异。结果巨噬细胞可吞噬杀灭申克孢子丝菌分生孢子,也可吞噬阳性对照白念珠菌酵母相细胞。巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1mRNA表达水平在申克孢子丝菌组和空白对照组无明显差别,作用于阳性对照的白念珠菌组的巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1mRNA表达水平明显上调。体外实验显示类几丁质酶3蛋白1对申克孢子丝菌分生孢子的无明显抑制作用,对白念珠菌繁殖却有较强的抑制作用。结论申克孢子丝菌未能诱导巨噬细胞表达类几丁质酶3蛋白1抑制其增殖从而逃逸清除,而白念珠菌感染可上调巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1表达从而抑制其增殖减轻感染,这可能是申克孢子丝菌特有的致病作用机制之一。

飞蝗几丁质酶5-1抗体制备及表达特性分析

【目的】通过制备飞蝗(Locusta migratoria)几丁质酶5-1(LmCht5-1)的多克隆抗体,建立飞蝗体内LmCht5-1蛋白水平检测方法,分析LmCht5-1在4龄飞蝗的表达特性及组织定位。【方法】采用MEGA软件对LmCht5-1和LmCht5-2氨基酸序列进行比对,利用Expression网站对LmCht5-1氨基酸序列进行抗原表位预测分析,获得LmCht5-1抗原结构区域;以飞蝗c DNA为模板,通过PCR扩增LmCht5-1的抗原片段;同时通过酶切连接构建含有鸡血清白蛋白OVA的载体p ET32a-OVA;然后通过酶切连接将LmCht5-1插入到p ET32a-OVA载体构建p ET32a-OVA-LmCht5-1;将p ET32a-OVA-LmCht5-1转入表达菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导表达重组蛋白OVA-LmCht5-1;利用Ni-NTA纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。通过ELISA方法检测抗体效价;利用Western blot检测抗体特异性。提取4龄飞蝗不同日龄表皮,采用Western blot分析LmCht5-1蛋白表达模式。对4龄飞蝗注射ds LmCht5-1,检测蛋白水平LmCht5-1表达量,并通过免疫组化方法对LmCht5-1进行定位及功能分析。【结果】通过LmCht5-1和LmCht5-2序列比对和抗原表位预测分析,获得LmCht5-1的471—533AA可作为抗原区域;通过酶切连接分别获得p ET32a-OVA和p ET32a-OVA-LmCht5-1。经诱导表达和纯化后获得重组蛋白OVA-LmCht5-1,分子量为71.34 k D;免疫后制备多克隆抗体OVA-LmCht5-1,ELISA检测效价为1﹕102 400。多克隆抗体OVA-LmCht5-1用于Western blot检测时可特异性识别LmCht5-1,与LmCht5-2蛋白无交叉反应。利用Western blot方法检测4龄若虫各日龄表皮中LmCht5-1蛋白的表达,发现LmCht5-1蛋白随发育日龄其表达量逐渐增加,在蜕皮当天达到峰值,蜕皮后快速降至最低点。对飞蝗若虫N4D2注射ds LmCht5-1,检测到在N4D5时,LmCht5-1的转录水平和蛋白水平均被显著抑制,抑制率分别为70.0%和73.6%。选取注射ds LmCht5-1和ds GFP的4龄飞蝗表皮,进行免疫组化实验显示LmCht5-1定位于表皮细胞和旧表皮中,其功能失活引起旧表皮中几丁质不降解。【结论】获得飞蝗LmCht5-1多克隆抗体可特异性识别LmCht5-1,可用于Western blot和免疫组化检测。明确LmCht5-1在飞蝗4龄若虫蜕皮当天表达最高,定位于表皮细胞和旧表皮中。ds LmCht5-1可减少表皮细胞和旧表皮中LmCht5-1的表达,阻碍旧表皮中几丁质的降解。

缺血性卒中血几丁质酶3样蛋白1水平与神经功能损害程度的关系

目的探讨血几丁质酶3样蛋白1(chitinase 3-like 1,CHI3L1)与缺血性卒中疾病严重程度之间的关系.方法本研究资料来源于第三次中国国家卒中登记(the third China National Stroke Registry,CNSR-Ⅲ)的缺血性卒中生物标志物亚组研究.连续性收集发病后7d内的缺血性卒中和短暂性脑缺血发作患者,并在基线收集血液标本.用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆CHI3L1水平,并根据血浆CHI3L1浓度将患者分组,校正多种混杂因素后分析血浆CHI3L1水平与美国国立卫生研究院神经功能缺损评分(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)的关系.结果本研究纳入8006例首发缺血性卒中,按照血浆CHI3L1浓度按照三分位从低到高分为3组,各组CHI3L1平均浓度分别为(30.4±8.5)mg/L(低浓度组)、(64.9±13.5)mg/L(中浓度组)和(164.6±50.4)mg/L(高浓度组).低、中、高浓度组患者NIHSS评分为0~3分者所占比例分别为55.8%、52.6%和47.3%,4~7分者所占比例分别为30.6%、32.0%和33.0%,8~14分者分别为12.1%、13.1%和15.0%,15~21分者分别为1.2%、1.7%和3.6%,≥22分者所占比例分别为0.4%、0.8%和1.2%.校正混杂因素后,以低浓度组为对照,中浓度组(OR=1.14,95%CI:0.98~1.34)和高浓度组(OR=1.50,95%CI:1.28~1.76)重度患者(NIHSS≥8分)比例更多.结论入院时血CHI3L1升高提示缺血性卒中病情严重.检测血CHI3L1有助于从血液标志物角度更好地筛选病重患者,为将来的分层治疗奠定基础.

2型糖尿病患者血清几丁质酶3样蛋白1与白蛋白尿的相关性研究

目的检测2型糖尿病(T2DM)患者血清几丁质酶3样蛋白1(YKL-40/CHI3L1)浓度、尿白蛋白/肌酐比值(UACR),探讨T2DM患者血清YKL-40/CHI3L1与白蛋白尿的相关性。方法共纳入T2DM患者187例,其中正常范围白蛋白尿组(UACR<30 mg.g-1)58例,微量白蛋白尿组(UACR 30～300 mg.g-1)66例,大量白蛋白尿组(UACR>300 mg.g-1)63例,正常对照组为同期健康个体25例。收集所有研究对象人口学指标、临床及实验室数据,检测其血清YKL-40/CHI3L1及UACR。结果正常对照组、正常范围白蛋白尿组、微量白蛋白尿组、大量白蛋白尿组YKL-40/CHI3L1中位数分别为39、70、89、126μg.L-1,各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。单因素相关分析显示,YKL-40/CHI3L1与UACR呈正相关(r=0.27,P<0.001);采用多元回归模型对相关协变量进行校正后显示,YKL-40/CHI3L1仍与UACR独立相关(β=0.25,P<0.001)。结论 YKL-40/CHI3L1可能与T2DM肾病的发生发展有关,而进行YKL-40/CHI3L1、UACR联合检测可能有助于预测T2DM慢性血管并发症的发生。

糖尿病肾脏疾病患者血清几丁质酶1、鸢尾素水平变化及影响因素的研究

目的探讨DKD患者血清几丁质酶1(CHIT1)、鸢尾素(Irisin)水平变化及影响因素。方法选取2020年1月至2021年12月于重庆市红十字会医院(江北区人民医院)内分泌科住院治疗的T2DM患者176例,分为UACR<30μg/mg的正常白蛋白尿组(NUAlb,n=58),30≤UACR<300μg/mg的微量白蛋白尿组(MUAlb,n=66)和UACR≥300μg/mg的大量白蛋白尿组(LUAlb,n=52),同期选取我院体检健康者为正常对照组(NC,n=47)。ELISA法检测血清CHIT1、Irisin。Spearman相关分析血清CHIT1、Irisin与其他指标的相关性,Logistic回归分析DKD的影响因素。结果NC、NUAlb、MUAlb、LUAlb组血清CHIT1依次升高(P<0.05),血清Irisin依次降低(P<0.05)。Spearman相关分析显示,血清CHIT1与HbA_(1)c、HOMA-IR、TC、LDL-C、UACR呈正相关(P<0.05),与eGFR呈负相关(P<0.05);Irisin与HbA_(1)c、HOMA-IR、TC、LDL-C、UACR呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,LDL-C、HOMA-IR、HbA_(1)c、CHIT1、Irisin是DKD的影响因素。结论随着UACR水平升高,DKD患者血清CHIT1升高,Irisin降低,具有拮抗调控作用,二者参与DKD的发生发展。

几丁质酶-3样蛋白-1与冠心病患者冠脉病变狭窄程度的相关性分析

目的通过检测几丁质酶-3样蛋白-1(YKL-40)的水平,探讨该新型生物标记物与冠心病患者冠脉狭窄程度的关联。方法纳入2015年1月1日-2017年10月1日于解放军总医院心血管内科行冠状动脉造影诊断为冠心病的患者200例,测定所有患者YKL-40的水平,并对所有患者进行Syntax评分及定量冠状动脉造影分析以判断冠脉狭窄严重程度。结果 Syntax评分低分组、中分组、高分组患者YKL-40水平分别为(136.18±14.00) mmol/L、(158.36±12.39) mmol/L、(181.18±12.94) mmol/L;此外,随冠脉狭窄程度增加,YKL-40水平呈升高趋势,YKL-40水平与冠脉狭窄程度呈正相关(r=0.808,P <0.05)。结论冠心病患者YKL-40水平与冠脉病变狭窄程度正相关,YKL-40可作为评估冠脉狭窄程度的生物标记物。

血清几丁质酶-3样蛋白-1和骨桥蛋白与子宫内膜异位症的相关性研究

目的检测血清几丁质酶-3样蛋白-1(YKL40)及骨桥蛋白(OPN)在子宫内膜异位症患者血清中的水平,探讨YKL40及OPN与子宫内膜异位症的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测45例子宫内膜异位症患者(子宫内膜异位症组)及23例对照组患者血清中YKL40及OPN的水平并进行比较。结果手术前,子宫内膜异位症组患者血清YKL40及OPN的检测水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后1周复查,子宫内膜异位症组YKL40及OPN水平降低,与手术前比较差异有统计学意义(P<0.05);对照组与术前比较差异无统计学意义(P>0.05)。术前临床分期Ⅲ、Ⅳ期患者血清YKL40水平高于Ⅰ、Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);而血清OPN水平Ⅲ、Ⅳ期患者与Ⅰ、Ⅱ期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 YKL40及OPN与子宫内膜异位症的发生、发展及预后密切相关,但二者无明显相关性,可能在子宫内膜异位症的发生发展中是2个独立的事件。