用分子原位杂交（GISH）鉴定小麦－簇毛麦双倍体、附加系、代换系和易位系

用生物素标记的簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａｖｉｌｌｏｓａ）染色体组ＤＮＡ（ｔｏｔａｌｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡ）作探针，以普通小麦染色体组ＤＮＡ作遮盖（用量１：２００左右），进行有丝分裂中期和减数分裂中期Ｉ染色体的分子原位杂交（ＧＩＳＨ），经抗生物素蛋白－辣根过氧化物酶复合物（ｂｉｏ－ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）和联苯胺四盐酸（ＤＡＢ）检测显色后，小麦－簇毛麦双倍体、附加系、代换系和易位系中的簇毛麦染色体及染色体片段显棕色，与显浅蓝色的小麦染色体可明显区分。用ＧＩＳＨ不仅可以检测导入小麦中的簇毛麦染色质，而且可以清楚地显示出易位染色体断裂点的确切位置。将ＧＩＳＨ用于减数分裂期染色体配对分析，还可以清晰形象地显示出同源和非同源染色体之间的配对和分离情况。

应用分子原位杂交技术解析小麦-天兰冰草部分双二倍体──远中2号的染色体构成

为分析普通小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）－天兰冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ）部分双二倍体──远中２号（２ｎ＝５４）的染色体构成，用生物素（ｂｉｏｔｉｎ－１６－ｄＵＴＰ）标记天兰冰草染色体组ＤＮＡ作为探针，以普通小麦品种中国春染色体组ＤＮＡ为封闭ＤＮＡ（ｂｌｏｃｋｉｎｇＤＮＡ），与远中２号的有丝分裂中期染色体ＤＮＡ进行了分子原位杂交。证明远中２号除具有普通小麦的２１对染色体外，附加了１对小麦－天兰冰草易位染色体（即天兰冰草染色体片段易位到小麦染色体的两臂端部）、５对天兰冰草染色体。说明小麦－天兰冰草部分双二倍体在形成过程中染色体行为是比较复杂的，不仅可能产生小麦－天兰冰草染色体间易位，而且小麦染色体也可能与天兰冰草染色体的３种染色休组染色体共同参与组建新的染色体组附加到小麦中去。

加拿大披碱草×野大麦三倍体杂种染色体的分子原位杂交鉴定

加拿大披碱草与野大麦 2个四倍体多年生禾草杂交产生的属间杂种F1为三倍体 (2n =3x =2 1) ,丢失了与亲本染色体基数相同的 7条染色体。为查明该杂种F1的染色体构成 ,应用基因组分子原位杂交方法 ,将父本(♂ )野大麦基因组 (H1H1H2 H2 )DNA用荧光生物素标记作为探针 ,以母本 (♀ )加拿大披碱草基因组 (SSHCHC)DNA作为封组 ,对杂种F1根尖细胞有丝分裂中期的染色体DNA进行原位杂交。结果表明 :三倍体杂种F12 1条染色体中 ,有 14条出现偏黄色荧光信号 ,来自父本 (♂ )野大麦H1H2 基因组有 7条出现橙红色荧光信号 ,来自母本 (♀ )加拿大披碱草S基因组、加拿大披碱草HC 基因组的 7条染色体丢失。

人乳腺癌HPV感染的超微结构和DNA分子原位杂交研究

目的 :对乳腺癌的HPV感染进行形态学定位研究。方法 :对 4 6例乳腺癌切除标本及 7例良性病变标本进行透射电子显微镜以及HPVDNA分子原位杂交检测。结果 :透射电镜下 ,14例 (30 4 0 % )乳腺癌细胞核内有HPV样病毒颗粒 ,颗粒直径 30～ 5 0nm ,或弥漫散布 ,或聚集成团呈假结晶状排列。颗粒圆形或略不规则 ,含有HPV样颗粒的癌细胞核异型性较明显。7例良性病变细胞核内未见到HPV样颗粒。HPVDNA分子原位杂交显示 ,2 1例 (45 6 5 % )乳腺癌细胞核内HPV31/ 33DNA阳性 ,1例软骨肉瘤样化生性癌细胞核同时有HPV31/ 33及HPV16 / 18阳性 ;1例纤维腺瘤 (14 2 9% )也显示HPV31/ 33DNA阳性 (χ2 =2 74 31,P <0 0 5 )。电镜下 85 %病毒样颗粒阳性病例中可检测到HPVDNA存在 ,两种检测结果符合率达73 91%。结论 :乳腺肿瘤内存在未组装的、裸型病毒样颗粒。

分子原位杂交技术及在植物染色体上的应用

分子原位杂交技术及在植物染色体上的应用马有志徐琼芳辛志勇（中国农业科学院作物育种栽培研究所北京１０００８１）分子原位杂交（Ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，简称ＩＳＨ）是把用生物素等标记物质标记的ＤＮＡ片段做为探针（ｐｒｏｂｅ），与染色体ＤＮＡ...

分子原位杂交在肿瘤研究中的应用

<正>1969年美国学者Parduc等首次将分子生物学的核酸杂交技术应用于组织化学领域。用标记有~3H的爪蟾核糖体基因作为探针与其卵母细胞标本直接进行杂交,成功地显示出该基因位于核仁,从而创建了原位杂交(in situ hybridization 1SH)技术。1SH的建立也是根据碱基互补原则。但其与Southern Norther核酸杂交相比有如下优越性:①1SH可在组织细胞原位结构包括染色体区带水平进行精确地目的核酸定位,能对特定核酸的表达状态和分布数量与组织分化形态和病理生理状态同时进行观察,所以对细胞的分化增殖,疾病的病因分析,

单分子荧光原位杂交(smFISH)技术及应用

单分子荧光原位杂交(single-molecule fluorescence in situ hybridization,smFISH)技术是一种通过用偶联荧光基团的寡核苷酸探针,对固定细胞或组织中单个mRNA分子进行成像的方法。smFISH可对RNA进行定位、定量,以此对目标转录本进行实时研究。sm FISH适用于细胞、组织切片等多种类型生物样本。近年来,多种基于基础smFISH的改进技术被发明,进一步促进了该技术的实际应用。smFISH良好的RNA单分子可视化能力,使得其在发育生物学、神经生物学及肿瘤生物学等基础生物学科中得到了广泛的应用。本文综述了smFISH技术基本原理、smFISH技术的局限性、smFISH衍生技术方法、smFISH在不同生物学科中的应用进展,并对smFISH技术的发展前景做出展望。

应用分子原位杂交技术检测大鼠烧伤后脏器内皮素 mRNA 表达

本实验动态观察大鼠烧伤后血浆内皮素（ＥＴ）变化，同时应用分子原位杂交技术检测了大鼠烧伤后心、肺、肝、肾等主要脏器ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达及细胞定位。结果显示，烧伤后血浆内皮素浓度迅速升高，伤后６小时达高峰，２４小时仍维持较高水平。原位杂交显示，烧伤后主要脏器组织ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达强度及阳性细胞数迅速增加；其表达峰值的次序为肾、肝、肺、心，且表达阳性细胞种类增加。这可能与内皮素发挥其强大的缩血管作用、调节血流再分布有关，对保证供给休克状态下重要器官的血流灌注有其有益的一面，但ＥＴ－１ｍＲＮＡ的过度表达则可能加重内脏器官的缺血缺氧性损害。

荧光原位杂交(FISH)检测乳腺癌中HER-2基因状态与p53、Ki-67、TOPOⅡ表达的相关性

目的:研究乳腺癌中HER-2基因状态和p53、Ki-67、TOPOⅡ蛋白表达的相互关系,以及HER-2基因扩增与HER-2蛋白表达的相关性。方法:运用FISH和IHC技术分别检测172例浸润性乳腺癌中HER-2基因状态及HER-2、p53、Ki-67、TOPOⅡ蛋白表达情况,分析HER-2基因状态与其相互的关系。结果:172例浸润性乳腺癌中HER-2基因扩增与p53、Ki-67、TOPOⅡ蛋白表达呈正相关(P<0.05),HER-2基因扩增阳性率为43.6%(75/172),HER-2基因扩增与HER-2蛋白表达具有相关性(P<0.05)。结论:联合检测HER-2基因状态和p53、Ki-67、TOPOⅡ蛋白表达可为浸润性乳腺癌的预后及分子靶向治疗提供依据。

滋养细胞肿瘤N-ras基因原位分子杂交研究

目的 :为探讨滋养细胞肿瘤发病原因。方法 :采用核酸原位分子杂交技术 ,用地高辛标记的N ras基因探针与 40例滋养细胞肿瘤患者的刮宫标本及子宫切除标本进行原位杂交。用图像分析仪分别测各组阳性信号的灰度值作定量分析。结果 :随着恶性程度的增加 ,N ras基因阳性信号的表达呈增高趋势 ,恶性葡萄胎和绒毛膜癌明显高于良性葡萄胎和正常绒毛 ,有极显著性差异 (P <0 .0 1 )。结论 :N ras基因与滋养细胞的增殖、分化、恶变有关 ,由于N ras基因的过度表达而致恶变。

荧光原位杂交检测胃腺癌中YAP基因的状态

目的:探讨胃腺癌中YAP基因的状态及其与临床病理特征、预后的相关性。方法:用分子荧光原位杂交技术检测人胃腺癌组织中YAP基因改变情况,并探讨YAP基因与患者的临床病理特征及预后的相关性。结果:13.5%(13/96)的胃腺癌中存在YAP基因拷贝数的增加,YAP基因拷贝数的增加与胃腺癌的不良预后显著相关(P=0.04)。结论:部分胃腺癌中存在YAP基因拷贝数增加且与不良预后相关。分子荧光原位杂交对YAP基因的检测有望为胃癌组织的早期诊断、预防、临床治疗和预后判断提供新的靶点和可靠依据。

分子标记技术在棉花育种中的应用

文章阐述了限制性片段长度多态性 (RFLP)、随机扩增多态性DNA (RAPD)、扩增片段长度多态性(AFLP)、分子原位杂交 (ISH)等几种分子标记的原理以及在棉花育种研究中的应用 ,可用于建立品种的指纹档案 ,保护品种专利 ;对重要农艺形状进行早期鉴定 ,缩短育种时间 ;应用分子标记构建棉花的遗传图谱 。

尖锐湿疣HPV及其复发病因的分子生物学研究

本系列研究采用核酸的斑点杂交技术、Southern印迹杂交、聚合酶链反应(PCR)及组织切片原位杂交对尖锐湿疣(CA)中HPV型别进行检测。①从重庆地区CA组织中克隆出的人乳头瘤病(HPV)DNA拟称为HPV-CA。在严格杂交条件下,以HPV-CA为探针与14例CA DNA杂交,全部呈阳性,大部份含HPV-CA DNA序列。

基于16S/18S rRNA/rDNA的分子技术在定量瘤胃微生物中的研究进展

瘤胃微生物是反刍动物与日粮间的纽带。用传统或经典的亨氏滚管法和最大似然法测定瘤胃内微生物总数的结果可能偏低。采用培养方法培养的已知菌种可能不完全适合或进入了未培养状态。由于缺少可行的方法,未知菌种从未培养过。由于任何一个细胞都含核糖体,rRNA/rDNA有进化守恒的特性,建立在16S/18S rRNA/rDNA的现代分子技术在不需要培养微生物的条件下,不仅能用于描述分子特性,而且能检测数量和提供用于预测自然进化关系的分类方法。基于不同的16S/18S rRNA/rDNA的守恒区能设计出通用、属、种甚至株特异性探针或引物,通过分子杂交能检测、量化细胞含量和测定细胞活性。杂交可得到某个序列或微生物的相对或绝对量。然而,杂交的灵敏度较低,它仅能检测出超过106个细菌/m l瘤胃液。竞争PCR和实时PCR已开发并用于检测瘤胃微生物,其灵敏度达到检测单个细菌。16S/18S rRNA/rDNA方法已成功用于瘤胃环境研究而且很快获得认可。但是基于16S/18S rRNA/rDNA的现代分子技术不能排斥经典传统微生物方法,但它将成为一项便利技术用于瘤胃微生物研究。

OLAND生物脱氮系统运行及其硝化菌群的分子生物学检测

采用两阶段限氧自养硝化 -反硝化生物脱氮系统 (oxygen limitedautotrophicnitrificationanddenitrificationsystem ,以下简称OLAND)处理高氨氮、低COD的废水 .应用内浸式多聚醚砜中空膜 ,实现了污泥的完全截留 ,阻止了生物量的大量洗脱 ,并通过控制溶氧在 0 .1～ 0 .3mgL-1之间 ,实现了硝化阶段出水中氨氮与亚硝态氮浓度的比例达到最适值〔1 (1.2± 0 .2 )〕 ,从而为第二阶段的厌氧氨氧化提供理想的进水 ,进而获得较高的脱氮率 .同时应用荧光原位杂交技术对硝化阶段不同时期硝化菌群的变化进行分子生物学检测 ,揭示了随溶氧浓度的降低 ,氨氧化菌的数量基本保持恒定、亚硝酸氧化菌的数量略有减少的变化规律 ,并且发现 ,在两阶段限氧自养硝化 -反硝化生物脱氮系统中氨氮的氧化主要是由Nitrosomonassp .完成 ,亚硝酸的氧化主要由Nitrobactersp .完成 .图 4表 2参 2

MYC基因在人类HL－60和CEM癌细胞系中原位表达的研究

以细胞分子原位杂交方法对两种不同类型的人类白血细胞系ＨＬ－６０和ＣＥＭ，以及正常人白细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因的表达进行了比较研究．结果证明：ＨＬ－６０细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因有异常高水平的表达，而在ＣＥＭ细胞和正常人白血球与淋巴细胞中则没有明显的Ｃ－ｍｙｃ转录产物．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析表明，ＨＬ－６０细胞基因组中Ｃ－ｍｙｃ基因有显著的扩增现象；而ＣＥＭ细胞基因组中的Ｃ－ｍｙｃ基因的拷贝数与正常人血细胞的接近，属正常水平表达。再次证明了ＨＬ－６０细胞系Ｃ－ｍｙｃ基因的异常高水平表达，与该基因的大量扩增紧密相关．还对两种癌细胞系的癌变机理和细胞原位杂交在基因表达研究中的应用进行了讨论．

单分子荧光原位杂交技术在面肩肱型肌营养不良症精准诊断中的应用研究

目的探讨单分子荧光原位杂交(FISH)技术在诊断中国面肩肱型肌营养不良症(FSHD)患者的可行性。方法采用单分子FISH技术对37例临床拟诊FSHD患者4q A区域的D4Z4重复单元数进行检测和分析。结果 35例明确诊断为FSHD患者4q A区域的D4Z4重复单元数介于2~7,平均值为(4.229±1.031)。7例FSHD患者和2例临床拟诊FSHD患者的检测结果为:病例1、2、3来自同一个家系,为兄妹关系,4q A区域的D4Z4重复单元数分别为5、(6;32)和(5;32),片段长度分别为17.5 kb、(18.3;106.0)kb和(17.9;104.9)kb,D4Z4重复单元数在误差范围内,3例患者的变异可能遗传自其母亲;病例4的4q A区域D4Z4重复单元数为(2;22),片段长度为(6.6;71.9)kb;病例5、6的4q A区域D4Z4重复单元数分别为4和5,片段长度分别为11.7 kb和17.3 kb;病例7为女性,55岁,4q A区域D4Z4重复单元数为(5;68),片段长度为(18.1;224.0)kb,为本研究中年龄最大的女性患者;病例8、9为2例临床拟诊FSHD患者,4q A区域D4Z4重复单元数分别为(14;50)和33,片段长度为(44.6;164.8)kb和110.2 kb,4q A区域的D4Z4重复单元数均>10。结论 FSHD患者存在高度家系间和家系内临床异质性。单分子FISH单次检测能同时准确分辨4种不同单倍型,即4q A、4q B、10q A和10q B的D4Z4重复单元数,可以明确检测致病相关的D4Z4单元重复数,误差在1 kb以内,能较精确地检测D4Z4单元重复数。因此,单分子FISH是现今精准的FSHD患者的临床分子诊断技术。

内蒙古乌审马染色体核型研究

采用外周血淋巴细胞培养方法和常规染色体制备技术,对内蒙古乌审马染色体核型进行了分析研究。结 果表明:乌审马染色体核型2n=64,雌性核型为64,XX;雄性核型为64,XY。32对染色体中,31对常染色体,1对性 染色体;常染色体中,13对为亚中和中着丝粒染色体,18对为端着丝粒染色体;X染色体为较大的亚中部着丝点染色 体,Y染色体为最小的端着丝点染色体。通过对乌审马的染色体核型分析,为其分子原位杂交及基因定位奠定基础。

江苏省植物细胞遗传学研究回顾与展望

20世纪初“遗传的染色体学说”的提出和证明标志着细胞遗传学交叉学科建立,伴随相关学科的发展,20世纪60年代末期细胞遗传学又与分子遗传学相结合,建立发展了分子细胞遗传学交叉学科。分子细胞遗传学以DNA分子原位杂交技术为核心,不断拓展应用领域,为生命科学研究提供了直观、高效的技术手段。原位杂交技术与基因组、细胞生物学等技术结合,被广泛应用于人类、动物、植物的起源、进化、驯化等基础研究和远缘杂交、染色体工程等应用研究。通过形象地展示DNA、RNA、蛋白质在细胞中的实际位置,揭示DNA序列之间的实际位置和顺序、亲缘物种间的进化关系和结构重排、基因组拼接序列的质量、转录水平RNA和翻译水平蛋白质的位置和数量变化等。江苏省遗传学会会员单位南京农业大学、扬州大学、南京林业大学、江苏师范大学、徐淮地区农科院等自20世纪中期开展细胞遗传学理论技术研究,伴随学科发展不断创新,建立了较完善的分子细胞遗传技术体系,并成功应用于开展植物系统进化、远缘杂交、染色体工程、基因组学等研究,取得了一批研究成果。本文将主要综述江苏省在该领域取得的重要进展,并展望未来发展方向。

人工栽培北冬虫夏草子实体对大鼠下丘脑GnRH细胞mRNA表达的调节作用

目的观察人工栽培北冬虫夏草子实体细粉和复合粉对下丘脑促性腺激素释放激素细胞(GnRH细胞)作用的影响。方法用腺嘌呤加入饲料喂饲大鼠,造成大鼠肾阳虚模型,用人工栽培的北冬虫夏草子实体细粉和复合粉进行治疗,通过分子原位杂交的方法显示下丘脑GnRH细胞的mRNA表达以观察北冬虫夏草子实体细粉对其的影响。结果与正常组相比,模型组的Gn-RH细胞杂交信号减弱,阳性细胞数减少,而中药组GnRH杂交信号及阳性细胞数较模型组有提高趋势。结论人工栽培的北冬虫夏草子实体细粉和复合粉可促进大鼠下丘脑GnRH细胞的mRNA表达,增加GnRH分泌,从而调节大鼠的生殖功能。