从原始生殖细胞分离克隆鸡胚胎生殖细胞的研究

从孵化 5 5天的鸡胚生殖腺中分离得到大量原始生殖细胞 (PGCs)集落 ,这些集落的细胞经多次克隆传代具有胚胎生殖细胞 (EG)的诸多特征 ,如有连续传代的能力 (传至第 9代 ) ,细胞集落有典型鸟巢状结构 ,PAS染色阳性 ,AKP染色阳性 ,在无饲养层无分化抑制因子LIF时可以自发分化成几种细胞类型 ,包括成纤维细胞、神经细胞、自律细胞等 ,悬浮培养时具有形成类胚体的能力。上述发现表明该细胞具EG细胞的诸多特性 。

茶树功能基因分离克隆研究进展

茶叶是世界上最流行的无酒精饮品之一,具有许多生理保健作用。在包括中国在内的许多国家,茶树是重要的木本经济作物之一,它含有许多有价值的次生代谢产物。最近十多年来,茶树分子生物学研究是茶叶科学中最活跃和进展最快的一个领域。分离和克隆重要的茶树功能基因,对揭示茶树优质、高产和抗逆的分子机理,对采用基因工程技术进行茶树遗传调控等都有重要意义。本文介绍了茶树功能基因分离克隆的研究进展,并对今后茶树功能基因的研究提出了展望。

银杏雄株GinNdly全长基因的分离克隆

以银杏栽培品种大佛手(Ginkgo biloba L.cv.Dafushou)雄株为材料,用四月中旬幼嫩的叶片基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得银杏雄株LEAFY(LFY)同源基因GinNdly全长基因。结果分析表明,该全长基因含1493个核苷酸。与文献报道的银杏雌株GinNdly基因相比,碱基数少了三个,对应地氨基酸少一个,核苷酸同源性为99.7％,氨基酸同源性为99.3％。该基因的克隆为在分子水平上研究银杏开花调控机理奠定了良好的基础。

木本植物开花调节基因的分离克隆及其童期控制

高等植物在萌发后需要经历一定时间的营养生长 ,即童期 ,才能进入生殖发育阶段。控制植物生殖转变调节童期的基因主要有花序分生组织特异基因、花分生组织特异基因、花器官分生组织特异基因。对近几年木本植物开花调节基因的分离克隆及其童期控制研究进行综述 ,对了解木本植物开花基因的作用功能 。

从原始生殖细胞中分离克隆胚胎干细胞的研究

作者探讨了从原始生殖细胞(PGCs)中分离克隆胚胎干细胞的优势、用于分离克隆胚胎干细胞的PGCs获取方法及其向胚胎干细胞转化的能力。

DDRT-PCR技术及其在植物抗性相关基因分离克隆中的应用

介绍了DDRT-PCR技术的原理及其一般操作过程,并就近几年此技术在植物抗病相关基因(包括抗病相关基因、抗逆相关基因)的分离克隆方面的应用做了概述。同时简要介绍了此技术存在的问题及常见的解决方法,展示了其应用前景。

牛胚胎干细胞分离克隆的研究

目的从牛原始生殖细胞中分离克隆牛胚胎干细胞。方法采用与同源胎儿成纤维细胞共同培养的方法,以高糖DMEM添加0.1 mM2-巯基乙醇、犊牛血清为培养基,以4-13周龄牛胎儿为实验材料,从牛原始生殖细胞中分离克隆牛胚胎干细胞。结果参与胚胎干细胞分离克隆的40例牛胎儿中,一体长6.5 cm的雌性胎儿胚胎干细胞传到15代;分离得到的牛胚胎干细胞,经碱性磷酸酶染色,体外分化实验,核型分析证明其具有胚胎干细胞的诸多特性。结论可以从4-13周龄牛胎儿的原始生殖细胞中分离克隆胚胎干细胞。

细胞因子对人类胚胎干细胞分离克隆的影响

目的 观察白血病抑制因子、干细胞因子、碱性成纤维细胞生长因子对人类胚胎干细胞分离克隆的影响。方法 在基础细胞培养液中加入不同的细胞因子组合 ,培养后观察人类胚胎干细胞集落形成数和各组的最高传代数。结果 细胞因子添加与否对人类胚胎干细胞原代培养无显著的影响 ,而对后继培养有显著影响。结论 在人类胚胎干细胞初代培养时可以不添加细胞因子 ,细胞的克隆过程中添加细胞因子有利于细胞的生长。

培养方式对自原始生殖细胞分离克隆小鼠胚胎干细胞的影响

目的 比较与同源胎鼠生殖嵴共培养及其传统饲养层培养的方式 ,从小鼠原始生殖细胞中分离克隆胚胎干细胞的差异。方法 获取 8～ 14d龄的胎鼠 ,制备同源胎鼠成纤维细胞饲养层 ,采用常规饲养层培养的方式和与生殖嵴共同培养的方式 ,分离克隆小鼠胚胎干细胞。结果 在初期分离克隆的过程中 ,采用共同培养的方式优于传统饲养层培养模式。

大鼠心肌条件培养基对ICR小鼠胚胎干细胞分离克隆的影响

采用大鼠心肌条件培养基(RH CM)培养ICR小鼠的桑椹胚和囊胚,发现由囊胚分离的ES细胞传代后ES集落的出现率显著高于桑椹胚(P<0.05),囊胚更适合作为ES细胞分离克隆的材料。以RH CM为培养基的试验组ES细胞传代的平均时间间隔为38 h,对照组传代的时间间隔平均为78 h,两者差异显著(P<0.05)。表明RH CM能够促进ES细胞贴壁增殖和ES集落的形成,有效地维持ES细胞未分化状态。试验中设计的3 种培养条件对原代ES集落的形成影响不显著,但对传代后的ES集落的形成和传代的代次有显著差异。其中以MEF作饲养层,添加RH CM培养基的效果最好。

绵羊FecB基因分离克隆的研究进展

Fec B基因是一个影响绵羊排卵率的基因。本文就该基因的提出、基因型判定、生理效应以及分离克隆等方面作一综述。

烟草渗调蛋白基因的分离克隆及序列分析

烟草渗调蛋白基因的分离克隆及序列分析＊鄢波陈莉张绍松黄兴奇＊＊（云南省农科院生物技术研究所，昆明６５０２２３）ＣＬＯＮＩＮＧＡＮＤＳＥＱＵＥＮＣＩＮＧＯＦＴＨＥＧＥＮＥＥＮＣＯＤＩＮＧＯＳＭＯＴＩＮＦＲＯＭＮＩＣＯＴＩＡＮＡＴＡＢＡＣＵＭＹａｎＢｏＣ...

苏云金芽孢杆菌质粒复制区的分离克隆

Bt-E .coli穿梭载体 pHT315去除Bt复制区 ,构成了一个具有红霉素和氨苄抗性 ,同时具有多克隆位点的只能在E .coli中复制的载体 ,命名为pHT315 - 1。利用 pHT315 - 1,通过部分酶切建库的方法 ,从近 10 0 0 0个重组子中得到 1个Bt复制区。序列测定结果表明 ,该复制区为 5 2 73bps ,已在GenBank注册 ,Accessionnum ber为AY2 7832 4。GenBank核酸序列Blast表明 ,该复制区部分序列与Bt菌株HD2 6 3的复制区ori4 3编码复制蛋白的序列同源性为 98%。 30℃连续培养 72h ,复制区质粒在Bt无晶体突变株HD73cry -中稳定性达 98%以上 ,30h生长曲线也表明 ,该复制区质粒对受体菌株无明显不良影响。

EGF对原始生殖细胞来源小鼠胚胎干细胞分离克隆的影响

目的观察表皮生长因子对原始生殖细胞来源的小鼠胚胎干细胞分离克隆的影响。方法以小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层,从原始生殖细胞中分离克隆小鼠胚胎干细胞的过程中,在基础细胞培养液中加入不同浓度的表皮生长因子,观察小鼠胚胎干细胞集落形成数和各组的最高传代数。结果表皮生长因子添加与否对原始生殖细胞来源的小鼠胚胎干细胞原代培养无显著的影响,而对后继培养有显著影响。结论在原始生殖细胞来源的小鼠胚胎干细胞分离的过程中,可以不添加表皮生长因子,而在胚胎干细胞的后续传代中,尤其对于较高代细胞的克隆过程中添加表皮生长因子有利于细胞的生长。

小脑颗粒神经元凋亡差异表达基因的分离克隆研究

目的筛选分离低钾诱导的小脑颗粒细胞凋亡的差异表达基因。方法采用低钾处理的小脑颗粒细胞,抽提细胞总RNA,用荧光法mRNA差异显示技术分离差异表达基因,并对差异表达基因片段进行回收、克隆,经反向RNA印迹及RT鄄PCR技术验证。结果发现51条差异片段,成功克隆8个片段,其中2个未知功能的基因片段证实在低钾诱导的小脑颗粒细胞凋亡中表达增加。结论mRNA差异显示法是分离差异表达基因的一个良好的工具,分离出的差异基因与神经细胞凋亡有关。

猪胚胎干细胞的分离克隆

文章从分化抑制物、培养基的选择、内细胞团的分离、胚胎干细胞的分离及鉴定方法等方面系统地综述了猪胚胎干细胞分离克隆的研究进展,并对其未来的应用前景进行展望。

“猪重要经济性状功能基因的分离克隆及应用研究”荣获国家科技进步二等奖

我校动物生物技术国家重点实验室主任黄路生教授主持的“猪重要经济性状功能基因的分离、克隆及应用研究”荣获2005年度国家科技进步二等奖。